前胡丙素对两肾两夹肾性高血压大鼠心脏重构及心功能的影响.pdf

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1、前胡丙素对两肾两夹肾性高血压大鼠心脏重构及心功能的影响 周四桂1， 黄河清1， 陈少锐1， 饶曼人2， 刘培庆1 （1. 中山大学药学院药理与毒理学实验室， 广东 广州 510089； 2. 南京医科大学心血管药理研究室， 江苏 南京 210029） 收稿日期： 2005 -12 -02， 修回日期： 2006 -02 -07 基金项目： 国家自然科学基金资助项目 （No 39570819） ； 广东省重点 攻关资助项目 （No 2002C30113） ； 珠海市科技局重点资助 项目 （No 2005-4205088） 作者单位： 周四桂 （1975 - ） 女， 博士生； 刘培庆 （1964

2、 - ） 男， 教授， 博士生导师， 研究方向： 心血管 药理学， 通讯作者， Tel： 020-87334613； E-mail： sps02 gz- sums. edu. cn 中国图书分类号： R-332； R 284. 1； R 332. 11； R 331. 31； R 542. 202. 3； R 542. 205. 3； R 544. 1 文献标识码： A 文章编号： 1001-1978 （2005） 05 -0543 -05 摘要： 目的 研究前胡丙素长期灌胃给药对两肾两夹肾性高 血压大鼠心脏、 心功能及左室顺应性的影响。方法 制作两 肾两夹肾性高血压大鼠模型， 前胡丙素 20

3、 mgkg -1d-1， 连续灌胃给药9 wk， 用离体大鼠工作心脏灌流法检测心功能 及左室顺应性， Woessner 等报道的方法测定心肌组织羟脯氨 酸含量。结果 与假手术对照组相比， 肾性高血压左室肥厚 （LVH）组 大 鼠 CF/ HWW 和 CO/ HWW 降 低 29. 2% 和 38. 5%， LVSP、 - dp/ dtmax分别降低 22. 8% 和 43. 2 %；LV- EDP 和 T 值增高 172. 9% 和 187. 1%， LVEDP-V 曲线左移上 抬， 左室肌胶原含量增加 38. 9%。前胡丙素组 CF/ HWW 和 CO/ HWW 比 LVH 组分别增加 23

4、. 5% 和 37. 2%， LVSP 值和 - dp/ dtmax负值较 LVH 组增加 16. 0%和 42. 7%， LVEDP 和 T 值降低 38. 9%和 39. 0%， 左室 LVEDP-V 曲线接近正常组水 平，左室肌胶原含量降低 18. 9%， 其作用与硝苯地平相似。 结论 前胡丙素可明显改善两肾两夹肾性高血压大鼠心脏 舒张功能， 改善心肌顺应性， 同时也可改善心脏收缩功能， 其 作用可能是通过扩张冠状动脉， 改善心肌缺血， 降低心肌胶 原含量而实现。 关键词： 前胡丙素； 两肾两夹肾性高血压大鼠； 左心室肥厚； 血流动力学； 心肌顺应性； 胶原 自 Goldblatt 等

5、1采用缩窄肾动脉的方法复制 高血压以来， 肾血管高血压模型已经被广泛应用于 高血压的机制研究及新药评价。最常用的模型是两 肾一夹方法， 该模型容易制作， 动物死亡率低， 以压 力超负荷为主 2， 本实验室利用该模型进行过多种 新药的评价及机制研究， 但也存在血压升高幅度小 以及后期血压回落等缺点。一肾一夹方法， 动物死 亡率高， 而且损害靶器官以肾脏及脑组织为主， 较少 用于心脏功能的研究 3。两肾两夹模型容量超负 荷与压力超负荷并存， 血压升高幅度大， 而且很少出 现后期血压回落现象， 是研究高血压心脑病变较理 想的模型 4。中药白花前胡 （peucedanum praerupto- rum

6、 Dunn. ） 以往主要用于镇咳、 祛痰、 胆绞痛及心 绞痛的治疗， 但近年来的研究发现前胡香豆素组份 的主要成分前胡丙素 （ praeruptorin C，Pra-C ） 具有 明显的钙拮抗作用和促进钾通道开放作用 6。本 实验室以往利用压力超负荷高血压模型对其抗高血 压心肌肥厚作用进行了大量研究， 本文在以上研究 的基础上， 采用两肾两夹高血压大鼠模型， 探讨了持 续给予前胡丙素 9 wk 对此容量超负荷为主的高血 压模型心脏功能、 血流动力学及左心室胶原含量等 的影响。 1 材料与方法 1. 1 主要药品及试剂 前胡丙素为白色粉状，由 江苏省中医药研究所植化室提供， 纯度高于 90%。

