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1、2 0 0 8 年1 2 月 第1 8 卷第1 2 期 中国比较医学杂志 C H I N E S EJ O U R N A LO FC O M P A R A T I V EM E D I C I N E D e c e m b e r ，2 0 0 8 V 0 1 1 8N o 1 2 帝e 目g 屿) 9 ；技术方法1 3 ( 曼= 、! 疗e ；夺亡者亡盘、妙 一项小鼠采血新技术颌下静脉丛采血法 余琛琳1 ，赵乐2 ，汤球1 ，崔淑芳1 ( 1 第二军医大学训练部实验动物中心，上海2 0 0 4 3 3 ；2 和记黄埔医药有限公司，上海2 0 1 2 0 3 ) 【摘要】目的介绍小鼠颌下
2、静脉丛采血方法。方法选用2 月龄昆明小鼠，固定小鼠后，将采血注射针头 刺入颌下静脉丛血管取血。结果单人操作约lm i n 内可完成小鼠颌下静脉丛采血，采血量达到O 3 0 5m L 。结 论此方法无需麻醉、创伤小、采血量大并可重复采血，是一种简便、安全、快速、采血量多的采血方法。 【关键词】小鼠；静脉；采血 【中图分类号】R 3 3【文献标识码】A【文章编号】1 6 7 1 7 8 5 6 2 0 0 8 ) 1 2 0 0 5 3 0 2 AN e wM e t h o do fB l o o dC o l l e c t i o nf r o mt h eS u b m a n d i b
3、 u l a r V e i nP l e x u si nM i c e Y UC h e n 1 i n l ，Z H A OL d ，T A N GQ i u l ，C U IS h u f a n g t ( 1 L a b o r a t o r yA n i m a lC e n t e r ，T r a i n i n gD e p a r t m e n t ，T h eS e c o n dM i l i t a r yM e d i c a lU n i v e r s i t y ，S h a n g h a i2 0 0 4 3 3 ，C h i n a ； 2 H u
4、 t e h i s o nM e d i P h a n n aL i m i t e d ，S h a n g h a i2 0 1 2 0 3 ，C h i n a ) 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e T oe x p l o r ea ni m p r o v e dt e c h n i q u eo fb l o o de o H e c f i o ni nt h em o u s ef r o mt h es u b m a n d i b u l a rv e i n p l e x u s M e t h o d sT w e n t
5、 y2 - m o n t ho l dK u n m i n gm i c e w e r eu s e di n t h i ss t u d y T h em o u s es u b m a n d i b u l a rv e i np l e x u sw a s p u n c t u r e dw i t has y r i n g en e e d l e R e s u l t s Av o l u m eo f0 3 0 5m Lb l o o ds a m p l ec o u l db ec o H e c t e dw i t h i no n em i n u t
6、 eb ya s i n g l ee x p e r i m e n t C o n c l u s i o n T h ed e s c r i b e db l o o dc o l l e c t i o nm e t h o di sas i m p l e ，s a f ea n dr a p i dm e t h o dt oo b t a i na c o n s i d e r a b l ea m o u n to fb l o o d I td o e s n tr e q u i r ea n e s t h e s i a ，w i t hm i l di n j u
