PPARγ激动剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后IL-1β、IL-6和TNF-α含量的影响.pdf

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1、 2 0中国实用神经疾病杂志 2 0 0 8年 2 月第 1 1 卷第 2 期 C h i n e s e J o u r n a l o f P r a c t i c a l N e r v o u s D i s e a s e s F e b . 2 0 0 8 , V o l . 1 1 N o . 2 6 单渊东. 白血病 M / / 张之南， 单渊东， 李蓉生， 等.协和血液病 学. 北京: 中国协和医科大学出版社， 2 0 0 4 : 3 6 4 . 7 F r a n k l e S R , E a r d l e y A, L a u w e r s G, e t a l.

2、 T h e r e t i n o i c a c id s y n - d r o m e in a c u t e p r o m y e l o c y t i c l e u k e n t ia J . A n n I n t e r n Me d , 1 9 9 2 , 1 1 7 ( 4 ) : 2 9 2 . ( 收稿 2 0 0 7 - 1 1 - 1 5 ) P P A R y 激动剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后I L - l p , I L - 6 和 T N F - a 含量的影响 都金涛t ) 高甜2 ) 宋颖飞2 ) 1 ) 河南波阳市人民医院波阳4 5 7 0

3、 0 0 2 ) 陕西省人民医院西安7 1 0 0 6 1 【 摘要】 目的观察P P A R y 激动剂毗格列酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤( I / R ) 的保护作用， 并对其作用机制进行初步探 讨。方法复制大鼠大脑中动脉阻断再灌注模型( MC A O / R ) ， 分别采用T T C染色法、 神经功能评分法观察P P A R y 激动剂对大鼠 脑梗死体积和行为学评分的影响， 同时观察P P A R y 激动剂对脑组织内白 细胞介素- 1 (3 ( I L - 1 田、 白 细胞介素- 6 ( I L - 6 ) 和肿瘤坏死因 子一 a ( T N F a ) 含量的影响。结果P P

4、A R y 激动剂能够减少I / R大鼠脑梗死体积和行为学评分， 降低脑组织中I L - 1 p , I L - 6 和 T N F - a 的含量( P 0 . 0 5 ) .结论 P P A R y 激动剂对大鼠 脑缺血再灌注损伤有一定保护作用， 其作用机制与降低脑组织中I L - 1 p 、 I L - 6 和T N F - a 含量有关。 【 关键词】 P P A R y 激动剂; 缺血再灌注损伤; 白细胞介素 一 1 日 ; 白 细胞介素一 6 ; 肿瘤坏死因子 一 a 中图分类号】 R -3 3 2 文献标识码 A 文章编号】 1 6 7 3 - 5 1 1 0 ( 2 0 0 8

5、 ) 0 2 - 0 0 2 0 - 0 3 E f f e c t s o f p e r o x i s o m e p r o l i f e r a t o r - a c t i v a t e d r e c e p t o r - y a g o n i s t o n t h e l e v e l s o f c e r e b r a l I L - 1 p ， I L - 6 a n d T N F - a i n r a t s e x p e r i e n c e d f o c a l c e r e b r a l i s c h e mi a / r e p

6、e r f u s i o n G u o J i n t a o “ , G a o T i a n ) ， S o n g Y i n g f e i ) . 1 ) D e p a r t m e n t o f N e u - r o l o g y， P u y a n g P e o p l e s Ho s p i tal， P u y a n g 4 5 7 0 0 0 2 ) D e p a r t m e n t o f Ne u r o l o g y， P e o p l e s Ho s p i t a l o f S h a n x i P r o v i n c

7、e , X i a n 7 1 0 0 6 1 , C h i n a A b s t r a c t O b j e c t i v e T o o b s e r v e t h e p r o t e c t i v e e f f e c t o f p e r o x i s o m e p r o l i f e r a t o r - a c t i v a t e d r e c e p t o r - y a g o n i s t p i o g l i t a z o n e o n S p r a g u e - D a w l e y r a t s s u b j

