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1、】5 8 0 塞丑匡堇盘盍! 嫂! 堡垒旦筮! 堡鲞筮! ! 翅( 鱼王! 21 丛! ：垒四! ：! 塑! ：! ! ! ：! ! ：塑! ：! ；( 地! 型量! ! 旦堡! 旦! ! 立 表1R e t 蛋白在H D 的表达 结果 堑型 扩张段移行段狭窄段对照组 2 2 肠管 段神 无G 结果孺矿面西麴嗉穰1 而 3 讨论 自从发现H D 以来，人们对它的认识逐渐加深，目前大多 数人认为，H D 是多基因遗传性疾病。研究表明R e t 原癌基因 与消化系统、周围及中枢神经系统多种前体细胞的增殖、分 化、存活有关。R e t 基因长约8 0k b ，含2 0 个外显子，编码一种 酪氨酸激酶
2、受体，它在神经脊源性细胞( 周围神经系统的神 经节细胞和中枢神经元) 中均有表达J 。R e t 基因的编码产 物是酪氨酸激酶受体( T K R ) ，T K R 的基本功能是将细跑外信 息转化为可传人胞内的化学信号。R e t 突变后使T K R 功能受 损，活性降低乃至缺乏，从而导致胚胎时期神经节细胞移行受 阻，当R e t 表达量减少一半时，神经节细胞就不能移行到肠壁 内导致H D 发生。3 j 。G D N F 是神经营养因子，在中枢和外周 神经系统中发挥作用，G D N F 家族神经营养因子信号是通过 复合受体途径实现的，复合受体由两部分组成，第一部分是糖 基化的磷脂酰肌醇( G P
3、 l ) ，为G D N F 受体a ( G F R a ) ，另一部分 为原癌基因C r e t 编码的产物蛋白R e t ，它是一种受体酪氨酸 激酶，G F R a 能特异性地结合G D N F 家族成员，促使R e t 磷酸 化，导致一系列胞内途径的激活，从而发挥G D N F 神经营养因 子的生理功能”J 。由于G D N F 是一种膜外蛋白，无法单独进 行信号传导，R e t 是一种跨膜蛋白，它与G F R a 协同作用，共同 参与G D N F 家族营养因子细胞内外的信号传导。因此，G D N F 或R e t 的表达缺失，均可导致神经细胞信号传导受阻，疾病发 生。 目前的研究已证
4、实，R e t 基因的突变在家族性H D 中约占 5 0 ，在散发性病例中约2 0 。我们采用免疫组化法检测 到，R e t 阳性表达广泛分布于正常结肠肌间及黏膜下，在移行 段R e t 的染色强度和量都明显减少，在H D 狭窄段无神经节 细胞阳性表达，由于R e t 的突变，导致胚胎时期神经节细跑移 行受阻，病变肠段肠神经系统发育障碍，从而形成H D 。G D N F 对于神经系统的发育及营养有重要意义，G D N F 促使从胚 胎肠独立出来的肠神经前体细胞的生存、增殖及分化，其表达 缺陷使神经前体细跑过早凋亡而引起肠神经系统发育障碍。 这与我们在H D 狭窄段检测不到G D N F 表达结
5、果一致。 以前H D 的诊断全部依赖于x 线，难免会出现误诊，给患 者带来不必要的伤害，全层活检是H D 组织学诊断的最可靠 依据。然而，这种方式需要全身麻醉，并且有发生肠狭窄和穿 孔的危险。吸取活检狭窄段肠黏膜和黏膜下层样本是较为安 全的方法，已被愈来愈多的医生使用，但由于所取组织较小， 黏膜下神经元不典型等因素，存在一定的误诊率，我们研究发 现：R e t 和G D N F 在H D 的扩张段强阳性染色，在狭窄的肠管 黏膜下无染色，因此在活检肠组织中检测R e t 和G D N F 蛋白， 可以减少H D 误诊的发生，是一种创伤小、准确率高的诊断 H D 方法，为H D 手术方案的选择提供
6、最可靠的依据。 参考文献： 1 E n gC T h eR e tp r o t o - o n c o g e n eI nm u l t i p l ee n d o c r i n en e o p l a s i a t y p e 2H i r s c h s p r u n g Sd i s e a s e J NE n g lJM e d ，1 9 9 6 ，3 3 5 ：9 4 3 9 5 1 2 Gl o v a n nR o m e o ，P a t r i z i eR o n c h e t t o ，Y i n l u o ，e ta 1 P o i n tm u t