7、 r y ，a n dC a l lb er e p e a t e df o rs e v e r a lt i m e s ，t h e r e f o r e ， d e s e r v e st ob ew i d e l ya p p l i e di ne x p e r i m e n t a ls t u d i e s 【K e yw o r d s 】 M o u s e ；S u b m e n d i b u l a rv e i np l e x u s ；B l o o dc o l l e c t i o n 在动物实验研究中，特别是生理学、药理学、药 物代谢动力
8、学等研究中，经常要采集实验动物的血 液样本进行常规质量检测、细胞学实验或进行生理、 生化分析。目前，小鼠常用的采血方法有眼眶后 静脉丛采血法、眼球摘除采血法、心脏采血法、剪尾 采血法等旧o ，不同的采血方法适用于不同的实验用 途和所需血量。本实验经过解剖、观察小鼠头部浅 层血管，发现其颌下部静脉血管丰富、位置浅表，尝 试并建立了小鼠颌下静脉丛采血的新方法。该方法 无需麻醉、创伤小、采血量大并可重复采血，是一种 安全、快速、简便、采血量多的采血方法。 1 材料和方法 1 1 材料 1 1 1 实验动物：2 月龄昆明小鼠，雌雄各1 0 只，由 第二军医大学实验动物中心提供 合格证号：S C X K
9、 ( 沪) 2 0 0 7 0 0 0 3 。 1 1 2 实验器材：灭菌6 号注射针头、酒精棉球、灭 基金项目】第二军医大学2 0 0 7 年度青年启动基金项目( 2 0 0 7 1 1 0 1 0 2 ) 。 【作者简介】余琛琳( 1 9 8 1 一) ，女，助教，硕士研究方向：人类疾病动物模型。E m a i l ：y e t 0 4 0 8 1 6 3 o m n 。 通讯作者 崔淑芳( 1 9 6 9 一) ，女，副教授。E m a i l ：面e u i s m m u e d u c n 。 万方数据 5 4中国比较臌学杂志2 0 0 8 年1 2 月第1 8 卷第1 2 期C
10、h i nJC o m pM e d ，D e c e m b e r2 0 0 8 ，V 0 1 1 8 N o 1 2 菌离心管、灭蘸干棉球、抗凝翔等。 1 2 方法 1 2 1 徒手固定法：将小鼠固定在左手中( 图1 ) 。 1 2 2 在小鼠头部下颁部准确把握颌下静脉丛血 管位置，絮嬲2 孛篱头所攒位置，盎管位予下领骨后 方咬肌边缘。酒精棉球擦拭采血部位消瓣詹，将灭 菌注射针头迅速刺入颌下静脉丛血管( 图3 ) ，血液 即流出( 图4 ) 。采血结束，立即用灭菌千棉球压迫 止盘。 1 2 3 将巍液收集予灭菌离心管内，缡号备用( 匿1 4 见封三) 。 2 结果 2 。1 透过颓下静辣
11、丛采蛊方法的应耀，攀久搡作采 血2 0 次，每只小鼠采血用时约为3 0 一5 9s ，平均每 次( 4 7 8 ) 8 内即可完成对一只小鼠单次采血的整 个过程。操作熟练的实验人员，可以在更短时间内 完成采斑过程。 2 2 使用颁下静脉丛采血法对雌雄各l O 必小鼠进 行采血操作，每只小鼠采血量范围为0 3 0 5m L ， 每只小鼠平均采血量可达( O 3 8 0 0 7 ) m L 。 3 讨论 已有的众多采血方法备有其优缺点。例如，对 于体重为2 5g 左右的成年小鼠，眼眶后静脉丛采血 法采血量比较多，约为0 2 0 。3m L ，并可蘸复采血， 僵易损伤睽蟓；眼球攘除采鑫法采盎量多，约
