人肠道病毒71型动物模型研究进展.pdf

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1、2 0 1 0 年6 月 中国实验动物学报J u n e ，2 0 1 0 第1 8 卷第3 期A C T AL A B O R A T O R I U MA N I M A L I SS C I E N T I AS I N I C A V 0 1 1 8N o 3 人肠道病毒71 型动物模型研究进展 刘江宁1 ，张连峰1 2 ( 1 中国医学科学院实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，北京1 0 0 0 2 1 ； 2 中国医学科学院实验动物研究所，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京1 0 0 0 2 1 ) 【摘要】人肠道病毒7 l 型是婴幼儿手足口病的致病原之

2、一，其严重的并发症可导致神经系统疾病，甚至死 亡，是近期威胁中国儿童健康的因素之一。目前尚无临床疫苗可以预防该病毒感染，而E V 7 1 的动物模型是进行致 病机理、疫苗评价和药物等研究的基础。本文对E V 7 1 的两种常用动物模型：小鼠和猕猴( M a c a c am u l a t t a ) 模型进 行了描述，并对其在研究中的应用给与概括，为研究者选择合适的动物模型提供了依据。 【关键词】 人肠道病毒7 1 型；手足口病；模型，动物 【中图分类号】B 一3 2 2【文献标识码】A【文章编号】1 0 0 5 - 4 8 4 7 ( 2 0 1 0 ) 0 3 - $ 5 - 0 5 H

3、 u m a nE n t e r o v i r u s7 1I n f e c t i o ni nE x p e r i m e n t a la n i m a l s L I UJ i a n g n i n g 。，Z H A N GL i a n - f e n 9 1 。 ( 1 K e yL a b o r a t o r yo fH u m a nD i s e a s e sC o m p a r a t i v eM e d i c i n e ，M i n i s t r yo fH e a l t h ；I n s t i t u t eo fL a b o r a

4、 t o r y A n i m a lS c i e n c e ，C h i n e s eA c a d e m yo fM e d i c a lS c i e n c e s ( C A M S ) C o m p a r a t i v eM e d i c i n eC e n t r e ， P e k i n gU n i o nM e d i c a lC o l l a g e ( P U M C ) ，B e i j i n g1 0 0 0 2 1 ，C h i n a ；2 K e yL a b o r a t o r yo fH u m a nD i s e a

5、s e s A n i m a lM o d e l s ，S t a t ea d m i n i s t r a t i o no fT r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n e ；I n s t i t u t eo fL a b o r a t o r yA n i m a lS c i e n c e ， C A M S & C o m p a r a t i v eM e d i c i n eC e n t r e ，P U M C ，B e i j i n g1 0 0 0 2 1 ) 【A b s t r a c t 】H

6、 u m a ne n t e r o v i r u s7 1 ( E V 7 1 ) i so n eo ft h em a j o rp a t h o g e n sc a u s i n gh a n d ，f o o ta n dm o u t hd i s e a s ei n c h i l d r e n T h es e r i o u sc o m p l i c a t i o n sc a nl e a dt on e u r o l o g i c a ls y m p t o m sa n de v e nd e a t h E V 7 1i so n eo ft

7、 h ef a c t o r s t h r e a t e n i n gt h eh e a l t ho fC h i n e s ec h i l d r e nr e c e n t l y H o w e v e r ，t h e r ei sc u r r e n t l yn ov a c c i n ea v a i l a b l et op r e v e n tc l i n i c a l i n f e c t i o no ft h i sv i r u s A sa n i m lm o d e l sa r et h ef o u n d a t i o n

8、f o rp a t h o g e n e s i ss t u d i e s ，v a c c i n ea n dd r u gr e s e a r c ho nE V 7 1 i n f e c t i o n ，i nt h i sp a p e r ，t w oc o m m o n l yu s e da n i m a lm o d e lf o rE V 7 1 ，m o u s ea n dr h e s u sm o n k e y ，a r ed e s c r i b e da n dt h e i r a p p l i c a t i o n si nr e

