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1、J ouma l of加 肠 the n 姐 ti 司 Medi d n e V b LZ I卜 10 .22 0()8 文t编号: 1 004 一3 3 7 ( 2 008 ) 0 2 刃1 7 4 刃2中圈分类号: R3 3文献标识码: A临床科研分析 前列地尔对局灶性脑缺血大鼠脑组织p 53的影响 包 翠芬包 翠芳田 布先， . ( 辽宁医学院科学实验中心 锦州 阂连秋二 1 2 1 0 0 1 ) 摘 要: 目 的: 从脑组织饰3 的表达变化的 角度来探讨前列地尔对大鼠局灶性脑缺血的防治机制及其盆效关系。 方法: 采用 大脑中动脉闭塞方法建立局灶性脑缺血动物模型， 观察低、 中、 高剂
2、量前列地尔对局灶性脑缺血大鼠 大脑皮质丙3 表达的形响。结 果: 前列地尔各组大鼠 脑组织P53 表达平均灰度 分别为ns . 75士n . 38、 1 40. 13土U. 38、 1 56. 21士 1 0.05， 均高于 缺血对照组97. 91士 1 0.01。 结 论: 前列地尔防治大鼠 局灶性脑缺血损伤的机制可能与抑制脑组织P53 表达有关， 且以高剂量效果较好 。 关妞词: 大鼠， 脑缺血; 前列地尔， P53 脑血管疾病是危害人类健康的常见病， 其中缺血性脑损 伤占有较大比例。因此， 开发新型有效的脑缺血治疗药物是 目 前研究热点。本研究试图通过给予大鼠不同剂量的前列地 尔进行预适
3、应， 应用免疫组化法对凋亡相关基因P53 进行侧 定， 探讨前列地尔预适应的的 脑神经保护机制， 为临床应用提 供理论依据。 1 材料与方法 1 . 1 实验动物与分组 健康SD 大鼠30只， 雌雄各半， 体重为2 002 509 ， 由锦州 医学院实验动物中心提供。随机分为假手术组、 单纯缺血组、 前 列地 尔 低剂 量 组(1 . 25 哆/ k g ) 、 前列 地 尔中 剂 量 组(2 。 5 四/ 掩) 和前 列地尔 高 剂 最 组( 5 . 。 四/ 掩) ， 每 组6 只 大鼠。 1 . 2 药品及仪器 前列地尔脂肪乳剂( 商品名: 凯时) ， 由 北京泰德制药有限 公司提供，
4、批号x262， 兔抗大鼠巧3由 北京中杉金桥生物公 司提供; 仪器: 5 3800全自 动免疫组化染色仪( 美国D A K O ) ， C LASI O 0 0 型细胞图像分析系统( 北京大恒图像视觉有限公 司) 。 1 . 3 给药方法 前列地尔脂肪乳剂用生理盐水配制成悬浮液。 大鼠 术前 5 天腹腔注射， 1 次/ 日， 并于术前 lh再次腹腔注射 1 次。 1 . 4 大鼠 局灶性脑缺血( M 忆 A O ) 模型的制备 以线栓法制作M C A O模型 卜 幻 。大鼠 麻醉后， 由右颈总 动脉剪一小口， 用直径0.2 35llun 细线擂人， 以顶总动脉分叉 处计算， 进线深度为18士。
5、 . s nuu ， 直至大脑中动脉起始部， 以 完全阻断血供。 模型成功的标志是大鼠即刻出现右侧 H o mer 征。 假手术组除不插人线栓外， 其他步骤同 上。 1 . 5 观侧指标及检测方法 神经功能评分: M 吃 A O术后24h 处死大鼠， 于处死前参考 肠n g a 等的5 分制评分标准对各组大鼠进行评分: 。 分， 无明 显神经病学症状八分， 不能完全伸展左侧前爪沼分， 向左侧 旋转沼分， 行走时向 左侧倾倒; 4 分， 不能自 动行走， 意识水平 下降a1。 免疫组化检测及图像分析: MC A O术后2 4h， 将各组大鼠 麻醉， 灌流固定， 断头取脑( 大脑皮质及海马区) ，
