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1、1 0 地方病通报2 0 0 8 年第2 3 卷第6 期E n d e m i cD i s e a s e sB u l l e t i n2 0 0 8V 0 1 2 3 N o 6 文章编号：1 0 0 0 - 3 7 1 11 2 0 0 8 ) 0 6 - 0 0 1 0 - 0 4 中药复方对实验性大鼠肝纤维化的影响 王福新1 ，韩月宁2 ，王亚男2 ，许晏1 ，丁剑冰1 ， 曹春宝1 ，贾海英1 ，阿曼古丽牙生3 ，吴日铭2 ( 1 新疆医科大学基础医学院，乌鲁木齐，8 3 0 0 5 4 ； 2 新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心； 3 新疆医科大学第一附属医院肝病专科医院) 摘
2、要：目的观察中药复方对实验性大鼠肝纤维化的影响。方法按照完全随机化原则将8 0 只实验动物W i s t a r 大鼠 随机分为8 组，每组1 0 只，分别为正常对照组、模型对照组、中药金三莪预防组、中药复方预防组、中药金三莪治疗组、中 药复方低剂量治疗组、中药复方中剂量治疗组、中药复方高剂量治疗组。以4 0 四氯化碳石蜡油作为腹腔造模剂进行 腹腔造模，预防组从造模之日起给予中药复方和中药金三莪治疗，治疗组从造模4W 起给予中药复方和中药金三莪治 疗。病理切片观察大鼠肝纤维化的变化情况。结果经过预防和治疗之后大鼠肝纤维化程度有比较明显的改善。结论 该中药复方可能通过抗炎、保肝等综合作用起到抗肝
3、纤维化的作用。 关键词：W i s t a r 大鼠；肝纤维化；中药复方 中图分类号：R 一3 3 2文献标识码：A E f f e c to fT r a d i t i o n a lC h i n e s eH e r b a lC o m p o u n dO NE x p e r i m e n t a l H e p a t i cF i b r o s i sM o d e lo fR a t s W A N GF u x i n l 。H A NY u e n i n 9 2 W A NY a n a i l 2 X UY a n l D I N GJ i a n b i n
4、9 1 - C A OC h u n b a 0 1 - J MH a i y m 9 1 A m 蚰g u nY A S E N ，W UY u e r u i n 9 2 ( 1 B a s i cM e d i c i n eC o l l e g eo f X i n j i a n gM e d i c a lU n i v e r s i t y - U r u m q i - X i n j i a n g8 3 0 0 5 4 C h i n a ；2 T h eC e n t e r f o rD i s e a s eC o n t r o la n dP r e v e
5、n t i o n U r u m q i - X i n j a i n g8 3 0 0 0 2 - C h i n a ；3 S p e c i a l i z e d 脚n t i cH o s p i t a lo fT h e1 s tA f f i l i a t e dH o s p i t a lo f X i n j i a n gM e d i c a 2U n i v e r s i t y - U r u m q i X i n j i a n g8 3 0 0 5 4 - C h i n a ) A b s t r a c t ：O b j e c t i v e
6、T oo b s e r v et h ee f f e c to ft r a d i t i o n a lC h i n e s eh e r b a lc o m p o u n do ne x p e r i m e n t a lh e p a t i ef i b r o s i sm o d e lo fr a t s M e t h o d s 1 1 l ee i g h t yr a t sw e r ed i v i d e di n t oe i g h tg r o u p sa c c o r d i n gt o t h ec o r n - p l e t e
7、r a n d o mp r i n c i p l e E v e r yg r o u pi n c l u d e dt e nr a t s T h e r ew e r ec o n t r o lg r o u p - m o d e lg r o u p t r a d i t i o n a l C h i n e s eh e r bJ i n s a n ep r e v e n t i v eg r o u p ( T C D J S E P ) t r a d i t i o n a lC h i n e s eh e r bc o m p o u n dp r e v
