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1、陕西医学杂志 2 0 0 5 年 8 月第 3 4 卷第 8 期 9 4 7 P C N A在胃粘膜病变伴幽门螺旋菌感染中表达的研究 河南省南阳医学高等专科学校( 南阳4 7 3 0 5 8 ) 刘安丽刘平 摘要目的: 探讨增殖细胞核杭原( P C N A) 在胃拈膜病变伴幽门螺旋杆菌( H p ) 感染 患者的表达。 方法: 对1 2 6 例经病理证实的不同胃粘膜病变用W a r t h i n - S t a r r y ( W- S ) 法检侧 H p感染， 免疫组织化学方法检浏P C N A标记; 结果: P C N A免疫组化标记在非胃疮组与胃 疹组之间差别明显( P 0 . 0 5
2、 ) 。 慢性浅表性胃炎、 慢性姜缩性胃炎、 肠上皮化生低表达， 早期 胃疹和进展期胃病、 痛旁组织中高表达， P C N A阳性表达与胃病组织学类型桨膜浸润和淋 巴结转移密切相关。 在分组病变中H p ( 十) 者P C N A高表达。结论: H p 感染与P C N A表达 之间有一定关系， H p 感染患者P C N A高表达， P C N A表达与H p 感染呈正相关关系; P C N A 基因表达与胃粘膜增殖和肿瘤恶化有关。 主题词胃疾病胃粘膜增殖细胞核杭原螺杆菌， 幽门 增殖细胞核抗原( P C N A) 是一种仅在增殖细 胞中合成和表达的核蛋白， 其主要在细胞的5 期、 G 1
3、期和G : 初期表达E e l 。 本研究对1 2 6 例伴有幽 门螺旋菌感染的胃癌活检标本和手术切除标本进 行P C N A定性检测， 以探讨其表达与胃粘膜增殖 的关系。 材料和方法 1 材料收集我校附属医院病理科 2 0 0 2 年 3 月至2 0 0 4 年 3 月间胃粘膜活检标本和手术 切除根治标本的归档蜡块 1 2 6 例， 所有标本均经 1 0 0 0 福尔马林液固定， 常规脱水、 透明、 浸蜡和石 蜡包埋， 其中男 7 6 例， 女 5 0 例， 年龄 3 2 - 7 7 岁， 平均5 7 岁。 慢性浅表性胃炎1 5 例， 慢性萎缩性胃 炎 2 1 例， 慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化
4、生 2 3 例， 非 典型增生 2 5 例， 早期胃癌 1 2 例， 晚期胃癌 3 0 例， 其中高分化 1 7 例， 低分化 2 5 例， 侵及肌层者 2 3 例， 侵及浆膜层 1 9 例， 淋巴结转移 3 2 例， 淋巴结 无转移 2 1 0例 。 H p检测采用改 良 Wa r t h i n 5 t a r y染 O l m o l / L拘椽酸缓冲液中经微波抗原修复， 室温 下冷却， 滴加即用型非免疫性动物血清， 室温 l O m i n ; 滴加 P C l o 单克隆抗体 4 过夜， P B S洗 涤; 其余步骤按试剂盒的操作步骤进行， D A B显 色， 苏木精复染。 4 P
5、C N A阳性结果判断以已知P C N A标 记的胃癌为阳性作对照， 结果以腺上皮细胞核出 现棕色颗粒为P C N A表达阳性， 其阳性颗粒定位 于细胞核; 用无癌病例做对照， 每张切片检测 1 0 个高倍视野， 按阳性细胞所占肿瘤细胞比例分为 4 级( I 级为 0 -2 5 0 o ; II 级为 2 6 0 o -5 0 %; 11 级为 5 1 %-7 5 0 o , I V 级为 7 6 0 o -1 0 0 0 o ) : I 一 II 级为 弱阳性; 1 1 一 N级为强 阳性， 求出细胞增殖数 ( P r o l i f e r a t i n i n d e x , P l
6、) ; P I =P C N A阳性细胞数/ 细胞总数X 1 0 0 %。实验数据统计学分析采用丫 检验。 结果 1 P C N A在胃粘膜病变中的表达见表 t o 表 1 P C N A在胃 粘膜病变中的表达( 例， %) 色C 2 7 和快速尿素酶试点; H p检测采用快速尿素 酶试点和Wa r t y - s t a r r y 银染色， 两项均阳性者为 H p ( 十) ， 两项均阴性者为H p ( 一) ， 单项阳性者退 出试验。 3 免疫组织化学染色采用免疫组织化学 S - P法， 主要步骤如下， 切片常规脱水化后置于0 . 病变类型n弱阳性强阳性 慢性表浅性胃炎 慢性萎缩性胃炎