8、e c t e d t o 2 2 - h o u r r e p e r f u s i o n f o l l o w i n g 2 - h o u r m i d d l e c e r e b r a l a r t e r y o c c l u s i o n ( MC A O ) . Me t h o d s A d u l t ma l e S D r a t s w e r e s u b j e c t e d t o MC A O / r e p e r f u s i o n ( MC A O / R ) . T h e n e u r o l o g i c a l

9、 s c o r e s w e r e m a d e o n Z e a L o n g a 5 - p o i n t s c a l e . T h e v o l u m e o f i n f a r c t i o n w a s m e a s u r e d b y T T C s t a i n i n g . T h e c o n t e n t o f i n t e r l e u k i n ( I L ) - 1 (3 , I L - 6 a n d t u m o r n e c r o s i s f a c t o r ( T N F ) - a w e

10、r e d e t e r m i n e d b y c o m m e r c i a l k i t s r e a g e n t R e s u l t s P P A R y a g o n i s t d e c r e a s e d i n f a r c t v o l u m e , p r o t e c t e d n e u r o n s a n d i m p r o v e d b e h a v - i o r a l o u t c o m e s i n M C A O / R r a t s . P P A R y a g o n i s t a l

11、s o s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d I L - 1 日 ， I L - 6 a n d T N F - a c o n t e n t C o n c l u s i o n T h e p r e s e n t s t u d y p r o v i d e s t h e i n v i v o e v i d e n c e t h a t P P A R y a g o n i s t p r o t e c t s b r a i n a g a i n s t c e r e b r a l i s c h e m i a r

12、e p e r f u s i o n i n j u r y . T h e m e c h a n i s m i s r e l a t e d t o t h e d e c r e a s e o f t h e c e r e b r a l l e v e l s o f I L - 1 p , I L - 6 a n d T N F - a . K e y w o r d s P P A R y a g o n i s t ; I s c h e m i a - r e p e r f u s i o n i n j u r y ; I L - 1 Q ; I L - 6 ，

13、T N F - a 过氧化物酶体增殖物激活型受体y( p e r o x i s o m e p r o l i f e r a t o r - a c t i v a t e d r e c e p t o r g a m m a , P P A R y ) 属于 核受体超家族成员， 是一种配体激活型核转录因子， 可 调控多种基因的转录与表达， 参与体内多种生理和病 理生理过程。近年的研究发现， P P A R y和缺血性病理 损伤的关系密切， P P A R y激动剂预处理对心肌、 肺脏 及休克时组织器官的缺血再灌注损伤有保护作用 t 1 本实验将 P P A R y 激动剂毗格列酮应用于

14、大脑中动脉 缺 血再灌注( m i d d l e c e r e b r a l a r t e r y o c c l u s i o n / r e p e r - f u s i o n , MC A O / R ) 损伤模型大鼠的治疗， 观察 P P A R y 激动剂对局灶性脑缺血再灌注损伤的影响， 并对其作 用机制进行初步探讨。 1 . 1 材料和方法 材 料 1 . 1 . 1 动物: 健康雄性 S p r a g u e - D a w l e y大鼠， 体重 2 7 0 3 1 0 g ， 西安交通大学医学院实验动物中心提供. 1 . 1 . 2 药品与试剂: P P A

15、R y 激动剂一 毗格列酮由连云 港德源药业有限责任公司提供; 2 , 3 , 5 - 氯化三苯基四 氮哇( 2 ， 3 ， 5 - t r i p h e n y l t e t r a z o l i u m c h l o r i d e , T T C ) ， 上 海化学试剂公司产品;I L - 1 日 、 I L - 6 , T N F - 。定量 E L I S A试剂盒， 由北京环亚泰克生物医学技术有限公 司提供 ， 考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒， 由南京建成生 物工程研究所提供。其他试剂均为国产分析纯。 1 . 1 . 3 主要仪器: 双极电凝器( 上海医疗器械公司) ; 数码相机