8、 e n t i v eg r o u p 【T C D C P P ) t r a d i t i o n a lC h i n e s eh e r bJ i n s u n et h e r a p e u t i cg r o u p ( T C D J S E T ) - t r a d i t i o n a lC h i n e s eh e r bC O l l l p o u n dl o wd o s a g et h e r a p e u t i cg r o u p ( T C D C P L S T ) - t r a d i t i o n a lC h i n
9、e s eh e r bc o m p o u n dm i d d l ed o s a g et h e r a - p e u t i cg r o u p ( T C D C P M S T ) - t r a d i t i o n a lC h i n e s eh e r bc o m p o u n dh i g l ld o s a g et h e r a p e u t i cg r o u p ( T C D C P H S T ) 1 1 l eh e p a t i cf i b r o s i si nr a t sw a sm a d eb y4 0 c a r
10、 b o nt e t r a c h l o r i d el i q u i dp a r a f f i n n et w op r e v e n - t i v eg r o u p sw e r ea d m i n i s t r a t e dt r a d i t i o n a lC h i n e s eh e I bJ i n s a n ea n dt r a d i t i o n a lC h i n e s eh e r bc o m p o u n d - r e s p e c t i v e l yw h e nt h em o d e lb e g a
11、nt ob em a d e T h et h e r a p yg r o u p sw e r ea d m i n i s t r a t e dt r a d i t i o n a lC h i n e s eh e r b c o m p o u n da n dt r a d i t i o n a lC h i n e s eh e r bJ i n s a n ea f t e rt 1 1 eh e p a t i cf i b r o s i so fr a t sb e g a nt ob em a d ef o rf o u r w e e k s T h ei m
12、p r o v e m e n to fh e p a t i cf i b r o s i so fr a t sw a so b s e r v e db yp a t h o l o g i c a ls e c t i o n R e s u l t s H e p a t i cf i b r o s i so fr a t sW a si m p r o v e do b v i o u s l ya f t e rp r e v e n t i o na n dt h e r a p y C o n d u s i o n s 。1 1 1 ee f f e c to ft r
13、a d i t i o n a lC h i n e s eh e r bc o m p o u n do np r e v e n t i v eh e p a t i cf i b r o s i sC a nb eo b t a i n e db yc o m p r e h e n s i v ee f f e c to fa n t i - i n m u l l m a - 收稿日期：2 0 0 8 一0 4 2 0 作者简介：王福新( 1 9 7 8 一) ，男，在读硕士研究生 通讯作者：丁剑冰，E m a i l _ d j b 唧0 2 1 6 3 o o m 。电话：0 9
14、 9 1 4 3 6 2 4 0 3 万方数据 地方病通报2 0 0 8 年第2 3 卷第6 期E n d e m i cD i s e a s e sB u l l e t 流2 0 0 8V 0 1 2 3 ，N o 6 t i o n - l i v e rp r o t e c t i o na n d8 0O n K e yw o r d s ：R a t s ；H e p a t i cf i b r o s i s ；T r a d i t i o n a lC h i n e s eh e r bc o m p o u n d 肝纤维化是一切慢性肝病发展的共同途径，也是 进一步
