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1、第2 3 卷第4 期 2005年 4月 . 2 3 No . 4 ARCHI VE S 日 E .簇 6学刊 OF T R AD I T I ON A L CH I N E S E二 2 0 0 5 文章编号: 1 0 0 9 一 5 2 7 6 ( 2 0 0 5 ) 0 4 一 0 6 2 3 一 0 3 P T A术后血府逐癖胶囊药物血清 对兔V S MC分泌 MI P一 1 MC P 一 1 的影响 彭 哲 ， 王硕仁2 ， 李秋梅3 ， 牛福玲2 ， 崔 巍2 ( 1 . 杭州市中医院心内科， 浙江 杭州 3 1 0 0 0 7 ; 2 . 北京中医药大学中医内科学教育部重点学科实验
2、室、 东直门医院气血研究实验室， 北京 1 0 0 7 0 0 ; 3 . 大连大学附属医院， 辽宁 大连 1 1 6 0 0 2 ) 摘要: 目 的: 探讨P T A术后血府逐A胶囊药物血清对兔V S MC分;3 L- Mi p - i , M C P - 1 的影响。方法: 首先建立颈动脉粥样硬化狭窄模型， 运用球交原位扩张和喂饲高脂饲并致P T A术后再狭窄模型， 适模成功 后给予含血府迢AL胶囊和西药组 普伐他汀、 巴来尔) 的饲并进行治疗4 周， 获取模型动物和给药动物血清; 采用E L I S A法观察药物血清作用1 2 h , 2 4 h 时， 对免V S M C分泌MI P 一
3、 1 , M C P 一 1 的影响。结果: 血府逐 癖胶囊和西药组药物血清作用1 2 h 均能显著抑制V S MC分泌MI P - 1 ， 与模型血清组比较， P 0 . 0 5 ; 但随作 用时问的延长， 2 4 h 血府逐癖胶交未显示出抑制作用， 而西药组仍具有显著的抑制作用， 两者间比较有显芳 性差异， P 0 . 0 5 ,二组药物血清作用1 2 h , 2 4 h 均未显示出 抑制V S M C分泌 MC P - 1 的作用。结论: 血 府逐癖胶众具有抑制V S M C分泌MI P - 1 的作用， 但随作用时问的延长作用逐渐减弱， 比西药( 普伐他汀、 巴 来尔) 的作用差; 验
4、证了普伐他汀、 巴未尔具有抑制炎症反应作用， 同时也为血清药理学的合理性提供了一 个很好的佐证。 关键词: 血府逐癖胶索; P T A术后再狭窄; 血管平滑肌细胞; 巨噬细胞炎性蛋白1 ; 单核细胞趋化蛋白1 中图分类号: R一 3 3文献标识码: B 中医药学刊 目 前经皮冠状动脉腔内成形术( p e r c u t a n e o u s t r a n s l u - m in a l c o r o n a ry a n g io p la s t y , P T A ) 已发展成为一种较成熟 的介入性治疗手段， 但 P T A术后约有 2 5 %一5 0 %患者 在P T A术后3
5、- - 6 个月内发生再狭窄o P T A术后再狭窄 的形成是一复杂机制。血管平滑肌细胞( v a s c u l a r s m o o t h m u s c l e c e ll , V S M C ) 增殖是P T A术后再狭窄形成的关键 环节 I 。 近年来， 炎症反应在P T A 术后再狭窄中 所起的 作用， 逐渐引起研究者的重视。有研究认为， P T A引发 炎症反应的机制大致有机械损伤与缺血/ 再灌注两方 面 2 1 。 本实验主要观察防治P T A术后再狭窄血府逐寮 胶囊药物血清对 V S MC分泌趋化因子MI P 一1 和单核细 胞趋化蛋白1 ( M o n o c y t
