β淀粉样蛋白亚单位疫苗免疫反应的量效关系.pdf

《β淀粉样蛋白亚单位疫苗免疫反应的量效关系.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《β淀粉样蛋白亚单位疫苗免疫反应的量效关系.pdf（4页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、1 4 7 0 中国药理学通报C h i n e s e P h a r m a c o l o 参 c a l B u l le t i n 2 0 0 6 D e c ; 2 2 ( 1 2 ) : 1 4 7 0 - 3 p 淀粉样蛋白亚单位疫苗免疫反应的量效关系 杨志 勇 ， 汪 华 侨 2 ， 谢 瑶 2 ， 袁 群 芳 ， ， 姚志 彬 ， ( 1 . 江南大学医学系 人体解剖学教研室， 江苏无锡 2 1 4 0 6 4 ; 2 . 中山大学基础医学院解剖学教研室 脑研究室， 广东广州 5 1 0 0 8 0 ) 中 国图书分类号: R - 3 3 2 ; R 3 4 1 ; R

2、3 9 2 . 1 1 ; R 4 5 7 . 2 ; R 7 4 5 . 7 0 5 文献标识码: A 文章编号: 1 0 0 1 一 1 9 7 8 ( 2 0 0 6 ) 1 2 一 1 4 7 0 一 。 摘要: 目 的 探讨A (3 亚单位疫苗诱发体液免疫反应的量效 关系和时程。 方法 采用C 5 7 B L 小鼠， 依据滴人A 氏 5 的量 将其分为5 0 , 2 5 , 1 2 . 5 N .g 3 个组， 每周 1 次经鼻粘膜滴人 收稿 日 期 基金项 目 2 0 0 6 - 0 7 - 0 3 ， 修回日 期二 2 0 0 6 - 0 9 - 0 9 国家自 然科学基金资助项

3、目( N o 3 0 4 0 0 5 1 2 ) ; 广东省自然 科学资金重点资助项目( N o 2 0 0 1 3 1 3 7 ) ; 广东省自 然科学 资金资助项目 ( N o 0 4 3 0 0 2 1 8 ) ; 广州市科技计划资助项目 ( N o 2 0 0 4 Z 3 一 E 0 1 5 1 ) 杨志勇( 1 9 6 9 一 ) ， 男， 博士， 讲师， 研究方向: 老年性痴呆 的基础与临床， T e l : 0 5 1 0 - 8 5 5 1 5 0 8 1 , E - m a i l : f y . z y . y a n g 1 6 3 . c o m; 姚志彬( 1 9 5

4、 3 一 ) ， 男， 教授， 博士生导师， 研究方向: 老年 性痴呆的基础与实验治疗， T e l : 0 2 0 - 8 7 3 3 1 9 6 1 , E - m a i l : a - n a t o m y g z s u m s . e d u . e n A R , 亚单位疫苗， 观察1 年之中鼠 血清中 抗A p 抗体水平的 变化; 取脾细胞培养， 加人不同浓度的A 民 、 洞 M TT法观察 脾细胞增殖情况。结果 3 组小鼠的外周血内 均有抗A R 抗 体产生。 2 5 R g 组和1 2 . 5 w g 组产生抗体较5 0 W g 组早， 3 组 峰浓度抗体水平分别为1 :

5、 6 7 2 0 , 1 : 6 2 2 2 和1 : 3 5 6 5 。脾细 胞增殖实验表明0 . 5 w g 和5 ji g 的A 民 5 具有较强的刺激脾 细胞增殖的 作用， 而5 0 N ,g 的A P ,， 对脾细 胞增殖的 刺激作用 反而下降( P = JO . 0 4 2 ; P = 0 . 0 2 1 ) 。结论 A R 1 5 亚单位疫苗 诱导体液免疫反应的能力因接种的剂量不同而异。高浓度 的A 氏 5 可以引起免疫耐受， 使抗A (3 抗体产生减少。 关键词: 阿尔采末病; 抗R淀粉样蛋白 抗体; 疫苗 作者简介: 在阿尔采末病( A l z h e i m e r s d

