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1、中国寄生虫学与寄生虫病杂志!“#年$月第!%卷第%期通讯作者! 年?$“ 这些成果为寄生虫病的预防 诊断 和治疗的研究提供了新的思路“ 本文介绍噬菌体展示 技术及其在寄生虫病研究中的应用“ !丝状噬菌体展示技术概述 噬菌体展示技术 %936:* A189(6B 70! 直径CD 70“ 其基因组均为EF G)单链环状 种不同蛋白质“ 主要衣壳蛋白 %:9$;个拷贝! 围绕; )9! 展示的蛋白拷 贝数只有JC.个! 常用于选择高亲和力的配体#D!$! 主要应用于抗体库的构建 生物大分子的表达和功能 分析等方面的研究“:9$分子较小! 只能融合较小的 外源肽段 %如五肽或六肽 (提要)本文介绍丝
2、状噬菌体展示技术及其在寄生虫病预防 诊断和治疗中的应用“ 包括*!噬菌体展示技术概 况! 丝状噬菌体及其载体的优势H “构建寄生虫噬菌体抗体库 确定抗原决定簇 模拟抗原决定簇用于研制诊断试剂和 疫苗等“ (关键词)丝状噬菌体!“噬菌体展示+ 抗原决定簇+ 诊断+ 疫苗 中图分类号 !“#$文献标识码 3 % “!“# $%3 +“)“(,-%(# ?6!7%-:;3 ;“!;,-%# $%?3+:*)+%P(. -OQ(OR S0C4.O. 0) /O ,1(C,/(0) 0S ,5O T(.1,U /OC)0105U () /O -OQO)/(0)!T(,5)0.(. ,)T /-O,/=O
3、)/ 0S ,-,.(/(C T(.O,.O.6 M/ C0QO-. ! ,) ()/-0T4C/(0) 0S ,5O T(.1,U /OC)0105U!S(1,=O)/04. ,5O ,)T /O ,TQ,)/,5O 0S C,-(O-6 “ C0)./-4C/(0) 0S ,5O ,)/(B0TU 1(B-,-(O. 0S ,-,.(/O.!O(/0O =,()5 ,)T =(=0/0O!,)T /O(- 0/O)/(,1 ,1(C,/(0) () /O TOQO10=O)/ 0S )0QO1 T(,5)0./(C -O,5O)/. ,)T Q,CC()O.6 $18 A,:B3%!“#$
4、%“? 1(=-,-?是从淋巴细胞中提取A83! 使用与抗体基因两 侧的保守区互补的引物! 通过+“$!;“G! 大大提高了获得特异抗体的机 率“#噬菌体抗体保存的是噬菌体或噬菌体载体! 经 过改建很容易在大肠埃希菌或酵母菌中大规模发酵生产“ F4等#;H$用夏氏鼠疟原虫2B顶端膜蛋白%3I3“;筛选肽文库富集了一群特异结 合抗原的BCDE! 测序获得了至少%个不同的BCDE基 因序列! 为进一步研究3I3“;的结构和功能奠定了 基础“+,5J/等#;# $利用能表达约 H #;“G个抗体片段的 噬菌体展示文库! 获得富含阿米巴种属特异识别的噬 菌体文库和富含致病性阿米巴特异识别的噬菌体文 库
5、“ KLMB3分离单一克隆! 进一步用流式细胞术和免 疫荧光检测! 获得了%个种属特异的单克隆抗体“ 其 中克隆N+O#的结合力最强) 而克隆N+OHH能与 致病性阿米巴特异结合! 可用于阿米巴病诊断“N0J 等#;P$用刚地弓形虫全虫免疫小鼠! 构建了噬菌体展示 的BCDE文库! 用与虫体入侵宿主有关的重组蛋白 %Q5IM$首次将噬菌体随机肽库用于抗原定 位之后! 借助该技术分析了多种蛋白质的抗原表位! 如 人类免疫缺陷病毒%NM7G$ 乙型肝炎病毒%N=.35合成型抗原决定簇库这是由统一长度的随机 寡核苷酸构成! 随机序列融合表达在噬菌体外壳蛋白 上! 再亲和选择出与抗体结合的重组噬菌体!