6、 e c h e m o a t t r a c t a n t P r o t e in - 1 , M C P 一 1 ) 的影响。 1 材料和方法 1 . 1 材料动物日 本大耳白兔， 体重 1 . 5 -1 . 6 掩， 均为雄性， 购自中国兽药监察所， 许可证编号: 京动许 0 0 4 号。 药物药物均根据“ 人和动物体表面积折算的等效 剂量比 率表+ ( 3 1 计算， 除血府逐疲胶囊外， 均以2 倍于临 床等效剂量给药。( 1 ) 血府逐寮胶囊: 由夭津市第五中药 厂提供。每克成品中含药 1 . 9 5 g 。动物给药量为 1 . 8 0 6 g / k g ( 含药3 . 5
7、2 g / k g ) : ( 2 ) 普伐他汀: 中美施贵宝 制药有限公司， 生产批号: 0 2 0 2 0 6 1 ， 动物给药量: 5 . 0 4 6 m g / k g ; ( 3 ) 巴米尔: 阿斯特拉( 无锡) 制药有限公 司， 生产批号: 2 0 0 1 1 0 0 1 5 ， 每片含乙酞水杨酸0 . 5 g ， 动物 收稿B期: 2 0 0 4 一 1 0 一 2 0 荃金项目: 国家中医 药管理局资助项目( 2 0 0 0 - J 一 P - 2 1 ) 作者简介: 彭哲( 1 9 7 1 一) ， 男， 主治医师， 博士。 给药量: 2 . 2 6 8 m 岁k g 。将上
8、述药物按动物每日每公斤体 重给药量均匀加入l o g 饲料中， 制成含药饲料。 试荆 D M E M培养基， 谷氨酞胺， 胎牛血清， 胰蛋白 酶, E D T A均为美国 S i g m a产品: M I P一1 , M C P一1 E L I S A试剂盒: 购自 上海森雄科技实业有限公司。 仪簇球囊导管， 美国C o r d i s 公司生产; 实验性体内 血栓形成测定仪， 包头医学院电器维修科技开发部制造; L a b s y s t e m s W e I I s c a n M K 2 酶标仪， 产地芬兰; L a b s y s - t e m s We I I Wa s h 4
9、洗板机， 产地芬兰; K J 一2 0 1 A型振荡 器， 姜堰市康健医 疗器具有限公司制造; P Y X 一 D H S 一 4 0 x 5 0隔热式电热恒温培养箱， 上海跃进医疗器械厂; B B 1 6 C O z 培养箱， 德国H e r a e u s : I M T一 2 倒置显微镜， 日 本O L Y MP U S ; 2 4 孔板， G I O B C O . 1 . 2 方法 建- P T A后再狭窄模型 将兔麻醉后， 剥离颈总动脉， 将实验性体内血栓形成测定仪刺激电极 放在近心端， 温度电极放在远心端， 调整电流为1 . 2 m A , 刺激1 0 - - 1 5 m i n
10、 ， 缝合肌层和皮肤。术后第2 天开始喂 高脂饲料( 0 . 7 %胆固醇, 3 %猪油、 9 6 . 3 %普通饲料， 胆固 醇购自 北京微生物培养基制品厂) ， 每天1 2 0 . 1 5 0 g 。正 常组不施加干预因素。连续喂养 8 周， 根据 B型超声和 病理切片的相关综合评价结果选择有斑块或血流有明显 改变者作球囊扩张术。插入球囊导管至电刺激处， 球囊 加压7 .9 个大气压， 原位扩张3 次， 每次持续时间3 0 s , 每次间隔l m i n 。术毕撤出球囊， 结扎颈外动脉近心端。 药物血清的制备将完成球囊扩张术的动物随机分 为模型组、 西药组( 普伐他汀、 巴米尔) 和药物组
