《[商检标准]-SN 0170-1992 出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法1.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《[商检标准]-SN 0170-1992 出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法1.pdf（15页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、SN 中华人民共和国进出 口商品检验行业标准 S N 0 1 7 0 一 9 2 出口食品沙门氏菌属 ( 包括亚利桑那菌) 检验方法 M e t h o d f o r d e t e c t i o n o f S a l mo n e l l a e ( i n c l u d i n g A r i z o n a ) i n f o o d f o r e x p o r t 1 9 9 2 门 2 一 2 8 发布 1 9 9 3 一 0 5 一 0 1 实施 中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品沙门氏菌属 ( 包括亚利桑那菌) 检
2、验方法 S N 0 1 7 0 一9 2 代替z a 8 一8 3 M e t hod f or de t e c t i on o f Sa l mon e l l a e ( i n c l u d i n g Ar iz o n a ) i n f o o d f o r e x p o r t 1 主题内容与适用范围 本标准规定了冻猪肉、 冻鸡肉、 鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属( 包括亚利桑那菌) 的检验方法。 本标准适用于冻猪肉、 冻鸡肉、 鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属( 包括亚利桑那菌) 检验。其他食 品可参照使用。 2 样品制备及增菌培养 2 . 1 肉类 2，1 如为冷冻产
3、品， 应在 4 5 C以下不超过 1 5 mi n ， 或在 2 5 不超过 1 8h 解冻。若不能及时检验 应置于一1 5 C 左右保存。非冷冻而易腐的食品， 置于 4 冰箱保存。 2 . 1 . 2 以无菌操作， 称 取剪碎后的瘦肉样品2 5 g , t 于灭菌均质杯内， 加入2 5 m L 缓冲 膝水增菌液. 以 8 0 0 0 - 1 0 0 0 0 r / min均质 1 m i n ， 移入盛有2 0 0 mL缓冲陈水增菌液的 5 0 0 mL广口瓶内， 混合均匀， 如 p H低于 6 . 6 ， 用灭菌 1 m o l / L氢氧化钠溶液. 调 p H至 6 . 8 士。 . 2
4、 ， 于 3 7 水浴培养4 h ( 以增菌液达到 3 7 C 时算起) ， 进行前增菌; 其后. 移取 1 0 , n L转种于盛有 1 0 0 m L四硫磺酸盐煌绿增菌液的 2 5 0 mL玻 璃瓶内， 摇匀， 于 4 2 士1 C培养2 0 士2h ， 进行选择性增菌。 必要时， 同时另称取2 5 g剪碎的瘦肉样品. 加 入 2 5 mL亚硒酸盐胧氨酸增菌液， 同样进行二 ; 质。其后， 移入盛有 2 0 0 r “ L亚硒酸盐胧氨酸增菌液的 5 0 0 m L 广口瓶内， 混合均匀， 如p H低于6 . 6 , 泪灭菌1 m o l / L氢氧化钠溶液调p H至6 . 3 10 . 2
5、 ， 于3 7 C 培养 2 4 士2 h， 进行直接选择性增菌。 2 . 2蛋品 2 . 2 . 1 冰蛋品( 冰鸡全蛋、 冰鸡蛋白、 冰鸡蛋黄) 2 . 2 . 1 . 1 按 2 . 1 . 1 解冻和保存样品。 2 . 2 . 1 . 2 以无菌操作称取样品2 5 g置于盛有2 2 5 m L四硫磺酸盐煌绿增菌液的5 0 0 m L厂口 瓶内. 混 合 均匀， 如p H低于6 . 6 . 用灭菌1 m o l / L氢氧化钠溶液调p H至6 . 8 士。 . 2 ， 于3 7 培养2 4 士2 h ， 进行 直接选择性增菌。 2 . 2 . 2 干蛋品( 鸡全蛋粉、 鸡蛋白片、 鸡蛋白
