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1、人Q ( ! K K !体外表达及其对神经元细胞增殖作用的研究 % 汪!凯!汪!渊!马传庚“!周!青!刘!虎!尹世杰!苏启庚 ! 安徽医科大学第一附属医院神经内科“ !分子生物学实验室“药理学教研室# 合肥!“ $ # # “ “$ “ # # “! ! 收稿!“ # # $# +! %修回 %安徽省自然科学基金资助课题“ Q 0(=$ 0 G 0( =$ , + G “(=, , G ! 文献标识码!?!文章编号! # # ! ) ! , 0“ # # $# ) # 0 + ) # + 摘要!目的!构建人 ) ! # # $表达载体! 体外表达人重组 ) ! # #$! 观察 ) ! # #
2、$的神经营养作用方法!应用= E Q?! 插入质粒5 ( 9 4 ; 6 3 5 O% R“U# 中! 转 化入大肠杆菌g C ! ) ( 9 中并在体外获得表达以镜下形态 学及酸性磷酸酶测定法观察表达蛋白对体外培养的 R ) Q ) B神经元增殖的作用结果!重组质粒体外表达的人 ) ! # #$可促进 R ) Q ) B神经元细胞附壁增加! 体积增大! 数 目增多! 突起增多延长( 且明显增加培养细胞酸性磷酸酶活 性结论! ) ! # # $对体外培养的 R ) Q ) B 神经元增殖有促 进作用 关键词! ) ! # #(聚合酶链式反应(a 4 O 6 K ) ( “V !2 3 K! 共
3、$ %个循 环! G %I琼脂糖电泳分析 A =产物 !: #: $!E Q?的酶切及连接!按S . K 3 O . O 3 4等 $%方 法! 经限制性内切酶 . ( E Q? 片段在E Q?连接酶的作用下! 插入经 . ( 6 3 5 O R%“U#中!得 到重组质粒5 ( 9 4 ; 6 3 5 O ) 8 ) ! # # $ !: #: 6 3 5 O ) 8 ) ! # # $转化至g C ! ) Z ( 9 中! 于C *氨苄青霉素培养基上挑选阳性克隆扩大 培养! 按碱裂解法制备重组质粒用1 ; %! # G “ “#2过滤灭菌! 制成# G “N+C D! ) ! # # $ 活
4、性二聚体溶液在, *孔细胞培养板上种植细胞 密度为% # #; ( (+2 ( D!的 R ) Q ) B培养基内加入 ) ! # # $活性二聚体溶液! 调整其浓度分别为#) “ #) * #和! # #2 N+C D!分别培养“ +) + 0) “), *8! 每时 间浓度组! “孔 !以镜下形态学观察及酸性磷酸酶活性“? ?# 检测 法 了 解 ) ! # # $活 性 二 聚 体 溶 液 对 R ) Q ) B + +0 +中国药理学通报! “ # $ % . 9Q ( ! K K!A . ? 9 B(/ 9 8 8 9 : ; %#: # $H#: # “ $%#: # , 0H#:
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