11、( 血府逐 癖胶囊) 。正常组、 模型组喂普通饲料， 各给药组分别给 予1 0 岁掩, d - 1 的含药饲料， 并于动物吃尽含药饲料后， 6 2 3 万方数据 中医药学 刊2 0 0 5 年第2 3 卷 补足普通饲料与其他各组总量相等， 共给药 4 周。4周 后， 耳背动脉无菌条件下取血， 5 6 灭活 3 0 m in ， 过 0 . 2 2 K m滤膜过滤除菌后， 一 8 0 冰箱保存 备用。 药物血清的干预实脸取4 -8 代生长状况良好的 兔V S M以购自中国医学科学院细胞中心) ， 用 0 . 1 %胰 蛋白酶和0 . 1 % E D T A消化液消化后， 以含 1 0 %胎牛血
12、清的D M E M将细胞稀释至3 x 1 0 4 / m L将细胞接种于2 块2 4 孔培养板中， 培养4 8 h 。倒置显微镜下观察待细胞 长成次融合状态后， 换以含0 . 5 % 胎牛血清的D M E M培 养2 4 h 后， 使细胞同步化于G O / G l 期， 将2 块 2 4 孔培养 板分为药物血清作用 1 2 h 和作用2 4 h 2 个时间点， 每个 时间点均分为正常血清组、 模型血清组、 血府血清组、 西 药血清组， 每组6 个复孔， 每孔液体总体积为1 m L o 据预实验结果， 各组动物血清小于 1 0 %时未发现有 细胞毒性， 本实验选用 5 %浓度的动物血清进行实验。
13、 用D M E M培养基将上述各组动物血清稀释成 5 %的浓 度按分组情况分别加入2 4 孔培养板中， 继续培养1 2 , 2 4 h 后， 收集细胞培养上清液， 进行 MI P一1 和 MC P 一1 含量测定。 培养上清液MI P 一1 MC P 一1 含黄浏定采用双抗 体夹心A B C - E L I S A法。严格按操作说明步骤进行， 结 果以p g / m L 表示。 统计方法来用S P S S 1 0 . 0 统计分析软件， 均数间 经方差齐性检验后， 数值以均值士 标准差表示， 以单因素 方差分析统计结果。 2 结果 2 . 1 各药物血清组对 V S MC培养上清液 MI P一
14、1 含贡 的影响1 2 h 结果显示， 模型血清组 MI P一1 含量显著 高于其它各组， P 0 . 0 5 : 血府血清组和西药血清组均能 显著降低V S MC分泌 MI P一1 ， 与模型血清组比较有显 著性差异， P0 . 0 5 . 2 4 h 结果显示， 西药血清组抑制 V S MC分泌MI P 一 1 的作用稳定。与2 4 h 的模型血清组 比较仍有显著性差异， P0 . 0 5 ; 而血府血清组未表现出 降低V S M C 分泌MI P 一 1 的作用， 相反还有增加的作用， 并与模型血清组的高水平 MI P - 1 含量比较已无显著性 差异; 由此显现出西药血清组降低V S
15、M C分泌 M I P 一 1 的作用明显优于血府血清组， P 0 . 0 5 0( 见表1 ) 表 1 各药物血清对V S M C 培养上清液M I P 一 1 含量的影响( p g / m L , 灭士 : ) 定， 均未与模型血清组有显著性差异。各含药血清组 2 4 h 的M C P - 1 含量较1 2 h 有轻微上升， 但各组间比 较 均无显著性差异。( 见表2 ) 表2 各药物血清对V S M C 培养上清液M C P 一 1 含量的 影响( p g / m L , 灭士 : ) 2 4 h 正常血清组 6 模型血清组 6 血府血清组 6 西药血清组 6 3 0. 3 6士3 .