9、s e a r c ha r es u m m a r i z e d ，t op r o v i d ef u n d a m e n t a l li n f o r m a t i o nf o rr e s e a r c h e r si n s e l e c t i o no fas u i t a b l e a n i m a lm o d e l 【K e yw o r d s 】H u m a nE n t e r o v i r u s71 ；H a n d ，f o o ta n dm o u t hd i s e a s e ；M o d e l ，a n i m

10、a l 1 9 6 9 年，研究者首次从患有中枢神经系统疾病 的婴儿粪便标本中分离得到肠道病毒7 1 型 ( E n t e r o v i r u s7 1 。E V 7 1 ) ，S c h m i d t 等。1 9 7 4 年鉴定。 E V T l 病毒属于微小病毒科肠道病毒属，为单股正链 R N A 病毒旧。1 9 7 4 年以来，E V 7 1 病毒曾在世界范围 内多次暴发，主要引起婴幼儿( 0 6 岁) 手足口病 ( H F M D ) 和无菌性脑膜炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样 的麻痹等多种与神经系统相关的疾病，而中枢神经系 统感染导致的肺水肿、肺出血和心肌炎，使其致残和 病死率较

11、高。每次疫情暴发，均会夺走许多婴幼儿的 生命引。到目前为止，临床上尚无预防E V 7 1 病毒感 染的疫苗或针对性治疗药物，理想的动物模型是解决 以上问题的关键之一，本综述对E V 7 1 病毒在中国的 流行特点，现有的动物模型及其应用进行了概括。 1E V 7 1 病毒流行特点及中国疫情 根据病毒的V P l 基因序列，E V 7 1 可分为A 、B 和C 三种基因型，包含A 、B 1 - B 5 和C 1 一C 5 共1 1 个 基金项目 十一五传染病专项支持( 2 0 0 9 Z X l 0 0 0 4 d 0 2 ) 。 作者简介】刘江宁( 1 9 8 1 一) ，助理研究员，研究方向

12、：传染病的动物模型。E m a i l ：l j n z b 0 3 0 3 8 1 2 6 c o r n 【通讯作者 张连峰。E - m a i l ：Z h a n g l f c n i l a s o r 8 万方数据 中国实验动物学报2 0 1 0 年6 月第1 8 卷第3 期A c t aL a bA n i t aS e iS i n ，J u n e ，2 0 1 0 ，V 0 1 1 8 N o 3 亚型HJ 。在1 9 9 7 2 0 0 5 年马来西亚的暴发中，重症 E V 7 1 感染以C 1 、C 2 、B 3 、B 4 和B 5 亚型为主。在 1 9 9 9 2

13、0 0 7 年，澳大利亚的重症E V 7 1 感染以c l 亚 型为主”。2 0 0 4 年台湾首次出现了C 4 亚型毒株的 流行，2 0 0 6 2 0 0 7 年问，台湾的E V 7 1 暴发以B 5 和 C 5 亚型为主o 。而中国的E V 7 1 暴发主要以C 4 亚 型为主，偶尔有C 5 亚型感染的报道o “。E V 7 1 不同 型毒株之间，在毒力方面并无明显差异，各种基因型 的E V 7 1 均有引发严重症状的报道3 。 1 9 9 7 年以来，E V 7 1 病毒的流行在亚太地区呈 上升趋势H 6 川。1 9 8 1 年，我国在上海发现手足I = I 病，随后北京、河北、天津、

14、福建、吉林、山东、湖北、广 东和安徽等十几个省( 市) 相继出现疫情。2 0 0 8 年 E V 7 1 导致的手足口病疫情在多个省市暴发，2 0 0 9 年I 一4 月，全国累计报告手足口病例1 1 56 1 8 例， 重症7 7 3 例，死亡5 0 例，由于死亡的都是婴幼儿， 引起很大的社会恐慌。李仁清等一1 分析了北京 2 0 0 6 2 0 0 8 年间的流行毒株的序列，发现北京地区 流行的E V 7 1 仍然是C 4 亚型，并且在同一时期的不 同地区、不同来源和不同疾病状态下分离的毒株在 V P l 序列上无明显差别。但是随着时间推移，核苷 酸变异的不断积累，有出现新亚型毒株的可能。