7、 a t i o n s a f f e c t i n gt h et y r o s i nK i n a s ed o m a i no ft h eR e tp r o t o o n c o g e n ei n H i r s c h s p m n g d i s e a s e J N a t u r e ，1 9 9 4 ，3 6 7 ( 2 7 ) ：3 7 7 - 3 7 8 3 管涛，李继承，李民驹，等中国人先天性巨结肠R e t 基因突变家 系研究 J 中华小儿外科杂志，2 0 0 3 ，2 4 ( 6 ) ：5 1 6 - 5 1 7 4 M a r t u e e
8、 i e l l oGT h o m p s o nH ，M a z z d aC ，e ta 1 G D N Fd e f i c i tH i r s c h s - p r u n g d i s e a s e J 】J P e d i a t rS u r g ，1 9 9 9 ，3 3 ( 1 ) ：9 9 1 0 2 ( 收稿日期：2 0 0 7 - 0 1 1 2 ) V a nG i e s o n 胶原纤维染色方法的探索 张赛霞，黎晖，陈东风 ( 广州中医药大学，广东广州5 1 0 4 0 5 ) 关键词 V a nG i e s o n 染色法；胶原纤维；褪色 中图分类号
9、 R - 3 3 1 文献标识码 B 文章编号 1 6 7 1 - 5 0 9 8 ( 2 0 0 7 ) 1 2 1 5 8 0 - 0 2 在科研工作中，普遍使用V a nG i e s o n 染色法显示胶原纤 维，但该法中各种染液的对抗作用往往不易得到满意的效果。 如苦味酸对细胞核有褪色作用，酸性品红与苦味酸混合的比 例不同直接影响染色结果。如何优化三者问的关系，使染色 达到最佳效果，我们进行了以下探索。 1 材料与方法 1 1 染液配制 1 1 1 W e i g e r t 铁苏木素染液 A 液：苏木精1g ，无水乙醇 1 0 0m l 。B 液：3 0 三氯化铁4m I ，蒸馏水
10、1 0 0m l ，浓盐酸1 f n l 。使用前取A 液与B 液等量混合即成。 1 1 2 M a y e r 苏木素染液苏木精0 2g ，钾矾1 0g ，碘酸钠 0 0 4g ，蒸馏水2 0 0m l 。加热使溶解，此时溶液为蓝色，加入 段行段张移窄 万方数据 塞用医撞苤蠢! 塑! 生! 旦箜! 垒鲞筮! ! 塑( 鱼刊) 丛! ：垒巳巫! ：! 塑! ：Y 尘：! 堡：! ! ( ! ! ! ! 鲤垦! ! 型堡! 旦! Y 出 + 1 5 8 1 水合氯醛1 0g ，枸橼酸0 2g ，继续加热煮沸5m i n ，此时染液 呈紫红色，冷却后过滤，便可立即使用。 1 1 3 H a r r
11、 i s 苏木素染液苏木精1g ( 溶于1 0m l 无水乙醇 中) ，钾矾2 0g ，蒸馏水2 0 0m l ，氧化汞0 5g ，冰醋酸8m l 。将 钾矾溶于蒸馏水中，加热使溶解，稍冷后加入苏木精，再缓慢 加入氧化汞。泠却后加入冰醋酸，过滤备用。一周后成熟可 用。 1 1 4V a nG i e s o n 染液A 液：l 酸性品红水溶液；B 液：苦 味酸饱和水溶液。临用前分别按A ：B = 1 ：9 、2 ：8 、3 ：7 、4 ：6 的比例混合使用。 1 2 染色方法切片经二甲苯脱蜡，各级梯度酒精“下行” 至水。分别以W e i g e r t 、M a y e r 、H a r r
12、i s 苏木素染液深染3 0r a i n ， 流水冲洗使蓝化，蒸馏水漂洗，吸水纸吸于。V a nG i e s o n 染液 染色5m i n ，吸水纸吸干，9 5 酒精( 滴加数滴苦味酸水溶液) 分色数秒钟，吸水纸吸干，无水乙醇脱水3 0s ，二甲苯透明， D P X 胶封片。 2 结果 2 1 细胞核颜色用M a y e r 苏木素染色，细胞核呈紫蓝色， 再经V a nG i e s o n 染色后，细胞核略有褪色，变为棕红色，但仍 清晰；用W e i g e r t 铁苏木素染色，细胞核呈灰黑色，再经V a n G i e s o n 染色后，细胞核基本不褪色；用H a r r i s