7、慢性萎缩性胃炎 伴肠上皮化生 肠化伴非典型性增生 1 5 3 ( 2 0 . 0 0 ) 2 1 1 5 ( 7 1 . 4 3 ) 0(0 . 0 0 ) 0 ( 0 . 0 0 ) 2 3 1 1 ( 4 7 . 8 3 ) 2 5 1 3 ( 5 2 . 0 0 ) 6 ( 2 6 . 0 9 ) 9 ( 3 6 . 0 0 ) 早期胃癌 晚期 胃疮 1 2 4 ( 3 3 . 3 3 ) 7 ( 5 8 . 3 3 ) 3 0 6 ( 2 3 . 3 3 ) 2 1 ( 7 0 . 0 0 ) 二商洛市病理检验中心 9 4 8 陕西医学杂志 2 0 0 5 年 8 月第 3 4 卷第
8、8 期 早期胃痛和晚期胃癌强阳性表达， 两者比较 均有统计学意义。 肠化生、 非典型增生、 早期胃庙、 晚期胃癌依次呈强阳性递增表达趋势( P 0 . 0 5 ) 。 2 P C N A在不同分化程度胃 癌中的表达 见表 2 0 表 2 P C N A在不同分化程度胃 疮中 的表达( 例， %) 项目n 类型 弥漫型胃 痛1 6 肠型胃庙2 6 分化程度 高分化1 7 低分化2 5 浸润深度 侵及肌层以内 2 3 侵及浆膜层1 9 淋巴结转移 无1 0 弱 阳性强 阳性 1 1 ( 6 8 . 9 ( 3 4 . 5 ( 3 1 . 2 5 ) 1 7 ( 6 3 . 5 8 ) 8 ( 4
9、7 . 0 6 ) 3 ( 1 2 . 0 0 ) 9 ( 5 2 . 9 4 ) 2 2 ( 8 8 . 0 0 ) 1 1 ( 4 7 . 2 ( 1 0 . 1 2 ( 5 2 . 1 7 ) 1 7 ( 8 9 . 4 7 ) 7 ( 7 0 . 0 0 ) 3 ( 3 0 . 0 0 ) 有3 2 8 ( 2 5 . 0 0 ) 2 4 ( 7 5 . 0 0 ) 表 2 显示: 分化差的腺癌P C N A强阳性反应， 明显高于分化高的腺癌( 尸0 . 0 5 ) , 癌组织有浸 润转移的明显高于无癌浸润 ( P 0 . 0 5 ) , P C N A 在侵及浆膜层及浆膜以外的强阳性
10、率为 8 9 . 4 7 %， 转移的高于非转移的( P 0 . 0 5 ) , 弥漫型胃 癌的表达明显高于肠型胃癌( P 0 . 0 1 ) . 3 P C N A与H p 感染的关系 见表3 , 表 3 P C N A与H p感染关系 Hp ( 一)Hp ( +) 组织类型二 二 P C N A阴性率 2 6 6 . 6 7 % ， P C N A阳性率 8 2 0 o 2 5 % 3 3 . 3 3 0 o 4 1 . 1 8 0 o 4 3 . 7 5 0 o 5 6 . 0 0 % 浅表性胃炎、 萎缩性胃炎、 肠上皮化生、 弥换型胃 癌、 肠型胃癌P C N A增殖阳性表达并根据病变
11、的 不同依次呈递增趋势; 尤其是萎缩性胃炎与肠型 胃 癌有显著的统计学意义( P 0 . 0 1 ) 。 讨论 H p于 1 9 8 3年 由澳大利亚 的 Wa r r e n和 Ma r s h a l l 首先从胃内分离， 目前已明确H p感染 是慢性胃炎最常见的病因， 与消化性溃疡病、 胃癌. 等病变关系密切， 不少学者也认为Hp感染所致. 胃癌可能遵循从慢性浅表性胃炎、 姜缩性胃炎、 肠 上皮化生及不典型增生到胃癌演变过程， 但其致 癌的确且机制尚不清楚， 它与胃癌的发生究竟有 多大关系， 是多年来人们较为关注的课题。 由于既 往认为胃癌的发生是由于细胞的异常增殖所致， 并且有相关材料
12、报道H p 感染与P C N A表达之间 有关 3 ) 。 故本组对1 2 6 例胃 粘膜病变采用H p 检 测方法， 快速尿素酶试点和Wa r t y - s t a r r y 银染 色， 两项均阳性者为H p ( +) ， 两项均阴性者为H p ( 一) ， 单项阳性者退出试验， 并用 P C N A免疫标 记， 以进一步证实伴有H p 感染的胃粘膜上皮细 胞在不同病变增殖的状态。 P C N A是一种仅在增殖细胞中合成与表达 的3 6 0 0 0 的多肤， 它作为D N A聚合酶的辅助蛋 白直接参与细胞增殖过程的D N A复制， 是一个 能较好地荆断细胞增殖活性和肿瘤恶性倾向的标 记物