16、4 33 0. 3 9士3 . 8 2 3 0. 01士6. 4 86 2士1 0. 6 2 2 5 . 3 9士2. 7 4. 9 9士2. 9 6 3 2. 7 5士1 . 9 63 4. 1 2士4. 5 6 2 4 h 767264 飞、内 6 2 4 正常血清组 6 模型血清组 6 血府血清组 6 西药血清组 6 . 3 8 士4 5 . 7 9 . 4 0士9 9. 5 3 4 2 9 . 2 0士2 8 . 7 7 . 1 8 土3 2 . 8 2 4 3 8 . 9 4 士5 9 . 6 5 4 3 7 . 0 4 士1 8 . 6 6 * 3 讨论 中医学将冠心病 P T A
17、术后再狭窄归属于血痪证范 畴 4 3 。陈 可冀院 士 5 3 认为， 冠脉介入治疗后R S 的病理 过程与中医学中的“ 心脉痹阻” 、 心脉不通” 有类同之处， 其病因病机为血管内膜损伤， 激活体内的凝血一 抗凝一 纤溶系统， 血小板猫附和聚集形成血栓， 导致新的痪血形 成， “ 癖血阻滞， 血脉不通” 。血痪是 P T A术后再狭窄的 主要病机， 相应的活血化寮法亦应是P T A术后再狭窄的 基本治法。并对活血化疲经典名方血府逐寮汤 5 3 防治再 狭窄进行了系统研究， 取得了较好的成果。 炎症反应在 P T A术后再狭窄形成的病理过程中所 起的作用已得到公认。炎症反应是各种因素作用于机体
18、 后导致各类炎性细胞局部浸润并引发一系列后续事件的 结果， 其中炎性细胞的浸润极为重要。趋化因子可通过 驱动、 调节私附分子的表达和/(或) 直接趋化、 吸引炎性 细胞， 导致炎症反应。有些趋化因子还可调节血管内皮 细胞和平滑肌细胞的增生、 迁移。趋化因子通过与其靶 细胞表面的受体( G蛋白偶联受体) 结合而发挥趋化作 用。 MI P 一 1 属于C 一 C 型趋化因子家族， 表达于平滑肌 细 胞和巨噬细胞E 6 1 . M I P 一 1 对许多正常和转化的细胞 具有促炎症性、 趋化活性及生长调节特性，。本实验结 果显示， 模型血清组具有明显促进 V S MC分泌 MI P一1 的作用， 尤
19、其在 1 2 h 作用更加明显。西药血清组和血府 血清组在1 2 h 都有显著降低 V S MC分泌 MI P 一1 的作 用， 但2 4 h 时血府血清组对 V S MC分泌 MI P 一1 的抑制 作用逐渐降低， 与模型血清组比较无显著性差异。西药 血清组在2 4 h 和 1 2 h 的不同时相均有良好的抑制 V S MC 分泌 MI P 一1 的作用。 M C P - 1 可诱导表达于内皮细胞、 平滑肌细胞和单 核细胞， 提高单核细胞和内皮细胞之间的钻附， 并介导单 核细胞的趋化和活化， 促进单核细胞穿过内皮屏障。有 研究显示 8 l ， 在牛V S M C 培养基中 分别加入L D L
20、 , o x - L D L , V L D L 和o x - V L D L ， 培养2 4 h 的结果发现， 培养 的 牛V S M C 能表达M C P - 1 m R N A及蛋白， o x - L D L 和 o x - V L D L 使其M C P 一 1 m R N A的表达明显增强， 同时 也使其条件培养基中MC P- 1 的蛋白水平增加， 而 L D L 和V L D L 仅使 V S MC中M C P 一 1 m R N A ( 下转第6 4 2 页) 中医药 3 5 5 . 5 6 士3 1 . 4 1 .3 5 0 . 0 8 土1 8 . 9 2 注: 与模型血清组
21、比较， * P 0 . 0 5 ; 与西药血清组比 较， * p 0 5 0 各药物血清组对 V S MC培养上清液 MC P - 1 含量 住2 2. 学刊 的影响结果显示， 模型血清组 2 4 h的 MC P - 1 含量较 1 2 h 有轻微下降， 正常血清组 1 2 h 和 2 4 h MC P 一1 含量稳 万方数据 中医药学刊2 0 0 5 年第2 3 卷 及和营通气片2 . 射肾上腺素8 K g 1 6 g “ k 产 k g - i 组和4 . 3 2 g - 吨一 I 组均皮下注 两次。2 次之间间隔 4 h 。在两次 5 m i n ， 处置后禁食不禁水。各组于第8 天晨断
