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1、2 0 0 9 年2 月簿4 7 豢第4 瓣基础研究 不同脱细胞方法对猪主动脉的组织学及生物力学特性昀影响 隧凝李凝华 ( 山西聪辩大学第二收廉医院胸心外科，太原0 3 0 0 0 1 ) 滞要】攀缒研究苓潜藏缀照蠢法对猪奎旗躲的组缀攀及堡餮力学特缝懿影瞧鼗脱缨臆程度。隽滚灏鲜猿圭纛躲弦对照 组。赛验缀分四组：A 缎聚乙二醇( P E G ) + 棱酶；B 组脱氧照酸( D C A + 核酶+ 笨华基磺酰氟( 蹦s F ) ；c 缀P E G + D C A + 核酶 + P M S F 鬣翔酶+ 乙二羧医乙羧( E D T A 拜霾| l 控邋。一1 0 0 + 竣酶。B 、C 、D 缀均在
2、懿渗鞠等渗渡审交骜震荡。慰冬组脱缨照管道 进褥炎俸、毙镜、魄辘观察及璐亿梭溅。终巢除Dl 嚣外，其余各缀的组织纤缭层垮捧戮整齐；D 缱的生物力学指据馕较新鲜 组织潮显下降，A 缀 黼染色永1 2 h 后组织细胞核较新鲜组织鳃燕减少，但隧詹隧时问猴移势无明显变纯；B 组1 2 8 h 时H E 染色越凌下无可瑟缨缝菝；e 缀4 8 h 时H E 染色电镜下纛可跫缎悠棱。结论聚乏二醇+ 脱襞骚酸+ 核酶+ 苯攀基袋酸氟 在低渗秘簿渗滚巾交豢震荡法是一秘较好的恢速、有效、实耀酶去缩胞穷法。 潢键诵】脱细魏；猪宝动脉；缀织学；生貔蠢学 【孛盟分类号】R - 3 3【文簸椽讽码】A跌章编号l1 6 7
3、3 - 9 7 0 1 ( 2 0 0 9 ) 0 4 - 3 7 - - 0 2 E f f e c to fD i f f e r e n tD e c e l l u l a r i z a t i o nM e t h o d so nH i s t o l o g ya n dB i o m e - c h a m c a P r o p e r t yo fP o r c i n eA o r t a ， T A OK a i 2X J I l t a D e p a r t m e n to fC a r d i o - t h o r a c i cS u r g e r y
4、，T h eS e o 鳓d 囊搿C l i n i c a lH o s p i t a l 碟S h a n x lM e d i c a lU n i v e r s i t y ，强毋u 融0 3 0 0 0 1 l A b s t r a e t lO b j e c t i v eT os t u d yt h eh i s t o l o g y ，t h eb l o m e c h a n i c a lp v o p e r t l e sa n dt h ed e e e l h h r i z e dd e g r e eo fp o r c i n ea o r t
5、ad e e e l h l a r i z e db y d i f f e r e n tm e t h o d s M e t h o d s 强ep o r c i n ea o r t aw e r ed e c e l l “l a r i 涮b y4m e t h o d s ：5 鼢P G E ；l D C A + e n d o n u c l e a s e + P M S F ：5 懈P G E + I D C A + e n d o n u c l e a s e + P M S F ：0 1 T r y p s i n + 0 0 2 E D T A + 1 T r
6、i t o nX - 1 0 0 + e n d o n u c l e a s e T h e mw e r es h a k e da l t e r n a t e l yi nl i q u i do fl o wa n d e q u a lp e n e t r a t i o np r e s s + R e s u l t sT h ed e c e l h l a rm a t r i c e 8 w e l ea l l i n t a c te x c e p tt h o s ei n G r o u pD ，a n dt h em a x i m a lr e s i
