力学应变对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响.pdf

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1、力学应变对大鼠骨髓间充质干细胞增殖 和成骨分化能力的影响* 井燕1李良1 李毅1陈孟诗2吴文超1陈槐卿1刘小菁3 1 (四川大学 华西基础医学与法医学院 生物医学工程研究室,成都6 1 0 0 4 1 ) 2 (四川大学 建筑与环境学院,成都6 1 0 0 6 5 ) 3 (四川大学 华西医院 心血管疾病研究室,成都6 1 0 0 4 1 ) 摘要探讨周期性双轴力学应变对大鼠骨髓间充质干细胞( Me s e n c h y ma l s t e m c e l l s , MS C s )增殖和成骨分化 能力的影响。选用9月龄健康S D雌性大鼠,分离股骨、胫骨提取骨髓,采用密度梯度离心法分离M

2、S C s 。体外培养 MS C s传至第3代,以1 1 0 5细胞浓度接种于双轴力学应变系统, 选取40 0 0 s t r a i n ,频率为1 h z的力学应变对 MS C s加载。每天加载3次, 每次2h ,间隔2h 。观察力学应变作用后1d 、 3d , MS C s增殖和成骨分化能力的变化, 并 与相应未加力学应变对照组比较。结果表明:( 1 )力学应变可增高MS C s的碱性磷酸酶( AL P )和骨桥蛋白 ( OP N)表达量;力学应变作用3d后MS C s的AL P和OP N表达量明显高于力学应变作用1d 。 I型胶原( C OLI )仅 在力学应变作用3d增高;骨钙素(

3、OC N)在各组无明显变化。( 2 )力学应变可促进MS C s增殖,但力学应变作用1d 和3d对MS C s增殖的作用无明显差异。上述结果提示:力学应变可以促进MS C s的增殖和成骨分化能力。 关键词力学应变骨髓间充质干细胞成骨分化 T h eE f f e c t o f Me c h a n i c a l S t r a i no nP r o l i f e r a t i o na n dO s t e o g e n i c D i f f e r e n t i a t i o no f B o n eMa r r o wMe s e n c h y ma l S t e m

4、 C e l l s f r o m R a t s J i n gY a n 1 L i L i a n g 1 L i Y i 1 C h e nme n g s h i 2 Wuw e n c h a o 1 C h e nh u a i q i n g 1 L i uX i a o j i n g 3 1 ( I n s t i t u t e o fB i o me d i c a l E n g i n e e r i n g , B a s i c Me d i c i n e a n dF o r e n s i c Me d i c i n e C o l l e g e ,

5、 S i c h u a nUn i v e r s i t y , C h e n g d u 6 1 0 0 4 1 , C h i n a ) 2 ( C o l l e g e o fAr c h i t e c t u r e a n dE n v i o n me n t , S i c h u a nUn i v e r s i t y , C h e n g d u 6 1 0 0 6 5 , C h i n a ) 3 ( L a b o r a t o ro fC a r d i o v a s c u l a rDi s e a s e s ,We s t C h i n

6、 aHo s p i t a l ,S i c h u a nUn i v e r s i t y ,C h e n g d u 6 1 0 0 4 1 , C h i n a ) A b s t r a c t I no r d e rt oi n v e s t i g a t et h ee f f e c t so f c y c l i cb i a x i a l me c h a n i c a l s t r a i no np r o l i f e r a t i o na n do s t e o g e n i c d i f f e r e n t i a t i o

7、 no fb o n ema r r o w me s e n c h y ma l s t e m c e l l s( MS C s ) f r o m r a t s .T h eMS C swe r ei s o l a t e df r o m b o n e ma r r o wi nt h e9 - mo n t h - o l df e ma l eS p r a g u e - D a wl e yr a t s b yad e n s i t yg r a d i e n t me t h o d .Af t e r t h et h i r dp a s s a g e

8、, 1 1 0 5c e l l swe r es e e d e do nt h ef l e x i b l es i l i c o n eme mb r a n ei nt h ec y c l i cb i a x i a l me c h a n i c a l s t r a i nu n i t .T h ea mp l i t u d e o fme c h a n i c a l s t r a i na p p l i e dt ot h ec e l l swe r e40 0 0 s t r a i n ,a taf r e q u e n c yo fo n eh