6、 i s e a s e , A D ) 的发病 过 程中， R 淀 粉样蛋白( A m y l o i d R - p r o t e i n , A (3 ) 起着 关键的 作用， 因此目 前治疗研究的 方向 都是抑制A (3 产生、 促进其降解或加强其从脑内清除。A R 4 2 肚诱 Me c h a n i s m o f a c h y p h y l a x i s b y b r a d y k i n i n i n o p e n i n g b l o o d - b r a i n b a r r i e r Q I N L i - j u a n ， G U Y a n

7、 - t i n g , X U E Y i - x u e ( D e p t of N e u r o b io l o g y , C o l l e g e of B a l ti c M e d i c a l S c i e n c e s , C h in a M e d i c a l U n iv e r s ity , S h e n y a n g 1 1 0 0 0 1 ， C h i n a ) A b s t r a c t : A im T o a s s e s s t h e e f f e c t o f h e a t s h o c k ( 3 0 m

8、in , P 2 . 1 为阳 性结果。取出现阳性结果的最高稀释倍数的倒 数为该样品的 滴度， 2 0 m i n内测定实验结果。阳性 对照用单克隆抗体B a m l O ( S i g m a 公司) ， 稀释浓度 为1 : 2 0 0 0 和 过氧 化物酶标记的 羊 抗小鼠Ig G ( 武 汉 博士 德公司) ， 阴 性 对照组为 不包被A P 4 2 的 倍比 稀释的血清。 1 . 4 接种小鼠的体外脾细胞增殖的检测取小鼠 的脾脏， 分别捣碎于R P M I 1 6 4 0 培养液中， 1 0 0目 筛 过滤， 1 0 0 0: m i n 离心 1 0 m in ， 去上清液; 用 0

9、 . 7 %氯化钱低渗液破碎红细胞， 1 0 0 0 r m i n 一 离 心1 0 m i n ， 去上清液; 再用 D - H a n k s 液洗涤， 1 2 0 0; m i n 一 离心1 0 m i n ， 去上清液， 共2 次; 细胞计数， 以1 x 1 0 6 L 一 ， 接 种 于%孔培 养板中， 培 养 过夜， 待 细 胞 贴 壁 后， 每 孔 加人1 0 0 闪含1 0 m g L 一 C o n A和体积分数为1 0 %胎牛血清的R P M I 1 6 4 0 培养 基以 及不同 浓度的A P 15 ， 培养7 2 h 后， M TT法测定 脾细胞增殖， 酶标仪检测各

10、孔的A值( 波长为4 9 0 n m) 。 培养的脾细胞共分5 组: 空白对照组: 仅加人培 养液R P M I 1 6 4 0 ; 阴 性对照组: 仅加人C o n A刺激， 低 AR, 组: 加 人的A 0 15 终浓度为0 . 5 m g L 一 ; 中A R 15 组: 终 浓 度 为5 m g L 一 ; 高A 日 1s 组: 终 浓度 为5 0 m g L 一 I 。 1 . 5 统计学处理 所测数据结果均用x 士 、 表示， 采用S P S S 1 1 . 0 统计软件。 2 结果 2 . 1 A 氏免 疫后外 周血中 抗A p 抗 体的变 化的时 程 各组小鼠 外周血中均测出

11、抗A R 抗体。 在第2 个月时 各组外周血中测出抗A p 抗体， 且1 2 . 5 . W g 组和2 5 p ,g 组产生的 抗体高于5 0 R ,g 组， 在第3 个 月时抗体水平明显增加， 在停止接种后， 各组 抗体水 平达到 最高 值， 1 2 . 5 L g 组和2 5 R ,g 组的 峰值 分 别为 1 : 6 7 2 0 和 1 : 6 2 2 2 ; 5 0 w g组抗体滴度为 1 : 3 5 6 5 , 1 个 月后， 1 2 . 5 ji g 组的 抗 体 水平与5 0 ji g 组相似， 分别为1 : 3 3 7 7 和1 : 3 3 0 0 ， 而2 5 L g 抗体