7、 硝苯地平 （nifedipine，Nif） 由南京小营制药厂提供。 两药使用前均以聚乙二醇 400 配成 2% 浓度， 4避 光保存。其它试剂均为市售分析纯。 1. 2 动物模型及分组 Sprague-Dawley（SD） 大鼠， 体重 （210 25）g，由江苏省动物中心提供。动脉 血压在清醒非麻醉及保温 （37， 30 min） 状态下采 用尾容积法， 以 MRB-A 型大鼠血压心率记录仪 （上海高血压研究所产品） 测定 3 次，取平均值， 作 为手术前正常血压。测压后， 按 Zeng 等 4报道的方 法制备两肾两夹 Goldblott 肾性高血压模型， 将 SD 大鼠以 3% 戊巴比妥

8、钠 30 mgkg -1ip 麻醉，打开 腹腔，游离左、 右两侧肾动脉，皆夹以内径 0. 3 mm 的银夹， 假手术组除不触及左侧肾动脉外，其余程 序同上。术后 4 wk， 收缩压 20 kPa 视为已形成高 血压。选取符合标准的大鼠随机分为 4 组： 前胡 丙素组，Pra-C 20 mgkg -1 d -1，灌胃，连续 9 wk； 硝苯地平组， 10 mgkg -1d-1用法同组； 两肾两夹模型对照组； 假手术对照组。、 两 组同时灌服同等容积聚乙二醇 400，连续 9 wk。 1. 3 大鼠离体工作心脏制备及指标测定 大鼠在 给药结束 （术后 13 wk） ，完成血压测定后， 击昏大 鼠，

9、 开胸制备离体工作心脏 7。左室充盈压 20 kPa，主动脉静水压 9. 3 kPa。灌注液为改良 Krebs- 345中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2006 May； 22 （5） ： 543 7 Henseleit（KH） 液 （ mmolL -1：NaCl 118， KCl 4. 7， MgSO41. 2， CaCl22. 5， KH2PO41. 2， Na2EDTA 0. 5， 葡萄糖 11. 5） ，pH 7. 4 0. 05，温度 （36 0. 5） ； 持续通入95% O2+ 5%CO2。聚乙烯管由心尖部插 入左心室，另端连于

10、SJ-42 型四道生理记录仪 （上 海医用电子仪器厂） ，同步记录左室内压 （LVSP） 、 左室内压最大变化速率 （ dp/ dtmax） 、 左室舒张末期 压 （LVEDP） ， 推算等容舒张期心室内压下降时间常 数 （T） 值， 定时收集 1 min 主动脉流出液 （AF） 和冠 脉流出液 （CF） ， 两者相加为心输出量 （CO） 。 1. 4 左室顺应性测定方法 7 大鼠断颈处死，开 胸制备 Langendroff 心脏， 灌流液为改良 KH 液 8 ml min -1， 持续通入 95% O 2 + 5% CO2。稳定 10 min 后，左心耳缝一荷包，剪开，将自制顶端为乳 胶球囊

11、的聚乙烯细导管，经左心房插入左心室， 37 KH 液经导管注入乳胶球囊。最初量为 0. 06 ml，以此量递增， 共 7 次， 终容积为 0. 42 ml。四导 生理记录仪上同步记录不同球囊容积时 LVSP、 LV- EDP 以及 dp/ dtmax。以 LVEDP 为纵坐标，球囊容 积为横坐标， 描绘左室压力容积曲线 （P-V 曲线） ， 反映心肌舒张期顺应性. 每次测定重复 3 次，取平 均值。测完后， 剪去心房及血管，沿室间隔剪开， 分 别称重 （右室， 左室 + 室间隔） 。 1. 5 心肌组织胶原含量的测定 按 Woessner 等 8 报道的方法测定胶原中羟脯氨酸含量，以推算出胶