9、e r t z ( 1 Hz ) ,f o rp e r i o d so f3 r e p e t i t i o n so f2h o u r s me c h a n i c a ls t r a i na n dab r e a ko f2h o u r s .T h eo s t e o b l a s t i cma r k e rs u c ha so s t e o p o n t i n ( OP N) , a l k a l i n ep h o s p h a t e a s e ( AL P ) , o s t e o c a l c i n ( OC N) , t y

10、 p eIc o l l a g e n ( C o l I )we r ed e t e c t e db yR T- P C R .T h e p r o l i f e r a t i o no f a l l c e l l swe r es t u d i e dwi t hF l o wC y t o me t r y ( F C M) .AL Pa n dOP Nl e v e l ss i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e di n t h eme c h a n i c a l s t r a i n e dg r o u p s a

11、n dr e a c h e dt h e t o pa t 3 t hd a ya f t e r me c h a n i c a l s t r a i n .C OLI l e v e l wa s i n c r e a s e o n l y a t 3 t hd a ya f t e rme c h a n i c a l s t r a i n ,a n dt h ec h a n g eo f OC Nwa sn o t o b v i o u si ne v e r yg r o u p .T h ep r o l i f e r a t i o ni n d e x o

12、f t h eme d c h a n i c a l s t r a i n e dg r o u p s wa s i n c r e a s e d , c o mp a r e dwi t ht h ec o n t r o l . T h e s er e s u l t s s h o we dt h a t me c h a n i c a l s t r a i nc a ni mp r o v eMS C sp r o l i f e r a t i o na n dma k eMS C sd i f f e r e n t i a t et oo s t e o b l a

13、 s t . Ke y w o r d sMe c h a n i c a ls t r a i nB o n e ma r r o w me s e n c h y ma ls t e m c e l l s( MS C s )Os t e o g e n i c d i f f e r e n t i a t i o n *国家自然科学基金资助项目( 3 0 2 7 0 3 5 9 ; 3 9 8 7 0 2 0 1 ) 通讯作者。E - ma i l :l i l i a n g wc u ms . e d u . c n 生物医学工程学杂志 JB i o me dE n g = = =

14、 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 2 0 0 6 ; 2 3 ( 3 ) :5 4 2 5 4 5 1 前言 骨 髓 间 充 质 干 细 胞( B o n ema r r o w me s e n c h - y ma l s t e m c e l l s , MS C s )是一种多分化潜能干细胞, 具有自我复制和多向分化能力,将这种干细胞施以 合适的诱导物,便可向一定目的

15、细胞分化。在体外经 不同的诱导剂可诱导分化成不同的组织和细胞,如: 在胰岛素,地塞米松,吲哚米沙星,异丁基甲基黄嘌 呤存在下可以向脂肪细胞分化;在表皮生长因子或 脑源性神经营养因子作用下可诱导分化为神经细 胞;在地塞米松,维生素C , -甘油磷酸酯共同作用 下可转化为成骨细胞 1 。除了化学因素外,物理因素 也可以促使其向成骨细胞转化,如脉冲电磁场等 2 。 但是有关力学应变对MS C s的影响研究较少,本研 究的目的就是观察力学应变对MS C s成骨分化能力 和增殖的影响,以期为MS C s向成骨细胞转化提供 新的思路。 2 材料与方法 2 . 1 实验动物和材料 健康未生育9月龄雌性S p

16、 r a g u e - D a wl e y ( S D) 大鼠2 4只,由四川省医学科学院实验动物研究所提 供。D ME M(低糖, L G)培养基( G I B C O) ,胎牛血清 ( F B S , G I B C O) ,淋巴细胞分离液(生化试剂,上海试 剂二厂) , P B S缓冲液,胰蛋白酶( G I B C O) ,碘化丙 啶( P I , S i g ma ) ,二乙基焦磷酸胺( D E P C , S i g ma ) , d NT P 、R T- P C R 试 剂 盒、T a q D NA合 成 酶 ( F e r me n t a s公司) , 引物的设计和合成由宝

17、生物工 程(大连)有限公司完成, C O2细胞孵箱( He r a e u s ) , 流式细胞仪( E L I T A E S P , C o u l t e r ,美国) , R T- P C R 仪( E p p e n d o r f公司,美国) 。 2 . 2 方法 2 . 2 . 1 骨髓间充质干细胞的体外培养采用密度 梯度离心法分离大鼠骨髓间充质干细胞 3 。在无菌 条件下分离大鼠的股骨,胫骨,去除软组织和骨膜, 切除两端骨骺。用针筒吸取5ml D ME M培养液冲 出骨髓,吹散细胞, 20 0 0r p m/ mi n ,离心1 0mi n ,弃 上清后加入3ml D ME M