6、 测定 噬菌体中编码多肽的核苷酸序列! 推导出展示多肽 的氨基酸序列“ 如果抗原决定簇与抗体反应的肽段有一个共有 序列%C0).J).4. .JT4J)CJ$“ 如果抗原决定簇与抗体反应的肽段完全不同于 天然抗原序列! 称这些肽为模拟表位“ 模拟表位的 结构与抗体结合位点相关! 它模拟天然蛋白一级结 构上不连续的氨基酸经过空间折叠而形成的表位结 :“H* 中国寄生虫学与寄生虫病杂志!“#年$月第!%卷第%期和$“ 2?A,B等#!%$实验证明! 噬菌体肽文库是鉴定多 克隆抗体的!细胞配体%抗原表位,)5等#!=$报道的此库构建和展示的基本构思及操 作过程为!将特定的基因片段用283酶N降解后!
7、 经凝胶电泳分离出不同长度的特定基因片段 %F“# “ HR建库S “用末端修饰酶适当处理基因片段库! 再与丝状噬菌体的外壳蛋白基因融合表达! 构建展示 于噬菌体表面的表位库S #用特异性抗体进行筛选! 分析能与特异性抗原结合的噬菌体肽的序列! 再与天 然抗原序列相比较! 就很容易确定抗原决定簇的位置 及序列“ 如果设想这个库足够大! 就有可能鉴定和分离包 含有F个不连续抗原决定簇中不同决定簇的杂合肽“ 当重组噬菌体展示的免疫优势抗原决定簇以诊断或疫 苗为目的时! 则包含大片段插入的随机抗原决定簇可 能有益“ 大的抗原决定簇片段能在噬菌体表面形成较 好的折叠! 而且所展示的肽可能包含部分或全部
8、不连 续抗原决定簇的顺序! 这对于构型抗原决定簇进行定 位提供了可能“ 在许多情况下! 特异性单克隆抗体的相应的特异 性抗原表位并不清楚! 使用单克隆抗体筛选随机肽库 和靶基因抗原决定簇库成为确定相应的特异性抗原表 位或决定簇的有力工具“ !O模拟抗原决定簇作为诊断试剂和疫苗关于作 为诊断试剂方面! 在预先不知道靶抗原是蛋白质或是 任何其他抗原分子时! 利用多克隆抗血清从合成抗原 决定簇库中筛选出对疾病专一的模拟抗原决定簇是可 能的#“T!$“ 关键是要从一个大的合成抗原决定簇库中 筛选出展示特异性模拟抗原决定簇的噬菌体! 且只能 与患者血清反应而不与正常血清反应! 用于疾病诊 断“ 这些模拟
9、抗原决定簇的序列与天然抗原分子是否 相似! 都不会影响诊断结果! 这对于诊断自身免疫性 疾病或新出现的疾病具有特别价值“ 模拟抗原决定簇还将是未来多肽疫苗研究的一个 重要领域“ 只要这样的噬菌体抗原决定簇是疾病特异 性的和带有中和抗原决定簇 %U细胞抗原决定簇或9 细胞抗原决定簇!6#有=?小鼠! 结果表明混和免疫组 抗体滴度明显高于单独免疫组! 佐剂并不影响其抗体 滴度“ 混合免疫组诱导产生的减虫率#L)./-, *3!T4./L-. *H!P,) RL- UL(;./ =3I V,NN()5 0M P(-,1 LN(/0NL. W(/ N-0X,-S0/( LQN-L(0) N-0R4/.
10、?%!CB !C#!%C6 “C#O(04= ;!2HKP,= 3!*?%!?$B !“! !6 “C!#M,1, ;!T?C!?“B “#C$!“#%!6 “CC#W(,) ;!M,( U*!X4,)5 +!“ #$6 +-$B C!CC6$() !X,)5 XO!Q( !U( U!X!?B !#$!A6$() !X$%B C“!C!6$() !XB !%! !%#6$() !T4,)5 E!T,) EG!“ #$6 &1()(J,1 -?C!ACB C%?!C6$() &()?C!ACB C%?!C6% “?#X,)5 YO!O,) *X!W(4 2W!“ #$6LI(=?A!B #!#%6$() &()?A!B #!#%6% “#&(54., U!N/,%B CC!CA6 “#Q( UO!TAA!$6 “!#U,)5 W6E!?B $! $6$() &()!?B $!$6% $收稿日期!“!?编辑&富秀兰% C“$