12、原含量方法。左室顺应性测定结束后将心室分为左 右心室及室间隔， 以滤纸吸干水分后精确称重，左 右心室各取重约 100 mg 组织， 分成大小基本相等的 两块，分析天平精确称重。一块于 110烘箱烘至 恒重， 称重， 计算干/ 湿重比。另一块加生理盐水， 将组织剪碎。5% 三氯醋酸 （TCA） 提取 2 次。提取 液混合，加终浓度为 5. 7 molL -1 HCl，具塞试管 内放置 110 烘箱水解 24 h。取水解液加氧化剂 （氯胺 T 溶液） ，放置 25 min。加 Ehrichs 试剂，静 置 30 min （室温） ， 721 分光光度计560 nm 处测定样 本 OD。羟脯氨酸标准

13、品配成标准液，蒸馏水为空 白对照，做标准曲线， 通过标准曲线求出样本中羟 脯氨酸含量， 羟脯氨酸含量 7. 14 即为胶原含量。 1. 6 统计学处理 所有数据均以-x s 表示。组间 及组内比较用 t 检验。 2 结果 2. 1 前胡丙素对大鼠血压的影响 大鼠肾动脉缩 窄术后 4 wk 血压明显升高， 各手术组比假手术组平 均升高 52. 9%， 模型对照组至实验结束 （术后 13 wk） 一直维持在高血压水平， 且有持续升高趋势。 前胡丙素用药 4 wk 大鼠 SBP 下降 23. 2%， 用药 9 wk 血压接近假手术对照组水平， 与硝苯地平给药组 作用类似。 2. 2 前胡丙素对大鼠心

14、脏血流动力学的影响 LVSP 和+ dp/ dtmax反 映 心 肌 收 缩 性，LVEDP， - dp/ dtmax和 T 值反映心肌舒张性能。由 Tab 2 可 见， 与假手术对照组相比，模型 对 照 组 LVSP、 - dp/ dtmax分别降低 22. 8% 和 43. 2%；LVEDP 和 T 值增高 172. 9% 和 187. 1%，+ dp/ dtmax无明显变化 （见 Tab 1） 。表明模型对照组大鼠心肌收缩及舒张 功能均降低，且以舒张功能减退为重。前胡丙素组 LVSP 值和 - dp/ dtmax负值较 LVH 组增加 16. 0% 和 42. 7%；LVEDP 和 T

15、值降低 38. 9%和 39. 0%。 Tab 1 Effect of Pra-C on systolic blood pressure in 2K2C RHSs（-x s， n =8） GroupBefore treatment Time of drugs treatment/ wk 49 Sham-operated15. 2 1. 815. 8 2. 416. 4 2. 2 RHR-untreated22. 7 3. 1*25. 4 3. 7*26. 9 4. 2* Pra-C23. 2 2. 619. 5 2. 3#17. 8 2. 0# Nif23. 8 3. 419. 0 2. 7#

16、17. 2 2. 9# *P 0. 01 vs Sham-operated；#P 0. 01 vs RHR-untreated 冠脉流量是反映心肌组织血液供应的重要指 标。与对照组相比，模型对照组 AF 和 CO 明显降 低，CF 改变不明显；以每克心肌组织计，则 CF 和 CO 分别降低 29. 2% 和 38. 5%。前胡丙素组 CF/ HWW 和 CO/ HWW 比模型对照组分别增加 23. 5% 和 37. 2%， Nif 组分别增加 23. 5%和 29. 2% （见 Tab 2） 。提示前胡丙素能增加冠脉流量，改善心肌血液 供应及心脏功能，且对舒张功能改善作用明显， 其 作用与 N

17、if 相似。 2. 3 前胡丙素对高血压左室肥厚大鼠左室顺应性 的影响 Fig 1 为左室压力容积曲线 （P-V 曲线） 。 与假手术对照组相比， 模型对照组 P-V 曲线明显向 上抬左移， 相同球囊容积，其 LVEDP 较对照组明显 增加；当球囊容积增加到 0. 42 ml 时，LVEDP 为 5. 1 kPa， 比对照组增加 244. 6%。表明模型对照组 大鼠左室舒张期顺应性降低。前胡丙素组 P-V 曲 线与模型对照组相比， 向右下移位，LVEDP 值较 LVH 组降低。球囊容积为 0. 42 ml 时， 其 LVDEP 为 1. 82 kPa， 比模型对照组降低 64. 3%；Nif