15、 2 E V 7 1 病毒的动物模型 2 1 小鼠模型 E V 7 1 感染的1E l 龄新生I C R 或B A L B c 小鼠 是最为常见的E V 7 1 模型动物。临床分离毒株对肌 肉组织的噬性高于脑组织，临床分离株经过小鼠体 内扶强后，可以引发神经症状，甚至可以感染1 周龄 或两周龄的小鼠。 C h u m a k o v 等驯使用B 1 亚型的保加利亚临床 分离株感染1 日龄的新生小鼠，可引发瘫痪和肌炎 及肌纤维坏死。A f i t a 等o 将B l 亚型的E V 7 1 毒株 在N O D S C I D 小鼠颅内传代扶强，分离到了一株 N O D S C I D 小鼠适应毒株

16、，该毒株感染3 4 周龄的 N O D S C I D 小鼠后，可以使其表现出后肢麻痹。 C h u a 等2 1 将B 3 亚型的澳大利亚临床分离株 在B A L B c 小鼠颅内扶强，扶强后的毒株感染1 7 日龄B A L B c 小鼠，引发了严重的致死症状，骨骼肌 是病毒的主要复制位点，病毒侵染引发严重的坏死 性肌炎。C h a n 等列用B 3 和B 4 亚型的E V 7 1 作为 出发毒株，建立了1 日龄I C R 小鼠的感染模型，对小 鼠进行颅内病毒感染后，小鼠均出现明显的体重增 长减缓，而B 3 亚型毒株感染2d 后可观察到嗜睡和 运动不协调症状，部分小鼠四肢肿胀并伴随死亡，未

17、发现后肢麻痹症状，而未死亡的小鼠在感染6d 后， 上述症状全部消失，恢复正常。C h e n 等43 用C 2 亚 型的小鼠适应株通过灌胃感染1 日龄的I C R 小鼠，2 d 后，小鼠可出现皮肤病变，一般在4 7d 后出现后 肢麻痹，7 9d 后死亡，病理观察发现了脑部的淋 巴细胞浸润。随后，W a n g 等列将上述C 2 亚型毒株 在1 日龄的I C R 小鼠颅内4 次传代扶强后，得到 M P 4 菌株。扶强菌株在体内外的毒力均比出发菌 株增强，且扶强后的毒株可通过灌胃法感染7 日龄 I C R 小鼠，导致其后肢麻痹，并在5 9d 内死亡。 病理观察到了感染小鼠的脑干与脊髓中神经元消失

18、和凋亡，四肢肌肉大面积坏死。感染早期，可在小鼠 的小肠内检测到病毒复制，而病毒的主要复制位点 是在肌肉、脊髓与脑中。同时，M P 4 感染小鼠后，可 发生同窝之间的交叉感染现象。 O n g 等叫使用B 3 亚型的小鼠适应株，通过灌 胃与注射感染2 周龄的I C R 小鼠，小鼠感染后表现 出脑脊髓炎等与人类似的神经症状，感染小鼠的前 角神经元、三叉神经运动核和脑干网状结构的神经 元中病毒数量最多，脑的其他部位也有少量的神经 元被感染。该模型是迄今为止，能感染E V 7 1 病毒 的年龄最大的正常小鼠。w u 等将新分离的 E V 7 1 的n e u 毒株在V e r o 细胞中进行两轮培养，