15、向肝硬化甚至肝癌发展的必经之路。目前 在全世界范围内，肝硬化已经成为仅次于心血管病和 恶性肿瘤以外的重大疾病，对人类危害极大悼J 。肝纤 维化的主要成因是由于肝细胞坏死和慢性炎症引起的 肝细胞外基质的增生和降解失去平衡。随着对不 同机制的理解，针对损伤、信号转导等关键步骤的靶向 性治疗已经展开，这就激励了研究者们不断研发新的 抗肝纤维化的药物 】。目前国际上主要采取西医西 药治疗肝纤维化，西医虽然有多种治疗方法，但是效果 都不理想而且副作用大，价格昂贵，不易被患者接受。 中医目前已有多种复方、单方及有效提取成分在肝纤 维化治疗方面取得了进展。本研究探讨由丹参、三棱、 虎杖、柴胡、香附等五味中药
16、配伍组成的中药复方对大 鼠肝纤维化的影响，希望能为进一步临床用药提供有 力的实验依据。 l 材料与方法 1 1 材料： 1 1 1 实验动物：W i s t a r 大鼠8 0 只，均为雌性。体重为 1 6 0 1 9 0g ，6 8W 龄。购自新疆医科大学基础医学 院动物实验中心。大鼠分笼饲养于通风良好温湿度适 宜的动物实验室内。 1 1 2 实验药物：三棱、香附、虎杖、柴胡、丹参、郁金、 莪术购自新疆医药公司。中药复方由三棱、香附、虎 杖、柴胡、丹参各1 2g 构成。中药金三莪由中药郁金 3 0g ，三棱1 2g 和莪术1 2g 。常规方法制成中药煎剂 并且进行浓缩处理。其中中药复方浓缩成
17、lm L 中含 中药复方生药1g ，中药金三莪浓缩成1m L 中含中药 金三莪0 3g 。四氯化碳分析纯购自于天津市北方天 医化学试剂厂，液体石蜡购自于天津市福晨化学试剂 厂。用液体石蜡将四氯化碳配制成4 0 的四氯化碳 石蜡油作为腹腔造模剂。 1 1 3 主要试剂及仪器：1 0 甲醛溶液、8 0 乙醇、 9 5 乙醇、无水乙醇、苏木素染液、伊红染液、二甲苯、 中性树胶、包埋用石蜡块。常规大鼠用灌胃器购自新 疆医科大学基础医学院技能试验中心。北京光明医疗 仪器厂产2 0 2 A S 型电热恒温干燥箱、L e i e aH L l 2 1 0 摊 片机、L e i c a R M 2 1 3 5
18、 切片机、C a n o nP o w e r s h o tA 5 6 0 数 码相机、上海实验室设备有限公司产雷伯特排气柜、 O l i m p u s 双筒显微镜。 1 2 研究方法： 1 2 1 试验动物分组：以体重编号按照完全随机化原 则将8 0 只实验动物随机分为8 组。每组1 0 只，分别为 正常对照组、模型对照组、中药金三莪预防组、中药复 方预防组方、中药金三莪治疗组、中药复方低剂量治疗 组、中药复方中剂量治疗组( G ) 、中药复方高剂量治疗 组( H ) 。 1 2 2 造模及中药灌胃治疗：动物分组后动物实验中 心饲养3d 后开始正式实验。除正常对照组以外其它 各组均腹腔注
19、射4 0 的四氯化碳石蜡油造模剂，首次 0 5m L 1 0 0g 体重，之后每次为0 3m l J l 0 0g 体重， 每周2 次。进行4W 造模之后改为每周1 次。再进行 8W 共进行1 2W ，造模并以1 0 的酒精作为以上造模 组的唯一饮料。正常对照组给以生理盐水。中药金三 莪预防组( B ) 、中药复方预防组方( C ) 在造模当日起 分别给予中药金三莪0 6 1 0 0g 和中药复方1g 1 0 0 g 灌胃，每天1 次。造模进行4W 之后随机抽取除预 防组以外其它各造模组中的任意1 只处死，证实肝纤 维化模型已经建立成功之后开始进行灌胃给药治疗。 具体方法如下：模型组给予双蒸水
20、2 0m L 1 0 0g 体 重，中药复方低剂量治疗组给予中药复方0 5g l o o g ，中药金三莪治疗组给予中药金三莪0 6w l o og ，中 药复方中剂量治疗组给予中药复方1 0g l o og ，中药 复方高剂量治疗组给予中药复方2 0g t o og ，共治疗 6 0d 。 1 2 3 标本收集：治疗6 0d 之后处死大鼠，统一留取 大鼠肝右叶标本置于1 0 甲醛溶液固定。常规石蜡 包埋切片H E 染色。 1 3 统计学处理：采用S P L M l 3 0 统计软件对多组非 正态性资料才用秩和检验。 2 结果 2 1 大鼠一般情况：各组大鼠均存活，模型组和低剂 量组大鼠精神萎
21、靡，活动明显减少，体重增加慢且饮食 少，大便稀水样，皮毛无光泽而且略发黄，烦躁，容易激 惹。正常组大鼠精神好，活动佳，饮食正常，体重增加 明显，大便正常皮毛有光泽。中药治疗和预防各组大 鼠精神活动尚可，饮食正常，皮毛有光泽，体重增加较 为明显。 2 2 病理学观察结果： 2 2 1 大体情况：正常组大鼠肝脏呈鲜红色，质地较 软，边缘锐，表面光滑无结节。模型组以及中药复方低 剂量治疗组大鼠肝脏体积明显增大，颜色略灰白色，边 万方数据 1 2 地方病通报2 0 0 8 年第2 3 卷第6 期E n d e m cD s e a s e sB u l l e t i n2 0 0 8V 0 1 2
22、3 。N o 6 缘较钝，质地硬，表面欠光滑。其余治疗组以及预防组 大鼠肝脏呈暗红色，体积略增大，边缘略钝，质地略硬， 表面欠光滑。 图I 正常对照组( C o n t r 0 1 ) 1 0 0 图3 中药金i 莪治疗组( T C D J S E T ) 1 0 0 表l T a b I e l 2 2 2 病理组织学变化：正常组大鼠肝小叶结构完整， 肝细胞以中央静脉为中心向周围发散形成明显的肝细 胞索，汇管区仅有少量纤维组织( 见图1 ) 。模型组大 图2 模型组( M o d e ) 1 0 0 图4 中药复方高剂量治疗组( T C D C P H S T ) 1 0 0 王福新等：中药