16、( P o w e r S h o t A 6 1 0 ) ; Mu l t i s k a n MK 3型酶 标仪( 芬兰T h e r m o L a b s y s - t e m s 公司产品) ， 低温高速 离心机( 北京医用离心机厂) 。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 分组与给药: 健康雄性 S D大鼠4 5 只， 随机分 为3 组， 术前 1 2 h禁食， 自由饮水。假手术组 5 只: 万方数据 中国实用神经疾病杂志2 0 0 8 年2 月第1 1 卷第2 期 C h i n e s e J o u r n a l o f P r a c t i caI N e rv o

17、 u s o i s e a s e : F e b . 2 0 0 5 ， v o L U丛些 2 l 仅手术暴露， 分离颈总、 颈内及颈外动脉， 不予阻塞; 缺血再灌注模型组 20 只: 线栓法制备大脑中动脉阻 塞( Zh ) 及再通( 2 2h ) 模型， 1 0只行 T T C染色， 另 1 0 只作脑组织匀浆待测; 毗格列酮治疗组20 只均为缺 血 Zh 再灌 2 2h ， 1 0只行 T f C染色， 另 1 0只作脑组 织匀浆待测。治疗组实验前 1 周灌胃给药( 毗格列酮 片Z o m g k g 才 ， 每日 量分2 次， 术前l h 、 术后 1 2 h 各灌1 次) ; 对

18、照组以等体积生理盐水灌胃。 1 . 2 . 2 局灶性脑缺血再灌注模型制备: 大鼠用 10% 水合氯醛麻醉( 3 50 m g k 扩) ， MC A O / R模型采用改 良 的z eaL 0 n g a 等图右侧颈内动脉尼龙线线栓法， 腹 腔麻醉大鼠， 颈部碘配消毒， 正中切口3 一4 c m， 分离 右侧颈部各动脉， 用电凝器电凝甲状腺上动脉、 枕动脉 和颈内外动脉交通支， 游离颈外动脉( E C A ) ， 在 E C A 上剪一小口， 将选取好的栓线自右 E C A插人右颈内 动脉(I C A ) ， 轻柔推进， 稍感阻力即止， 此时插人深度 约为( 18。 0 士。 . 5) m

19、m( 自颈总动脉分叉处算起) ， 阻断 Zh 后， 拔出栓线， 恢复颈总、 颈内动脉再通行再灌注。 动物术中、 术后注意保暖。清醒后出现以左前肢偏瘫 为主的神经功能缺失症状为模型成功的标志。假手术 组一切同对照组， 仅不行血管内栓线。术后苏醒回笼， 自由食水。 1 . 2 . 3 T T C染色、 梗死体积计算: 于大鼠 MC A O / R 后22 h观察神经功能缺损症状并评分， 水合氯醛麻 醉， 断头取脑， 迅速置于一20冰箱冻存 sm in ， 去除 嗅球、 小脑和低位脑干， 其余部分沿冠状切片， 从额极 向后每Zm m切片， 共 5 一6片， 然后迅速将脑片置于 2 %T T C溶液中

20、， 避光， 3 7 ，C温孵3 om i n ， 每隔 7 一8 m in翻动1 次， 温孵完毕后， 数码相机照相， 将染色结 果输入计算机， 利用图象处理软件A uto C A D ， 分别计 算出各个脑片缺血侧的总体积和梗死区域的体积， 梗 死区域占大脑半球总体积的百分比作为统计参数。 1 . 2 . 4 神经功能缺损评分: 参照Z eaL o n g 尹 的评分 方法， 在处死大鼠前观察并记录神经功能缺失症状; 无 神经病学征象为。 分; 提尾时病灶对侧前肢不能完全 伸直为1 分; 向瘫痪侧旋转征象为2 分; 向病灶对侧跌 倒为3 分; 无自发活动及意识障碍者为4 分。 1 . 2 .