18、组为1. 69 kPa， 降低 66. 9%。表明前胡丙素长期给药可改善 模型对照组心脏舒张期顺应性， 改善心脏舒张功能。 2 . 4 心肌组织胶原含量的测定 由Tab3结果可 445中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2006 May； 22 （5） Tab 2 Effect of Pra-C on the function of isolated working hearts in 2K2C RHRs （-x s， n =8） Sham-operatedRHR-untreatedPra-CNif HR/ bpm184 30196 27182 2

19、4189 37 + dp/ dtmax/ kPas -1 482 37453 31474 39491 51 - dp/ dtmax/ kPas -1 365 41208 21*296 30#291 37# LVSP/ kPa16.2 2.012. 5 1. 4*14. 5 1. 6#15. 4 1. 3# LVEDP/ kPa0.48 0.11.31 0. 3*0. 80 0. 2#0. 76 0. 2# T/ ms7.14 1.720. 5 2. 7*12. 5 2. 3#11. 7 1. 2# AF/ mlmin -1 45.0 4.332.7 3. 1*38. 2 2. 6#36. 4

20、3. 0# CF/ mlmin -1 14.1 1.513. 0 1. 413. 4 1. 513. 8 0. 9 CO/ mlmin -1 56.2 5.845. 5 4. 6*51. 9 3. 6#50. 4 3. 1# AF/ HWW30.7 2.917. 0 2. 2*23. 9 1. 9#22. 1 2. 5# CF/ HWW9.6 1.86. 8 0. 7*8. 4 0. 9#8. 4 1. 8# CO/ HWW38.4 3.423. 6 3. 6*32. 4 3. 6#30. 5 2. 1# *P 0. 05，*P 0. 01 vs Sham-operated；#P 0. 05，

21、#P 0. 01 vs RHR-untreated； HR： heart rate； dp/ dt max： maxium rate of rise or fall of left ventricular pressure；LVSP： left ventricular systolic pressure；LVEDP： left ventricular end diastolic pressure；T： time constant； AF： aortic flow； CF： coro- nary flow； CO： cardiacoutput；HWW：heart wet weight Fig 1

22、 Effect of praeruptorin C on diastolic myocardial compliance（pressure-volume curve）of isolated working heart in 2K2C RHRs （-x s， n =8） * P 0. 05，*P 0. 01 vs Sham-operated group；#P 0. 01 vs RHR-untreated group 见， 两肾两夹模型对照组大鼠术后 13 wk 已发生明 显左室肥厚同时左室心肌组织胶原含量增加 38. 9%， 说明发生了左室重构。前胡丙素可明显减 轻左室肥厚程度， 同时左室心肌组

23、织胶原含量降低 18. 9%， 提示改善了心脏重构。 Tab 3 Effect of Pra-C on ratio of wet heart ventricles weight vs body weight and collagen contents in heart ventricles in 2K2C renovascular hypertensive rats （-x s； n =8） Group LVWW/ BW RVWW/ BW LV Contents of collagen/ % dry wet Sham-operated2.85 0.260.81 0.132.85 0.39 RH

24、R-untreated3.87 0.41*0.94 0.153.96 0.31* Pra-C3.08 0.32#0.90 0.173.21 0.27# Nif3.14. 0.37#0.88 0.193.09 0.34# *P 0. 01 vs Sham-operated；#P 0. 01 vs RHR-untreated 3 讨论 两肾两夹肾性高血压大鼠由于两肾缺血， 既存 在肾素血管紧张素醛固酮系统功能增强， 同时 血中肾上腺素等升压胺类物质水平增加， 这与两肾 一夹肾性高血压大鼠类似。但血浆醛固酮的异常升 高及两肾动脉血流减少可导致明显钠水排泄障碍， 其基本病理生理变化是容量超负荷与压力超

25、负荷并 存， 以容量超负荷为主， 加剧了血压升高及心脏负 担 9， 10。本实验结果表明，两肾两夹肾性高血压大 鼠术后 13 wk 已发生明显左室肥厚， 同时左室收缩 及舒张功能均降低，但以舒张功能减退尤为明显， 表现为左室舒张末期压力明显增高、 - dp/ dtmax及 T 值明显增加， 这与以往研究报道的两肾一夹肾性高 血压大鼠类似。 左室舒张功能下降是高血压心脏功能障碍发生 较早、 而且明显影响预后的方面 11。实验发现两肾 两夹肾性高血压大鼠肥厚左室心肌组织与以往报道 两肾一夹肾性高血压大鼠类似， 同样存在胶原含量 显著增加现象。间质胶原代谢在心脏重构中具有重 要作用， 高血压心肌肥厚

