《原发性肝癌患者红细胞调控IL8新的实验体系研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《原发性肝癌患者红细胞调控IL8新的实验体系研究.pdf（2页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、原发性肝癌患者红细胞调控I L - 8新的实验体系研究 张乐之 郭峰 许育 吴淑梅 王海立 摘 要 目的 采用血液免疫反应路线图实验体系探讨原发性肝癌患者红细胞调控白细胞分泌I L - 8的能力。方法 将癌细胞 (S 1 8 0) 悬液0 . 2 m l( 5 1 0 6/ m l) 或生理盐水0 . 2 m l加至枸橼酸抗凝全血细胞悬液( 或白细胞悬液)0 . 2 m l和血浆0 . 3 m l中,3 7 水浴1 h, 酶联免疫法测定反应液中I L - 8含量。结果 原发性肝癌患者全血细胞实验组、 全血细胞对照组、 白细胞实验组和白细胞对照组的 I L - 8含量(p g/m l) 分别为3
2、 7 6 . 3 52 4 3 . 9 6、3 5 3 . 6 42 7 1 . 9 2、4 6 1 . 2 72 7 7 . 1 1和4 2 4 . 9 72 7 8 . 9 3, 正常人相应各组则分别为1 1 . 3 6 6 . 9 3、4 . 9 8 4 . 3 5、2 9 . 4 1 3 0 . 6 6和2 0 . 7 7 2 4 . 2 0; 原发性肝癌患者全血细胞实验组、 白细胞实验组和正常人全血细胞实验组、 白细胞 实验组的癌细胞激活率(%) 分别为0 . 2 2 0 . 2 4、 0 . 2 5 0 . 5 3、2 . 4 9 2 . 3 3和0 . 7 5 0 . 2 1;
3、原发性肝癌患者全血细胞实验组、 全血细胞对 照组和正常人全血细胞实验组、 全血细胞对照组的红细胞I L - 8吸附率(%) 分别为0 . 2 20 . 1 8、 0 . 1 70 . 3 3、1 . 1 82 . 2 9和0 . 8 6 0 . 4 9。原发性肝癌患者红细胞I L - 8激活率及I L - 8吸附率均明显低于正常人(P 0 . 0 1) 。结论 采用血液免疫反应路线图实验体系 测定红细胞对I L - 8的调控作用方法简便、 实用。原发性肝癌患者红细胞对I L - 8含量的调控能力明显下降。 关键词 癌, 肝细胞; 变态反应和免疫学; 红细胞; 白细胞介素8 中国图书资料分类号
4、R 3 9 2 S t u d i e s o nan e we x p e r i m e n t a l s y s t e mo f e r y t h r o c y t e r e g u l a t i n g I L - 8 i np a t i e n t sw i t hp r i m a r yh e p a t o c a r c i n o m a Z h a n gL e z h i,G u oF e n g,X uY ue t a l. D e p a r t m e n t o fE x p e r i m e n t a lD i a g n o s i s,C
5、 h a n g h a iH o s p i t a l,S e c o n dm i l i - t a r yM e d i c a lU n i v e r s i t y,S h a n g h a i 2 0 0 4 3 3,C h i n a A b s t r a c t O b j e c t i v e T oa p p r o a c ht h e c a p a c i t yo f e r y t h r o c y t e r e g u l a t i n gI L - 8 i np a t i e n t sw i t hp r i m a r yh e p a
6、 t o c a r c i n o m a(P H C)b ya n e we x p e r i m e n t a l s y s t e mo fh e m a i m m u n e .M e t h o d s 0 . 2 m l s u s p e n s i o no f c a n c e r c e l l s(S 1 8 0:51 0 6/ m l)o rN Sw e r ea d d e d i n t o0 . 2 m l a n t i c o a g u l a n t s u s p e n s i o no fw h o l eb l o o dc e l l
7、 so r l e u k o c y t e s a n d0 . 3 m l p l a s m a,t h e n i n c u b a t e d f o r 1ha t 3 7 . T h e c o n t e n t o f I L- 8w a s d e t e r m i n e db yE L I S A. R e s u l t s I nt h ep a t i e n t sw i t hP H C,t h eI L - 8l e v e l s(p g/m l)i ne x p e r i m e n t a l a n dc o n t r o lg r o u