12、 1 4 7 2中国药理学通报C h i n e s e P h a r m a c o l o g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 6 D e c ; 2 2 ( 1 2 ) 水平为1 : 4 2 0 0 0 1 2 . 5 w g 组和5 0 w g 组的高抗体 水平可维持约1 个月左右， 而2 5 t ,g 组高抗体水平 可维持2 个月左右。以 后逐渐下降。在停止接种后 s 个月， 外周血中仍可测到抗A (3 抗体， 3 组抗体水 平降 至相似的 水平， 约为1 : 1 0 0 0 左右。 见F i g 1 0 80 0 0 7 0 0 0 G r o u p

13、 G r o u p G r o u p 5 0“ g 2 5 u g 1 2 5 u g 6 0 0 0 5 0 0 0 4 0 0 0 3 0 0 0 20 0 0 渭。乙一5。一PO君p口。艺 0 1 24 5 6 T i me / mo n t h s J召益，es ， ， ， ， 曰 9 1 2 Mg 1 T i m e c o u r s e o f a n t i - A D a n t i b o d y r e s p o n s e i n t h e m i c e s e r u m a f t e r A 肠 5 v a c c i n a t i o n 2 . 2

14、 A 肠 ， 刺激培养的 脾细胞对增殖的影响 脾细 胞增殖实验显示0 . 5 W g 组和5 w g 组对脾细胞的增 殖作用高于5 0 R ,g 组( P = 0 . 0 4 2和P= 0 . 0 2 1 ) 0 0 . 5 ji g 组和5 ji g 组对脾细胞有较强的刺激增殖作 用， 而5 0 L g 组对脾细胞增殖的刺激作用最弱。见 T a b 1 。 T a b 1 T h e s p l e n o c y t e p r o l i f e r a t i o n a s s a y a f t e r t h e s t im u l a t i o n b y d iff e

15、r e n t A 肠 s c o n c e n t r a t i o n G r o u p B l a n k C o n A A p 1 5 D o s e / N ,g 5 5 0 0 . 2 7 8土0 . 0 3 1 0 . 2 3 6 10 . 0 4 2 0 . 2 3 1士0 . 0 4 3. 0 . 2 3 8上0 . 0 3 7 . 0 . 2 0 4士0 . 0 3 6 P = 0 . 0 4 2 ; 承 . P = 0 . 0 2 1 v s A p 1 5 5 0 W g 3 讨论 我们发 现C 5 7 B L 小鼠 在接 种A p 15 的1 个月 后， 即

16、介导了 体 液 免 疫反 应， 产生了 抗A R 抗体， 在停止 接种后的半个月左右， 外周血中的抗体滴度达到了 峰 值。 不同 浓度的A P 15 抗原并没 有显示明 显的 量 反 应 关系， 1 2 . 5 w g 组和2 5 R ,g 组 介导体液免 疫反 应， 产生抗A (3 抗体的滴度相似， 量效关系一致， 均 高 于5 0 W g 组产生的 抗体滴度; 但维持峰浓度抗体 的能力根据接种A p肤疫苗剂量的不同而异。5 0 W g 和2 5 p g 组 均能维 持较高 浓 度 抗体 水平约2 个 月 左 右， 而1 2 . 5 ji g 虽 然 产 生 较高的 抗体 滴度， 但维 持高

17、抗体浓度能力弱于上两组。在停止接种的8 个 月后， 3 个剂量组的外周血中 仍可测出相近的抗A p 抗体水平， 表明 虽然剂量不同， A R 15 肤疫苗能介导较 长时程的抗体反应。 脾 细 胞 增 殖 反 应 的 结 果 表 明0 . 5 ji g 和5 W g 刺 激脾细 胞增殖的 作用均大于5 0 w g 组 对脾细 胞增殖 的刺激作用， 这可以 解释为什么动物实验中， 高浓度 的A R i5 引起的体液免疫反应最弱， 这与S e a b r o o k 等 8 的实验结果相似， S e a b r o o k 发现用A R . 免疫 C 5 7 B L 小鼠和B 6 D 2 F 1 小