21、5 脑组织匀浆的制备: 10写水合氯醛麻醉， 断头 处死， 迅速取手术侧额顶背外侧皮质和基底节约。 . 3 9 ( 电子天平称量) ， 用冷生理盐水冲洗， 除去血液， 滤纸 拭干， 称重放人匀浆器中， 以。 . 1 9 : 。 . gm l 加人预冷 的生理盐水制备10%脑组织匀浆， 用低温低速离心机 将匀浆以3 o 0 o r m i nl离心 10 m in， 取上清液， 分装， 一2 0 冰箱保存备用。 1 . 2 。 6 脑组织匀浆生化指标的测定: I L-l p 、 1 卜6 、 T N F-。 定量按 E LIS A定量试剂盒说明书测定， 组织 匀浆中相应炎性因子的含量除以蛋白含量

22、即为每毫克 组织蛋白中各炎症因子的含量， 并按考马斯亮蓝法标 定蛋白含量。 1 . 3 统计学处理采用S P S S 13. 0 统计软件， 所有实 验数据均以均数士标准差( 了 士: ) 表示， 组间比较用单 因素方差分析及 t 检验检验进行统计处理。 2 结果 2 . I P P A R 丫激动剂毗格列酮对大鼠脑梗死体积及大 鼠神经功能的影响T T C染色结果可见， 假手术组 经T T C染色后脑片全红， 模型组大鼠右侧额顶叶皮 质及纹状体可见明显的白色梗死灶， 毗格列酮给药组 与模型组比较梗死面积明显减小( P 0 . O 5 ) 。缺血再 灌注术后， 模型组动物表现出明显神经运动功能障

23、碍， 而毗格列酮给药组大鼠神经功能缺损症状均获不同程 度改善， 肌力表现明显增强( 表1 ) 。 衰 I R P P A R y 激动剂毗格列酮对大鼠神经功能 评分及脑梗死体积的影响( 了 士5) 组别 假手术组 模型组 治疗组 n 5 1 O 1 0 神经功能评分 0 2 . 6 8 2 士0 . 9 4 0 1 . 6 0 1 士0 . 8 1 1 脑梗死体积( %) O 0 . 3 1 9 士0 ， 0 7 9 0 . 2 1 9 土0 . 0 8 1 与模型组比较， 尸 。 . 05 2 . 2 毗格列酮对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织 I L- 1 日 、 I L-6 、 T N Ra

24、 含量的影响毗格列酮能降低模型大 鼠 脑组织中IL-l p 、 I L- 6 和T N F- a 的含量( 尸 0.0 5 ) ， 结 果见表 2 。 表 Z P P A R T 激动剂毗格列酮对大爪 少1 日 、 I L- 6 、 T N R 。 含 里的 影响( f 士5 ， m g / 9 ) 组别nI L-l p I L， 6TNF a 假手术组 5 模型组 治疗组 l 0 l O 1 . 6 9 3 士0 ， 3 9 1 . 2 . 8 1 7 士0 . 6 8 1 1 . 6 1 3 士0 . 3 3 2 . 1 . 0 6 1 士0 . 3 1 2 . 2 . 8 7 6 士0

25、. 8 5 6 1 . 1 4 7 士0 . 2 8 0 0 . 4 6 0 士0 . 0 7 7 1 . 1 0 5 士0 . 4 4 1 0 . 5 7 2 士0 . 2 0 7 与模型组比较， 尸 0 . 05 3 讨论 脑梗死发生、 发展机制复杂， 不仅梗死导致的缺血 缺氧引起组织损伤， 溶栓或者侧支循环的建立能引起 血流再通导致再灌注损伤， 其损伤的中心环节是组织 的过氧化及炎症级联反应。因此阻断脂质过氧化和炎 症反应是治疗缺血性脑血管疾病的一个重要策略。 脑梗死后缺血区的炎症反应主要表现在白细胞聚 集、 氧自由基产生、 溶酶体破坏、 水解酶生成以及炎症 介质形成等方面。脑缺血再灌注

26、后内皮细胞炎症反应 使血脑屏障受损， 加重了脑损害及脑水肿， 此病理生理 万方数据 2 2. 。中国实用神经疾病杂志2 0 0 8 年2 月第 1 1 卷第2 期J o u rna l o f P r a c t i c a l N e r v o u s D i s e a s e s F e b . 2 0 0 8 , V o h 1 1 N o , - 2 过程的基础是以I L - 1 日 、 T N F - a , I L - 6 等细胞因子为代 表的多种炎性介质失控、 释放而形成的“ 瀑布效应” 。 ， I L - 1 p 是I L - 1 基因家族成员之一， 主要存在于脑组织 中，