8、 p so fw h o l eb l o o d c e l l s,a n d i ne x p e r i m e n t a la n dc o n t r o lg r o u p so fl e u k o c y t e sw e r e3 7 6 . 3 52 4 3 . 9 6,3 5 3 . 6 42 7 1 . 9 2,4 6 1 . 2 72 7 7 . 1 1a n d4 2 4 . 9 7 2 7 8 . 9 3,r e s p e c t i v e l y;w h i l e i n t h en o r m a l h u m a n,t h e yw e r
9、 e 1 1 . 3 6 6 . 9 3,4 . 9 8 4 . 3 5,2 9 . 4 1 3 0 . 6 6a n d2 0 . 7 7 2 4 . 2 0,r e s p e c t i v e l y . I n t h ep a t i e n t sw i t hP H C,t h e a c t i v a t i o nr a t e so f c a n c e r c e l l s i n t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p s o f b o t hw h o l eb l o o dc e l l a n d l e u k
10、 o c y t ew e r e 0 . 2 2 0 . 2 4a n d0 . 2 5 0 . 5 3,r e s p e c t i v e l y;w h i l e i nn o r m a l h u m a n,t h e yw e r e 2 . 4 9 2 . 3 3a n d0 . 7 5 0 . 2 1,r e s p e c t i v e l y . I n t h ep a t i e n t sw i t h P H C,t h e I L - 8a d s o r p t i o nr a t eo f e r y t h r o c y t e i nb o
11、t he x p e r i m e n t a l a n dc o n t r o lg r o u p so fw h o l eb l o o dc e l lw e r e0 . 2 20 . 1 8a n d0 . 1 7 0 . 3 3,r e s p e c t i v e l y;w h i l e i nn o r m a l h u m a n,t h e yw e r e 1 . 1 8 2 . 2 9a n d0 . 8 6 0 . 4 9,r e s p e c t i v e l y . T h e I L - 8a c t i v a t e dr a t e
12、so f e r y t h r o c y t e i n t h ep a t i e n t sw i t hP H Cw a sm u c h l o w e r t h a ni nt h en o r m a lh u m a n(P0 . 0 1) ,a n ds ow a st h ea d s o r p t i o nr a t eo fe r y t h r o c y t e(P 0 . 0 1). C o n c l u s i o n T h er e s u l t s i n d i c a t e dt h a t t h ee x p e r i m e n
13、 t a l s y s t e mo fh e m a i m m u n er e a c t i o n,w h e nu s e di nd e t e c t i n gt h er e g u l a t i v e e f f e c to f e r y t h r o c y t e t o I L - 8,w a s p r a c t i c a l a n d c o n v e n i e n t . T h e r e g u l a t i v e c a p a c i t yo f e r y t h r o c y t e t o I L - 8d e c
14、l i n e do b v i o u s l y i n t h e p a t i e n t s w i t hP H C. K e yw o r d s c a r c i n o m a,h e m a t o c e l l u l a r;a l l e r g ya n d i m m u n o l o g y;e r y t h r o c y t e s;i n t e r l e u k i n - 8 红细胞趋化因子受体对白细胞分泌的I L - 8有吸附 调控作用。我们曾用免疫酶联竞争法证实肿瘤患者红 细胞吸附I L - 8能力明显下降 1,2。我们新近用“ 血液免
15、 疫反应路线图” 理论指导构建的用癌细胞激活红细胞 调控白细胞免疫能力的实验体系 3, 证实红细胞可促 进癌细胞激活白细胞分泌I L - 8, 同时又可吸收白细胞 分泌的I L - 8, 使其含量下降, 即红细胞对I L - 8有双调作 用 4。为了解原发性肝癌患者红细胞对I L - 8的双调作 用, 我们进行了本实验, 现报道如下。 1 材料与方法 1 . 1 研究对象 1 1例诊断明确的原发性肝癌患者为 长海医院住院病人, 其中男1 0例, 女1例, 年龄3 0 6 4 岁, 平均4 8岁。8例正常人为体检正常的献血员, 男6 例, 女2例, 年龄2 0 4 2岁, 平均3 0岁。 1 .