6、粉、 鸡蛋黄粉) 以 无菌操作将样品 碾碎后， 称取2 5 g 加 入盛有2 2 5 m L缓冲陈水增菌液的5 0 0 m L广口瓶内( 瓶内 事先 盛有直径3 - 4 m m的玻璃珠约5 0 粒) ， 振荡1 0 m i n ， 如p H低于6 . 6 ， 用灭菌1 m o l / L 氢氧化钠溶 液调p H至6 . 8 士。 . 2 ， 于 3 7 C培养2 0 - 2 4 h ， 进行前增菌; 其后， 移取 1 0 m L转种于盛有1 0 0 mL亚硒酸 盐胧氨酸增菌液的 2 5 0 m L玻璃瓶内， 混匀， 于 4 2 士1 培养 2 0 士2h ， 进行选择性增菌。 中华人民共和国国
7、家进出口商品检验局 1 9 9 2 - 1 2 - 2 8批准 1 9 9 3 一 0 5 一 0 1 实施 1 S N 017 0一 9 2 3 分离培养 3 . 1 将增菌培养液摇匀， 以无菌操作， 用直径 3mm的接种环分别挑取 1 环. 分别划线于表面无凝结水 的亚硫酸秘和胆硫乳琼脂平板各一个( 必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用) ， 于3? C培养 24士Z h ， 3 . 2 观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落， 如无典型或可疑菌落， 应再继续培养 24士 Zh 。 沙门氏菌属的菌落特征见表 1 . 表 1 沙门氏菌属菌落特证 琼月 旨 平板 棕褐色或灰色至黑色。 有
8、时有金属光泽 亚硫耽秘琼脂 围培养基呈棕色或黑色， 有些菌株呈 色. 周围培养荃不变或微变暗 胆硫乳琼脂 无色半透明自黑匕中心或几乎全为黑色。有 些菌株无色半透明 乳糖阴性菌株， 相似于沙门氏菌菌落， 乳糖 阳性菌株为价红色有暗色中心 亚利桑那茵凉脂 黄色有暗蓝色中心， 周围培养基中有黄色沉 淀物 粉红色有黑色中心 有时为全黑色. 周围培 养基呈红色， 被发醉卫矛醉或蔗糖的细菌包 围时， 菌落边缘可为浅黄色 4 鉴定 4 . 1 筛选试验 4 . 1 . 1 每个 琼脂平 板至少应挑选2 个典型或可疑菌落， 分别用接种针接种赖氨酸脱梭酶培养基或尿素 酶琼脂一管， 接种后无须灭菌接种针， 直接再
9、接种三糖铁琼脂一管于 37培养24士Zh 。 4 . 1 . 2 挑取菌落后的琼脂平板， 应置于4 8 至少保留24 h ， 以备必要时复查。 4 . 1 . 3 按表2或表3 结果进行判断。 表 2三塘铁琼脂和籁氨酸脱羚酶培养基筛洗 三糖铁琼脂 赖氨酸脱 矮酶培 养圣 初步判断 斜面 底层产气硫化氢 K K A A一 K A A A 一盒 +( 一) 斗 ( 一 ) + ( 一 ) + ( 一 ) 十 / 一 一 卜( 一 ) + ( 一 ) 十 ( 一 ) +( 一) 一 十一 + 一 一尸 +/ 一 可疑沙门氏菌属 可疑沙门氏菌属 可疑亚利桑那菌 非沙门氏苗属 非沙门氏菌属 注: K 一
10、 产钱; 十一阳性反应。 一) 一少见反应汰一产酸; 一一阴性反应; +/ 一 一 阳性或阴性反应. s N 0 1 7 0 一9 2 表 3 三糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选 三糖铁琼脂 尿素酶琼脂初步判断 斜面底层产气硫化氢 K A K A K A A A A K +( 一) + ( 一 ) +( 一) + ( 一 ) +/ 一 +( 一) +( 一) + ( 一 ) 一 丫 + . 小 / 一 可疑沙门氏菌属 可疑亚利桑那菌 非沙门氏菌属 非沙门氏菌属 非沙门氏菌属 注: K 一产碱: +一阳性反应八一) 一少见反应, A一产酸， 一一阴性反应; +/ 一一阳性或阴性反应. 4 . 2 生化试
11、验 4 . 2 . 1 将符合表 2 或表 3 可疑沙门氏菌属特性的三糖铁琼脂培养物， 按表 4 进行生化试验( 表中赖氨 酸脱梭酶试验或尿素酶试验的结果见 4 . 1 结果， 不再另做) 。 表 4 沙门氏菌属生化反应 反应 序 号 生 化项 目 沙 门氏菌亚利 桑那菌 尿 素酶 试验 V- P试验 袄之钾试验 赖氨酸脱梭酶试验 a i l噪试验 丙二酸钠试验 卫 矛醉试验 注: 山一阳性反应; 一一阴性反应 d 一反应不定。 4 . 2 . 2 所有生化试验管均于3 7 培养2 4 士2 l i , 4 . 2 . 3 生化试验结果符合表4沙门氏菌属特性的按 4 . 3 进行。 4 . 3
