《[商检标准]-SNT 1396-2004 弓形虫病间接血凝试验.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《[商检标准]-SNT 1396-2004 弓形虫病间接血凝试验.pdf（5页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N / T 1 3 9 6 -2 0 0 4 弓 形 虫 病 间 接 血 凝 试 验 I n d i r e c t h e ma g g l u t i n a t i o n t e s t f o r t o x o p l a s mo s i s 2 0 0 4 - 0 6 - 0 1 发布2 0 0 4 - 1 2 - 0 1 实施 中华人民共和国、 * V- * -. 理曳 _“尤压， 胜守 a- ti n户 、4 J、- - 从 . - . 丝月勿c夕 J 飞氢 拈庄 幢了月 宝 立苛门. 立 t t 丈 汽乡、 夕 正 习 S
2、N/ T 1 3 9 6 -2 0 0 4 月 U吕 本标准的附录 A为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国湖北出人境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人: 陈建军、 郭明星、 付文鹏、 赵晖等。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 S N/ T 1 3 9 6 -2 0 0 4 弓 形 虫 病 间 接 血 凝 试 验 范围 本标准规定了弓形虫病的间接血凝( I HA ) 试验操作方法。 本标准适用于动物弓形虫病的检疫、 诊断及抗体水平的检测。 2材料和试剂 2 . 1 9 6 ( 1 2 X8 ) 孔 1 1 0 0 V型血凝板及玻璃
3、盖板 2 . 2 可调式微量移液器及吸头 2 . 3 平板振 荡器。 2 . 4 弓形虫 I HA诊断液( 抗原效价)1 : 1 0 2 4 ) ， 标准阴性对照血清( 效价-1 : 4 ) ， 标准阳性对照血清 ( 效价)1 ， 1 0 2 4 ) 。 2 . 5 稀 释液按附录 A所示要求配制 ， 所用试剂均 为分析纯 。 3 采样 无菌采动物静脉血液约1 m L -2 mL ， 静置自然析出血清或待血液凝固后以6 0 0 g 离心分离血清， 5 6 水浴灭活3 0 m i n ， 预冷， 用健康公绵羊红细胞( 按血清/ 红细胞体积比约 1: 1 混匀) 室温吸附 2h ( 或 4 冰箱过
4、夜) ， 6 0 0 g 离心 1 0 min ， 取上清( 要求无血球、 无溶血、 无杂菌污染) ， 置 4 冰箱备检。 4操作步骤 4 . 1 取洁净的血凝板， 于各孔中加入 7 5 I L稀释液。 4 . 2 取受检血清 2 5 f c L加人第一列孔中， 用移液器反复吹吸混匀， 取 2 5 p L加人第二列孔， 混匀后取 2 5 p L加人第三列孔中， 如此4 倍稀释至第6孔， 混匀即 1 : 40 9 6弃去 2 5 p L ( 对于大量样品可只稀释 至 1，6 4见表 1 ) , 表 1 弓形虫病 间接血凝试验操作术式 孔号1234567 血清稀释度0，) 41 66 42 5 6
5、1 0 2 44 0 9 6 稀释液空 白对照 稀释液/ u L ; : ; : ; : : : ; : ; : 7 54 2 5 受检血清/ “ L 诊断液/ u L 2 52 52 52 5 2 5一2 5 2 5 感作2 2 0 C - 3 7 0 C静置 2 h - 3 h 结果举例( 样) + 十 + +十 + + + + 4 . 3 每次试验须同时作标准阴、 阳性血清及稀释液空白对照， 标准阳性血清对照应稀释至 1 : 4 0 9 6 ， 标 准阴性血清对照应稀释至 1， 6 4 ， 标准阴、 阳性血清稀释方法同受检血清。 4 . 4 取弓形虫 I H A诊断液( 如为冻干制品需按
6、使用说明洗涤稀释后使用) ， 于各检验孔中加入 2 5 夙 ， 置振荡器上振荡约1 min ( 或手持血凝板绕圈轻摇至各孔中血球分布均匀) ， 盖上玻璃盖板， 2 2 C - 3 7 0C S N/ T 1 3 9 6 -2 0 0 4 静置约2 h -3 h ( 当稀释液空白对照呈现“ 一” 时) 观察判定结果。 5结果判定 5 . 1 判定方法 a ) 1 0 0 线的红细胞在孔底四周呈均匀、 致密的膜样凝集， 孔底中央无红细胞沉积， 记“ +” 。 b ) 7 5 %的红细胞在孔底四周呈膜样凝集， 有少量未凝集的红细胞沉积在孔底中央呈很小的圆 点， 记“ +” 。 c ) 5 0 %的红
7、细胞松散的凝集在孔底四周， 其余 5 0 %未凝集的红细胞沉积在孔底中央呈较大的圆 点， 记“ +” 。 d ) 2 5 %的红细胞凝集在孔底四周， 其余大部分未凝集的红细胞沉积在孔底中央呈很大的圆点， 记“ +” 。 e ) 所有红细胞均不凝集， 全部沉积在孔底中央呈规则的最大的圆点， 记“ 一” 。 5 . 2 判定标准 a ) 以呈现“ +” 的血清最大稀释度为该血清的抗体滴度。 b ) 当阳性对照血清抗体滴度不低于 1: 1 0 2 4 ， 阴性对照血清各孔均为“ 一” ( 第一孔允许存在前 滞现象“ +” ) ， 稀释液空白对照为“ 一” 时， 对受检血清抗体滴度进行判定， 否则试验
8、不成立。 c ) 受检血清抗体滴度)1， 6 4时判为 阳性 ( 如表 1 所示血清抗体滴度为 1: 6 4 ， 判为阳性) ， (1 ， 1 6 判为阴性 S N/ T 1 3 9 6 -2 0 0 4 附录A ( 规范性附录) 稀释液的配制 A . 1 p H7 . 2 , 0 . 1 5 m o l / L磷酸盐缓冲液( P B S ) : 磷酸氢二钠( Na , HP 0 , 1 2 H 2 0) 1 9 . 3 4 g 磷酸二氢钾( K H, P O , ) 2 . 8 6 g 抓化钠( N a C U 4 . 2 5 g 叠氮化钠( Na N , ) 1 . 0 0 g 双蒸水( 或去离子水)1 0 0 0 m L 1 2 1 C, 1 5 mi n 高压灭菌。 A . 2 无菌取 9 8 m L上述 P B S溶液， 加人 2 mL经 5 6 0C3 0 m i n灭活的健康兔血清， 混匀， 4 下保藏 备用 。