19、得 到Y N 3 毒株，其通过腹腔感染新生I C R 小鼠时表现 出较高的毒力，可致新生的I C R 小鼠后肢麻痹，最 终死亡。 中国大陆地区的E V 7 1 流行株主要属于C 4 亚 型，而实验动物普遍对该毒株不敏感，导致多数病毒 株感染动物后，不能表现出明显的临床症状。朵建 英等刮通过腹腔注射对1 日龄的I C R 小鼠进行病 毒感染，随后在脑、肺、骨骼肌与小肠中检测到了病 毒复制，绘制了病毒在骨骼肌内的复制曲线，并联合 组织的病理变化，建立了我国流行的C 4 亚型毒株 的小鼠模型。 2 2 非人灵长类模型 口服E V 7 1 病毒不能使猕猴产生严重的神经症 状，猕猴免疫与攻毒多使用椎管或

20、静脉注射接 种9 ，2 0 1 。C h u m a k o v 等1 使用保加利亚临床分离 株感染猕猴之后，可使猕猴发生瘫痪，神经系统出现 类似于脊髓灰质炎的病变。N a g a t a 等纠分别用5 种E V 7 1 的临床分离株( 患者分别患有脑炎，脑膜炎 万方数据 中国实验动物学报2 0 1 0 年6 月第1 8 卷第3 期A c mL a bA n i mS c iS i n ，J u n e ，2 0 1 0 ，V 0 1 1 8 N o 3 和手足口病) ，通过椎管注射对猕猴( 5 1 3 岁，成年 雌性) 进行病毒感染，1 6d 后，猕猴均表现出了神 经症状：迟缓性麻痹、震颤和

21、共济失调，免疫组化证 实了病毒在脊髓、脑干、小脑皮层、齿状核和大脑中 的复制。随后，N a g a t a 等旧叫进一步建立了静脉注射 感染猕猴的模型，猕猴( 6 1 7 岁，成年雌性) 感染病 毒后，具有与人脑炎类似的临床体征与神经病理表 现，包括震颤、共济失调和脑水肿，但没有发生诸如 肺水肿和心脏衰竭之类的神经源性并发症。值得注 意的是，许多E V 7 1 病毒的临床分离株对猕猴感染 时，表现出了较低的神经毒性。国内未见使用猴 建立感染模型的报道。 3 动物模型的应用 3 1病毒在体内的传递及致病机制研究 病毒在体内的传播途径，是发病机制研究的焦 点之一。C h e n 等钊用C 2 亚型

22、小鼠适应株通过灌 胃感染小鼠，组织内病毒滴度实验表明，病毒首先在 小肠内复制并引发病毒血症，随后依次传播到脊髓 的胸段、颈段和脑干中，推测病毒利用逆向轴突的传 递的方式进入脑内复制，这一点与脊髓灰质炎病毒 类似。随后，C h e n 等旧引通过灌胃、肌内注射和颅内 注射三种方式对7 日龄小鼠进行感染后，均导致脑 部感染、松弛型麻痹、肺功能失调和死亡。然而，不 同的感染方式影响了疾病进展和发生神经症状的概 率，与其他两种感染方式相比，颅内注射感染，可导 致小鼠的死亡提前发生，表明从病毒接种到病毒传 递到颅内的时间长短，决定了疾病发生的潜伏期长 短。虽然灌胃感染可引发病毒血症，但是不引发明 显的神

23、经症状，预示着血液运输并不是病毒传递的 主要方式。后肢感染病毒后，首先会在脊髓的腰段 检测到病毒，随后传递到脊髓的颈段，最后抵达脑 部；而上肢感染病毒后，则首先在脊髓的颈段检测到 病毒，从而得出E V 7 1 病毒依赖神经元逆向传递的 结论。O n g 等6 发现，通过肌内注射感染2 周龄小 鼠，病毒进入骨骼肌后，通过运动神经感染附近的中 枢神经，并在中枢神经系统内传递。 关于E V 7 1 病毒的致病机理，目前尚不清楚。 病毒感染引发的严重神经症状，普遍被认为是病毒 在脑组织的复制引起的。然而，随后的解剖数据表 明，许多患者体内的病毒复制与病变部位并不一致， 并推测宿主免疫系统在发病过程中扮

