二烯丙基二硫对小鼠肾包膜下移植人胃癌细胞的生长抑制作用.pdf

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1、中国药理学通报C h i n e s e P h a r m a c o l o g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 4 J u l ; 2 0 ( 7 ) : 8 3 5 - 6 - 8 3 5 今研究简报令 二烯丙基二硫对小鼠肾包膜下移植人胃癌细胞的生长抑制作用 刘 瑶， ， 黄卫国， ， 袁静萍， ， 黄 深 ， 唐荣军 ， 宋 颖， ， 周秀田 ， 凌 晖， ， 何 洁 ， 苏 琦 ( 1 . 南华大学肿瘤研究所， 湖南衡阳 4 2 1 0 0 1 ; 2 . 湖北省武汉市中心医院病理科， 湖北 武汉 4 3 0 0 1 4 ) I n h i b i t

2、o r y e f f e c t o f d i a l l y l d i s u l f i d e o n h u m a n g a s - t r i c c a n c e r c e l l s MGC 8 0 3 i n v i v o L I U Y a o , H U A N G We i - g u o , Y U A N J i n g - p i n g , H U A N G C h e n ， T A N G R o n g 一 u n ， S O N G Y i n g , Z H O U X i u - t i a n ， L I N G H u i ， H

3、 E J i e ， S U Q i ( C a n c e r R e s e a r c h I n s t i t u t e , N a n h u a U n i v e r s i t y , H e n g y a n g 4 2 1 0 0 1 , C h i n a ) 中国图书分类号: R - 3 3 2 ; R 2 8 4 . 1 ; R 3 2 9 . 2 4 ; R 7 3 - 3 5 ; R 7 3 5 . 2 0 5 文献标识码; A 文章编号: 1 0 0 1 一 1 9 7 8 ( 2 0 0 4 ) 0 7 一 0 8 3 5 一 0 2 关键词: 二烯丙基

4、二硫; 胃癌; 小鼠; 生长抑制 K e y w o r d s : d i a l l y l d i s u l f i d e ( D A D S ) ; g a s t r ic c a n c e r; m i c e ; i n h i b i t i o n 二烯丙基二硫( d i a l l y l d i s u l fi d e , D A D S ) 是大蒜的主要有 效成分， 对多种肿瘤均有明 显的抑制作用川。 本室体外研究 表明: D A D S 可明显抑制人胃癌M G C 8 0 3 细胞生长 ， 其机 制与 G z / M期阻滞和信号传导通路 E R K / A P

5、 - 1 途径有 关3 .4 。 本 研究采用人肿瘤细胞肾包膜下移植模型， 探讨 D A D S 对体内生长的M G C 8 0 3 细胞的抑制作用。 1 材料和方法 1 . 1 主要试剂及药品D A D S 为F l u k a 公司产品、 纤维蛋白 原和凝血酶购自S i g m a 公司、 S P 免疫组化试剂盒及P C N A抗 体购自 福州迈新生物技术有限公司。 5 - 氟尿啼吮( 5 - F U ) , 环磷酞胺分别为浙江海门制药厂及上海华联制药有限公司 生产。 1 . 2 细胞培养 M G C 8 0 3 细胞株 ( 由山东师范大学生物系 建系， 为人胃低分化勃液腺癌， 从中南大学

6、细胞中心引进) 用 含体积分数为0 . 1 0 小牛血清的R P M I - 1 6 4 0 培养基， 3 7 9 0 ， 体 积分数为0 . 0 5 的C O : 培养箱中培养。 1 . 3 动物模型制作及分组给药昆明小鼠( 中南大学实验 动物中心提供) 2 5 只， 体重2 0 - 2 5 g , 6 。 术前1 d 经腹腔注 射环磷酞胺( 1 5 0 m g k g 一 ) 抑制其免疫力。 取对数生长期 的M G C 8 0 3 细胞制备纤维蛋白 凝块， 用腹穿针将1 m m , 的 细 胞凝块接种人小鼠肾包膜下15 1 。术后随机分为5 组， 每组5 只。 D A D S 设4 0 ,