12、 血清学试验 4 . 3 . 1 枪查培养物有无自凝性 在洁净的玻片上加一滴生理盐水， 将待试培养物混合于生理盐水滴内， 使成为均一性的混浊悬 液， 将玻片 轻轻摇动3 0 -6 0 s ， 在黑色背景下观 察反应( 最好用放大镜观察) 。 如菌体彼此相凝集成明 显或比 较明显小颗粒状物， 即认为有自凝性。反之无自凝性。 4 . 3 . 2 检查“ O ” 抗原 对无自凝 性的培养物， 按照4 . 3 . 1 的程序进行试验， 但以多价“ O ” 血清代替生理盐水， 在2 m i n内 判断结果。如为阳性结果以单价 O” 血清进行分群试验。如为阴性结果， 必要时， 可结合 4 . 2结粱按 4
13、 . 3 . 3 进行试验， 再以多价和单价“ O” 血清进行试验。 4 . 3 . 3 检查“ v i ” 抗原 按照 4 . 3 . 1 的程序进行， 但以 Vi ” 血清代替生理盐水。 4 . 4 根据 4 . 2和4 . 3 试验结果， 按照表 5进行判定。 S N 017 0一 92 表 5 沙门氏菌属生化试验与血清学试验结果判定 类别生化试脸血清学试验其他试脸判定 1 符合表4中沙门氏菌生化特性u 0” 因子血清分群阳性沙门氏菌 2 符合表4中沙门氏菌生化特性. U; 因子血清分群阴性 菌落典型. 镜检 革蓝氏阴性无 芽胞杆菌 沙门氏菌 3 尿家酶试验阳性非沙门氏菌 4 尿索酶试验
14、阴性， 表 4生化反应 3 - 5项中任 一项不符合沙门氏菌特性 “ O“ 因子血清分群阳性沙门氏菌 5 尿素酶试验阴性， 表 4生化反应 2 5项中任 一项不符合沙门氏菌特性 1 0” 因子血清分群阴性 非沙门氏菌 6 尿素酶试验阴性， 表4生化反应 2 5 项中任 二项或二项以上不符合沙门氏菌特性 非沙门氏菌 7符合表4中亚利桑那菌生化特性1 0” 因子血清分群阳性亚利桑那 菌 6 符合表4中亚利桑那菌生化特性 l u U 因子血清分群阴性 菌落典型， 镜检 革蓝氏阴性无 芽胞杆苗 亚利桑那菌 9尿素酶试验阳性 非亚利桑那菌 1 0 尿素酶试验阴性， 表4生化反应 3 - 5项中任 一项不
15、符合亚利桑那菌特性 4 01 1因子血清分群阳性亚利桑那菌 1 1 尿家酶试验阴性， 表4生化反应 2 -5项中任 一项不符合亚利桑那菌特性 “。 ，因 子 血 清 分 ， 阴 、 非亚利桑那菌 1 2 尿素酶试验阴性， 表4生化反应 2 5项中任 两项或两项以上不符合亚利桑那菌特性 非亚利桑那菌 注: 丙二酸钠试验阴性， 卫矛醉试验反应不定的菌株， 按上述 1 - 6 类别结果进行判断. 丙二酸钠试验阳性， 卫矛醉试验阴性的菌株， 按上述 7 - - 1 2 类别结果进行判断. 如以上生化项目仍不能判定时， 可按P“ R“ 爱德华， W “ H 爱文: 4 肠杆菌科的鉴定 ( 1 9 7 3
16、中译本) ， 扩大 必要的生化试验.结合血清学作综合判定. 5 报告结果 5 . 1 报告阳性结果: “ 发现沙门氏菌” 或“ 发现亚利桑那菌” 或“ 发现沙门氏菌和亚利桑那菌” 。 5 . 2 报告阴性结果: “ 未发现沙门氏菌” 或“ 未发现亚利桑那菌” 或“ 未发现沙门氏菌和亚利桑那菌” 。 6 培养基 6 . 1 营养肉汤( N13 ) 蛋白陈 1 0 . 0 g 酵母膏 3 . 。 9 氯化钠 5 . 0 9 葡萄糖 1 . 0 g 蒸馏欠1 0 0 0 . 0 mL 将冬n# 4 r 加入蒸馏水中， 搅混均匀， 静置约 1 0 n u n . 加热老沸至完全溶解， 调至 p H 7
17、 . 5 士。 . 1 ， 分装 S N 0 1 7 0 一9 2 试管( 1 2 m m X1 0 0 mm) ， 每管约 3 mL , 高压灭菌 1 2 1 C, 1 5 mi n , 6 . 2 营养琼脂( N A) 蛋白 陈 1 0 . 0 g 酵母膏3 . 0 g 氛化钠 5 . 0 g 葡萄糖 1 . 。 9 琼 脂 1 2 . 0 g 蒸馏水1 0 0 0 . 0 m L 将各成分加入蒸馏水中， 搅混均匀， 静置约1 0 m i n ， 加热煮沸至完全溶解， 调至p H 7 . 5 士。 . 1 ， 分装 试管( 1 2 mmx1 0 0 m m) ， 每管约 3 mL , 高压
18、灭菌 1 2 1 C, 1 5 mi n , 6 . 3 缓冲陈水增菌液( B P ) 蛋白 陈1 0 . 0 g 汉 化钠5 . 0 g 磷 酸氢二钠( 含1 2 个结晶 水) 9 . 0 g 磷酸二氢钾L5 g 蒸馏水1 0 0 0 . 0 m L 将各成分加入蒸馏水中， 搅混均匀， 峥置约1 0 m in ， 加热煮沸至完全溶解， 调至p H 7 . 2 士。 . 1 ， 高压 灭菌1 2 1 C. 1 5 min , 临用时， 以无菌操作分装灭菌玻璃瓶， 每瓶 2 0 0 mL或2 2 5 mL , 6 . 4 亚硒酸盐胧氨酸增菌液( S C ) 蛋白 陈5 . 。 9 乳 糖4 .