24、演了重要的角 色3 | 。H a s h i m o t o 等旧43 用临床分离的毒株经皮下 注射感染猕猴，结果一半的猕猴感染后表现出临床 症状：后肢麻痹或衰弱。病理分析发现了神经系统 和血管的病变，以及脊髓、延髓、大脑和脑干灰质中 的神经元变性消失和炎细胞侵润。但是，在这些部 位均未发现病毒复制，而血清中E V 7 1 抗体的浓度 却显著升高，这预示着除了病毒复制以外，可能存在 其他致病机制，如免疫过激或交叉免疫反应等旧“。 3 2 疫苗评价 预防E V 7 1 病毒感染的疫苗，均处于研究阶段， 目前尚无临床上可以使用的疫苗。猕猴模型中，因 为可以感染病毒的猕猴年龄较高，可以用做疫苗的 自

25、体免疫评价。A f i t a 等2 刮使用减毒的A 型E V 7 1 病毒做为疫苗，对猕猴进行免疫，4 5d 后经静脉注 射进行攻毒，免疫后的猕猴没有表现出症状，且其血 清对不同亚型的E V 7 1 毒株( A 、B 1 、B 4 、C 2 和C 4 ) 具 有广谱性的中和作用。然而，从减毒毒株接种的猕 猴脊索中，分离到了活病毒，表明弱毒株仍具有一定 的神经侵染性，并引发了猕猴的震颤等微弱的神经 症状。 由于小鼠对E V 7 1 病毒的敏感期较短，限制了 其在疫苗评价中的使用。目前，国际上多采用对雌 鼠或母鼠免疫，疫苗产生的抗体可以通过胎盘屏障 传递给幼鼠，随后对幼鼠进行病毒感染，从而间接的

26、 评价母源抗体对幼鼠的保护作用。使用此类方法评 价的疫苗，包括灭活的病毒、病毒结构类似物、V P l 蛋白及V P l 的D N A 疫苗。w u 等7 。比较了灭活全 病毒疫苗、V P l 的D N A 疫苗和V P l 蛋白对雌鼠免 疫后，母源抗体对幼鼠的保护能力。雌鼠经灭活病 毒免疫后，再交配产下的的幼鼠，经2 3 0 0 L D 的病 毒剂量感染时，存活率达到8 0 ，而母鼠经V P l 蛋 白的D N A 疫苗和V P l 蛋白免疫后产下的的幼鼠， 在2 3 0L D ，。的病毒剂量感染时，存活率分别为4 0 和8 0 ，指出灭活全病毒作为疫苗具有最佳的保护 效果。C h u n g

27、 等旧川表达并纯化了E V 7 1 病毒类似 物一V L P ，V L P 模仿了全病毒的形状、衣壳蛋白结构 和蛋白组成。免疫后的B A L B c 母鼠产下的幼鼠， 在受到E V 7 1 病毒( 1 0 0 0L D ，。) 攻击时，存活率可以 达到8 9 ，其保护活性大于变性的V L P 蛋白和热灭 活的E V 7 1 病毒。 O n g 等8 使用2 周龄I C R 小鼠的感染模型，对 甲醛灭活的全病毒疫苗进行了自体免疫评价。对1 日龄的新生鼠进行初次免疫，7d 后进行加强免疫。 加强免疫7d 后的幼鼠进行病毒感染，结果均未表 万方数据 中国实验动物学报2 0 1 0 年6 月第1 8