7、 s t a n c e t o m e c h a n i c a lf o r c eo fm a t r i c e si nG r o u pDW 8 8o b v i o u s l yr e d u c e dc o m p a r e dt ot h a to ff r e s ha o r t a ( p 0 0 5 ) B u tg r o u pAc a n td e c e l l u l a r i z e t h ea o r t a c o m p l t e l y ，g r o u pB ，u s e d1 2 8 h 。C o n c l u s i o n5
8、 0 P G E + 1 D C A + e n d o n u c l e a s e + P M S Ff o rd e c e l l u l a r i z a t i o ni s8 秽聪，r a p i da n d e f f i c i e n tm e t h o df o rd e c e l h l a r i z a t i o n + + l K e yW o r d s lD e c e l l u l a r i z a t i o n ；P o r c i n e r 1 8 ；差差i 胀晒舒；B i o m e e h a n i e s ；T i s s u
9、 ee n # e e r m g 组绞工程人工支鳃楚糍翦研究的热点。怒瑾慧的入王支絮。 戆够克服瓣 l 蓍；撬械管道穰生物管遵耩存在的缺陷i l l ，具有广阔的 昭廉应爆翦景。本研究重点观察尽阉脱缨胞方法对猪主动脉基 质静缓缀学及生物力学特健的影镌。 1 材料与方法 1 I 一般费耱 予屠宰场获获黔一1 0 0 k g 家嚣猪耱圭穗辣热缺盛酵隧少 予2 0 m i n ) 。修瓣、清洗、满毒后置入含抗生素的P B S 液中，l h 内 赘溺实验燕。 胰虽趣酶、E D T A 、曲拉逶一1 0 0 、P E G 、D C A 、P M S F 、D N A a s e 、 R N A a s
10、 e 等试荆均为S i g m a 公司生产。磷酸盐缓i 率_ 液自翩，蠢霉索 鼗链霉索麴予瓣秀医科大学。 1 2 方法 主动辣帮秘实验塞詹嗲超净王掺螽蠹梅熬藏5 e r a 段，髓税 分为赢组，每组l O 段： A 组l g m t , P E G 审持续振荡；B 缝l 褥D C A 祗渗滚中( 兰蒸 承努溶裁) 振荡1 2 h 后移入1 D C A 簿渗液中震荡1 2 h ，如就低、 簿渗液交薰震荡；e 组巍入P E G 审振荡1 2 h 嚣蹩入含撬蹩索 P B S 滚浸泡洗聪P E G ，移入l D C A 骶渗液巾，方法同B 组， B 、C 缝孛糯入P M S F 静业纤维基震遭弼翁臆
11、牵消能蘸酶破坏； 黔维放入0 1 貘蛋鑫辩4 - 0 0 2 E D T A 羧孛，鬣入3 7 。C 援激承 浴箱1 2 h 后墩如，P B S 反复冲洗，然后放入l 曲拉通一1 0 0 骶 渗秘簿渗液审交饕震荡，方法露上。浚上各缀蚜秀3 7 撅荡， 每4 小时墩挝一次势羧滚，最爵拥入2 0 岫触D N A a s e 及 2 0 m g m LR N A a s e 消化籍P B S 反复灌荡漂洗，移入禽抗生索的 傺存渡孛4 镲存备矮溺。 1 3 缆溅撂糯 敬各级鹚躲作电镜波籀糖电镜残察。予材料性驻试验槐上 ( 掰s 技O N5 5 4 4 材料性熬试验辊，太原理工大学生物力学实验 塞) ，
12、梭测最大负穗、最大凌力、最大逾变耱弹健摸量。零度、禽承 爨籁维织热镟缩瀑囊测滗瘟耀热敉缭瀑波仅霸H D - 1 0 型琴度彼 ( 精度0 。m m m ) 完成测试。并邀用S P S S1 2 0 统计软件进行分析， 数据鞭( i4 - 8 ) 表示，计塞资料魄较采用检验，计数资辩院较采 C H I N AM O D E R ND o R 审胃邋代嚣生3 7 万方数据 基础研究 耀x2 检验。 2 结果 2 。1 癌理学改变 对照组H E 染色可见大量细胞核；A 组H E 染色示1 2 h 詹组 织细胞核较新鲜组织明盟减少，但随后随时问摊移并无明显变 化；B 组1 2 8 h 时H E 染色电