27、 由胶质细胞、 神经元细胞及内皮细胞合成和分泌， 它不仅能够协同其他细胞因子促进 B , T细胞活化， 而 且能够诱导其他炎性介质产生， 加强白细胞与内皮细 胞的勃附; T N F - 。 是被激活的巨噬细胞分泌的一种细 胞因子， 属多肤类激素， 具有广泛生物学功能， 主要与 炎症及免疫反应有关， 在脑缺血早期 T N F - a 分泌或合 成的增加是脑梗死形成的主要原因 3 1 ， 它具有增加血 管内皮细胞的通透性， 诱导细胞戮附因子表达等作用。 T N F - a 在脑缺血后诱发的白细胞浸润和组织损伤中 起重要作用， 可引起多核白细胞聚集和激活并释放炎 症介质， 因此通过各种措施阻断T N

28、 F - a 的表达可减少 缺血性神经元损伤。 I L - 1 p 、 T N F - 。 还可激活其他细胞 产生多种细胞因子， 如诱导I L - 6 的合成。I L - 6 是一种 具有广泛生物学活性的多功能单链糖蛋白细胞因子， 是由T细胞、 成纤维细胞、 单核细胞、 巨噬细胞、 内皮 细胞等产生， 具有广泛生物学功能， 参与机体免疫应答 和炎症反应， 目前认为 I L - 6 是急性缺血期脑损伤程度 的一个标志 4 1 。这与本研究结果一致， 表明应用 MC A O模型确切可靠， 进一步验证了上述理论。 毗格列酮属于唾哇烷二酮类药物， 是 P P A R I的 选择性激动剂， 最初是作为一

29、种胰岛素增敏剂应用于 临床2 型糖尿病的治疗。近来越来越多的研究表明这 类药具有潜在的抗炎和免疫调节作用。目前认为这类 药物所具有的抗缺血性损伤作用主要和其激活后抑制 了T N F - a 、 干扰素( I F N ) - y 、 细胞间猫附分子( I C A M) - 1 , I L - 6 , P 一 选择素( P - s e l e c t i n )等细胞因子、 豁附分子 及降低其活性有关。 本研究发现， 毗格列酮可有效抑制脑缺血/ 再灌注 后I L - 1 日 , T N F - a , I L - 6的表达， 从而抑制再灌注后的 炎症反应， 缩小缺血/ 再灌注后脑梗死体积， 改善神

30、经 功能缺损评分， 表明毗格列酮对缺血性神经损伤具有 保护作用， 与近年文献报道的其他研究结果相似 5 - 6 J 糖尿病是脑梗死重要独立危险因素， 所以， 探讨此类药 物对脑梗死的保护作用及其机制有非常重要的实践意 义。 参考文献 1 1 A b d e l r a h m a n M ， S i v a r a j a h A， T h i e r n e r m a n n C.B e n e f ic i a l e f f e c t s o f P P A R - g a m m a l ig a n d s i n i s c h e m i a - r e p e r f u

31、s i o n i n j u ry, i n f l a m m a t i o n a n d s h o c k J I . C a r d io v a s c R e s , 2 0 0 5， 6 5 ( 4 ) : 7 7 2 - 7 8 1 . 2 1 Z e a L o n g a E , We i n s t e i n P R , C a r i s o n S , e t a l . R e v e r s i b l e m i d d l e c e r e b r a l a rt e r y o c c l u s io n w i t h o u t c r a

32、 n i e c t o m y in r a t s J . S t r o k e , 1 9 8 9 , 2 0 ( 1 ) : 8 4 - 9 1 . 3 1 S a i r a n e n T , C a r p e n O , K a r j a l a i n e n - L i n d s b e r g M L , e t a l . E v o l u - t io n o f c e r e b r a l t u m o r n e c r o s i s f a c t o r p r o d u c t io n d u r i n g h u m a n i s