28、卷第3 期A c t aL a bA n i mS c iS i n ，J u n e ，2 0 1 0 ，V 0 1 1 8 N o 3 现出症状，各组织也未检测到病毒。 3 3 药物筛选 抑制E v 7 1 病毒的药物研究，多处于细胞水平 上，在动物模型中对于药物治疗效果进行验证的报 道并不多见，概因为感染病毒的幼鼠存在年龄过低、 感染周期短和不宜进行给药等缺点。“等心州对1 2 1 4d 的I C R 小鼠进行腹腔注射感染病毒，感染后 2h 开始腹腔注射利巴韦林药物，每日剂量为1 0 0 m r , ( k g b w ) ，持续给药9d ，发现利巴韦林可以通过 抑制组织内的病毒复制，来

29、降低小鼠在面临病毒感 染时的发病率、致死率( 致死率降低到3 0 ) 和麻痹 后遗症。L i u 等p 引研究了I 型I F N s 对病毒感染的 幼鼠的治疗效果，对3 日龄的I C R 小鼠进行腹腔注 射攻毒，感染2 3d 后注射地塞米松( I 型I F N s 的 抑制剂) ，会加剧临床症状，增加组织内病毒滴度。 而在病毒感染前1 2h 注射I F N 素的诱导剂，则会提 高成活率和降低组织内病毒滴度。注射I 型I F N 的 抗体，则会提高死亡率和组织内病毒滴度。并且，在 感染病毒后的3d 内，连续3d 注射I F N - a A ，则会使 幼鼠存活。W e n g 等p 发现，牛乳铁蛋

30、白在小鼠体 内具有抗病毒效果，它可以延缓麻痹，降低死亡率。 但是治疗组的死亡率依然达到了7 0 ，表明其体内 治疗效果微弱。 4展望 E V 7 1 病毒被认为是脊髓灰质炎病毒被扑灭后， 目前最重要的嗜神经性肠道病毒。然而，由于该病 毒的流行地区主要是经济不发达的亚太地区，不能 引起发达国家的足够重视，导致其研究进展不够迅 速。关于E V 7 1 病毒感染的致病机理，目前尚不清 楚；没有临床上可以使用的疫苗和针对性治疗药物， 使疫情在很长时间内难以得到缓解，而解决上述问 题的关键，是建立理想的模型。猴模型虽然可以满 足上述要求，但是价格昂贵，不适合大规模药物筛选 研究；目前小鼠的感染年龄过低，

31、感染周期短，限制 了其在疫苗的自体免疫评价和药物筛选中的应用。 而进一步提高可感染病毒的小鼠年龄，甚至建立成 年小鼠的感染模型，有望解决上述问题。 中国大陆地区手足口病疫情的病源主要是C 4 亚型毒株，但是，该亚型的毒株对于实验动物普遍敏 感性不高，导致目前尚未见可以使被感染动物发病， 甚至死亡的模型报道。进一步提高病毒对动物的噬 性，或改善动物对病毒的敏感性，有望解决这一问 参考文献 S e h m i d tN J ，L e n n e R eE H ，H oH H A na p p a r e n t l yn e w e n t e r o v i r u si s o l a t e

32、 df r o mp a t i e n t sw i t hd i s e a s eo ft h ec e n t r a l n e r v o u ss y s t e m J JI n f e c tD i s ，1 9 7 4 ，1 2 9 ：3 0 4 3 0 9 H oM E n t e r u v i r u s7 1 ：t h ev i r u s 。i t si n f e c t i o n sa n do u t b r e a k s J JM i c r o b i o iI m m u n o lI n f e c t 。2 0 0 0 ，3 3 ：2 0 5

33、2 1 6 C h a n gL Y ，H u a n gL M 。G a nS S ，e ta l ，N e u r o d e v e l o p m e n ta n d c o g n i t i o ni nc h i l d r e na f t e re n t e r o v i r u s7 1i n f e c t i o n J NE n g lJ M e d ，2 0 0 7 ，3 5 6 ：1 2 2 6 1 2 3 4 A b u b a k a rS ，C h e eH Y ，S h a f e eN ，e ta 1 M o l e c u l a rd e t