12、力0 。3 0 4m L ，健不可重复采巍，而且可致小鼠失明，易 感染，止血不严时还可致小鼠死亡，同时也不符合动 物福利基本原则；心脏采胤法采血量可达0 8m L ， 但由于小鼠个体小、心脏小、心脏搏动抉，采盘对位 置较难固定【3 】，因而操作难度系数大，需要麻醉，盈 容易因操作问题导致动物死亡；剪尾采疵法，虽可以 连续多次采皿，但每次采血掇极少，不到0 1m L ，不 适于需要较多血量的实验J 。 须下静艨丛采盘法主甏宥浚下咒个方嚣酶优 点：( 1 ) 采S t 操作方法简单，所需实验器械简易、普 遍；( 2 ) 对小鼠损伤小。采也所需时间很短，尤其是操 像熟练实验人员，可很好的把握采蛊位置
13、纛深度，将 损伤降至最低。本实验中，采做操作结束后，未见小 鼠出现明显的行为异常和精神沉郁，均很快恢复活 跃的状态，而且所有实验小鼠均正常存活；( 3 ) 斑液 采集量大，藏年小飘萃次盎量霹达0 。5m L ；( 4 ) 建盎 速度快；( 5 ) 爵多次重复采集血液样本，满足对血样 的不同需求。此采血方法尽量减轻了对实验动物的 伤害，在倡导实验动物福利方躐有着积极的意义。 同时，单次0 。5m L 的采矗量可以满足诲多动物实验 对血液样品量的黉求，翔盘红鬣盘的测定、红纲臆计 数、白细胞计数及白细胞分类计数、血液涂片、酶活 性微量分析、血液D N A 的提取等。 掌握好这项采血技术，我们认为以下
14、几点值褥 注意：( 1 ) 采集煎渡样晶嚣雩，魏果小鼠头部弱魏肢摆 动，容易导致渗出的血样洒落，减少血液采集量。因 而在徒手固定小鼠时，应确保其头部和前肢不能摆 动，以便更好的判断采血部位和进行血液采集。( 2 ) 采巍震注射钟头的大小、遴赞憋力度秘深度要依照 小鼠体重丽定，并且都需要经过多次的实验和训练 才能很好的把握。一般2 5g 以内小鼠，可选用4 号、5 号注射针头，进针深度以1 。2h i m 为宜；2 5g 以上成年小鼠碍选用6 号注射针头，进针深度以3 4m i l l 为宣。( 3 ) 采盘过程都要遵循无菌操馋纂 则，尤其是采血用注射针刺入之前，一定要用洒精棉 球擦拭采血部位，
15、一方面是进行消毒，另一方鲡，由 予血液由下颌部被毛处流出，宥可能粘连上毪发污 染盛滚，蠢在操终时进行磐要赫消毒措麓，就霹趿避 免上述情况发焦，最大程度保证血液的质量。 参考文献： 【1 】基毒燕，马跃繁。小鼽玉脏穿刺聚纛并存活豹几点注意事顼 【j 】泸翔罴学貔学报，2 6 ，2 9 ( 3 ) ：2 0 6 。 ( 2 吴晓晴郝震黢1 6 0 只小鼠心脏浆m 的操作体会( J 】实验 动物科学与镑壤，2 0 0 4 ，2 1 ( 1 ) ：5 3 5 4 3 粱月琴，杨波大鼠、小鼠给药及策疵的几点体会 J 山西 医辩大学学报。2 0 0 0 ，3 1 ( 1 ) ：9 2 9 3 【4 】宗舞
16、毒。餐蠖， 薹簿萍。实验费携疆整捡灞孛不弱皋纛方法 的比较 J 】巾灏比较医学杂惠，2 0 0 8 ，1 8 ( 2 ) ：7 4 7 5 【修回日期3 2 0 0 8 - 0 9 - o l 万方数据 余琛琳，等：一项小鼠采血新技术- 一颌下静脉丛采血法( 正文见第”页 Y UC h e r t l i n e ta lAN e wM e t h o do f B l o o dC o l l e c t i o nf r o mt h eS u b m a n d i b u l a rV e i nP l e x u si nt h eM o H s e ( F u l lt e x t
17、O i lp a g e5 。 F i g1 T o f i x t h en 目2m H l * M m # F i g2 L o c a l i o no f 【1 Ks u b m a n d i b u l a rv e i n 口l c x u sm s c 目1 # m # * m F i g 1 T h ce f f e c t so f t h eD a s ld e v e l o p e rb a r 2 0 z m 目2 自# g “P2 12 # 日* F i g 2T h ee f f e c t so f I h ed e v e l o p err s e u d oP2 I2b a F l O p m 页 万方数据