《内毒素预处理诱导大鼠供肝缺血再灌注交叉耐受机制的研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《内毒素预处理诱导大鼠供肝缺血再灌注交叉耐受机制的研究.pdf（3页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、 实验研究 内毒素预处理诱导大鼠供肝缺血再灌注 交叉耐受机制的研究 刘作金李生伟游海波彭勇龚建平 基金项目： 国家自然科学基金资助项目 （3 0 4 7 1 9 6 9， 3 0 5 0 0 4 7 3） ； 重 庆市自然科学基金资助项目 （2 0 0 5 B B 5 2 4 2） 作者单位： 4 0 0 0 1 0重庆医科大学附属第二医院肝胆外科、 重庆市肝 胆外科重点实验室 通讯作者： 龚建平 【摘要】 目的探讨以内毒素耐受为基础诱导的移植肝脏对缺血再灌注损害 （IR I） 交叉耐受 的相关机制。方法雄性S D大鼠， 随机分为正常对照组、 缺血再灌注组 （IR组） 和内毒素耐受组 （E T
2、组） 。以未经任何处理的大鼠肝脏为正常对照； E T组供体第1天经尾静脉给予脂多糖0 . 1m g k g 体重， 第2、 3、4、5天给予0 . 5m g k g 体重； I R组供体给予等体积0 . 5m l无菌P B S液。第8天， 切取供体， 以未经任何处理的大鼠为受体， 两袖套法建立大鼠原位肝移植模型。按门静脉血流恢复 后第0、 6 0及1 8 0m i n分为3个亚组。逆转录-聚合酶链式反应及蛋白免疫印记法测定肝组织的白 细胞介素- 1受体相关激酶- 4（I R A K - 4） m R N A和蛋白表达水平； 酶连免疫吸附法检测肝组织核因子 - k B （N F - k B） 活
3、性及血清T N F - 含量。结果再灌注后0、 6 0及1 8 0m i n，I R组与E T组的I R A K - 4 蛋白与m R N A表达水平， N F - k B活性以及T N F - 含量均高于正常对照组 （P 0 . 0 5） ， 但I R A K - 4蛋白 与m R N A表达水平高于E T组 （P 0 . 0 5）a t 0m i na f t e r r e p e r f u s i o n， t h e l e v e l s o f I n t e r l e u k i n - 1 r e c e p t o r a s s o c i a t e dk i n
4、a s e - 4（I R A K - 4） g e n e a n dp r o t e i nw e r e h i g h e r i n I Rg r o u p t h a n i nE Tg r o u p（P 0 . 0 5） 。 再灌注后0m i n， E T组与IR组， 正常对照组间比较， P 0 . 0 5 图1内毒素预处理对缺血再灌注后 肝脏的I R A K - 4m R N A表达水平的影响 2 . 内毒素预处理对缺血再灌注后肝脏的I R A K - 4 蛋白表达水平的影响： W e s t e r nb l o t结果 （图2） ： 再灌 注后0m i n， I R组
5、I R A K - 4蛋白表达水平最高， E T组 次之， 均高于正常对照组 （P 0 . 0 5） 。 6331 中华实验外科杂志2 0 0 5年1 1月第2 2卷第1 1期 C h i nJE x pS u r g，N o v e m b e r 2 0 0 5，V o l 2 2，N o . 1 1 1泳道： 正常对照组I R A K - 4蛋白表达水平；2、3、4泳道： 再灌 注后0、 6 0和1 8 0m i nE R组I R A K - 4蛋白表达水平；5、6、7泳 道： 再灌注后0、 6 0和1 8 0m i n IR组I R A K - 4蛋白表达水平 图2内毒素预处理对缺血再
6、灌注后 肝脏的I R A K - 4蛋白表达水平的影响 3 . 内毒素预处理对缺血再灌注后肝脏的N F - k B 活性的影响： E L I S A结果表明 （图3） ： 再灌注后0m i n， E T组与I R组的N F - k B活性差异无统计学意义 （P 0 . 0 5） ， 但均明显高于正常肝组织 （P0 . 0 5； 再灌注后0 m i n，IR组，E R组与正常对照比较，P 0 . 0 5） ， 但均明显高于正常对照组 （P0 . 0 5； 再灌注后6 0 m i n及1 8 0m i n，IR组与E R组比较， #P0 . 0 1； 再灌注后0、 6 0及1 8 0 m i n，
7、IR组与E R组内各时段比较， #P 0 . 0 1 讨论 本实验结果表明， 在缺血期 （再灌注0m i n） ， E T 组和IR组的I R A K - 4表达水平明显高于正常对照 组， 显然门静脉血流阻断还诱导K C s的L P S胞内信号 转导通路的相关蛋白表达增强。而小剂量L P S的长 期刺激， 对T L R 4信号通路的反馈抑制可能是缺血期 E T组的I R A K - 4表达水平低于I R组的原因。N F - k B与T N F - 是一种普遍存在的转录调控因子与促炎 症因子， 为多种信号转导途径的汇聚点， 缺血所诱发的 多种其他病理状态 （除内毒素外） 必然导致E T组和I R
8、组的N F - k B剂量内毒素预处理所诱导的升高效应 已恢复至正常水平， 因此E T组和IR组在再灌注前 的差异并无统计学意义。再灌注期， E T组I R A K - 4表 达水平无明显变化， 而IR组的却迅速上升， 进而造 成N F - k B活性与T N F - 含量迅速升高并明显高于E T 组， 尤其是再灌注1 8 0m i n时分别为E T组的2倍和 1 6倍。现已证明，T N F - 可诱导黏附因子产生、 补体 激活、 触发中性粒细胞过氧化呼吸爆发反应等， 是造成 I R损害的最关键细胞因子。由此可见， 抑制再灌注 期I R A K - 4表达的确也是内毒素预处理诱导的移植肝 脏对
9、IR I交叉耐受的原因之一。 参考文献 1 L y eE，M i r t s o sC，S u z u k iN，e t a l . T h e r o l e o f I R A K - 4k i n a s e a c t i v i t y i n I R A K - 4 - m e d i a t e d s i g n a l i n g . JB i o l C h e m，2 0 0 4，2 7 9：4 0 6 5 3 - 4 0 6 5 8 . 2 P e n gY，G o n gJ P，L i uC A，e t a l . E x p r e s s i o no f t o
10、 l l - l i k e r e c e p t o r4a n d MD - 2g e n e a n dp r o t e i n i nK u p f f e r c e l l s a f t e r i s c h e m i a - r e p e r f u s i o n i n r a t l i v e r g r a f t . W o r l d JG a s，2 0 0 4，1 0：2 8 9 0 - 2 8 9 3 . 3 刘作金， 李生伟， 龚建平， 等. I R A K - 4 - s h R N A阻断内毒素诱导的 k u p f f e r细胞激活效应的实验研究.中华肝脏病杂志，2 0 0 5，1 3：8 1 9 - 8 2 2 . （收稿日期： 2 0 0 5 - 0 1 - 0 6） 7331 中华实验外科杂志2 0 0 5年1 1月第2 2卷第1 1期 C h i nJE x pS u r g，N o v e m b e r 2 0 0 5，V o l 2 2，N o . 1 1