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1、!C“#$% 1解放军九六零医院检验科, 潍坊 261000; 2解放军四一一医院药剂科, 上 海200081 ) 摘要:促肝细胞生长物质(hepatic stimulatory substance, HSS)不仅能够阻止肝损伤、 启动肝细胞增殖再生, 而且 可以部分恢复肝功能以及具有抗氧化作用, 因此有较为广阔的应用前景。 关键词:促肝细胞生长物质(“#$; 急性肝损伤;肝再生; 氧化作用 中图分类号:Q51 - 收稿日期:2005-11-25 上海市-sk基金资助(No. 2003003-S) 作者简介:金 艳(1979), 女, 硕士,E-mail:wawj0156ya 肝脏是生物体内
2、一种具有很强再生能力的器 官, 从中分离纯化出具有再生刺激功能的物质一 直 是 国 内 外 研 究 人 员 关 注 的 重 点 )1975年 , LaTrecUue等V1,2W首次报道了从断乳大鼠肝脏中分 离到一种热稳定的特异性肝细胞增殖刺激物质, 由于其对肝脏的特异性作用, 将这种物质命名为 促肝细胞生长物质(HSS) 实验证明HSS具有阻止 肝损伤、 启动肝细胞增殖再生, 抗氧化以及恢复 肝功能的作用) 1. HSS的特性及其分离纯化 HSS由于至今尚未得到纯化单一的活性物质, 其分子结构和XNY序列仍不清楚, 但有研究显示 是一类分子量约为12#18 kX, 带强负电荷、 微弱 疏水的多
3、肽类物质的总和) 在0.1ZSXS或8 molL 脲中不失活, 说明其活性不需要三级结构; 经 1Z二巯基乙醇和1Z二硫代赤藓醇处理, 其活性 仍不降低, 表明二硫键对其活性也非必需; 胰蛋 白酶、 胰凝乳蛋白酶可破坏其活性; 经XNase、 RNase和神经氨酸酶处理后其活性无变化, 表明 活性物质不是核酸类物质) 姚志强等V3W报道了人 胎肝HSS中氨基酸的组成, 指出含有16种氨基 酸, 含量最高者为甘氨酸, 最低者为酪氨酸, 两 者相差28倍) HSS没有种属特异性V4W, 如人的胚胎, 新生 牛 、 猪中都存在此种物质; 但有器官特异性: HSS在体内对骨髓、 脾脏、 肾等器官均不作
4、任何 反应; 在体外, 对8种正常的或恶变的非肝脏起 源细胞株也没有作用, 然而无论体内、 外, 正常 或恶变的肝脏起源的细胞均能对HSS产生较强的 反应) 此外,HSS是一种耐热的肽类, 研究表明, 当温度升高到37$,4 h后,HSS能够保持活性; 当温度升高到65 $,90 min后, 有80%的HSS 有活性; 温度达到95 $,20 min 后, HSS仍有少 量活性)HSS还具有pH稳定性: 将HSS 分别加 入到pH值为1.0、3.0、5.0、7.0、9.0及11.0的 溶液中并测其活性, 结果发现: 在pH为1.09.0 时HSS仍保持活性, 但在pH9.0时活性将部分 丧失V
5、4W) HSS的分离纯化一般都是按照LaTrecUue等V1,2W 的方法进行的, 取部分肝脏加入到pH 7.2 TS 中, 高速匀浆, 匀浆液70 $保温20 min,4 $ 27000 !_ 离心60 min, 取上清液, 过滤, 滤液按16加 入-20 $预冷的40Z乙醇, 继续搅拌2 h,4 $ “ 参考文献 V 1 WHeithoaa XMet al. roc Natl Ycab Sci cSY, 1997, 94 934939 V 2 WHanbaielb Met al. FEMS Microbiol Red, 1999, 23(1) 6991 V 3 W陈师勇 等.遗传, 200
6、5, 27(3) 505511 V 4 WHanbaielb Met al. Trenbs Microbiol, 2000, 8(7) 336339 V 5 WSon_ YHet al. Ynn eriobontol, 2002, 7(1) 3842 V 6 WCao SLet al. FEMS Microbiol Lett, 2004, 237(1) 97103 V 7 WXeb Xeet al. Tuberculosis(Ebinb), 2002, 82(4-5) 175182 V 8 WHan_ Let al. roc Natl Ycab Sci cSY, 2003, 100 85088