18、培养液制成骨髓细胞悬 液,贴壁缓慢加入装有等体积淋巴细胞分离液的离 心管中, 20 0 0r p m/ mi n ,离心3 0mi n ;小心吸取分 离液和细胞悬液界面层细胞,用D ME M培养液洗2 次,收集细胞,血细胞计数板计数,以4 1 0 6/ ml 的 密度接种于培养瓶,加入含1 0 %F B S ,青霉素1 0 0 U/ ml ,链 霉 素1 0 0 g / ml , 2 5mmo l / L HE P E S的 D ME M培养液4 ml , 放入3 7 , 5 %C O2孵箱中,第 5 d首次换液, 弃悬浮细胞。以后每3 4 d换液一次, 直至细胞长成融合状态进行细胞传代。取3

19、 4代细 胞用于实验。 2 . 2 . 2 力学实验分组用0 . 2 5 %胰蛋白酶消化长 成融合状态的骨髓间充质干细胞,以1 1 0 5个细胞 接种于已处理的双轴力学应变培养小室,加入含 1 0 % F B S的D ME M培养液。次日细胞长成亚融合 状态,吸取原液与未贴壁细胞,定量加入含1 0 %F B S 的D ME M培养液3ml 。选取40 0 0 s t r a i n对细胞 加载。每天加载3次,每次2h ,间隔2h 。力学实验 分为: ( 1 )加力1d组( s t r a i n e d - 1 ) :按上述方法加力 1d ; ( 2 )对照1d组( u n s t r a i

20、 n e d - 1 ) :不加力学刺激, 与( 1 )培养相同时间; ( 3 )加力3d组( s t r a i n e d - 3 ) : 按上 述 方 法 施 加 力 学 刺 激 3d ; ( 4 )对 照3d组 ( u n s t r a i n e d - 3 ) :不加力学刺激,与( 3 )培养相同时 间。 2 . 2 . 3 细胞周期分布与细胞增殖检测力学应变 实验结束后,培养小室中的骨髓间充质干细胞用 P B S清洗2次, 用0 . 2 5 %胰蛋白酶消化细胞, 10 0 0 r / mi n离心5mi n , 去上清,加入碘化丙锭( 5 0mg / L ) ,室温下避光反应2

21、 0mi n ,经流式细胞仪检测和 细胞周期分析软件拟合处理,分析细胞周期变化与 增殖活性。用增殖指数( P r o l i f e r a t i o ni n d e x , P I ; P I = S +G2/ M期细胞百分比) 表示细胞的增殖活性。 2 . 2 . 4 骨桥蛋白( Os t e o p o n t i n , OP N) ,碱性磷酸酶 ( Al k a l i n ep h o s p h a t a s e , AL P ) ,骨 钙 素( Os t e o c a l - c i n , OC N) , 型 胶 原( T y p e c o l l a g e n

22、, C o l) mR NA的测定 力学应变实验结束后,培养小室中 的骨髓间充质干细胞用含0 . 1 % D E P C的 P B S冲 洗2遍,用T r i z o l提取总的R NA,取细胞总R NA 2 u l ,加入0 . 1 % D E P C水9 8u l ,分别于紫外分光光度 计2 6 0n m和2 8 0n m处读取 A值, A2 6 0/ A2 8 0值为 1 . 8 2 . 0间方可使用。按R T- P C R试剂盒说明操 作,进行逆转录和P C R扩增反应。引物序列如下: OP N:上游5 - G C AT T AC AG C AAAC AC T C - 3 ;下 游 5

23、 - C C AAG C T AT C AC C T C G G A- 3 ,产 物 长 度 3 5 3 b p 。 AL P :上游5 - C T AC T T G T G T G G C G T G AA G G- 3 ;下 游5 - AAT G C T G AT G AG G T C C AG G- 3 ,产物长度是4 1 8b p 。OC N:上游5 - G AG G AC C C T C T C T C T G- 3 ;下 游5 - AG G T AG C G C C G G AG T C - 3 ,产物长度4 0 0b p ; C o lI :上游5 - C C C AC C C