16、 2 材料 肝癌患者与正常人新鲜枸橼酸抗凝血, I L - 8酶联免疫试剂盒( 上海茂原生物科技公司) , 癌细胞冰 冻试剂( S 1 8 0株, 长海医院输血科血液免疫研究室制 备) 。 1 . 3 方法 血浆、 全血细胞制备 3: 新鲜枸橼酸抗凝血 4 m l, 离心沉淀取上清液( 血浆) , 用生理盐水洗涤离心 一次, 倒尽上清液, 恢复至4 m l, 即为全血细胞悬液( 包 括红细胞和所有白细胞) 。白细胞悬液制备: 取0 . 2 m l 全血细胞悬液, 加蒸馏水2 m l, 在冰水中轻轻吹打 作者简介: 张乐之, 主任技师。主要从事临床免疫学研究。已发表论文 5 0篇 作者单位:2
17、0 0 4 3 3 上海 长海医院实验诊断科( 张乐之、 许育、 吴淑梅、 王海立) , 输血科( 郭峰) 89 解放军医学杂志2 0 0 6年2月 第3 1卷 第2期M e dJC h i nP L AV o l 3 1N o2F e b r u a r y2 0 0 6 1 m i n, 再加1 . 8 %氯化钠溶液2 m l, 混匀, 再加生理盐水 至满, 离心沉淀, 弃上清液, 即为0 . 2 m l的白细胞悬液 ( 其白细胞数量与全血细胞悬液中白细胞数量相等) 。 取4支试管, 编号1 4。编号1、 2都加全血细胞 悬液0 . 2 m l, 编号3、 4都加白细胞悬液0 . 2 m
18、l, 编号1、3 都加癌细胞悬液( 5 1 0 6/ m l)0 . 2 m l, 编号2、4都加生理 盐水0 . 2 m l( 取代癌细胞悬液) , 编号1、 2、3、4都加血浆 0 . 3 m l。充分混匀,3 7 水浴1 h, 取出离心沉淀, 取各自 上清液, 按酶联免疫试剂盒说明书常规测定I L - 8含量。 编号1称全血细胞实验组, 编号2称全血细胞对照组, 编号3称白细胞实验组, 编号4称白细胞对照组。癌 细胞激活率=( 实验组I L - 8含量-对照组I L - 8含量) / 对照组I L - 8含量。红细胞I L - 8吸附率= 全血细胞实 验组I L - 8含量( 或全血细胞
19、对照组I L - 8含量)-白细 胞实验组I L - 8含量( 或白细胞对照组I L - 8含量) /白 细胞实验组I L - 8含量( 或白细胞对照组I L - 8含量) 。 1 . 4 统计学处理 数据结果以x s表示, 组间比较采 用t检验。 2 结 果 原发性肝癌患者全血细胞实验组、 对照组及白细 胞实验组、 对照组I L - 8含量均高于正常人相应各组, 且 不论正常人还是肝癌患者, 全血细胞实验组和对照组 的I L - 8含量都比白细胞实验组和对照组低( 表1) 。正 常人全血细胞实验组癌细胞激活率明显高于白细胞实 表1 原发性肝癌患者与正常人红细胞调控I L - 8 含量指标比较
20、( xs) T a b l e1 C o m p a r i s o no n I L - 8c o n t e n t s a n d c o r r e l a t i v e i n d e x e s r e g u - l a t e db ye r y t h r o c y t e i np r i m a r yh e p a t o c a r c i n o m a a n dn o r m a l h u m a n 组别 n I L - 8含量 ( p g/m l) 癌细胞 激活率(%) 红细胞I L - 8 吸附率(%) 肝癌 全血细胞实验组1 1 3 7 6 . 3
21、 5 2 4 3 . 9 60 . 2 2 0 . 2 40 . 2 2 0 . 1 8 全血细胞对照组1 1 3 5 3 . 6 4 2 7 1 . 9 20 . 1 7 0 . 3 3 白细胞实验组1 1 4 6 1 . 2 7 2 7 7 . 1 10 . 2 5 0 . 5 3 白细胞对照组1 1 4 2 4 . 9 7 2 7 8 . 9 3 正常人 全血细胞实验组81 1 . 3 6 6 . 9 3 (1) (2)2 . 4 9 2 . 3 3(3) (4) (6) 1 . 1 8 2 . 2 9( 2) 全血细胞对照组84 . 9 8 4 . 3 5 (3) 0 . 8 6 0