6、 梯度脱水， 定 向包埋， 石蜡切片。免疫组化二步法染色。阳性表达主要定 位在细胞核， 呈棕黄色颖粒， 部分细胞浆内也有淡染。每实验 组随机选择5 张切片， 每张切片在缺血侧大脑皮层及海马区 随 机选择5 个高倍视野， 通过C LASI 以 刃型细胞图 像分析系 统检测阳性表达的平均灰度。灰度值越低， 表示免疫组化染 色越深， 免疫反应性越强。 1 . 统计学分析 应用5 决 如 1 0 . 。 软件分析， 所有数据均用主 王， 表示。多 组间 差异显著性检验采用单因素方差分析， P 0 . 05表示有 显著差异。 2 结果 2 . 1 神经功能评分 与假手术组相比， 缺血对照组出现明显的神经
7、功能障碍 ( 3 . 00 士0 . 6 3)， 神经行为评分显著升高( 尸 0 . 0 5 ) ; 与缺血对 照组比 较， 低、 中、 高剂量组的神经行为评分均明显降低分别 为 2 . 0 0 士0 . 6 3 、 1 . 6 7 士0 . 5 2 、 1 . 1 7 士0 . 7 5 v s 3 . 00士0 ， 6 3 ， P 0 . 05， 前列地尔各剂量组大鼠 行为功能缺陷均获不同程度改 善， 肌力表现明显 增加， 其中以高剂量组更为显著。 见表1 。 2 . 2 免疫组化结果 各组大鼠 脑组织丙3 表达的平均灰度比较见表2 。 收稿日 期二 2 007 一 1 2- n 作者简介:
8、 包翠芬( 197 2- ) ， 辽宁锦州人 ，娜州市中心医院神经内 科二 1 7 4 ， 辽宁中医药大学博士研究生， 主要研究方向 为脑发生发育。 辽宁医学院附属第一医院神经内 科 万方数据 数理医药学杂志2008 年第21 卷第2 期 表1 不同荆.前列地尔对州 吃 A O大最神经 功能的影晌 玄 士 5) 组 别鼠 数( 只 )给 药 剂 量( 略/ 掩 ) 等 体积等 渗盐 水 等体积等渗盐水 神 经 功能 评 分 0 借 3 . 0 0 :I=0 . 6 3 # 2 . 00士 0 . 6 3 . 称 1 . 6 7 士0 ， 5 2 . # 1 . 1 7 士0 . 7 5 . 件
9、 舀0U 2550 LZ。 月0月0心U 假 手 术 组 缺血 对照 组 前列地 尔 低 剂 量组 前列地 尔中 剂 量组 前列地尔高剂量组 注: 与缺血对照组比较，尸 0 . 05 ; 与很手术组比较， #尸 0. 05; 与前列 地尔2 . 50 料 以掩组比 较， p 0 . 05。 表2 各组大暇脑组织P53 衰达的平均灰度比 较 王 王， ) 组 别鼠 数 ( 只 ) 给 药 剂 量( 鸿 / 掩 )P53 假手术组 缺血 对照组 前 列地 尔 低剂最 组 前 列地 尔中 剂 童组 前 列地 尔 高剂 量组 等 体 积 等 渗 盐 水 1 75 . 50 士 5 ， 72 等 体 积
10、 等 渗 盐 水 97 . 91士 1 0. 01# 1 . 2 51 1 5.7 5 士1 1 . 3 8 . 协 2 . 51 4 0 . 1 3 士1 1 . 3 8 . 份 5 。 01 5 6 . 2 1 :I= 1 0 . 0 5 . # 抗凋亡剂或采用相应对策可对神经细胞的损伤起到保护作用， 这为缺血性脑损伤疾病的治疗开辟了新途径。因此， 大力开展 抗缺血后神经细胞凋亡药物的研究是今后研究的方向之一。 前列地尔( P G E I ) 具有广泛的生物活性， 可抑制血小板聚 集、 减少血栓素人 合成， 激活血小板膜内腺昔酸环化酶， 直接 对抗血栓素人 释放所诱导的血管收缩与血栓形成