24、C AG C C G C AAAG AG T- 3 ;下 游5 - T T G G G T C C C T C G AC T C C T AC A- 3 ;产物长度3 5 2b p 。甘油醛 345 第3期井燕等。 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 力学应变对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响 - 3 - 磷酸 脱 氢 酶( G AD P H)上 游 5 -

25、 AAT G C AT C C T G C AC C AC C AA- 3 ;下游5 - G T AG C C AT AT T C AT T G T C AT A- 3 ,产物长度5 0 0b p 。P C R的扩增 条件为: 9 5 预变性5mi n ,然后9 4 3 0s , 5 0 3 0s ( OP N的退火温度是5 0 , AL P的退火温度是 5 9 . 2 , OC N的退火温度是5 8 . 5 , C o l I 的退火温度 是5 1 ) , 7 2 3 0s ,共3 2 ( OP N为2 3 )个循环。最后 7 2 延长1 0mi n 。R T- P C R产物经1 . 5

26、%琼脂糖凝 胶电泳,以图像分析仪进行吸光度扫描,做凝胶成像 成析。以内参G AD P H的R T- P C R产物为标准,各 组MS C s的OP N、 AL P 、 OC N、 C Ol I的R T- P C R产 物分别与相应G AD P H的产物比较,其比值为相应 参数mR NA的相对表达量。 2 . 3 统计学处理 所有检测均重复测定3 4次,所有参数均用 ANOVA做统计学处理, P0 . 0 5 ) 。 表1力学应变作用前后各组MS C s的细胞周期分布和增殖变化( x - s , n =3 ) T a b l e1T h ec h a n g e so ft h ec e l l

27、c y c l ed i s t r i b u t i o n o fMS C s p r o l i f e r a t i o nb e t w e e nu n s t r a i n e da n ds t r a i n e d ( x - s , n = 3 ) G r o u p s C e l l c y c l ed i s t r i b u t i o n ( %) G0/ GsSG2/ M P I ( %) Un s t r a i n e d - 1 6 7 . 1 4 . 51 5 . 5 1 . 81 6 . 3 1 . 6 3 0 . 1 0 . 7 Un s

28、 t r a i n e d - 3 6 3 . 1 2 . 11 6 . 6 1 0 . 11 8 . 7 5 . 1 3 5 . 5 1 . 1 S t r a i n e d - 16 1 . 3 2 . 31 7 . 8 5 . 61 9 . 0 5 . 8 3 6 . 6 1 . 1 S t r a i n e d - 35 3 . 4 5 . 52 6 . 3 3 . 82 0 . 3 8 . 9 4 4 . 2 1 . 2 与相应的u n s t r a i n e d比较, P 0 . 0 5 ) 。 3 . 5 O C NmR N A表达 力学应变作用组与相应对照组比较, O

29、C N表达 无明显变化( P0 . 0 5 ) ,见表2 。 表2力学应变作用前后各组MS C s的A L P , O P N , C O LI表达量( x - s , n =3 ) T a b l e2 T h ec h a n g e so fe x p r e s s i o no fA L P , O P N , C O LIb e t w e e n u n s t r a i n e da n ds t r a i n e d ( x - s , n =3 ) G r o u p sAL POP NC OLI Un s t r a i n e d - 1 0 . 3 0 0 . 0

30、 20 . 4 0 0 . 0 20 . 2 0 0 . 0 1 Un s t r a i n e d - 3 0 . 3 2 0 . 0 40 . 4 6 0 . 0 70 . 2 1 0 . 0 1 S t r a i n e d - 10 . 5 1 0 . 0 4 0 . 6 4 0 . 0 3 0 . 2 1 0 . 0 1 S t r a i n e d - 30 . 7 6 0 . 0 6 * 0 . 8 7 0 . 0 5 * 0 . 3 5 0 . 0 1 * P 0 . 0 5 ,与 相 应 的u n s t r a i n e d组 比 较, * P 0 . 0 5 ,与