22、头取血检 测。结果见表3 e 注射肾上腺素之间( 前后各间隔2 h ) 将大鼠浸入冰水内 表3 对血痕模型组大鼠血液流变学的影响( X _+ s ) 动物数 ( n ) 剂量 ( g / k g ) 全血钻度( m P a “ S - ) 血浆钻度 低切( 3 S - 1 )中切( 3 0 S - 1 )高切( 2 0 0 S 一 ) 对照组 模型组 和营通气片 和营通气片 2 . 1 6 4. 3 2 1 0 . 0 1 士3 . 2 6 1 5 . 5 4 士 3 . 2 1 A 1 1 . 3 6士2 . 8 8 “ 4 . 9 5土1 . 9 1 7 . 3 0 士 2 . 3 1 A
23、 5 . 5 5士1 . 4 0 3. 5. 4. 3. 2 8士0 . 8 1 8 7 士1 . 6 5 “ 1 6土0 . 9 5 9 8士1 . 0 4 “ 1 . 3 9士0 . 2 3 1 . 8 1 士 0 . 1 2 “ 1 . 4 4 士 0 . 2 4 “ “ 1 . 4 1 士0 . 2 2二 注: 与模型组比较， P 0 . 0 5 , “P 0 . 0 1 ; 与对照组比较， A T 0 . 0 5 , A A P 0 . 0 1 . 2 . 5 对急 性软组织 挫伤修复的影响 取大耳白 家兔2 4在双侧小腿三角肌部位剃毛后垫以木块， 用l k g 重的铁 只， 随机分
24、成3 组， 挫伤模型组( 每日 灌服自 来水 l O m L球在3 0 c m高处自由落下打击， 面积7 c m 2 。兔造模后分 k g - 1 ) ， 和营 通气片低剂量组( 1 . 1 2 g - k g - ) ， 和营通气片笼饲养， 各组分别灌服相应药物或自 来水， 每 天1 次。于 高剂量组( 2 . 2 4 g - k g - l ) 。制备家兔双侧小腿三头肌的急造模后1 天、 2 天、 3 天、 5 天分别进行观察， 测量兔下肢 性软组织挫伤模型， 方法如下: 将家兔固定于实验台上，寮血面积。结果见表 4 0 表4 对急性软组织挫伤修复的影响( X士: ) 组别 动物数 ( n
25、 ) 剂量 ( g / k g ) 寮血面积( c m ) 模型组 和营通气片 和营通气片 2. 1 6 4. 3 2 5. 5 6士1 . 8 9 5. 6 6士1 . 8 6 5. 3 4士 1 . 6 0 3. 7 1士1. 2 9 3. 2 3士1. 2 0 2 . 4 4士1 . 0 2 1 . 8 1 士0. 6 7 0 . 9 8士0 . 5 1 ， 0 . 7 9 士0 . 4 3 二 0. 4 9士0 . 2 7 0 . 2 3 土0 . 1 3 0 . 1 8 土0 . 1 0 二 清性足肿胀; 降低急性血寮模型大鼠的全血猫度和血浆 猫度; 促进家兔急性软组织挫伤的恢复。结
26、果表明和营 通气片具有镇痛、 抗炎和改善血液流变学作用。提示该 药可能通过减轻局部组织炎症反应， 改善局部及全身血 液循环， 从而缓解腰椎间盘突出症的临床症状并促进损 伤恢复。 参考文献: 1 陈奇. 中药药理研究方法学【 M) . 北京: 人民卫生出版社， 1 9 9 3 . 1 0 7 4 , 5 6 4 徐叔云， 卞如镰， 陈修. 药理实验方法学【 M . 北京: 人民卫 生出版社， 2 0 0 2 . 8 8 2 毛腾敏. 血察病理模型探索 J 北京医科大学学报， 1 9 8 5 , 1 7 ( 4 ) ; 2 4 6 ，副，J.J 2门j r.Lr.L 注: 与对照组比较， P 0
27、. 0 5 , “P 0 . 0 1 , 3 讨论 腰椎间盘突出症多因慢性劳损导致椎间盘的纤维环 破裂和髓核组织的突出， 刺激并压迫神经根引起一系列 临床症状。该病属祖国医学“ 痹证， 腰痛” 范畴。作者通 过长期临床实践发现， 慢性劳损、 气血窟滞， 易致风寒湿 邪乘虚而入， 痹阻经络， 气机受阻， 血运不畅是引发本病 的关键。和营通气片根据祖国医学的理论组方， 主要由 活血化癖、 通络止痛和祛风除湿类药物组成。处方中当 归补血活血; 丹参、 郁金活血通络止痛; 沉香温肾纳气， 行 气止痛， 辅以砂仁、 木香燥湿化湿; 1 , 1 -4、 三七活血化0“o 本实验结果显示， 和营通气片抑制醋