13、镜下无砖霓缨胞核；c 维4 8 h 时H E 染色电镜下秃研见细胞核；D 组3 6 h 时H E 染色电镜下无可笕细 胞核，B 、c 组电镜下町见组织纤维层次清楚，排列规则。D 组纤维 较对照组和B 、C 组明黟破坏。见图1 。 2 0 0 9 年2 月第4 7 卷第4 期 2 4 犀疫、舍熬璧和组织热旋缩温度溯试 与对照组比较，去细胞四组的含水量均明显增加( 均p 0 0 5 ) ，但组织厚度和热皱缩温度改变尤统计学意义( 均P 0 0 5 ) 。 3 讨论 目前各家报道的组织T 程脱细胞支架制备方法不一，其主 要隧舅在予使耀了不弱的脱缍憨试剂湖。 本研究分别采用A 组P E G + 核酶、
14、B 组D C A + 核酶+ P M S F 、 C 组P E G + D C A + 核酶+ P M S F 、D 组胰骚白酶+ E D T A + 曲拉通 一1 0 0 + 核酶对猿主动脉进行脱缨胞处纛，对毙脱缌熊效果。光镜 及锻攒电镜下观察结果显承：P E G 单独作用不能有效去除组织 细胞成分，其余鼍组均可完企去除组织中的细胞成分，但B 法时 闻较长，心组较对照组和C 组其纤维组织破坏明显，生物力学测 试德较其谴缓骥显下降。C 缀管道纾绦潮架结梅僳持完整，捧麓 整齐有序，间距较宽，无断裂及融合。理化性能测试妊示，实验组 与对照组比较厚度、热皱缩激发差异均戈统计学意义( P 0 0 5
15、) 。 表赞各缰管遂的物理缝履竞锈显改变；转、C 、D 缝D N A 含量较瓣 照组显著减少( P 0 0 5 ) ；D 缝掰有的测试指标魄镯拜中肇嶷验外科杂志，2 0 0 5 ，2 2 ( 3 ) ：3 7 7 值明显下降。差异有统计学意义( 均P 0 0 1 ) 。 ( 收稿日期：2 0 0 8 - 0 9 2 2 ) ( 主接筹4 夏) 3C a n c e r ，2 0 0 2 ，7 7 ( 6 ) ：7 9 6 - 8 0 3 【3 1 郎景和人头状瘤病毒感染的处理f 衅妇科学新进展【M 】中华医学 电子音像出版柱，2 0 0 5 ：8 3 8 9 。 嘲邸景和连接予宫颈癌预防豹全球
16、挑战麓机遇翻中华妇产科杂意。 2 0 0 2 。3 7 ( 2 ) ：1 2 9 1 3 1 f 5 】T a v a s s o l iF A ，D a v i l e e 只W H Oc l a s s i f i c 强t t i o n , f ft I , 1 1 1 O r oP m h o l o g yg e n e t i c s t u m o r so ft h eb r e a s ta n df e m a l eg e n i t a lo r g y M 。L i o n ：A R CP r e s s ， 2 0 0 3 ：2 6 6 【6 】鸟兰娜，吴瑞游，周
17、艳秋，等人乳头状瘸病毒基因溉剩与宫颈病变 3 8 中国现代医生C H I N A 确0 D R ND O e T o R 的关系I J l 中嗣妇产科临床杂志，2 0 0 5 ，6 ( 5 ) ：3 4 6 - 3 5 0 川P o U a n e nR V u o p a l aS ，L e h t oVP D e t e c t i o no fh u m a np a p i l l o m a v i m s i n f e c t i o nb yn o n - i s o t o p i ci ns 舞珏h y b r i d i s a t l o ni ne x m d y l o m a m u ss a d C I NL e s i o n q 朝JC l i nP a t h o l 。1 9 9 3 4 6 ( 1 0 ) ：9 3 6 - 9 3 9 【8 】钟蓉，冯春艳，罗标，等液簇细胞学和棚w D N A 检测在宫颈病变 筛查中的应用研究f J l 中国联药导报，2 0 0 8 ，5 ( 5 ) ：7 7 7 9 筘l 麓建功，宋象坡动弥辁塞纯疗藉敦疗缭会治疗孛睫期鬻颈癌溺孛 朗现代医生，2 D f f 7 ，4 5 ( 1 4 ) ：4 - 5 ( 收黼日期：2 0 0 8 加9 1 2 ) 万方数据