18、鼠， 2 5 ji g 组的脾细胞对 A (3 肤刺激的增殖效应远高于5 0 L g 组， 这可能与 A R 耐受有关。 低剂量的A R 4 2 虽然引起的 强烈的体 液免疫反应， 但常常伴随有强烈的细胞免疫反应， 这 在某种程度上限 制了 其临床 应用。 A R 1 5 也可能存在 着 免 疫 耐 受， 是 否 低 剂量的A R , 也 伴随 着细 胞免疫 反应目 前尚不清楚， 由于M F 5 9的免疫刺激作用是 非特异性的， 既可以 诱导体液免疫， 也可以 诱导细胞 免疫， 因 此， 虽然1 2 . 5 w g 组 也可以 产生高滴度的抗 A R 抗体， 但我们认为2 5 W g 和5 0

19、 w g 组在安 全性方 面可能更有优势。 M F 5 9 是第1 个用于人类的油/ 水混合的 乳型免 疫佐剂， 具有铝佐剂的安全性和不完全性弗氏佐剂 有效性。因此常常用于对疫苗反应比较弱的老年 人【 ，” 。 而鼻粘膜免疫可以 产生两个重要的 免疫反 应后果: 一是刺激B 细胞， B 细胞到达邻近的 淋巴结 和粘膜组织， 分化为浆细胞而产生相应的抗体; 另一 个是由于树突状细胞的作用， 激活了T细胞， 分泌 细胞因子， 这些细胞因子对于介导T h l 和T h 2 细胞 或 者 介 导抑制性T 细胞反应至关重要 川， 其中以 T h l 介导的细胞免疫是粘膜局部炎症反应的 主要发 病机制。

20、A R 4 2 疫苗诱导免疫反应的机制已 得到明 确， 由 于其肤段的c 端是以 诱导细胞免疫反应为主， 其介 导的以T h l 为主的细胞免疫反应被认为是中 枢神经 系统炎症发生的主要原因; 而其N端的多肤介导的 是B细胞的表位， 以刺激B 细胞产生抗体为主， 很 少诱导产生细胞毒性的T 细胞反应， 我们选择以N 端巧个氨基酸为主要结构的A (3 肤疫苗， 通过鼻粘 膜接种的 方式， 不仅 诱导出 特异性的 抗A R 抗体， 避 免了系统性或中枢神经系统内的炎症反应。 因 此， 我们认为A R ,: 亚单位疫苗可以 作为一个 安全有效的治疗和预防性疫苗， 从其安全性和有效 性而言， 较高的剂

21、量在临床应用方面更有希望。 中国药理学通报C h i n e s e P h a r m a c o lo g ic a l B u l l e t i n 2 0 0 6 D e c ; 2 2 ( 1 2 ) 1 4 7 3 参考文献: 1 S c h e n k D , B a r b o u r R , D u n n W, e t a l . I m m u n i z a t i o n w i t h a m y - l o i d - b e t a a t t e n u a t e s A l z h e i m e r - d i s e a s e - l i k e

22、p a t h o l o g y i n t h e P D A P P m o u s e J . N a t u r e , 1 9 9 9 , 4 0 0 ( 8 ) : 1 7 3 一 7 . 2 O r g o g o z o 工 ,M , G i lm a n S , D a rt i g u e s J F , e t a l . S u b a c u t e m e n i n g o - e n c e p h a li t i s i n a s u b s e t o f p a t i e n t s w i t h A D a ft e r A p 4 2 i m

23、 m u n i z a - t i o n j . N e u r o l o g y , 2 0 0 3 , 6 1 : 4 6 一 5 4 . 3 李国营， 胡金家， 林 贤， 等. A p 不同片段肤疫苗免疫鼠后血 清 对A R 4 2 诱导 细 胞毒 性 作 用的 影响【 J . 中 山大 学学 报( 医 学 科学版) , 2 0 0 4 , 2 5 ( 2 ) : 1 0 2 一 4 . 3 L i G Y , H u J J , L i n X , e t a l . T h e e f e c t s o f i m m u n i z e d r a t s e r a o

24、f A R d if e r e n t p e p t i d e v a c c i n e o n C y t o t o x i c i ty i n d u c e d b y a m y l o i d 3 P e p t i d e J . J S u n Y a t - S e n U n i v M e d S i c , 2 0 0 4 , 2 5 ( 2 ) : 1 0 2 一 4 . 4 胡金家， 汪华侨， 曲 怀刚， 等. A R 4 2 及亚单位疫苗诱导B A L E / 。 小鼠 抗体的产生及其抗A R 4 2 的细胞毒性 作用 J 细胞与分 子免疫学杂志， 2