19、。 9 磷酸氢二钠( 含1 2 个结晶 水) 1 0 . 0 g 亚硒酸氢钠4 . 0 9 L - 胧氨酸0 . 0 1 g 蒸馏水1 0 0 0 . 0 mL 除亚硒酸氢钠和 L - 胧氨酸外， 将各成分加人蒸馏水中， 搅混均匀， 静置约 1 0 mi n ， 加热煮沸 5 m i n 至完全溶解， 冷至5 5 C 以下， 以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1 g / L L - 胧氨酸溶液1 0 m L ( 称 取。 . 1 g L - 胧氨 酸， 加1 m o l / L氢氧化钠溶液1 5 m L ， 使溶解， 再加灭菌燕馏水至1 0 0 m L即成， 如为D L - 肮氨酸， 用 量应加倍)
20、。 摇匀， 调至p H 7 . 0 士。 . 1 ， 以无菌操作分装灭菌玻璃 瓶内， 每瓶1 0 0 m L或2 0 0 m L , 6 . 5 四硫磺酸盐煌绿增菌液( T = B ) 6 . 5 . 1 基础液 蛋白 陈 1 0 . 0 g 牛肉膏5 . 09 氯化钠 3 . 0 9 碳酸钙4 5 . 0 g 蒸馏水1 0 0 0 . 0 m L 除碳酸钙外， 将各成分 加入蒸馏水中， 搅混均匀， 静置约1 0 m i n ， 加热煮沸至完全溶解， 再加入碳酸 钙， 调至p H 7 . 0 士0 . 1 1 高压灭菌1 2 1 C , 2 0 m i n , 6 . 52 硫代硫酸钠溶液 硫
21、代 硫酸钠( 含5 个结晶水) 5 0 . 0 g 蒸馏水加至 1 0 0 . 0 m L 高压灭菌 1 2 1 C , 2 0 m i n , 6 . 5 . 3 碘 溶液 S N 0 1 7 0 一9 2 碘片2 0 . 。9 碘化 钾 2 5 . 。 g 蒸馏水 加至1 0 0 . 0 m L 将碘化 钾充 分溶解于少量的 蒸馏水中， 再投入 碘片， 振摇玻瓶至 碘片全部溶解为止， 然后加蒸馏水 至规定的总量. 贮存干褐色瓶内， 塞紧瓶盖备用。 6 . 5 . 4 煌绿水溶液 熄绿。 . 5 9 蒸馏水 1 0 0 . 0 M I , 济解后， 存放暗处. 不少于 l d ， 使其自 然
22、灭菌。 6 . 5 . 5 牛胆盐溶液 牛 胆盐 1 0 . 0 g 蒸馏水 1 0 0 . 0 m l . 加热煮沸至完全溶解， 高压灭菌1 2 1 C . 2 0 m i n . 65 . 6 制备 基础液9 0 0 . 0 m L 硫代硫酸钠溶液1 0 0 . 0 MI . 碘解液2 0 . 0 M I , 煌绿水溶液2 . 0 mL 牛胆盐溶液5 0 . 0 MI , 临用前， 按上列顺序， 以无菌操作依次加入基础液中， 每加入一种成分 ， 均应摇匀后再加入另一种成 分。 鼓后分装于灭菌玻璃瓶内， 每瓶1 0 0 M L或2 2 5 M I , , 6 . 6 亚硫酸秘琼脂( B S
23、) 蛋白陈1 0 . 0 g 牛肉 膏5 . 0 g 葡 z j r 5 . 0 9 硫酸亚铁。 . 3 g 磷酸氢二钠 4 . 0 g 煌 绿0 . 0 2 5 g 或5 g / L 水溶液5 m L 柠檬酸秘按 2 . 0 g 亚硫酸钠6 . 0 g 琼 脂1 8 . 0 g 蒸 馏水1 。 。 。 ， 。 M I , 将前三种成分加入 3 0 0 MI , 蒸馏水中( 制作基础液) ， 硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入 2 0 M I . 和 3 0 M I _ 蒸馏水中， 柠檬酸秘按和亚硫酸钠分别加人另一2 0 m L和3 0 M I , 蒸 馏水中， 琼脂加入6 0 0 m l . 蒸