7、 8 0 , 1 6 0 m g k g 一 3 个剂量处理组。阳 性对 照 组 选用2 0 m g k g - 浓度的5 - F U “ 。 阴 性对照 组用 生理 盐水。腹腔注射给药， 每日1 次， 连续5 d , d 6 处死小鼠， 测 量肿瘤的长、 宽径。体积及抑瘤率计算公式: 肿瘤的体积 二 长径 x 宽径x 宽径/ 2 ， 抑瘤率( %) 二 ( 1 一 用药组瘤体积/ 对 照组瘤体积) x 1 0 0 %。 1 . 4 形态学观察及免疫组化检测P C N A的表达将荷瘤 肾常规切片， 经H E染色观察形态学变化。按 S - P 试剂盒说 明书操作。应用图像分析系统( 重庆天海医疗

8、设备公司) 测 量P C N A阳 性细胞的平均光密度。阳性表达率( P I ) = ( 阳 性细胞数/ 5 0 0 ) x 1 0 0 %。 2 结果 2 . 1 D A D S 对小鼠肾包膜下人胃癌MG C 8 0 3 细胞的生长 抑制作用 如T a b 1 所示， D A D S 各处理组的抑瘤率与阴性 对照组相比 差异均有显著性( P 0 . 0 5 ) 。 T a b 1 I n h i b i t o r y r a t e o f D A D S a g a i n s t x e n o g r a f t t u m o r o f h u m a n g a s t r i

9、 c c a n c e r ce l l s MG C 8 0 3 g r o w i n re n i - t h e c a o f m i c e ( x t s , n = 5 ) G rou p D o s e o f p r e c e p t A v e r a g e v o l u m e A v e r a g e C o n t rol 5 一 F U DADS DA D S DAD S 7 . 5 1 0 6 11 . 1 1 0 5 3 . 6 8 1 1 10 . 5 9 4 3 4 . 0 6 3 8 t 0 . 6 0 4 7 2 . 0 9 8 2 1 0

10、. 5 4 9 8 2 . 2 5 7 4 10 . 1 4 5 5 5 0 . 9 8. 4 5 . 8 9. 7 2 . 0 6. # 6 9 . 9 4. # 204080160 P 0 . 0 5 v s c o n t ro l , “ P 0 . 0 5 v s 5 - F U a n d 4 0 m g k g 一 D A D S T a b 2 T h e e x p r e s s i o n o f P C N A i n h u ma n g a s t r i c c a n c e r MG C 8 0 3 c e ll s d e t e c t e d b y S

11、 - P i mm u n o h i s t o c h e m i s tr y G ro u p C o n t rol A v e r a g e o p t i c a l d e n s i t y P o s i t i v e r a t e / % 63l5 收稿日 期: 2 0 0 3 - 1 0 - 2 7 ， 修回日 期: 2 0 0 3 - 1 2 - 0 8 基金项 目: 湖南省自然科学基金资助项目，N o O l J J Y 2 1 4 6 , N o 0 2 J J Y 2 0 2 6 ; 湖南省教育厅科研重点项 目， N o O I A 0 1 6 ; 湖 南

12、省卫生厅科研基金资助项目， N o Y 0 2 -6 4 作者简介: 刘瑶( 1 9 7 4- ) ， 女， 2 9岁， 硕士， 研究方向: 胃癌发病机 制及防治， E - m a il : l iu y a o 2 0 0 2 1 l 5 4 1 6 3 . c o m ; 苏琦( 1 9 4 5 - ) ， 男， 5 8岁， 教授， 博士生导师， 通讯作 者. T e l / F a x - 0 7 3 4 - 8 2 8 1 5 4 7 0 . 1 8 2 t 0 . 0 4 6 0 . 0 5 8 t 0 . 0 1 2 P 0 . 0 5 v s c o n t rol 2 . 2

