《[石油化工标准]-SBT 10316-1999 孢子发芽率测定法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《[石油化工标准]-SBT 10316-1999 孢子发芽率测定法.pdf（2页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、 中华人民共和国专业标准中华人民共和国专业标准 孢孢 子子 发发 芽芽 率率 测测 定定 法法 SB/T 10316-1999 Determination of the rate of conidis germination 本方法适用于酿造酱油时在制品菌种孢子发芽率的测定。本方法适用于酿造酱油时在制品菌种孢子发芽率的测定。 1 仪器及试剂仪器及试剂 a. 凹玻片、盖玻片、显微镜凹玻片、盖玻片、显微镜; b. 恒温箱恒温箱; c. 生理盐水、无菌水、察氏培养基生理盐水、无菌水、察氏培养基; d. 接种环、酒精灯等。接种环、酒精灯等。 2 操作操作 2.1 制备悬浮液制备悬浮液:取种曲少许入盛有
2、取种曲少许入盛有 25mL 事先灭菌的生理盐水和玻璃珠的锥形瓶中事先灭菌的生理盐水和玻璃珠的锥形瓶中,充分充分 振摇约振摇约 15min,务使孢子个个分散务使孢子个个分散,制成孢子悬浮液。制成孢子悬浮液。 2.2 制作标本制作标本:先在凹玻片的凹窝内滴入无菌水先在凹玻片的凹窝内滴入无菌水 1 滴滴,再将察氏培养基融化并冷却至再将察氏培养基融化并冷却至 45 50后后,接入孢子悬浮液数滴。充分摇匀后接入孢子悬浮液数滴。充分摇匀后,用玻璃棒以薄层涂布在盖玻片上用玻璃棒以薄层涂布在盖玻片上,然后反盖然后反盖 于凹玻片的窝上于凹玻片的窝上,四周涂凡士林封固。放置于四周涂凡士林封固。放置于 3032恒温
3、箱内培养恒温箱内培养 35h。 2.3 镜检镜检: 取出标本在高倍镜头下观察孢子发芽情况取出标本在高倍镜头下观察孢子发芽情况,逐个数出发芽孢子数和未发芽孢逐个数出发芽孢子数和未发芽孢 子数。子数。 3 计算计算 a 发芽率发芽率(%)100 A 式中式中:a发芽孢子数发芽孢子数,个个; A发芽及不发芽孢子总数发芽及不发芽孢子总数,个。个。 4 注意事项注意事项 4.1 为了正确起见为了正确起见,要同时制作两张以上标本片镜检要同时制作两张以上标本片镜检,取其平均值。取其平均值。 4.2 悬浮液制备后要立刻制作标本培养悬浮液制备后要立刻制作标本培养,时间不宜放长。时间不宜放长。 4.3 培养基中接
4、入悬浮液的数量培养基中接入悬浮液的数量,应根据视野内孢子数多少来决定应根据视野内孢子数多少来决定,一般以每视野内有一般以每视野内有 10 20 个孢子为宜。个孢子为宜。 4.4 每次镜检每次镜检,要在不同视野中连续观察要在不同视野中连续观察 100200 个孢子的发芽情况。个孢子的发芽情况。 4.5 由于发芽快慢与温度有密切关系由于发芽快慢与温度有密切关系,所以培养温度要严格控制。为了加速发芽所以培养温度要严格控制。为了加速发芽,可提高可提高 培养温度至培养温度至 35左右左右,但必须与但必须与 3032法进行对照。法进行对照。 4.6 菌种不同菌种不同,驯化程度不同驯化程度不同,测定用培养基
5、配方允许稍有不同测定用培养基配方允许稍有不同,例如例如 3.951 菌种可在察氏菌种可在察氏 培养基中加几滴豆饼煮出液。培养基中加几滴豆饼煮出液。 4.7 察氏培养基配方如下察氏培养基配方如下: 硝酸钠硝酸钠 3g 磷酸氢二钾磷酸氢二钾 1g 氯化钾氯化钾 0.5g 硫酸镁硫酸镁 0.5g 硫酸亚铁硫酸亚铁 0.01g 蔗糖蔗糖 20g 蒸馏水蒸馏水 1000mL 琼脂琼脂 20g 将上述药品按顺序溶解后将上述药品按顺序溶解后, 加入琼脂加热溶化。分装加入琼脂加热溶化。分装 15150mL 试管中试管中, 加压灭菌后加压灭菌后 备用。备用。 附加说明附加说明: 本标准由商业部副食品局提出。本标准由商业部副食品局提出。 本标准由上海市酿造科学研究所起草。本标准由上海市酿造科学研究所起草。 本标准主要起草人须凤高。本标准主要起草人须凤高。 中华人民共和国商业部中华人民共和国商业部 1987-11-20 批准批准 1988-07-01 实施实施