24、饰水中。 然后分别搅拌均匀， 静置约1 0 mi n ， 加热煮沸至完全溶解。 冷至 8 0 C左右时， 先将硫酸亚铁和磷 残较二钠混匀， 倒入基础液中， 混匀。 将柠横酸秘钱和 亚硫酸 钠混匀， 倒入基础液中， 再混匀。 调至p H 7 . S 士 。 . 工 . 随即倾入 琼脂液中， 混合均匀. 冷至5 0 -5 5 -C 。 加人煌绿溶液. 充分混匀后立即倾注 平皿， 每 皿约2 0 mL . 本培养基不需要高压灭菌， 在制备过程中不宜过分加热， 避免降低其选择性， 新配制的培养基呈玉 白己 不透明， 贮于室 温暗处， 超过4 8 h 会降低其选择 性， 本 培养基宜于当 天制备， 第二
25、天使用。 6 . 7 胆硫乳琼脂( 胆盐硫化氢乳糖琼脂D H L ) 蛋白脏2 0 . 0 g 牛肉 汗3 . 0 “ S N 0 1 7 0 一 9 2 乳 糖1 0 . 0 g 蔗 糖1 0 . 。 g 牛胆盐2 . 0 9 硫代硫酸钠 2 . 2 9 柠檬酸钠1 . 0 g 柠檬酸铁按 1 . 0 g 中性红0 . 0 3 g或 5 g / L水溶液 6 m L 琼 脂1 6 . 0 g 蒸馏水1 0 0 0 . 0 m l 除 中 性 红 和 琼 脂 外， 将j 渺 成 分 加 入4 0 0 m L 蒸 馏 水中 ， 搅 拌 均 匀， 静 置 约1 0 m i n ， 加 热 煮 沸
26、至 完 全 溶解， 调至p H 7 . 3 士0 . 1 . 另将琼脂加入 6 0 0 mL蒸馏水中， 搅拌均匀， 静置约1 0 m i n ， 加热煮沸至完全溶 解。 将两种溶液混合后， 再加入5 g / L中 性红水溶液6 m L , 搅拌 均匀， 冷至5 0 -5 5 C , 倾注平皿， 每皿约 2 0 mL, 本培养基不需高压灭菌， 也不再进行任何加热。制成的平板为橙黄色。 6 . 8 亚利桑那菌琼脂( S A) 蛋白冻1 2 . 0 g 酵母膏3 . 09 牛胆盐9 . 0 g 蔗塘1 2 . 0 g 丙二酸钠6 . 0 g 卫矛醇2 0 . 0 g 葡萄糖1 . 0 g 氯化钠5
27、. 0 9 硫代硫酸钠5 . 0 g 柠檬酸铁按L S 9 酚红0 . 0 4 g或5 g / L溶液8 mL 琼脂1 4 . 0 g 蒸馏水1 0 0 0 . 0 mL 除酚红和 琼脂外， 将其他成分加人4 0 0 m L 蒸馏水中， 搅拌均匀， 加热煮 沸至完全溶解， 调至p H 7 . 1 士 0 . 1 a 将琼脂加入6 0 0 m L蒸 馏水中， 搅拌 均匀， 静置约1 0 m i n ， 加热煮沸至完 全溶解， 冷至约9 0 -C ， 将上 述溶 液加入琼脂中， 摇匀， 再加入酚红指示剂， 棍匀， 冷至5 0 - - 5 5 0C ， 倾注平皿， 每 皿约2 0 m L . 本培养
28、基不需高压灭菌， 制成的平板为透明桔红色。 6 . 9 三糖铁琼脂( TS I ) 蛋白陈2 0 . 0 g 牛肉 齐3 . 0 9 乳 糖1 0 . 0 g 蔗糖1 0 . 0 g 葡萄糖1 . 0 9 硫酸亚铁钱( 含 6个结晶水、。 ， 59 酚红 ;。 . 0 2 5 g或 5 g / L溶液 5 mL 诫化 钠5 . 0 g 硫( C 硫酸钠0 . 5 9 s N 0 1 7 0 一9 2 琼脂1 2 . 0 g 蒸馏水1 0 0 0 . 0 mL 除酚 红和琼脂外， 将其他成分加入4 0 0 m L蒸 馏水中， 搅拌 均匀. 静置约1 0 m i n ， 加热煮沸至完全溶 解， 调
29、至p H 7 . 4 士 。 . 1 。 另将琼脂加入6 0 0 m L 蒸馏水中， 搅拌均匀， 静置约1 0 m i n , 加热煮沸至完全溶 解 。 将上述两溶液混合均匀后， 再加入酚红指示剂， 混匀， 分装试管( 1 2 m m X 1 0 0 m m) ， 每管约 2 -4 mL ， 高压灭菌 1 2 1 C1 0 m i n或 1 1 5 C 1 5 mi n ， 灭菌后置成高层斜面， 呈桔红色。 6 . 1 0 赖氨酸脱梭酶培养基( L D) 醉母膏3 . 0 9 葡萄糖1 . 。 9 L 一 赖氨酸 5 . 0 g 澳甲酚紫 0 . 0 1 6 g 或8 g / L溶液2 m L