11、习 。国内 外已广泛用于治疗血管性痴呆及周围血管病， 临床效果较好， 但有关机制还不十分清楚。 本实验的结果初步证实在M C A O 术前5 天给予大鼠前列地尔， 大鼠脑组织的p 53 的表达与缺 血组比较呈不同程度的下降， 且神经功能评分也显示大鼠的 神经病学症状也较缺血组有明显的减轻， 说明应用前列地尔 预适应后对脑缺血确有保护作用， 可能是通过抑制大鼠脑组 织丙3 的表达从而抑制神经细胞的凋亡而发挥作用; 同时还 发现不同剂量前列地尔均可减轻大鼠 脑缺血的 损伤， 3 种剂量 间差异显著( 尸 。 . o 5)， 而高剂量前列地尔对局灶性缺血性脑 损伤的保护作用效果最佳。 盛卜U暇U心甘
12、月0 .考文献 注: 与缺血对照组比较，尸 0 . 05 ， 与饭手术组比较， #尸 。 . 05; 与 前列 地尔2 . 50 阔 掩组比 较， 尸 。 . 05。 3讨论 丙3 是进化过程中高度保守的蛋白， 其主要生物学功能为 引起细胞阻滞， 诱导凋亡和促进分化。人类 P53 蛋白存在两 种形式即 野生型( wtP53)和突变型( mtP53)。 野生型P53 为一 个转录激活蛋白， 作为” 基因卫士” 负贵维持细胞基因的完整 性、 D N A损伤的修复和细胞周期的正常运转。当D N A受到 各种基因毒剂损伤时， 可诱导D N A受损细胞进人G l 静止期， 抑制细胞增殖， 直到D N A
13、损伤修复， 如果修复失败， P53 就激 活那些诱导细胞凋亡的基因转录， 使细胞进人凋亡状态。 Rosen 场um 等证实， 大鼠局灶性脑缺血后缺血区的神经元 P53 表达增加， 说明P53 介导的凋亡参与了脑缺血的病理生理学 过程4。 凋亡是缺血性脑损伤后细胞死亡的重要形式。 使用 1 孟宜良. 线栓法大民大脑中动脉局灶性脑缺血模型研究现状. 国外 医学神经病学神经外科学分册， 2 002 ， 2 9(2): 113. Z C 扭 f t 了 K ， G l a s p 吧 r E R ， Mc Cul 】 o Ugbl ， etal. 5 笼 认 】 i nt e r a Ct i 叨 皿
14、 ” p r o ， 。e 月 冲 d m 臼七 dst 功k eo u t a 戈 n 已3印k e ， 2 005 ， 3 6 : 2 ( 幻 6 2 0 1 1 . 3 助雌a EZ， W七 玩 ， t e in P R ， C ar l son S ， et吐 R e 忱rs i b le而叼le b 花 1 到 rt e 寸眼 l u slon 初t 抽u t c ra 垃 侧 比 。 . y i n ra t 氏Stm ke， 1 9 8 9 ， 2 0 ( 1 ) : 84- 4 R 徽 川 ” 帅 M， G o p t a G D ， 凡加民J ， etal. 丙3 ( C 旧
15、 5 / A 到 ) 1 ) 咖邓a闹eint he 钾t boP h y ， 沁 】 q 井offo ca l c e r e b 司 亩 鱿 h 曰 刘 匕J N etJ” 大 蛇 I R es， 2 0 0 0 ， 6 1 ( 6 ) : 6 8 6 6 9 2 . 5 刘杨， 陶贵周， 李艳芹. 前列地尔顶处理对大鼠心肌缺血再灌注拐 伤的 心脏超徽结构的保护作用. 解剖科学进展， 2 004 ， 1 。 ( 2): 1 33 1 3 5 E f 介 叉 tsofPr份加 gl and i 企 E l on 。 甲 雌 i ous ofP53 in b rai nt i ssue a fl 犯 rfoca】 忱代b 价 d七 沁 h 以川ain 份ts E 以 oC u i fen ， et 以 ( Q九 t reof P 5 3 1 7 5 万方数据