《兔出血病血凝和血凝抑制试验方法NYT572-2002.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《兔出血病血凝和血凝抑制试验方法NYT572-2002.pdf（4页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、器 1 1 1 . 2 2 0 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 N Y / T 5 7 2 -2 0 0 2 兔出血病血凝和血凝抑制试验方法 Ha e ma g g l u t i n a t i o n a n d h a e ma g g l u t i n a t i o n i n h i b i t i o n t e s t s f o r r a b b i t h a e mo r r h a g i c d i s e a s e 2 0 0 2 一 0 8 一 2 7发布2 0 0 2 一 1 2 一 0 1实施 中 华 人 民 共 和 国 农 业 部发
2、 布 5 6 7 NY/e 5 7 2 -2 0 0 2 前言 兔出血病( 曾称兔病毒性出血症) ， 是兔的毁灭性疫病， 世界动物卫生组织 Wo r l d O r g a n i z a t i o n f o r A n i m a l h e a l t h ( 英) , O f f i c e I n t e r n a t i o n a l d e s E p i z o o t i e s ( 法) , O I E 和我国分别将之列为f 3 类和二类动 物疫病。 本标准采用了( A E 诊断试验和疫苗标准手册) ( 2 0 0 0 版) ( M a n u a l o f S t
3、 a n d a r d s f o r D i a g n o s t i c r e s t s a n d V a c c i n e s ) 第2 . 8 . 3 章规定的常规诊断方法( 该方法最早系由我国建立) ， 与 该章的规定相比， 本标准特点: 根据本国实践经验， 将其具体化， 成为操作程序。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由个国动物检疫标准化技术委员会归no 本标准起q.单位: 江苏省农业科学院畜牧兽医研究所 本标准主要起草人: 王启明、 董亚芳。 - 2 0 0 2 572000 NY/ T 兔出血病血凝和血凝抑制试验方法 1 范 围 本标准规定了兔出血病血凝和血凝
4、抑制试验的技术要求。 本标准适用于兔出血病的诊断和流行病学调查。 2 血凝试验( HA) 和血凝抑制试验( HI ) 2 . 1 材料和试荆 2 . 1 . 1 可疑兔及正常兔肝悬液的制备: 分别将肝脏剪碎、 按 1 : 离心3 0 m i n ， 取上清液做血凝试验 2 . 1 . 2 生理盐水 2 . 1 . 3 阿氏液( Al s e v e r s ) 成分: 葡萄糖( 化学纯) 氯化钠 柠檬酸钠( N a , C , H,; O, 2 H( ) ) ( 化学纯) 柠檬酸( H H ; ( ) , H( ) ) ( 化学纯) A馏水 制法: 将以 1 _ 药品混合加热溶解、 过滤. 6
5、 5 . 9 4 k P a 1 5 mi n 1 。加入牛理盐水后匀浆 再以4r / mi n 2 0 “ K 门 . 1 2 K 比8! () . 0 5 5 k 1 0 0 ml 火菌， 4 交保存备用 2 . 1 . 4 1 %人 ( ) “ N Y 9 1 * 细胞悬液的制备: 取新鲜人 ( ) “ I 红细胞于阿氏液中保存( 置4 Y 可保存一周) 。 用时取人，()” 酬红细胞以2 。 倍量生理盐水混匀洗涤红细胞， 2 0 0 0 r / n t i n离心 1 5 mi n ， 弃 仁清， 重复洗 涤4 次. 最后一次离心前， 计算红细胞悬液体积( 在离心后扣减弃去L清液的体积
6、. 即为红细胞的体积) 。 洗涤后的红细胞用生理盐水配成 1 %悬液， 置4 (备用。 2 . 1 . 5 阳性血清。 2 . 2 微f血凝试验 2 . 2 . 1 在9 6 孔 V I 1 微量滴定板上， 从第 2 孔至第 1 1 孔， 每孔加人生理盐水(0 . 0 2 5 m l 。 2 . 2 . 2 然后在第 1 , 2 孔加人 1 : 1 0 的可疑兔肝悬液。0 2 5 m l . 2 . 2 . 3 从第 2 孔开始， 充分混合后用 。 . 0 2 5 m l移液管作等量倍比稀样至第 1 0 孔， 最后 1 孔弃去 0 . 0 2 5 ml。 2 . 2 . 4 第 1 1 孔是生
7、理盐水对照， 第 1 2孔加 1: 1 。的正常兔f f 悬液对照 2 . 2 . 5 每孔各加 1 写人. . C l . l 型红细胞 0 . 0 2 5 m 工 J ， 立即在微型振荡器卜 摇匀. 置4 C 冰箱 4 5 m i n ， 待对照 孔的红细胞完全沉积后观察结果。 2 . 2 . 6 结果判定和红细胞凝集效价表示方法 们“ 十十一 +” 符号为 1 0 0 0 , 凝集， 无红细胞沉积; 6 7 “ + 干 一 卜 ” 符号为 7 5 %以上凝集， 有少于2 5 % , 的红细胞沉积; c ) “ 一 十十” 符号为 5 0 % - 7 5 %凝集， 有少于 5 0 0 ,
8、的红细胞沉积; 山“ +” 符号为凝集的红细胞少于 5 0 % 沉积的红细胞多十 5 0 . NY/r 5 7 2一 2 0 0 2 的“ 一” 符号为 1 0 0 %的红细胞沉积。 出现+十的最高稀释度作为其凝集价， 凝集价妻1= 1 6 0 ( 即第 孔、 的判为阳性， 如在( 1 : 2 0 ) - - ( t : 8 0 ) 之问， 定为可疑， 应重做， 重做后仍为可疑的判为阳性。 2 . 3 微，血凝抑制试验 2 . 3 . 1 从第t 排开始到第1 1 孔每孔加生理盐水0 . 0 2 5 m l 。 2 . 3 . 2 第 2 孔加， 丁 疑兔肝组织悬液0 . 0 2 5 m 1
9、2 . 3 . 3 稀释方法同2 . 2 . 3 。其他各排 与 此相同。 2 . 3 - 4 第 1 2 孔为正常兔肝悬液对照。 2 - 3 . 5 第2 排起每孔加阳性血清0 . 0 2 5 m L ， 于微型振荡器上摇匀， 3 7 C 温箱放置 1 0 m i n . 2 . 3 . 6 侮孔加人 1 %人“ ()“ 1.红细胞 0 . 0 2 5 m L 立即在微型振荡器上摇匀 N4 C冰箱作用 4 5 mi n ， 待 对照孔红细胞完个沉积后观察结果。 2 . 3 . 7 结果判定: 第 1 排微量血凝试验和其他微量血凝抑制试验相应两排孔的血凝效价相差 2个滴度 以 卜( 含 2个滴度) 为阳性。 3 现场快速诊断( 玻片血凝法) 用直径 5 m m滤纸片插人可疑兔肝片刻， 取出滤纸片放入预先已经滴有 1 %人“ O“ 型红细胞的玻片 上， 若有兔出血病病毒、 肉眼可直接观察到血凝现象。