26、时除心肌细胞肥大外，醛 固酮等生物活性物质可介导成纤维细胞过度增殖而 且产生胶原的能力增强， 心脏间质胶原累积， 影响心 脏舒缩功能及心肌细胞信号转导， 参与心肌肥厚形 成 12。这可能是造成心肌顺应性下降，劲度增加 的重要原因。心肌胶原增加不仅影响心肌组织结 构， 而且冠状血管周围的心肌纤维化还会使冠状血 管受到挤压， 加剧心肌供血不足 13。 本室曾对白花前胡香豆素所含主要成分进行研 究， 在其他高血压模型发现前胡丙素具有抑制钙内 流， 保护心肌细胞膜， 防止心肌舒缩功能下降， 以及 545中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2006 May；

27、 22 （5） 扩张血管、 增加冠脉流量等作用 14， 15。但其对两肾 两夹这种基本病理生理变化是容量超负荷与压力超 负荷并存， 以容量超负荷为主的高血压大鼠模型未 进行过研究及报道， 考虑到目前临床上肾血管病变 及肾功能障碍多涉及双肾， 故这种模型较两肾一夹 高血压模型更接近临床肾血管病变及肾功能障碍导 致的高血压大鼠模型， 作为前胡丙素对不同类型高 血压的影响的一个部分进行研究。本文在研究两肾 两夹肾性高血压大鼠左室肥厚及功能紊乱的基础上 首次观察到前胡丙素可明显保护该高血压模型大鼠 心脏的收缩及舒张功能、 增加冠脉流量、 而且前胡丙 素在降压及减轻左心室肥厚的同时也降低了左心室 胶原含

28、量， 即改善了病理性心脏重构， 这对高血压心 肌重构及其并发症的防治非常有益， 前胡丙素对心 肌胶原代谢的影响机制有待于进一步的研究。 参考文献： 1 Goldblatt H， Lynch J， Hanzal R F， Summerville W W. Studies on experimental hypertension：Production of persistent elevation of systolic blood pressure by means of renal ischemia J . J Exp Med， 1934， 59： 347 -9. 2 Amiri F，Garc

29、ia R. Renal angiotensin. receptor regulation in two-kidney，one clip hypertensive rats：Effect of ACE inhibition J . Hypertension， 1997， 30 （part 1） ： 337 -44. 3 Nag S，Kilty D W. Cerebrovascular changes in chronic hyperten- sion：Protective effects of enalapril in ratsJ . Stroke， 1997， 28： 1028 -34. 4

30、Zeng J，Zhang Y，Mo J，et al. Two-kidney，two clip renovascular hypertensive rats can be used as stroke-prone ratsJ . Stroke， 1999， 30 （3） ： 695 -6. 5 杨 俭， 饶曼人. 前胡丙素对两种高血压模型大鼠尾动脉的钙 拮抗作用 J . 中国药理学通报， 1997， 13 （3） ： 216 -9. 6 徐 毅， 饶曼人. 粉防己碱对 DOCA 盐性高血压心肌肥厚大鼠 心脏血流动力学的影响 J . 药学学报， 1995， 30 （2） ： 86 -92. 7 奚

31、 涛， 饶曼人. 间硝苯地平对左室肥厚大鼠左室功能的保护 作用 J . 高血压杂志， 1995， 3 （3） ： 190 -2. 8 Woessner J F jr. Acid hydrolases of the rat uterus in relation to pregnancy，post-partum involution and collagen breakdown J . Biochem J， 1965， 97 （3） ： 855 -66. 9 Trolliet M R，Kurnjek M L，et al . Development of renovascular hypertens

32、ion after central serotonin depletion J . Hypertension， 1990， 15 （2 Suppl） ： 166 -9. 10王 青， 樊血萍， 陈 忠. 肾神经传入纤维在2K2C Goldblatt 高 血压中作用 J . 生理学报， 1995， 47 （4） ： 366 -72. 11Diamond JA，Phillips RA. Hypertensive heart disease J . Hyper- tens Res， 2005， 28 （3） ： 191 -202. 12龚素珍， 刘培庆， 鲁 伟，等. 醛固酮促进心室成纤维细胞增 殖