34、e c t i o no f e n t e r o v i r u s e sf r o ma l lo u t b r e a ko fh a n d ，f o o ta n dm o u t hd i s e a s ei n M a l a y s i ai n1 9 9 7 J S c a n dJI n f e c tD i s ，1 9 9 9 ，3 1 ：3 3 1 3 3 5 O M n e rB ，H u a n gC W ，S e h m i dD ，e ta 1 E p i d e m i o l o g yo f e n t e r o v i r u st y p

35、e sc a u s i n gn e u r o l o g i c a ld i s e a s ei nA u s t r i a1 9 9 9 2 0 0 7 ：d e t e c t i o no fc l u s t e r so fe e h o v i r u s3 0a n de n t e r o v i r u s7 1a n d a n a l y s i so fp r e v a l e n tg e n o t y p e s J JM e dV i r u l ，2 0 0 9 ，8 1 ：3 1 7 3 “ H u a n gY P ，L i nT L ，K

36、u oC Y ，e ta 1 T h ec i r c u l a t i o no f s u b g e n o g r u u p sB 5a n dC 5o fe n t e r o v i r u s7 1i nT a i w a nf r o m2 0 0 6 t o2 0 0 7 J 】V i r u sR e s ，2 0 0 8 ，1 3 7 ：2 0 6 2 1 2 L iL ，H eY ，Y a n gH ，e t8 1 G e n e t i cc h a r a c t e r i s t i c so fh u m a n e n t e r o v i r u s

37、7 1a n dc o x s a e k i e v i r u sA 1 6c i r c u l a t i n gf r o m1 9 9 9t O 2 0 0 4i n S h e n z h e n ，P e o p l e SR e p u b l i co fC h i n a J JC l i n M i e r o b i o l ，2 0 0 5 ，4 3 ：3 8 3 5 3 8 3 9 S h i hS R ，H oM S ，L i nK H ，e ta 1 G e n e t i ca n a l y s i so fe n t e r o v i r u s 7

38、1i s o l a t e df r o mf a t a la n dn o n f a t a lc a s e so fh a n d ，f o o ta n dm o u t h d i s e a s ed u r i n g 蛐e p i d e m i ci nT a i w a n ，1 9 9 8 J V i r u sR e s ， 2 0 0 0 。6 8 ：1 2 7 1 3 6 李仁清，陈丽娟，王玉梅，等北京地区2 0 0 6 2 0 0 8 年肠道病 毒7 l 型V P I 区基因特征分析 J 中华流行病学杂志， 2 0 0 9 ，3 0 ：4 5 4 9 C h

39、 u m a k o vM ，V o r o s h i l o v aM 。S h i n d a r o vL ，e ta 1 E n t e r e v i r u s7 1 i s o l a t e df r o me a s e lo f e p i d e m i cp o l i o m y e l i t i s l i k ed i s e a s ei n B u l g a r i a J A r c hV i r u l ，1 9 7 9 ，6 0 ：3 2 9 3 4 0 A r i t aM ，A m iY 。W a k i t aT ，e ta 1 C o o

40、p e r a t i v ee f f e c to ft h e a R e n u a t i o nd e t e r m i n a n t sd e r i v e df r o mp o l i o v i r u ss e b i nls t r a i ni s e s s e n t i a lf o ra t t e n u a t i o no fe n t e r o v i r u s7 li nt l I eN O D S C I D m o u s ei n f e c t i o nm o d e l J JV i r o l ，2 0 0 8 ，8 2 ：1

41、 7 8 7 1 7 9 7 C h u aB H P h u e k t e sP ，S a n d e r sS A 。e ta 1 T h em o l e c u l a rb a s i s o fm o u s ea d a p t a t i o nb yh u m a ne n t e r o v i r u s7 1 J JG e nV i r o l ， 2 0 0 8 。8 9 ：1 6 2 2 1 6 3 2 C h a nY F ，A b u B a k a rS H u m a ne n t e r o v i r u s7 1s u b g e n o t y p