25、0 0 4 , 2 0 ( 2 ) : 1 7 8 一 8 0 . 4 H u J J , W a n g H Q , Q u H G , e t a l . A n ti b o d y p ro d u c ti o n a n d it s n e u t r a l i z a t i o n o f A p 。 s c y t o x i c i ty i n B A L B / c m i c e i n d u c e d b y A p 4 2 a n d i t s s u b u n i t v a c c i n e s J .C h i n J C e l l M o

26、t I m m u n o l , 2 0 0 4 ， 2 0 ( 2 ) : 1 7 8 一 8 0 . 5 林 贤， 汪华侨， 徐 杰. A R 4 2 及其C 端亚单位疫苗接种正常 大鼠 产生高 滴度的 抗A R 4 2 抗 体【 J . 解 剖学 报， 2 0 0 3 , 3 4 ( 3 ) : 2 3 1一5 . 5 L i n X , W a n g H Q , X u J , e t a l . I n o c u l a t i n g c o m p l e t e o r C t e r m i - n a l f r a g m e n t o f A 0 4 2 v a

27、 o c i n e i n d u c e d n o r m a l S D r a t s t o p r o d u c e h ig h t it e r o f a n t i b o d y a g a i n s t A 0 4 2 J . A c t a A n a t o m i c a S i n ic a , 2 0 0 3 , 3 4 ( 3 ) : 2 3 1 一 5 . 6 胡金家， 汪华侨， 林贤， 等. 铝佐剂A 0 4 2 及其亚单位疫苗可 诱导大鼠 产生特异性抗体 J . 中山大学学 报( 医学 科学 版) ， 2 0 0 4 ， 2 5 ( 1 ) :

28、3 9一 4 4 . 6 H u J J , W a n g H Q , L i n X , e t a l . C o m p l e t e o r fr a g m e n t o f A 甲2 v a c c i n e w it h a l u m i n u m a d j u v a n t e ff e c t i v e l y i n d u c e d r a t s t o p r o d u c e s p e c ifi c a n t i b o d y J J S u n Y a t - S e n U n iv M e d S c i , 2 0 0 4 ,

29、2 5 ( 1 ) : 3 9一 4 4 . 7 李少兵， 汪华侨， 林 贤， 等. 接种A 0 4 2 全肤疫苗恒河猴的特 异 性体液免疫应答【 J . 细胞与分子免疫学杂志， 2 0 0 5 , 2 1 ( 2 ) : 2 0 2 一 4 . 7 L i S B , W a n g H Q , L i n X , e t a l . S p e c i f i c I m m o r a l i m m u n e r e - s p o n s e i n r h e s u s m o n k e y s v a c c i n a - t e d i m m u n e r e s

30、p o n s e w i t h A p 4 2 p e p t i d e v a c c i n e J . C h i n J C e l l M o l I m m u n o l , 2 0 0 5 ， 2 1 ( 2 ) : 2 0 2 一4. 8 S e a b r o o k T J , I g l e s i a s M , B l o o m J K , e t a l . D i ff e r e n c e s i n t h e i m - m u n e re s p o n s e t o l o n g t e r m A pv a c c i n a t i

31、o n i n C 5 7 B L6 a n d B 6 D 2 F 1 m ic e J . V a c c in e , 2 0 0 4 , 2 2 :4 0 7 5 一 8 3 . 9 O t t G . T h e a d j u v a n t M F 5 9 : t h e 1 9 9 8 p e r s p e c t iv e , c l in i c a l p e r - f o r m a n c e a n d m e c h a n i s m o f a c t i o n J . R e s I m m u n o l , 1 9 9 8 , 1 4 9 : 2

32、5一7 . 1 0 S i n g h M , 0 i 1 a g e D . A d v a n c e s i n v a c c i n e a d j u v a n t s J N a t B i o - t e c h n o l , 1 9 9 9 , 1 7 : 1 0 7 5 一 8 1 . 1 1 N e u r a t h M F , F i n o k tt o S , G l i m c h e r L H . T h e ro l e o f T h l / T h 2 p o - l a r i z a t io n i n m u c o s a l i m m