13、， P C N A在静止期中较少， 于G ; 晚期表达渐 增高， S期达到高峰， 认为这种细胞的增殖动力学 的变化与肿瘤发生及复发都有很密切的关系 4 1 因此， 一个时期以来， 不少学者把 P C N A的检测 已广泛应用到大肠癌、 乳腺癌、 食管癌等恶性肿瘤 的研究中， 用它的指标来检测和判断细胞增殖活 力和肿瘤的增殖活性， 以此判定恶性程度和预后 的估计。本组观察到， 慢性浅表性胃炎P C N A表 达较低， 但是肠上皮化生性病变到上皮的非典型 增生和早期胃癌的发展过程其阳性率逐步在升 高。萎缩性胃炎组 P C N A含量高于浅表性胃炎 组; 伴有非典型增生的肠上皮化生组 P C N A
14、含 量高于萎缩性胃炎伴肠化组; 胃癌组织P C N A的 表达明显高于不典型增生组和慢性浅表性胃炎 组。胃癌组 P C N A的含量明显高于胃炎组， 进展 期胃癌P C N A含量高于早期胃癌组; 低分化腺癌 P C N A含量高于高分化腺癌组; 有淋巴结转移组 口. Qb 勺二 4 4 . 0 0 0 o 3 1 . 2 5 肠 2 6 . 9 2 % 1 1 1 6 6 8 . 7 5 % 7 3 . 0 7 % 1091157 浅表性胃炎 3 葵缩性胃炎 1 7 肠上皮化生 1 6 肠化生伴非 2 5 典型增生 弥漫型胃痛 1 6 肠型胃痛2 6 在H p 感染阳性组与H p 感染阴性组
15、， 两组相 比有显著差异( P0 . 0 1 ) , H p阳性的病变中从 陕西医学杂志 2 0 0 5 年 8 月第 3 4 卷第 8 期 9 4 9 _. - ， ，甲 ， . . . . . . . . . . . . . . .一一 P C N A含量高于淋巴结无转移; 癌组织浸润胃 壁 深层的 P C N A 含量高于非浸润， 差异显著。 P C N A过度表达尤其与淋巴结转移及远处转移 密切相关， 与胃癌浸润浆膜有关， 这与庄小强等 5 1 报道P C N A的表达与肝转移和肿瘤浸润深度有 密切相关的说法基本一致。R o b b i n s 等 6 1 报道在 实体瘤的阳性率与有丝
16、分裂活动有关， 同时也研 究了各种癌组织P C N A的表达， 认为P C N A指数 是评价肿瘤恶性程度的有用指标， 肿瘤细胞增殖 水平的增高与其恶性生物学行为密切相关 7 .8 ， 本 组结果也支持这一观点。 但如何在临床上， 较准确 地反映胃癌的恶性生物学行为， 以便指导临床选 择合理治疗方案， 改善胃癌整体疗效， 是临床重待 解决的间题。 同时， 这种胃粘膜上皮细胞的增殖状 态， 可作为评价胃癌发生风险的一项有效指标尚 值得进一步探讨。 H p 感染者P C N A表达明显高于无H p 感染 者; 有H p感染的萎缩性胃炎和伴肠上皮化生组 中的P C N A含量高于同类不伴有H p 感
17、染的该类 病人; P C N A在胃癌患者中H p 感染组P C N A阳 性表达显著高于H P阴性组， H p阳性的肠型胃 癌P C N A表达高于弥漫型胃痛; 同时， H p阳性的 病变中从浅表性胃炎、 萎缩性胃炎、 肠上皮化生、 弥漫型胃癌、 肠型胃痛 P C N A增殖阳性表达， 并 根据病变加重的不同依次呈递增趋势; 表明H p 感染后增加了胃粘膜损伤程度和易感性， 使细胞 具备了向恶性转化的可能性。说明不论是萎缩性 胃炎、 肠上皮化生、 胃粘膜上皮的异型增生还是已 形成胃癌与 H p感染是有密切关系的， 这个结果 与国外研究结果基本一致 8 . 9 。由 此可以推测， 有 H p存
18、在的胃粘膜细胞可出现过度增殖与分化， 尽管这种增殖在某些人可以持续多年， 而不发生 癌变， 但在这种增殖期间， 如若遇到像吸烟、 饮酒、 暴食的不良因素时， 可能使正常粘膜向化生转变， 进而促进肿瘤的形成。 由于胃癌的发生是一个多病因多阶段的过 程， 从慢性胃炎到腺体萎缩肠化和非典型增生最 终发展为胃癌一般需要数年或数十年时间。在这 漫长的病变过程中， 各种致病因素可能单独或协 同作用于不同阶段最终导致癌变， 因此， H p 感染 在胃癌的发生发展过程中与其它致癌因素共同作 用下促进正常粘膜向癌变化应成为可能。所以 积极治疗H p 感染的胃粘膜病变对预防细胞增殖 和痛变有着重要意义; 及时纠正