42、 eB 3 l a c k se o x s e c k i e v i r u sA 1 6 1 i k en e u r e v i r u l e n c ei nm i c ei n f e c t i o n 【J V i r c lJ ，2 0 0 5 ，2 ：7 4 C h e nY C ，Y uC K ，W a n gY F ，e ta 1 Am u r i n eo r a le n t e r o v i r u s 7 1i n f e c t i o nm o d e lw i t hc e n t r a ln e r v o u ss y s t e mi n v

43、o l v e m e n t J JG e nV i r u l 。2 0 0 4 8 5 ：6 9 7 7 W a n gY F ，C h o uC T ，L e iH Y ，da 1 Am o u s e - a d a p t e d e n t e r o v i r u s7 1s t r a i nc a u s e sn e u r o l o g i c a ld i s e a s ei nm i c ea f t e ro r a l i n f e c t i o n J JV i r u l 。2 0 0 4 。7 8 ：7 9 1 6 7 9 2 4 ，1J 1 J

44、 1 J 1 J 1 J 1 J 1 J 1J 1 J 1 J 1 J 乱 。 2 3 4 5 6 7 8 9 m n n H ” 是rL r L r L rL r L r L rL r L r L rL 万方数据 S 9 中国实验动物学报2 0 1 0 年6 月第1 8 卷第3 期A c t aL a bA n i mS c iS i n ，J u n e ，2 0 1 0 ，V 0 1 1 8 丙o 3 1 6 1 7 1 8 1 9 2 0 2 1 2 2 2 3 2 4 O n gK C ，B a d m a n a t h a nM ，D e v iS ，e ta 1 P a t h

45、 o l o g i c c h a r a c t e r i z a t i o no fam u r i n em o d e lo fh u m a ne n t e r o v i r u s7l e n c e p h a l o “y e l i t i s J JN e u r o p a t h o lE x pN e u r o l ，2 0 0 8 ，6 7 ： 5 3 2 5 4 2 W uC N ，L i nY C ，F a r mC ，e ta 1 P r o t e c t i o na g a i n s tl e t h a l e n t e r o v i

46、 r u ，71i n f e c t i o ni nn e w b o r nm i c eb yp a s s i v ei m m u n i z a t i o n w i t hs u b u n i tV P lv a c c i n e sa n di n a c t i v a t e dv i r u s J V a c c i n e ， 2 0 0 1 ，2 0 ：8 9 5 9 0 4 朵建英，王卫，佟薇，等肠道病毒7 1 型( E V 7 1 ) 对I C R 小 鼠的感染 J 中国比较医学杂志，2 0 0 9 ，5 ：4 1 4 6 N a g a t aN ，S

47、 h i m i z uH ，A m iY ，e ta 1 P y r a m i d a la n d e x t r a p y r a m i d a l i n v o l v e m e n ti n e x p e r i m e n t a l i n f e c t i o no f c y a o m o l g u sm o n k e y sw i t he n t e r o v i r u s7 1 J JM e dV i r o l ， 2 0 0 2 。6 7 ：2 0 7 2 1 6 N a g a t aN ，1 w a s a k iT ，A m iY ，e

48、 ta 1 D i f f e r e n t i a ll o c a l i z a t i o no f neuronss u s c e p t i b l et oe n t e r o v i r u s71a n dp o l i o v i r u st y p e1i nt h e c e n t r a lnervouss y s t e mo fc y n o m o l g u sm o n k e y sa f t e ri n t r a v e n o u s i n o c u l a t i o n J JG e nV i r o l ，2 0 0 4 ，8 5 ：2 9 8 1 2 9 8 9 A r i t aM ，S h i m i z uH ，N a g a t aN ，e ta 1 T e m p e r a t u r e s e n s i t i v e m u t a n t so fe n t e r o v i r u s7 1s h o wa t t e n u a t i o ni ne y n o m o l g u s m o n k e y s J JG e nV i r o l ，2 0 0 5 ，8 6 ：1 3