33、- c h e m i c s t r o k 迁J . S t r o k e , 2 0 0 1 , 3 2 , 1 7 5 0 - 1 7 5 8 . 4 C l a r k WM, R i n k e r L G , L e s s o v N S , e t a l . L a c k o f i n t e r l e u k i n - 6 e x p r e s s io n i s n o t p r o t e c t iv e a g a i n s t f o c a l c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m i s c h e

34、 m i a J . S t r o k e , 2 0 0 0 , 3 1 , 1 7 1 5 - 1 7 2 0 . 5 S h im a z u T , I n o u e I , A r a k i N， e t a l. A p e r o x i s o m e p r o l i f e r a t o r - a c t i v a t e d r e c e p t o r - g a m m a a g o n i a t r e d u c e s i n f a r c t s iz e i n t r a n s i e n t b u t n o t i n p e

35、 r m a n e n t i s c h e m i a J . S t r o k e , 2 0 0 5 , 3 6 ( 2 ) s 3 5 3 - 3 5 9 . 6 S u n d a r a r a j a n S , G a m b o a J L , V i c t o r N A， e t a l . P e r o x i s o m e p r o - li f e r a t o r a c t i v a t e d r e c e p t o r - g a m m a l i g a n d s r e d u c e i n f l a m m a t i o

36、 n a n d in f a r c t i o n s i z e i n t r a n s i e n t f o c a l i s c h e m i a J . N e u r o s c i e n c e , 2 0 0 5 , 1 3 0 ( 3 ) s 6 8 5 - 5 9 6 . ( 收稿 2 0 0 7 - 1 2 - 0 8 ) 精神疾病司法鉴定中智力因素影响的分析 王跃徐静波卫舒丽 杭州市会安局安康医院杭州3 1 1 1 1 3 【 摘要】 目的了解低智能因素在精神病司法鉴定中的影响. 方法用自制登记表回顾分析 2 8 6 例有智能损害的精神病司法 鉴定案例。

37、结果同等程度的智能损害在不同疾病的案由、 智力情况、 伴发疾病等明显不同. 结论有智能损害的不同疾病的司法 鉴定， 既有共性， 也有各自的特点。 智能损害是发生作案行为的基础， 多种因素可起到触发和限制作用.恶性案件的发生与伴发的 精神症状有关。智能损害程度的诊断可能受到被鉴定人及其家人的千扰. 【 关键词】 精神病司法鉴定; 智能损害 【 中图分类号 R 7 4 9【 文献标识码】 A 文章编号】 1 6 7 3 - 5 1 1 0 ( 2 0 0 8 ) 0 2 - 0 0 2 2 - 0 3 A n a l y s i s o n t h e i n f l u e n c e o f

38、i n t e l l e c t u a l f a c t o r s i n j u d i c i a l a p p r a i s a l o f m e n t a l d i s o r d e r s W a n g Y u e ， X u J i n g b o ， W e i S h u l i . A n k a n g Ho s p i t a l , Ha n g z h o u P o l i c e s t a t i o n ， Ha n g z h o u 3 1 1 1 1 3 , C h i n a A b s t r a c t O b j e c t

39、 i v e T o u n d e r s t a n d t h e d i f f e r e n t i n f l u e n c e s o f p o o r i n t e l l e c t u a l f a c t o r s o n j u d i c i a l a p p r a i s a l o f d i f f e r e n t m e n t a l d i s o r d e r s . M e t h o d s T w o h u n d r e d a n d e i g h t y - s e v e n c a s e s o f m e n

40、 t a l d i s o r d e r s j u d i c i a l l y a p p r a i s e d w i t h m e n t a l d a m a g e w e r e r e v i e w e d u s i n g r e g i s t r a t i o n m a d e b y o u r s e l v e s . R e s u l t s I n t e l l e c t u a l l e v e l s a n d c o m p l i c a t io n s w e r e e v i d e n t l y d i f f e r e n t i n d i f f e r e n t d i s e a s e s w i t h 万方数据