31、 s t r a i n e d - 1组比较 4 讨论 体外实验已经证实在力学因素的影响下MS C s 可向成骨细胞系定向诱导分化 4 ,但是力学刺激的大 小,加载的周期性以及频率不同时对所获得结果有 很大的差异,当力的大小在25 0 0 50 0 0 s t r a i n 范围内时骨形成明显大于骨吸收在骨的表面形成片 层骨,增加骨的建造 5 ,周期性的力学刺激对细胞的 增值分化和基因表达的作用明显大于持续性的静态 负荷作用,而在周期性力学应变刺激中,频率为1 Hz的力学刺激可能是刺激骨细胞增殖的最佳频率, 因此,在我们的实验中,对 MS C施加大小为40 0 0 s t r a i n

32、, 频率为1Hz的周期性力学应变刺激 5 6 。 本实验中,细胞受到力学应变刺激后,通过流式 细胞术检测细胞周期,可以看出力学应变作用后P I 值比相应静态组增高,表明力学应变可促进MS C s 的增殖作用。 MC S s向成骨分化的重要表现是细胞能够合 成、分泌表达成骨特异性的蛋白和细胞外基质成分, 445 生 物 医 学 工 程 学 杂 志第2 3 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = =

33、= = = = = 卷 这些成分包括早期出现的AL P , I型胶原, OP N等, 以及较晚出现的 OC N,骨涎蛋白等,其中AL P和 OC N是成骨的两个关键性标志 7 , 8 。AL P是成骨细 胞的早期标志酶,在成骨过程中水解磷酸脂,为羟基 磷灰石的沉积提供必要的磷酸,有利于成骨 6 ,可标 志成骨分化的开始,它的活性作为成骨细胞功能及 分化的指标,在骨代谢的研究中被广泛应用。有学者 发现MS C s成骨诱导后, AL P是最早出现的成骨性 标志物,并有时间依赖性 9 ,我们的实验结果与之有 相似性,在力学应变作用1d和3d后大鼠MS C s的 AL P表达量明显增高。 OP N是成

34、骨细胞分泌的非胶原蛋白基质,在 MC S s分化早期开始表达, 通过与膜受体 C D 4 4相 互作用传导力学信号,影响骨发生与再生时细胞的 迁移。从而促进骨的形成 1 0 ,我们的实验发现在力 学应变作用1d和3d后它的表达都明显升高( P 0 . 0 5 ) 。 I型胶原作为成骨细胞早期分泌的有机基质, 具有反映成骨细胞成骨能力的特质,是在AL P出现 后的另一个较早期的的标志 1 1 。在我们的实验中发 现力学应变作用3d后C OLI明显增加。 OC N是成骨细胞特异性合成和分泌的一种非 胶原蛋白,在钙离子存在的条件下,与羟磷灰石结合 并稳定其构象,主要功能是维持骨的正常矿化速率, 促进

35、骨组织矿物质沉积的正常钙化过程,是反映成 骨细胞活性的重要指标 1 2 。在我们的实验中力学应 变作用后OC N无明显变化,这可能与OC N在骨形 成过程中出现较晚有关。 我们的实验结果提示,力学应变可提高大鼠 MS C s的增殖和成骨分化能力, 促进MS C s向成骨 分化。 参考文献 1Ma r kF P , Al a s t a i rMM,B e c kS C , e t a l . Mu l t i l i n e a g ep o t e n t i a l o f a d u l t h u ma nme s e n c h y ma l s t e m c e l l s .

36、S c i e n c e , 1 9 9 9 ; 2 8 4 ( 2 ) :1 4 3 2Nu t t a l lME ,G i mb l eJ M.C o n t r o l l i n g t h eb a l a n c eb wt we e n o s t e o b l a s t o g e n e s i s a n d a d i p o g e n e s i s a n d t h e c o n s e q u e n t t h e r a p e u t i ci mp l i c a t i o n s . C u r r .B o n eMa r r o wOp

37、 i nP h a r ma c o l , 2 0 0 4 , ( 3 ) :2 9 0 3L i L , L i D J , WuJ , e ta l . T h ep o t e n t i a lr o l eo fb o n ema r r o w me s e n c h y ma l s t e m c e l l si nt h ep a t h o g e n e s i so f o s t e o p o r o s i sb y o v a r i e c t o myi nr a t .JB i o me dE n g , 2 0 0 6 ; 2 3 ( 1 ) :1

38、 2 9 李 良, 李冬菊,吴江等.骨髓间充质干细胞在去卵巢大鼠骨质疏松 发 病机理中潜在的作用.生物医学工程杂志, 2 0 0 6 ; 2 3 ( 1 ) : 1 2 9 4J a g o d z i n s k i M, D r e s c h e rM,Z e i c h e nJ , e t a l . E f f e c t so fc y c l i c l o n g i t u d i n a l me c h a n i c a l s t r a i na n dd e x a me t h a s o n e o n o s t e o g e n i cd i f f