30、 燕馏水1 0 0 0 . 0 m L 除澳甲酚紫外， 将其他成分加入蒸馏水中， 搅拌均匀。 静置约 切 mi n ， 加热煮沸至完全溶解， 调至 p H 6 . 7 士0 . 1 ， 加入澳甲酚紫， 混匀， 分装试管( 1 2 m m X 1 0 0 m m) ， 每管1 - 1 . 5 m L , 高压灭菌1 2 1 C. 1 5 mi n , 试验与判断: 接种待试菌. 于3 7 C 培养 2 4 士2h 。阳性反应为紫色， 阴性为黄色。 6 . 1 1 尿素酶琼脂( U) 蛋白陈L0 9 葡萄搪1 . 0 g 尿素2 0 . 。g 氯化钠5 . 0 9 磷酸二氢钾 2 . 0 9 酚
31、红。 . 0 1 2 g 或5 g / L 溶液2 . 5 m L 琼 脂1 5 . 0 g 燕馏水1 。 。 。 m L 除酚红和尿素外， 将其他成分加入蒸馏水中， 搅拌均匀， 静置约 1 0 m i n ， 加热煮沸至完全溶解， 调至 p H 7 . 0 10 . 1 ， 高压灭菌1 2 1 C , 1 5 m i n ， 冷至5 0 - 5 5 -C ， 以无菌操作加入尿素2 0 g ( 4 0 0 g / L业经除菌过 滤的 尿素溶液5 0 m L ) 和5 g / L酚红溶液2 . 5 m L , 混匀， 分装灭菌试管( 1 2 m m X 1 0 0 m m ) ， 每管2 3 m
32、L , 置成斜面。 试验与判断: 大量接种待试菌于 3 7 培养 2 4 士2 h , 强阳性反应为深红色。 弱阳性为粉红色， 阴性为 黄色或不变色。 6 . 1 2 V- P半固体琼脂( VP ) 6 . 1 2 . ， 制备 蛋白陈1 2 . 0 g 酵母膏 1 . 0 g 葡萄 糖 1 0 : o 9 氯化 钠 5 . 0 g 琼 脂 3 . 0 g 蒸馏水1 0 0 . 0 m L 将各成分加入蒸馏水中. 搅拌均，. 脚置约7 ! % m i n ， 加热煮沸至完全溶解， 调至p H 7 . 3 士。 . 1 ， 分装 试管( 1 2 mmX1 0 0 m m) ， 每管 1 - 1
33、. 5 mL ， 高压灭菌 1 2 1 C, 1 0min ， 灭菌后立即取出冷却备用。 6 . 1 2 . 2 试验判断 s N 0 1 7 0 一9 2 6 . 1 2 . 2 . 1 配制试剂 甲液: a - 蔡酚 . 0 g 无水乙醇溶液1 0 0 . 0 m L 乙液 : 氢氧化钾4 0 . 0 g 肌 酸。 . 3 9 蒸 馏水1 0 0 . 。 m L 先将氢氧化钾溶于水中， 再加入 肌酸. 甲液和乙液 保存于4 冰箱中， 可使用2 个月。 6 . 1 2 . 2 . 2 试验 接种幼嫩待试菌， 于 3 7 C培养 2 4 士2h ， 将甲液 0 . 2 m L( 约 6 滴)
34、加入试管中， 摇混均匀， 再加乙液 0 . 1 mL ( 约 3 滴) ， 再摇混均匀。 6 . 1 2 - 2 . 3 判断 阳 性反应立即或在1 5 m i n 内呈现红色， 阴 性为 铜色。 阴性结果在1 h 后再 做一次检查。 有些试管在 数小时后红色会逐渐消失， 此仍作阳性反应， 6 . 1 3 . 引 噪培养基( D: 6 . 1 3 . 1 制备 蛋白陈1 0 . 。g 氯化钠5 . 0 g D L 一 色氨酸1 . 0 g 蒸馏水1 0 0 0 . 0 m L 除 D L 一 色氨酸外， 将其他成分加入蒸馏水中， 搅拌均匀， 静置约 1 0 m i n 。另将 D L 一 色氨
35、酸加入约 4 m L I m o l 儿 氢氧化钠溶液中， 待溶解后， 再将两液进行混合并加热煮沸至完全溶解， 调至p H 7 . 4 士0 . 1 ， 分装试管( 1 2 m m X1 0 0 m m) ， 每管 1 -1 . 5 mL, 高压灭菌1 2 1 C! 1 5 m i n , 6 . 1 3 . 2 试验与判断 6 . 1 3 . 2 . 1 配制试剂 柯凡克试剂: 对二甲 氨基苯甲醛1 0 . O g 戊 醇1 5 0 . 0 m l 浓盐酸5 0 . 0 mL 将色泽鲜明干燥的对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中， 缓慢搅拌加入盐酸 加热至6 0 C . 呈深黄色， 静 置6 - 7