19、肠上皮化生的 适应性病变及与之相应的不合理生活习惯， 对于 肿瘤的发生有着深远的影响; 通过快速脉酶试 验和Wa r t h i n - s t a r y染色来检测H p感染、 P C N A 指数检测均对胃粘膜相关病变的研究起到一定的 指导作用。 参考文献 1 王伯， 李玉松， 黄高， 等主编. 病理学技术.北京: 人民卫生出版社， 2 0 0 0 = 1 6 0 - 2 崔云， 张盛忠， 卢志达. 改良Wa r t h i n - S t a r r y 染色技 术的新用途. 临床与实验病理学杂志， 2 0 0 1 ; 1 7 ( 1 ) : 8 3 庄则豪， 陈奕贵， 陈玉丽， 等.
20、幽门螺旋杆菌感染对胃 瘤及胃庙前病变中P C N A表达的影响. 实用庙症杂 志， 2 0 0 0 ; 1 5 ( 2 ): 1 3 0 4 Mo g g s J C , G r a n d P , Q u i v y J P , e t a l . A C A F - 1 - P C N A - m e d i a t e d c h r o m a t i n a s s e m b l y p a t h w a y t r i g g e r e d b y s e n s i n g D N A d a m a g e. Mo l C e l l B i o l， 2 0 0 0 ;
21、 2 0: 1 2 0 6 5 庄小强， 郑杰， 林三仁， 等.幽门螺旋杆菌感染与胃 粘膜增殖及与胃痛预后的关系. 临床与实验病理学杂 志， 2 0 0 2 ; 1 8 ( 2 ): 1 7 4 6 R o b b i n s B A. D e - l a v e g a D, D n a t a K, e t a l . I m m u n o h i s t o c h e m i c a l d e t e c t i o n o f p r o l i f e r a t i n g c e l l u n c l e a r a n t i g e n i n s o li d h
22、u m a n m a l i g u a n c i e s . A r c h p a t h o l L a b Me d , 1 9 9 7 ; 1 1， 8 4 1 7 D w o r a k o w s k a D ， G o z d z S , J a s s c m E, e t a l P r o g n o s t i c r e l e v a n c e o f p r o l i f e r a t i n g c e ll n u c l e a r a n t i g e n a n d P 5 3 e x p r e s s i o n i n n o n -
23、s m a l l c e l l l u a n g c a n e r . L u n g C a n c e r , 2 0 0 2 ; 3 5， 3 5 8 T e s t i n o G, v a l e n t i n i M , c o r n a g g i a M , e t a l. C h r o n i c a t r o p h i c g a s t r i t i s a n d g a s t r i c c a n c e r. D i g l i v e r D i s , 2 0 0 0 ; 3 2 ( 6 ): 5 4 4 9 L a q u i n t
24、 o G, T o d i s c o A, G i a r d u l l o N, e t a l . A n t i b o d y r e s p o n s e t o H e l i c o b a c t e r p y l o r i C a g A a n d h e a t - s h o c k p r o t e i n s i n d e t e r m i n i g t h e r i s k o f g a s t r i c c a n c e r d e v e l o p m e n t . D i g L i v e r D I S , 2 0 0 0 ; 3 2 ( 5 ) ， 3 7 8 ( 收稿, 2 0 0 5 - 0 4 - 2 0 )