28、酸引起的小鼠 扭体反应; 降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度; 抑制大鼠蛋 门.J，.J，.J 、曰67 r.Jr.LF.L ( 上接第6 2 4 页) 和蛋白的表达轻度增加。同时， 有研究 表明1 9 1 ， 许多诱导因素在促进M C P 一 1 的基因表达过程 中， 其表达具有时间依赖性。 本实验未发现模型血清组有明显的促 V S MC分泌 M C P 一1 的作用， 亦未发现各药物血清组有明显的抑制 V S H C 分泌M C P - 1 的作用。有研究已证实 “ ， 普伐他 汀除调脂作用外， 还有杭炎作用。而本实验未观察到其 对V S M C 分泌M C P - 1 明显抑制作用的原因考虑可
29、能 是: ( 1 ) 从文献来看， MC P 一1 的表达需要炎症刺激等诱 导因素， 是否因模型血清组的血清中所包涵的刺激诱导 V S M C 分泌M C P 一 1 的强度不够所致; ( 2 ) 从文献也同时 看到， M C P 一1 的显著表达需要一定的时间， 是否还因 本实验模型血清组和各药物组血清作用时间短， 因此未 能发现各组血清对V S M C 分泌MC P 一 1 的影响。 参考文献: 1 吴立玲. 心血管病理生理学 M . 北京: 北京医科大学出 版社， 2 0 0 0 . 4 5 一4 9 2 l S e r r a n o C V , R a m ir e s J A F
30、, V e n t u r in e lli M, e t a l . C o r o n a ry 3 4 a n g i o p l a s t y r e s u l t s i n l e u k o c y t e s a n d P l s t e l e t a c t i v a t i o n w i t h a d h e s i o n m o l e c u l e e x p r e s s i o n . E v i d e n c e o f i n fl a m m a t o ry r e s p i n s e in c o r o n a ry a n g
31、 i o p l a s t y J . J a m C o ll C a r d i o l , 1 9 9 7 , 2 9 ( 6 ) : 1 2 7 6 -1 2 8 3 徐淑云， 卞如潦， 陈修. 药理实验方法学【 Ml . 第三版. 北 京: 人民卫生出版社， 2 0 0 2 . 2 0 2 - 2 0 3 张敏州， 李新梅， 李松， 等. 中医 药防治冠状动脉成形术后 再狭窄研究进展 J l广州中医药大学学报， 2 0 0 1 , 1 8 ( 2 ) : 1 7 8 一1 8 0 于蓓， 陈可冀， 毛节明， 等. 血府逐察浓缩丸预防冠心病冠 脉内支架植入术后再狭窄的临床研究【 J
32、l . 中国中西医结 合杂志， 1 9 9 8 , 1 8 ( 1 0 ) : 5 8 5 一 5 8 9 牛玉宏， 许从峰， 葛均波. 炎症反应与动脉粥样硬化 J l 北京大学学报( 医 学版) , 2 0 0 1 : 3 2 3 一 3 2 7 Wo l p e S D , C e r a m i A . M a c r o p h a g e in fl a m m a t o ry p r o t e i n s l a n d 2 : m e m b e r s o f a n o v e l s u p e r f a m il y o f c y t o k in e s J .
33、 F A S T B J , 1 9 8 9 , 3 ( 1 4 ) : 2 5 6 5 一2 5 7 3 于光耀， 邓仲端， 瞿智玲. 氧化型脂蛋白诱导血管平滑肌 细胞表达单核细胞趋化蛋白一 1 J 中国动脉硬化杂志， 1 9 9 8 , 6 ( 4 ) : 3 0 1 一3 0 4 王国平， 邓仲端. M C P 一 1 的表达与动脉粥样硬化【 J l . 国 外医学生理、 病理科学与临床分册， 1 9 9 5 , 1 5 ( 3 ) : 1 8 0 梁春， 吴宗贵， 仲人前， 等. 普伐他汀抑制o x L D L 诱导的 人外周血单核细胞C D ll b 表达及与内皮的粘附【 J l . 中国 药理学通报， 1 9 9 9 , 1 6 ( 3 ) : 2 4 9 一 2 5 1 中医药 5910 6 4 2 学刊 万方数据