36、h . 变成黄色即可使用。 试液宜小 量配制， 不用时保存于4 C 冰箱内。 久存后 试液变成黄褐色不可 使用。 6 . 1 3 - 2 . 2 试验 接种待试菌， 于3 7 C 培养2 4 士2 h , 滴加 柯凡克试剂。 . 1 m L , 6 . 1 3 . 2 . 3 判断 阳性反应出现红色环; 阴性为黄棕色环。 6 . 1 4 佩化钾培养基( K C N ) 6 . 1 4 . ， 制备 蛋白府1 0 . 0 g 氯化钠5 0 9 磷酸_氢钾0 . 2 2 59 s N 017 0一 92 磷酸氢 二钠5 . “9 硝酸钾( 无亚硝酸盐)1 . 0 9 5 g / L氰化钾 溶液1
37、0 . 0 m L 蒸 馏水1 0 0 0 . 0 m L 将蛋白陈、 氯化钠和硝酸钾加入 9 0 0 mL蒸馏水中. 搅拌均匀， 静置约 1 0 m i n ， 加热煮沸至完全溶 解， 调至p H7 . 6 士。 . 1 ， 高压灭菌 1 2 1 C. 1 5 mi n . 取出置于 4 C 冰箱内进行冷却。 将磷酸二氢钾、 磷酸氢二钠溶于 1 0 0 m L蒸馏水. 高压灭菌 1 2 1 C. 1 5 mi n ， 取出进行冷却。 在冷却后的上述培养液9 0 0 m l中. 以无 菌操作加入磷酸盐缓冲液1 0 0 m L和5 g / L氰化钾溶液 ( 必须用冷却的灭菌蒸馏水配制) 1 0
38、mL, 摇混均匀( 氰化钾的最终浓度为0 . 0 5 g / L ) 。 并立即分装灭菌试 管( 1 2 m m X 1 0 0 m m ) ， 每管约1 - 1 . 5 m L ， 同 时加 入约0 . 3 m L灭菌石 蜡油封盖。在4 C 冰箱中可 保存 7 d. 6 . 1 4 . 2 试验与判断 6 . 1 4 . 2 . 1 配制试剂 甲液 : 截基苯磺酸 0 . 8 g 5 mo l / I _乙酸1 0 0 . 0 mL 乙液 : tt - 蔡胺。 . 5 9 5 m o l / L乙酸1 0 0 . 0 ml . 6 . 1 4 . 2 . 2 试验 在三糖铁琼脂斜面上挑取少量
39、菌苔， 先接种于叫噪培养基中， 混匀( 使其浓度近似于3 7 C, 2 4 h 肉 汤培养物) 然后烧灼接种环， 再沾取叫噪培养基少许接种于氰化钾培养基中， 于3 T C培养2 4 土2 h , 培养 之后， 先观察培养液有无混浊. 然后在每支氰化钾培养物试管内滴加甲液 1 滴一 然后再滴加乙液 1 滴， 摇 匀。 6 . 1 42 . 3 判断 强阳性反应为鲜红色， 弱阳性为粉红色， 在 ? 0 .6 0 m i n内. 强阳性可转为暗褐色。 阴性无变化( 加试 剂前， 培养液出现混浊， 即有细菌生长， 亦为阳性反应) 。 6 . 1 5 丙二酸钠培养基( M) 酵母膏1 . 0 g 硫酸按
40、2 . 0 9 磷酸氢二钾0 . 6 9 磷酸二氢钾。 . 4 g 氯化钠2 . 0 9 丙二酸钠3 . 0 g 蔺萄搪。 . 2 5 9 澳晤香草酚蓝 。 . 0 2 5 “ 或5 g / L 溶液5 m L 蒸馏水去 。 。 。 。 m l . 除滇晓香草酚蓝外 将其他成分加人蒸馏水中搅拌均匀 静堤约 1 0 m i n , 加热煮沸至完全溶解. 调 至 p H6 . 9 士。 . 1 . 加户 、 澳畴香草酚蓝 再混匀， 分装试苛( 1 2 mm X 1 0 0 m m) . 每管1 - 1 . 5 ml . 高医灭菌 1 1 5 C . 1 0 mi n, 试验与判断: 接种大量幼嫩待