33、作用 J . 中国应用生理学杂志， 2001， 17 （1） ： 64 -7. 13Conrad C H，Brooks W W，Hayes J A，et al. Myocardial fibrosis and stiffness with hypertrophy and heart failure in the spontaneous- ly hypertensive rat J . Circulation， 1995， 91 （1） ： 161 -70. 14Rao M R，Shen X H，Zou X. Effects of praeruptorin C and E iso- lated

34、from Qian2Hu on swine coronary artery and guinea2pig atria J. Eur J Pharmacol ， 1988， 155 （3） ： 293 -6. 15饶曼人， 刘宛斌， 刘培庆. 胡丙素对高血压大鼠血管肥厚、 细胞 内钙、 胶原及 NO 的影响 J . 药学学报， 2001， 36 （3） ： 165 -8. Effect of Praeruptorin C on cardiac remodelling，cardiac function in two-kidney two-clip renovascular hypertensive

35、 rats ZHOU Si-gui1，HUANG He-qing1， CHEN Shao-rui1， RAO Man-ren2，LIU Pei-qing1 （1. Lab of Pharmacology and Toxicology，School of Pharmaceutical Sciences，Sun Yat-Sen University，Guangzhou 510089， China； 2. Cardiovascular Pharmacology Department，Nanjing Medical University，Nanjing 210029， China） Abstract：

36、 Aim To study the effect of Praeruptorin C （Pra-C）on cardiovascular remodeling，cardiac func- tion and left ventricular diastolic compliance by long- term treatment to two-kidney two-clip（2K2C）reno- vascular hypertensive rats（RHRs） . Methods 2K2C operation was made to SD rats to establish hypertensio

37、n and left heart hypertrophy（LVH）model， Pra-C 20 mg kg -1 d -1 was given ig for 9 weeks from the 4th week after 2K2C operation.The isolated working hearts and Langendorffs hearts were made to study the effect of Pra-C on hemodynamics and myocardial com- pliance，and myocardial hydroxyproline content

38、was measured with Woessners method to evaluate cardiac remodelling.Result Compared to sham-operated group，CF/ HWW， CO/ HWW and LVSP，- dp/ dtmax （absolute value ）were reduced by 29. 2%， 38. 5%， 22. 8 %， 43. 2 %respectively，whereas LVEDP， T val- ueandleftventriclecollagen （ representby hydroxyproline）

39、 contentincreasedby172. 9%， 187. 1%， 38. 9%，the left ventricular diastolic pres- sure-volume（P-V）curve was moved to left and up- word direction in RHR untreated group. Pra-C treated for 9 weeks leadto LVSP and - dp/ dtmax（absolute val- ue）increased 16. 0%，42. 7%，while LVEDP and T 645中国药理学通报 Chinese

40、Pharmacological Bulletin 2006 May； 22 （5） value and left ventricle collagen content decreased 38. 9%， 39. 0% and 18. 9% than those in RHR un- treated group，and the LVEDP-V curve were shifted to the right and in the up-ward direction. Conclusion These results indicate that Pra-C improved the cardiac

41、relaxation and contractility in 2K2C RHRs，which may be related with increasing the coronary flow and cardic output，decreasing the collagen content in the left ven- tricular myocardium. Keywords：praeruptorinC； two-kidneytwo-clip （2K2C）renovascular hypertensive rat； left ventricular hypertrophy；hemody

42、namics；myocardial compliance； collagen 坎地沙坦对糖尿病肾病小鼠血清和糖皮质激素 诱导的蛋白激酶 1 表达的影响及意义 姜华军， 刘建社， 朱忠华， 王全胜， 张晓丽， 王玉梅， 冯玉锡 （华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科， 湖北 武汉 430020） 中国图书分类号： R-332； R 322. 61； R 345. 57； R 587. 1； R 977. 11； R 977. 3 文献标识码： A 文章编号： 1001 -1978 （2006） 05 -0547 -05 摘要： 目的 研究血管紧张素 （Ang） 型受体 （AT1） 拮 抗剂坎