7、513 V 9 WChen_ Set al. Mol Microbiol, 2003, 48(5) 12751288 V10Weim YRet al. Inaect Immun, 2003, 71(10) 54615471 V11WMahan Mfet al. Science, 1993, 259(5095) 686688 V12Wgalbidia RHet al. Science, 1997, 277(5334) 20072011 V13WHensel Met al. Science, 1995, 269(5222) 400403 264 !“#$ 生命的化学2006年26卷3期 CHEMI
8、STRY OF LIFE 2006, 26(3) 240005离心20 678# 沉淀用蒸馏水溶解# 即可得 到粗品$ 继而可通过离子交换层析# 凝胶层析# 高效液相等进一步分离提纯$ 2. HSS的生物学功能 29: HSS的促肝源细胞增殖作用把不同浓度的 HSS加入到肝细胞H;T?R参入法测定细胞增殖活性发现# 与 生理盐水组相比# 加入HSS的细胞3HAT?R参入 量明显增多#H;6;RG结合# 再通过该受体将 信号传入细胞内# 从而促进肝细胞CDE的合成# 使肝细胞增殖( 分裂# 促进肝脏的再生$ XLMLTTL等:2A和Y7HH7L6QS8等:3A通过对各种 生长因子的研究发现# 胞
9、外DLZ的快速涌入是多 数生长因子起到调控作用的共同作用机制# 而 HSS对静态细胞发挥作用首先表现在细胞外DLZ 的快速涌入# 及HZ快速反向运动# 从而细胞内的 HZ浓度降低# 提高了胞内的VZETO酶泵# 恢复胞内外的%DLZ523的荧光强度均有所增加# 而给予 HSS后二者增加的程度会相应减小# 说明HSS能 够有效地维持急性肝损伤后线粒体的通透性# 阻 止细胞死亡$ 当然#HSS作为一种促肝生长物质是不可能 完全独立发挥作用的$ 例如有研究证实#HSS能 与表皮生长因子(EBF共同作用于细胞增殖# 并且 很可能还与多种其他细胞因子作为促进剂或抑制 剂共同发挥作用$ 4.现状、存在的问
10、题及发展方向 目前# 国内部分科研机构已成功从乳猪或乳 牛肝脏中提取出了较为纯化的HSS# 并获得了国 家新药证书# 有注射液% 口服液等多种形式# 已 广泛应用于临床# 对重症型肝炎% 急性肝炎% 慢 性肝炎% 肝硬化等均有良好的疗效$ 由于我国是 肝炎大国# 而且HSS的原料来源广泛# 制作流程 较为简单# 制品可以批量生产# 冻干保存# 所以 有非常理想的应用前景$ 但是# 当前国内各单位所制备的HSS其动物 来源不一并都不是单一的活性组分# 这给科研和 临床治疗造成了很大的障碍$ 所以有的科研机构 正从人胎肝CD9:库中克隆这种新型的肝细胞生 长素# 有希望能用基因工程方法生产这种高活
11、性 的单一物质$ 此外# 如何在提纯后改善其性能# 将单一的促肝细胞生长物质与其他方面的因素结 文章编号 亚型;生物学功能 中图分类号:RE62 - 收稿日期GHAPPQCP8QCR(李丽琴S5ET2# 女# 博士# 副研究员# 联系作者#E8;GH号染色体上$ 基因命名为 !2C60#!2C2和!2C;0?% 啮齿类动物中R20基因与人 !2C60基因高度同源(A;?9$R20基因编码的!28- 5R与!25-5R氨基酸序列的同源性高达AB?$ 但 二者的药理学特性存在差异$ 表明!28-5R是!25- 5R的种属变体$ 故未被列为!2-5R的亚型#5C区仅有!25-5R亚型分布0个氨基酸残
12、基组成$ 为C次跨 膜受体$ 含有多个亲水区与疏水区$ 其疏水区迂 回进出细胞膜$ 由20!2个氨基酸残基组成的! 螺旋结构组成% 其亲水区包括3个胞外环和3个 胞内环% !2-5R的D端有两个糖基化位点$ 生理配基 为肾上腺素(E9和去甲肾上腺素(DE9% 第3胞内环 较长$ 其氨基酸序列在各亚型间存在较大的异质 性A72)U 2C32A; )U 66B6C3 =LSFLRTR 8HL FMN 8SV 8SR SIS, 2003, ;A760)U 6B2B6B3A , 66C7)U 6606602 2, 6B76)U 2622; A63 , 2;AU C203266 =SFMFFG IHL FMN TT_SITM 5WWM EPFGXFITM, 200;, 6BA(69U 660 66=LHXFRLHGR OOHL FMN :STIPSX :STWPQR 5ILF, 6BBA, 6366U 6CC6B6 “ 267