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1、!“# 年 #! 月 第 $ 卷第 % 期 中国实验动物学报 ） 【摘要】 目的建立光化学诱导小鼠急性脑梗塞模型。方法采用 : 因素 % 水平正交试验建立光化学诱导 小鼠急性脑梗塞模型的最佳实验条件。结果最佳实验条件为： 照射时间 : 、 照射强度为 # )?、 玫瑰红剂量 #“ IC4，)- )=，JK， C=O） 【4%“#6$/#】 7%8*/#9*(8 4IQOU9=IC O SV54S O5VQ4 54P4UPO9 =ROP5Q=863*#(,1“ (C4 8PD QC88O9 Q4IQ M=QC : RO5Q8PI OS % 94W49I MOI VI4S Q8 IQVSX QC4
2、 U4IQ 4?N4P=Q 58S=Q=8I 8R NC8Q85C4SV54S O5VQ4 54P4UPO9 =ROP5Q=8 = Q 58S=Q=8I：4?N8IVP4 Q=VQ4I， 4?N8IVP4 POQ4 =I #， S8IO4 8R P8I4 U4O9 =I #“I U9V4 =I #“ 8R QC4 P4IV9Q NP8W4I QCOQ QC4 4?N4P=Q 58S=Q=8I 8R QC4 ROP5Q=8；/=54；! ， 取 Y% 只随机分为 #Y 组进行正交 试验。另 #Y 只随机分为 组， 每组 Y 只， 用 于结果论证。试剂： 玫瑰红 （四氯四碘荧光素钠盐） 批号 EF
3、“Y!F， 北京化工厂。伊文思蓝， 批号 EF#!:， 中国医药公司北京采购供应站。仪器： )(D* 冷光源 透照仪 （河北泊头医疗器械厂） ， 奥林巴斯体式显微 镜， 立体定位仪， 离心机， 紫外分光光度计。 ?方法 #6!6#正交设计实验设计为照射时间、 照射强 度、 玫瑰红剂量、 伊文思蓝剂量、 处死时间 : 因素各 万方数据 ! 水平的正交试验方案 （表 “） 。 “#$#$实验方法将动物 “%:8 （-） 照射时间 AB97; 718; （:B） 玫瑰红剂量 C9; （()*(） 处死时间 G,; 8 89 =;18. （.） ! 值 ! F1:; “+“)!5+!%#+%#%“H
4、$+“)$“%H%“%#%6I 6+6)!“$+J%$%#%JI !+“+%“%!%#$“5 +“%“)!“%J%!%#%“! H“%“)$5+“%$%#“$6 5“%6)!“+%!%“%#%$J J“%“$+H%#+%#%6I I“+“)!“$+“%“%#%6J “%“+“)$“+%J%#+%#%“! “+6)!5+H%!%#“%! “$“+“%!%$%#%+$ “6$%“)!“+%H%$%#%6“ “!$%“)$“$+!%!%#%5% “+$%6)!“%“%#+%#%!J “H$%“5+J%“%#%J% ! “ %#6H%+%#%II“%#6H“I%#“H+$%#“+I ! # %#$%6
5、6%#$!+%#“6+6%#$“6$%#“J+! ! $ %#“IJ“%#$HI%#$!I!%#“I5$%#$I+H ! % %#$%$6%#6$+6%#$JI5%#6I6%#!%+ K)L%#%!%H%#%+H+%#%+$“+%#%+HI+%#%H“+ !“统计方法按正交设计进行求和， “ 为极差 （最大值 M 最小值） ， # 为频次， “)# 值为该因素的影 响系数， 其值越大， 则该因素影响越大。最佳实验条 件为总和值最大的各条件的组合。 (结果 影响因素最大的为处死时间， 处死时间越长， ! 值越大， 其后依次是： 伊文思蓝剂量、 照射强度、 玫瑰 红剂量、 照射时间。最佳实验条件为
6、玫瑰红 5+ () *(、 伊文思蓝 “% ()*(、 照射时间 + ,-、 强度为“ NB、 处死时间为 ! .。 #结果验证 因为本实验结果即最佳条件组合在正交试验中 无该组合， 为论证该结果， 我们设 6 组进行比较， O 组为正交实验结果即玫瑰红 5+ ()*(、 伊文思蓝 “% ()*(、 照射时间 + ,-、 强度为 “ NB、 处死时间为 ! .。 P 组为第 H 处理组即玫瑰红 5+ ()*(、 伊文思蓝 “% ()*(、 照射时间“%,-、 强度为%#+ NB、 处死时间为$ .。另设 Q 组为玫瑰红 5+ ()*(、 伊文思蓝 “% () *(、 照射时间 + ,-、 强度
7、为 “ NB、 处死时间为 $ .， 与 O 组仅为处死时间之别。O 组和 P 组之间比较照射 时间 + ,-、 强度为 “ NB， 与照射时间 “% ,-、 强度为 %#+ NB 是否为等同效应。O 组和 Q 组之间比较伊文 思蓝渗出与时间的关系。实验过程同前。三组用 2R22软件包进行单因素方差分析。P 组较 O 组差 异有显著性， O 与 Q 组间、 P 与 Q 组间无差异。 讨论 光化学诱导脑梗塞动物模型实验原理： 玫瑰红 P 为一种无毒染料， 不能穿越血脑屏障 5， 在绿色光 的照射下能产生并释放属于自由基的单链氧， 使血 管内皮细胞不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应， 直 接损害血管内
8、皮的完整性， 使血小板粘附于血管内 皮表面并发生释放反应， 激发凝血过程， 导致血管内 血栓形成 J。血栓生成后， 形成局部循环障碍， 出现 水肿， 血管通透性增加， 这时给予伊文思蓝， 则会透 过血管屏障进入组织间， 显示与照射范围大致相同 的梗塞灶。为快速大批筛药， 我们选择脑匀浆液的 伊文思蓝的 ! 值作为指标， 伊文思蓝的 ! 值在一定 程度上反映了血循环障碍的严重程度。但如果照射 时间过长、 照射强度过大时伊文思蓝的 ! 值并非与 损伤程度一致， 从本实验结果来看， 伊文思蓝的 ! 值与损伤程度呈先上升后下降的趋势， 其原因可能 为损伤严重到一定程度， 血管完全闭塞， 伊文思蓝在 局
9、部渗出反而减少， 我们根据有关文献以 + 因素 ! !I“中国实验动物学报 $%“ 年 “$ 月第 I 卷第 ! 期OS81 N1E O-, 2S, 2,-， C;S;E;7 $%“， T9:#I#09#! 万方数据 水平正交试验方案探索一个最佳实验条件使得伊文 思蓝的 ! 值最高， 再运用于药物筛选， 则这一指标 灵敏而可靠。在因素众多情况下， 正交试验省时、 省 力。通过结果验证， 可以看出照射时间 ! “#$、 强度 为 % :2 *， 5)?/1$2 4:： 1$ #A:1 :$: =. B112:) 3$A0=#.$ .O 7 #$#=#1=:A =N:2#.$2 .O =N: .67 1$A 4:8 N1/#.#O#:A “.A: .O R12: “#AA: 0: 18 2#.$ #$ 2B.$=1$:.27 N7B:.6#01 2=1#$2， A7:2 1$A .=N:. *BB TN1 %,HP， KK： JJ! P 2 ) S TN1 F:=N.A， %,HH， K(： QJ( , S2=#$ *， S1“:2 +Z)*$#“1 9=2 =N:7 1:/:$= =. N“1$ A#2:12:)9=),)E.)K 万方数据