13、 e 苏木素染色，细 胞核呈深蓝色，再经V a nG i e s o n 染色后，细胞核几乎完全褪 尽。 2 2 纤维颜色用1 酸性品红与苦味酸饱和液按不同比 例配成的V a nG i e s o n 染液染色后，肌纤维呈不同深浅的黄色， 胶原纤维为不同程度的红色，红细胞呈黄绿色。具体结果如 下： 表1 酸性品红与苦味酸混合比例及染色结果 3 讨论 胶原纤维是结缔组织的一种组成成分，由成纤维细胞所 产生，易被酸性染料着色。V a nG i e s o n 作为传统的胶原纤维 染色方法之一，其配方中酸性品红用于染胶原纤维，而苦味酸 能使肌纤维黄染，染色效果鲜艳明亮，且本法不受组织固定液 的限制，
14、因而深受科学研究欢迎。本文中试探将V a nG i e s o n 染液中两种染料按不同比例组成配方使用，目的在于探索能 否根据不同组织选用不同比例配方达到不同的染色效果。经 过我们反复比较试验，按1 酸性品红3 份与7 份苦味酸饱 和水溶液混合配制而成的V a nG i e s o n 染液，染色结果胶原纤 维与肌纤维颜色鲜艳且对比明显。另外，苏木精为组织学技 术中常用的细胞核优良染料，但苏木精单独使用并没有染色 作用，必需经过氧化并与媒染剂结合才可形成具备染色能力 的色精，常用的媒染剂有钾矾、铵钒、铁钒等，且用不同媒染剂 配制成的不同苏木素染液染色效果也不同，我们对比使用不 同苏木素染液目
15、的在于找寻一种用于V a nG i e s o n 染色法的细 胞核染液，该染液染色后不易被苦味酸褪掉。反复比较发现， W e i g e r t 铁苏木素深染后再经V a nG i e s o n 染色，胞核仍保持较 好颜色，分析各种苏木素配方，可能在于媒染剂三氯化铁的作 用。用M a y e r 苏木素染色也可获得满意效果，且结果更为清 晰明亮，但V a nG i e s o n 染色时间需要缩短，否则细胞核颜色易 被褪掉。 实验结果并结合以上分析，使用V a nG i e s o n 染色法，若将 酸性品红与苦味酸按3 ：7 比例配制染液，并用含铁的苏木素 染液如W e i g e r
16、t 铁苏木素染细胞核，可获得较为稳定的操作方 法，且可使肌纤维、胶原纤维、细胞核的颜色对比更为突出。 也可根据需要选用其他比例的V a nG i e s o n 染液。 4 体会 V a nG i e s o n 染色后不必经过水洗，用吸水纸吸于再分色 可避免胶原纤维褪色；用9 5 酒精分色时加几滴苦味酸及乙 醇脱水时间尽量短( 不超过1r a i n ) ，可避免肌纤维黄色褪去。 本法中细胞核必须深染，不必分色。本法的最大缺点是胶原 纤维易褪色，不能长久保存( 保存期约1 个月) ，需及时拍照。 参考文献： 【1 杜卓民实用组织学技术【M 第1 版人民卫生出版社，1 9 8 2 ： 7 4
17、- 7 7 ，1 0 0 - 1 0 5 2 易家农组织和胚胎学技术 M 湖南医学院，1 9 8 6 ：6 0 - 6 4 ，9 3 9 5 ( 收稿日期：2 0 0 7 4 ) 1 - 2 2 ) 胆碱酯酶在肝病检测中的临床意义 王利丽 ( 济南市中心医院，山东济南2 5 0 0 1 3 ) 摘要 目的：通过检测胆碱酯酶在部分肝脏病患者血清中的活性，从而证明其在肝病临床诊断中的价值。方 法：用酶速率法对1 2 6 例观察对象血清( C H E ) 活性进行检测。结果：急性肝炎、肝硬化和肝癌患者血清C H E 活性明显 降低。结论：C H E 在蛋白质合成受损时的肝病患者的诊断及治疗中是一项很
18、有价值的检测指标。 关键词 血清胆碱酯酶；肝病；检测指标；临床价值 中图分类号 R 5 7 5 文献标识码 B 文章编号 1 6 7 1 - 5 0 9 8 ( 2 0 0 7 ) 1 2 1 5 8 1 - 0 2 人体组织中有两种胆碱酯酶，一种是分布在红细胞和神 经组织中的乙酰胆碱酯酶( 又称真性胆碱酯酶) ；另一种是广 泛分布于血浆及许多非神经组织中的假性胆碱酯酶( 非特异 性胆碱酯酶) ，我们一般称假性胆碱酯酶( C H E ) 。C H E 是一 种生物酶，具有降解胆碱酯并在自主神经系统和肌肉运动系 统中起神经传递的功能，它存在于血清、肝、大脑、肾、肠及胰 中，对其检测常被用于有机磷中毒患者的辅助诊断。由于 C H E 是由肝脏生成后分泌入血的，所以它还能反映肝实质细 万方数据