39、e r e n t i a t i o no f h u ma nb o n e ma r r o ws t r o ma l c e l l s . E u r o p e a nc e l l sa n dma t e r i a l s , 2 0 0 4 ; 7 :3 5 5L iL , C h e n MS ,D e n g L ,e ta l .T h ee f f e c to fme c h a n i c a l s t i mu l a t i o no nt h ee x p r e s s i o no f2、 1、 3i n t e g r i n sa n dt h

40、 e p r o l i f e r a t i o n, s y n t h e t i cf u n c t i o ni nr a to s t e o b l a s t s . JB i o me d E n g , 2 0 0 3 ; 2 0 ( 2 ) :1 8 7 李 良,陈孟诗,邓力等.力学刺激对 大鼠成骨细胞I n t e g r i n s 2、 1、 3表达和细胞增殖、合成功能的 影响.生物医学工程学杂志, 2 0 0 3 ; 2 0 ( 2 ) :1 8 7 6Au b i nJ E , L i uF , Ma l a v a l l , e ta l . Os t

41、e o b l a s ta n dc h o n d r o b l a s t d i f f e r e n t i a t i o n . B o n e , 1 9 9 5 ; 1 7 :7 7 7F a r a c h - C a r s o nMC , R i d a l l AL . D u a l 1 , 2 5 - d i h y d r o x y v i t a mi nD 3 s i g n a lr e s p o n s ep a t h wa y si no s t e o b l a s t s : C r o s s - t a l kb e t we e

42、n g e n o mi ca n dme mb r a n ei n i t i a t e dp a t h wa y s. Am JKi d n e yD i s , 1 9 9 8 ; 3 1 ( 4 ) :7 2 9 8D u n c a nR L , Ak a n a b i KA, F a r a c h - C a r s o nMC . C a l c i u m s i g n a l s a n dc a l c i u m c h a n n e l si no s t e o b l a s t i cc e l l s. S e m i nNe p h r o l

43、, 1 9 9 8 ; 1 8 ( 1 2 ) :1 7 8 9Mo r i mi c h i M, Yo s h i n o r i .Os t e o b l a s t - r e l a t e dg e n ee x p r e s s i o no f b o n ema r r o wc e l l d u r i n gt h e o s t e o b l a s t i c d i f f e r e n t i a t i o ni n d u c e d b yt y p eI c o l l a g e n. JB i o c h e m, 2 0 0 1 ; 1 2

44、 9 ( 1 ) :1 3 3 1 0S a mmo n sJ , Ah me nN. T h er o l eo f B MP - 6 , L - 6a n dB MP - 4i n me s e n c h y ma l s t e m c e l l - d e p e n d e n t b o n ed e v e l o p me n t e f f e c t so n o s t e o b l a s t i cd i f f e r e n t i o ni n d u c e db yp a r a t h y r o i dh o r mo n ea n d v i t

45、 a mi ni nD ( 3 ) . S t e m C e l l s , 2 0 0 4 ; 1 3 ( 3 ) :2 7 3 1 1Mi k i h i mo M,Mu n e a k iI , No mu r a T , e ta l .Os t e o p o n t i n e x p r e s s i o ni no s t e o b l a s ta n do s t e o c y t e sd u r i n gb o n ef o r ma t i o n u n d e r me c h a n i c a l s t r e s s i nt h ec a l

46、v a r i a l s u t u r ei nv i v o . J o u r a l o f B o n ea n dMi n e r a l R e s e a r c h , 2 0 0 3 ; 1 8 ( 9 ) :1 7 0 6 1 2X uQ, T i a nX X . T h e i n v e s t i g a t i v e d e v o l o p me n t o f d i f f e r e n t i a t i o na n db i o c h e mi c a l s t a n d a r do f o s t e o b l a s t s . C l i n i c a l F o c u s ,2 0 0 3 ; 1 8 ( 1 ) :5 5 徐 青,田小秀.成骨细胞分化产物 以其生化标准研究进展.临床荟萃, 2 0 0 3 ; 1 8 ( 1 ) :5 5 545 第3期井燕等。 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 力学应变对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响