33、 u n i t y J . N a t M e d , 2 0 0 2 , 8 ( 6 ) : 5 6 7- 7 3. D o s a g e - e f f e c t r e l a t i o n o f h u mo r a l i mmu n o r e a c t i o n i n d u c e d b y A 肠 ， p e p t i d e i n C5 7 BL Y A N G Z h i - y o n g ( D e p t of A n a t o m y 2 . D e p t o f A n a t o m y a n d B r a i n ， W A N

34、 G H u a - g i a o 2 ， X I E Y a o 2 , Y U A N Q u n - f a n g ， Y A O Z h i - b in 2 ， D e a n o f M e d ic i n e , S o u t h - Y a n g t z e U n i v e r s i t y , W u x i J i a n g s u 2 1 4 0 6 4 , C h i n a ; R e s e a r c h , P r e c l i n i c a l M e d i c a l S c h o o l , S U N Y a t - s e n

35、 U n i v e r s i t y , G u a n g z h o u 5 1 0 0 8 0 , C h i n a ) A b s t r a c t s : A i m T o i n v e s t i g a t e t h e d u r a t i o n o f h u - m o r a l i m m u n e r e a c t i o n w h i c h m a y c o n d u c e t o u n d e r - s t a n d t h e i m m u n e m e c h a n i s m o f A ps u b u n i

36、t v a c c i n e a n d d e t e r m i n e t h e o p t i m a l d o s e a n d t i m e c o u r s e . Me t h o d s C 5 7 B L m i c e w e r e d i v i d e d i n t o t h r e e g r o u p s ， 5 0 ， 2 5 a n d 1 2 . 5 w g , a c c o r d i n g t o t h e i m m u n e d o s e s . I m m u n e v i a n a s a l m u c o u

37、 s m e m b r a n e w e e k l y a n d e m p l o y i n d i r e c t E L I S A a s s a y t o d e t e c t t h e a n t i - A p a n t i b o d i e s l e v e l i n t h e s e r u m . S p l e n o c y t e s w e r e c u l - tu r e d w it h d iff e r e n t c o n c e n tr a t io n A R ts , 0 . 5 m g L 一 ， 5 m g L

38、一 a n d 5 0 m g L 一 t . C e ll s p r o l ife r a t i o n r a te w a s m e a s u r e d u s i n g M I T a s s a y . R e s u l t s T h e a n ti - A p a n t i b o d i e s w e r e d e t e c t e d i n 3 g r o u p s ， t h e y w e r e e - m e r g e d e a r l i e r i n 2 5 p ,g a n d 1 2 . 5 R g g r o u p s

39、t h a n t h e 5 0 N t,g g r o u p . M o r e o v e r , t h e p e a k c o n c e n t r a t i o n s i n t h r e e g r o u p s w e r e 1 : 6 7 2 0 、 1 : 6 2 2 2 a n d 1 : 3 5 6 5 . T h e s p l e n o c y t e p r o l i f e r a t i o n a s s a y s h o w e d t h a t t h e h i g h - e r A v a l u e w e r e f

40、o u n d i n t h e g r o u p o f 0 . 5 m g L 一 1 a n d 5 m g L 一 A p 15 th a n t h e 5 0 m g L 一 g r o u p ( P = 0 . 0 4 2 ; P= 0 . 0 2 1 ， r e s p e c t i v e l y ) .C o n c l u s i o n A R , s u b u n i t v a c c i n e i n d u c e s t h e I m mo r a l i m mu n e r e a c t i o n d e p e n d e n t o

41、f t h e d o s e i n o c u l a t e d . H i g h l e v e l A P 15 a l s o i n d u c e s t h e i m m u n o l o g i c t o l e r a n c e a n d l e a d s t o t h e d e - c r e a s e o f a n t i - A 日a n t i b o d i e s . K e y w o r d s : A l z h e i m e r s d i s e a s e ; a n t i - R - a m y l o i d ; a n t i - b o d i e s v a c c i n e