43、地沙坦 （candesartan） 对糖尿病肾病 （Diabetic nephrop- athy，DN） 小鼠血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 1 （SGK1） 表达的影响及意义。方法 采用链脲佐菌素 （STZ） 单次腹 腔注射诱导小鼠糖尿病肾病 （DN） 模型。将正常 C57BL/6 小鼠随机分成 3 组， 每组 12 只： 正常对照组 （N 组） 、 糖尿病 肾病组 （D 组） 、 Candesartan 治疗组 （DC 组） 。治疗 8 wk 后 取肾组织， 观察肾脏病理改变； 半定量 RT-PCR 法检测各组 肾皮质 SGK1 及结缔组织生长因子 （CTGF） mRNA 的表达； Wes

44、tern blot 检测各组肾皮质中 SGK1 及 CTGF 蛋白的表达。 结果 与 N 组相比， D 组小鼠肾重/ 体重、 24 h 尿蛋白量， 肾 小球滤过率均明显增加； 肾皮质中 SGK1、 CTGF mRNA 及蛋 白质的表达均明显升高。经 Candesartan 干预后 （DC 组） ， 相 应生化指标较 D 组有明显改善， SGK1、 CTGF 的表达水平较 D 组亦有明显下调。纤维化指标 CTGF 的表达与 SGK1 呈正 相关。结论 Candesartan 可以延缓糖尿病肾病的肾脏纤维 化过程， 它对细胞内 SGK1 信号转导途径的抑制作用可能是 其抗纤维化作用的主要环节， 该

45、作用与 Ang-AT1 途径被阻 断有关。 关键词： 坎地沙坦； 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 1； 结 缔组织生长因子； 糖尿病肾病 收稿日期： 2005 -12 -18， 修回日期： 2006 -01 -14 基金项目： 国家自然科学基金资助项目 （No 30270618） 作者简介： 姜华军 （1977 - ） ， 男， 博士生， 研究方向： 糖尿病肾病， Tel： 027-62438455，E-mail： jiang-huajun yahoo. com. cn； 刘建社 （1955 - ） ， 男， 教授， 硕士生导师， 研究方向： 糖尿 病肾 病， 通 讯 作 者， Tel： 02

46、7-85726379，E-mail： Liujian- she5509 yahoo. com 糖尿病肾病是导致终末期肾功能不全的主要病 因之一， 临床治疗和延缓糖尿病肾病病程的进展较 为困难。Candesartan 是血管紧张素的型受体 拮抗剂 （ARB） 药物中的一种， 因其具有改善肾脏血 流， 降低尿蛋白等作用而被用于糖尿病肾病的治疗。 我们在对 DN 小鼠模型的研究中发现： Candesartan 阻断 Ang-AT1 结合途径后能够对抗肾脏组织纤 维化、 延缓 DN 的进展。Candesartan 抗纤维化作用 的分子机制目前尚不清楚 1 4。为了进一步探讨 Candesartan 对

47、抗纤维化作用的分子途径， 本研究观 察了 DN 小鼠中与组织纤维化相关的血清和糖皮质 激素诱导的蛋白激酶 1 （SGK1） 信号转导通路的变 化， 初步探讨 Candesartan 对抗肾脏组织纤维化的主 要作用环节。 1 材料与方法 1. 1 药物与试剂 坎地沙坦 （Candesartan，必洛 斯， 天津武田公司） ； 链脲佐菌素 （ streptozotocin， STZ， Sigma 公司） ； Trizol （Invitrogen 公司） ； DNase# （Deoxyribonuclease ， Invitrogen 公司） ； 逆转录试剂 盒 （MBI Fermentas 公司）

48、 ； Taq DNA 聚合酶 （MBI 公 司） ； 哺乳动物蛋白提取液 （Pierce 公司） ； 兔抗小鼠 SGK1 多克隆抗体 （Upstate 公司） ； 兔抗小鼠 CTGF 多克隆抗体 （Santa Cruz 公司） ； 小鼠抗小鼠 $-actin 多克隆抗体 （Pierce 公司） ； 辣根过氧化物酶标记的 羊抗兔 IgG （Pierce 公司） ； 辣根过氧化物酶标记的 羊抗小鼠 IgG （Pierce 公司） ； 硝酸纤维素膜 （Biorad 公司） ， ECL 试剂盒 （Pierce 公司） 。 1. 2 动物分组及 DN 模型的建立 随机将 36 只 8 wk 龄 C57BL/6 小鼠 （购自上海中科院动物实验 中心） 分为 3 组， 每组 12 只， 分别为： 正常对照组 （N 745中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2006 May； 22 （5） ： 547 51