41、试节. 于3 7 C 培咚2 4 士2 h , 阳性反应为普蓝色; 阴 性不变色。 6 . 1 6 卫矛醇半;,体琼脂( n ) 蛋白陈2 。9 S N 0 1 7 0 一9 2 醉毋 计1 . 0 g 卫矛醇功 0 g 氯化钠5 . 0 9 磷酸氢二钾0 . 3 g 澳条香草酚蓝 0 . 0 5 g 或0 g / L 溶液1 0 m L 琼脂2 . 5 g 蒸馏水1 0 0 0 . 0 m L 除嗅路香草酚蓝外， 将其他成分加入蒸馏水中， 搅拌均匀. 静置约 1 0 m i n ， 加热煮沸至完全溶解， 调 至 p H 7 . 1 士。 . 1 ， 加入澳解香草酚蓝， 呈绿色， 分装试管(
42、1 2 mm X 1 0 0 mm) ， 每管约 1 - 1 . 5 mL, 高压灭 菌1 2 1 C , 1 5 m in ， 灭菌后立即取出， 冷却备用。 试验与判断: 穿刺接种待试菌， 于 3 7 C 培养 2 4 士2h ， 阳性反应为黄色阴性不变色。 注: 新制备的培养基均应用已知阳性及阴性菌进行测试， 以保证培养基质量。 s N 017 0一 92 附录A 肉类、 蛋品类沙门氏菌属检验程序 ( 补充件) A 1 肉类沙门氏菌属检验程序: 肉类 的增曲法宜挂劝.法 2 5e 野 加 I 25 A( Ao 加 . 2 5 mL峨冲旅水场日液 打碎 亚困.盐雌鱿暇切，浪2 5 恤L 打
43、碎 移 入移 入 2 0 0 mL峨冲膝水劝臼液 3 7 C , 4 h 2 0 0 mL亚侧酸盆脸氛吸幼.浪 盯 C . 2 4 上2 h l O mL转种l o o mL四桂成 吐盆扭姆场曲液 4 2 土V C. 2 0 士2 h 亚班吐服粗乳亚利雄那” 怪琼脂璐.口玻. 3 7 C, 2 4 -4 8 h 器l kM A A A N 盟RN A M: 亚利雄那 ， ，京. 普 3 7 C. 2 4 -4 8 h 三橄铁埠脂 ， 接狱.脱竣.试脸 ( 或尿素醉试脸) 3 7 C . 2 4士2 h 三褚铁球脂、 峨氛硬脱使醉试脸 ( 或屎素醉试较) 3 7 r. 2 4士 Zh 尿盆口 (
44、 成.抓徽脱段.) V一P弓吸丙二艘钠卫矛醉 佩化钾 3 7 C. 2 4 土2h 尿索的 ( 或栩氮酸脱趁的) V一 P 叫嗓丙二酸钠卫矛醉 佩化钾 3 7 c. 2 4 土2 h 血清学试跪 ( “ 0”多价与分解) 血浦学试位 ( 00多价与分群) 。 ” 。 告 。 。 ! 注: 1 ) 可参照使用。 1 2 s N 0 1 7 0 一9 2 A 2 蛋品类沙门氏菌属检验程序: 盆 品 类 干 蛋品旅 班品 前 增 自法 直 搜幼 苗 法 25 叶 晶 加 . 2 5 g样晶 l A 2 2 5 mL暇冲陈水场日浓拐匀 3 7 。知 -2 4 h 2 2 5 mL四优成陇盐艘绿抽曰液鹅
45、匀 3 7 1 “ . 2 4 22 h t o mL转种1 的ml . 亚侧 酸盐峨抓酸增目掖 4 2 土PC . 2 0士2 h 亚 旅 吐 仙 旅比器xa n 亚利盈那. .称肠 3 7 1 C. 2 4 -4 8 h 亚砚暇协 球盛 旨黑 乳 亚科 桑 那 ” .棘心 3 7 0 . 2 4 - 4 8 h 三帐映月脂、 翻氮敌脱位西 试脸( 或尿扮醉试胜 3 7 1 ; . 2 4 3 2 h 三目铁雌脂t 峨纸酸脱欢碑 试较 ( 成尿索醉试位) 3 7 亡。 2 4土 2h 尿素陇 或怕氮酸脱硬.) V - P 1 3 1吸丙二 组钠卫矛醉 佩化钾 3 7 0 . 2 4 2 2 h 尿贵脚 ( 或软氛胶脱从肠) V-P弓吸丙二艘钠卫矛醉氛化钾 3 7 0. 2 4 22 七 血清学试公( “ 0 多价与 分.) 血愉学试脸 ( “ 0. 多价与分群) L & * fa x I 注: 1 )可参照使用. ” ” s x 0 1 7 0 一9 2 附加说明: 本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。 本标准由中华人民共和国天津进出口 商品检验局、 武汉进出口 商品检验局、 秦皇岛进出口 商品 检验 局起覃a 本标准主要起草人郝士海、 周良朋、 李佳生。