13、D A D S 对移植油的形态学及P C N A表达的影响光镜 下， 生理盐水对照组瘤细胞的异型性大， 并有新生小血管生 成。而D A D S 处理组可见瘤细胞密度较小， 异型性减小， 提 示细胞形态向正常细胞方向分化。 图像分析P C N A 检测结 万方数据 ，8 3 6 中国药理学通报C h i n e s e P h a r m a c o l o g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 4 J u 1 ; 2 0 ( 7 ) : 8 3 6 - 7 组织经脯氨酸含量微量测定方法及应用 杨秀颖， 杜冠华 ( 中国医学科学院药物研究所， 北京 1 0 0 0 5

14、0 ) Mi c r o v o l u me a s s a y m e t h o d o f h y d r o x y p r o l i n e i n a n i m a l t i s s u e s a n d a p p l i c a t i o n Y A N G X i u - y i n g ， D U G u a n - h u a ( I n s t i t u t e o f M a t e r i a M e d i c a , C h i n e s e A c a d e m y o f M e d i c a l S c i - e n c e s a

15、n d P e k i n g U n i o n M e d i c a l C o l l e g e , B e ij i n g 1 0 0 0 5 0 , C h i - a a ) 中国图书分类号: R 3 2 2 . 3 5 ; 3 4 1 . 7 ; R 5 7 5 . 2 0 2 ; R 9 7 7 ; R 9 7 7 . 4 文献标识码; A 文章编号: 1 0 0 1 一 1 9 7 8 ( 2 0 0 4 ) 0 7 一 0 8 3 6 一 0 2 关键词: 经脯氨酸; 测定方法; 肺组织 K e y w o r d s : h y d ro x y p r o l i

16、 n e ; d e t e r m i n a t i o n ; l u n g t i s s u e 经脯氨酸( h y d r o x y p r o l i n e , H y p ) 是机体胶原蛋白的主要 成分之一， 在正常胶原蛋白中含量约1 3 . 4 %， 在弹性蛋白中 含量极少， 而在其它蛋白则不存在。因此， 不同组织中H y p 含量可作为衡量其胶原组织代谢的重要指标。肺纤维化时， 肺组织内胶原纤维量增加。由于经脯氨酸为胶原纤维所特 有， 以 此作为肺纤维化的指标， 可以 判断纤维化程度仁 。 目 前国内外有多人报道了经脯氨酸的测定方法， 但组织 需要量和样品测定体积均较

17、大， 不适合进行大规模的筛选实 验 一 “ 。因 此建立羚脯氨酸的微量测定方法对于研究组织 收稿日 期: 2 0 0 3 - 1 2 - 0 3 ， 修回日 期: 2 0 0 4 - 0 2 - 0 2 作者简介: 杨秀颖( 1 9 7 3 一) ， 女， 硕士， 研究方向: 分子药理学， T e l ; 0 1 0 -6 3 1 6 5 3 1 3 , E - m a i l : l u c i a i m m . a c . c n ; 杜冠华( 1 9 5 6 一) ， 男， 研究员， 博士生导师， 研究方向: 血 管、 神经药理学 病理过程， 特别是筛选抗纤维化的药物， 具有重要意义。

18、本 文介绍一种微量经脯氨酸测定方法以及对小鼠肺组织中经 脯氨酸含量的测定结果。 1 材料与方法 1 . 1 试剂经脯氨酸( h y d ro x y p ro l i n e , H y p ) 为J . H . B a k e r c h e m i c a l c o 产品， 其他试剂均为国产分析纯试剂。所需溶液 具 体 配 制 方 法 见 参 考 文 献 “ “ 。 1 . 2 标准H y p 的测定 取标准H y p ( 2 0 m g “ L - ， 应用液 及不同 浓度的 稀释液) 2 5闪， 柠檬酸缓冲液2 5国， 0 . 0 5 m o l L 一 氯胺T 5 0闪， 加人9