22、. 4 9( 3) 白细胞实验组82 9 . 4 1 3 0 . 6 6 (4) 0 . 7 5 0 . 2 1 白细胞对照组82 0 . 7 7 2 4 . 2 0 (5) 注: 与正常人全血细胞对照组比较, (1)P0 . 0 5; 与肝癌患者全血细胞实验组 比较, (2)P 0 . 0 1; 与肝癌患者全血细胞对照组比较, (3)P 0 . 0 1; 与肝癌患者白细 胞实验组比较, (4)P 0 . 0 1; 与肝癌患者白细胞对照组比较, (5)P 0 . 0 1; 与正常人 白细胞实验组比较, (6)P 0 . 0 5 验组, 且高于原发性肝癌患者全血细胞实验组、 白细胞 实验组, 而
23、后两者之间差异不显著( 表1) 。正常人全血 细胞实验组和对照组的红细胞I L - 8吸附率均明显高于 原发性肝癌患者相应各组( P 0 . 0 5, 表1) 。 3 讨 论 红细胞中有多种天然免疫分子, 可全方位调控补 体系统和白细胞免疫系统 5。本研究应用血液免疫反 应路线图理论构建的新的实验体系, 发现红细胞不仅 可通过广谱趋化因子受体吸附白细胞产生的I L - 8, 使 其含量下调, 而且还可提高癌细胞抗原对白细胞激活 能力, 使其分泌I L - 8明显增多, 而原发性肝癌患者红细 胞对I L - 8的吸附清除能力明显下降, 癌对细胞抗原激 活白细胞分泌I L - 8的促进能力也明显下
24、降。原发性肝 癌患者不论有无红细胞参与, 反应液中I L - 8含量都明 显高于正常人相应各组, 表明原发性肝癌患者由于体 内存在肝癌细胞分泌的抗原物质激活白细胞, 使白细 胞免疫功能处于亢奋状态, I L - 8分泌量大大上升, 而红 细胞无能力协助清除血循环中的I L - 8分子, 因此, 作为 肿瘤新生营养血管促进因子 6的I L - 8大量存在, 促进 了肝癌的生长、 转移。如何清除肝癌细胞分泌的激活 I L - 8产生的因子以及如何提高原发性肝癌患者红细胞 对白细胞分泌I L - 8的调控能力, 是肿瘤免疫治疗的重 要研究内容, 值得进一步探讨。本研究也表明用新理 论为依据构建的红细
25、胞调控白细胞免疫功能的实验研 究体系简便、 客观、 自然, 值得推广应用。 参 考 文 献 1 张乐之, 郭峰, 龚燕芳 等.红细胞趋化因子受体测定方法的建立及 临床初步应用.深圳中西医结合杂志,1 9 9 9,9(5) :1 0 2 郭峰, 张乐之, 钱宝华 等.肿瘤患者红细胞天然免疫分子C D 3 5和 趋化因子受体变化.解放军医学杂志,2 0 0 2,2 7(1 1) :9 7 1 3 郭峰, 张乐之, 花美仙 等.癌细胞激活血液免疫反应路线图初步研 究.肿瘤学杂志,2 0 0 5,1 1(3) :1 6 3 4 郭峰, 张乐之, 花美仙 等.疫苗激活红细胞增强白细胞释放I L - 8的
26、 实验研究.药学服务与研究,2 0 0 5,5(2) :1 1 5 5 郭峰.血液免疫反应路线图.深圳中西医结合杂志,2 0 0 5,1 5(1) :1 6L e n t s c hA B . T h eD u f f ya n t i g e n/r e c e p t o r f o r c h e m o k i n e s(D A R C)a n d p r o s t a l e c a n c e r . Ar o l e a s c l e a r a s b l a c ka n dw h i t e . F A S E B J,2 0 0 2,1 6 (9) :1 0 9 3 (2 0 0 5 - 1 0 - 1 1收稿 2 0 0 6 - 0 1 - 1 3修回) ( 责任编辑 李恩江) 99 解放军医学杂志2 0 0 6年2月 第3 1卷 第2期M e dJC h i nP L AV o l 3 1N o2F e b r u a r y2 0 0 6