19、6 孔微板中， 室温氧化4 m i n 。 加 3 . 1 5 m o l L - 高氯酸5 0 11 1 终止氧化反应5 m i n ， 再加人 1 0 % P D A B 5 0闪。透明胶带封严， 烤箱内9 5 反应2 0 m i n , 冰上冷却后酶标仪测定A 5 6 0 0 1 . 3 肺组织H y p 的测定 取小鼠肺组织， 去掉周围结缔组 织。浸泡在 1 0 % ( V / V ) 甲醛中固定过夜， 丙酮浸泡8h ， 更换 新鲜丙酮过夜， 再更换乙醇“ 乙醚( 1 : 1 ) 过夜。 6 0 干燥至 恒重。 每一样品取6 一 1 2 m g , E P 管中用玻璃棒研磨碎， 加人

20、0 . 3 m l 纯水、 0 . 3 m l 浓盐酸离心混匀。E P 管盖上用针头扎 一小孔， 置人高压锅中， 1 2 0 水解2h 。取出后4 0 % N a O H 调p H至6 左右， 再用纯水稀释至 1 . 5 m l , 1 2 0 0 0 r m i n 一 离心1 5 m i n 。取上清用水稀释3 一 6 倍， 即可作为样品直接 测定。按校正曲线， 计算 H y p 百分含量， 再按 G r a n t 的方 法计算 胶原百分含 量: 胶 原%二 H y p % x 7 . 4 6 0 2 结果 2 . 1 实验条件 2 . 1 . 1 组织固定对实验结果的影响炎症时组织易发

21、生水 ，.Jlesesesl 气6 rllrJ 果见 T a b 2 0 3 讨论 翰液腺癌是胃癌中的一种低分化癌， 临床疗效仍不理 想， 寻找天然高效低毒的治疗药物仍是当前研究的热点。 L e a 等 “ 研究表明D A D S 可以通过增加组蛋白乙酞化诱导 鼠肝细胞癌分化。能否通过诱导肿瘤细胞向正常细胞分化， 从而达到治疗肿瘤的目的， 这个问题已成为研究人员日 益关 注的热点。本研究证实 D A D S可明显抑制人 胃癌细胞 M G C 8 0 3 的增殖， 且恶性程度减低， 向成熟方向分化， 为胃癌 的治疗提供了新的理论依据。深人研究其作用的分子机制， 具有十分重要的理论意义和广泛的应用

22、前景。 2 l 3 4 参考文献: 川M il n e r J A . h i s t o r ic a l p e rs p e c t i v e o n g a r li c a n d c a n c e r J . I N u t r , 2 0 0 1 , 1 3 1 ( 3 s ) : 1 0 2 7一 3 1 . 张 良运， 苏琦， 彭军 e t a l .二烯丙基二硫对人 胃癌 M G C 8 0 3 细胞生长的影响 J .世界华人消化杂志， 2 0 0 3 , 1 1 ( 9 ) : 1 2 9 0 一 3 . 袁静萍， 凌晖， 张孟贤 e t a l .二烯丙基二硫对人胃

23、癌 M G C 8 0 3 细胞 G 2 / M期的阻滞作用【 J .中国药理学通报， 2 0 0 3 , 1 9 ( 1 0 ) : 1 1 4 7 一 5 1 . 凌晖， 宋颖， 曾铁兵 e t a l . D A D S 诱导人胃癌细胞分化过 程中E R K / A P - 1 通路的改变【 J .中国药理学通报， 2 0 0 3 , 1 9 ( 1 1 ) : 1 2 3 5一 8 . 韩锐. 抗痛药物研究与实验技术 M ， 北京: 北京医科大学 中国协和医科大学联合出版社， 1 9 9 7 , 3 4 9 - 4 4 7 . L e a M A , R a n d o l p h V M . I n d u c t i o n o f h i s t o n e a c e t y l a t io n i n r a t l i v - e r a n d h e p a t o m a b y o r g a n o s u lf u r c o m p o u n d s i n c l u d i n g d i a l l y l d i - s u l f i d e j . A n t ic a n c e r R e s , 2 0 0 1 , 2 1 ( 4 A ) : 2 8 4 1 一 5 . 万方数据