23、复方对实验性大鼠肝纤维化的影响图版说明 各组大鼠肝纤维化病理分级情况 P a t h o l o g i c a lG r a d eo fH e p a t i cF i b r o s i so tE v e r yG r o u po fR a t s 组N ( g r o u p ) ( 每组1 0 只，N o 1 0 ) 大鼠肝纤维化病理分级情况 ( 一)S l S 2 S 3S 4 正常组( c o n t r 0 1 ) 模型组( m o d e l ) C 中药金三莪预防组( T C D J S E P ) _ D 中药复方预防组( T c D c P P ) _ E 中药金三
24、莪治疗组( T C D J S E T ) _ F 中药复方低剂量组( T C D C P L S T ) 一 G 中药复方中剂量组( T C D C P M S T ) 1 0 0 2 2 3 O 4 H 中药复方高剂量组( T C D C P H S T ) 54100 与正常组相比P O 0 5 ； ：C o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u pP 0 0 5 ；( 一) ，S 1 ，s 2 ，S 3 ，s 4 ：肝纤维化的病理分级； ( 一) ，S 1 ，s 2 ，S 3 ，S 4 ：R e f e r i n gt op a t h o l
25、 o g i c a lg r a d e0 fh e p a t i cf i b r o s i s 万方数据 地方病通报2 0 0 8 年第2 3 卷第6 期E n d e m i cD i s e e sB u l l e t i n2 0 0 8V o L2 3 ，N o 6 1 3 鼠大部分肝小叶结构严重破坏，肝细胞变性坏死，多呈 气球样变和脂肪变性，坏死区周围有炎性细胞浸润。 广泛纤维组织增生，纤维间隔增宽分割肝小叶，肝脏细 胞增生明显被增宽的纤维间隔分割形成假小叶( 见图 2 ) 。中药金三莪治疗组大鼠肝细胞变性坏死明显减 轻，肝纤维化程度较明显地改善，仅有部分肝小叶汇管 区周
26、围有少量纤维组织增生，大部分病理分级为( ) 痢 S l 仅有1 只大鼠病理分级为S 2 级( 表1 ) 。中药复方 低剂量组肝细胞变性坏死程度没有明显地改善，大量 纤维间隔形成，分隔并破坏小叶，致小叶结构紊乱病理 分级程度主要为S 3 和s 4 。中药复方中高剂量治疗组 大鼠肝细胞变性坏死程度明显改善，病理分级程度主 要为( - ) 和S 1 具有较为明显的剂量依赖性( 见图3 和 图4 ) 。病理分级标准：S 1 包括汇管区、汇管区周围纤 维化和限局窦周纤维化或小叶内纤维瘢痕，两者均不 影响小叶结构完整；S 2 纤维间隔形成但小叶结构大部 分保留；S 3 大量纤维间隔，分隔并破坏小叶，致小
27、叶结 构紊乱，但尚无肝硬化；S 4 早期肝硬化，肝实质广泛破 坏，弥漫性纤维增生，被分隔的肝细胞团呈不同程度的 再生及假小叶形成J 。 3 讨论 各种病因引起的慢性肝病和各种损伤因素所致的 肝脏损伤都可能发生肝细胞坏死或炎症并继发肝纤维 化【6 - 。鉴于人体实验的局限性，许多实验研究均通过 动物实验来完成。建立良好的动物模型是实验是否成 功的关键步骤。目前已经建立了多种类型的肝纤维化 动物模型，其中C C L 4 中毒是最常用、最可靠的诱导动 物形成肝纤维化的药物。研究肝纤维化的经典模 型1 。C C I A 腹腔注射，可以直接进入肝细胞。破坏肝 细胞膜及其结构，使肝细胞变性坏死 3 】。本
28、实验以 4 0 的四氯化碳作为腹腔造模剂进行腹腔造模，经过 病理组织学检测成功的诱导出大鼠肝纤维化的模型。 中药三棱、丹参、虎杖、柴胡、香附具有保肝护肝， 抗炎改善微循环抗氧化等作用。已有大量的研究证明 此几味中药单用和联用均具有抗肝纤维化的疗效。杨 错等研究结果提示柴胡可通过抗氧化的作用来起到预 防四氯化碳致大鼠肝纤维化的的作用 9 】。余世锋等 以高、中、低剂量丹参注射液治疗慢性乙型肝炎肝纤维 化患者，结果各剂量组均能改善临床症状 1 引。本实验 结果中药金三莪治疗组大鼠肝细胞变性坏死明显减 轻，肝纤维化程度较明显地改善，仅有部分肝小叶汇管 区周围有少量纤维组织增生，大部分病理分级为( -
29、 ) 和 S l 仅有1 只大鼠病理分级为S 2 级，提示该中药也有 较好的抗肝纤维化的作用。中药复方低剂量治疗组大 部分大鼠致小叶结构紊乱，肝实质广泛破坏，弥漫性纤 维增生，被分隔的肝细胞团呈不同程度的再生及假小 叶形成，与模型组相比肝纤维化没有得到明显改善，病 理分级程度主要为S 3 和S 4 ( P 0 0 5 ) 。中药复方中 高剂量治疗组大鼠肝纤维化程度明显改善，大部分大 鼠肝小叶结构正常，仅有少部分大鼠少数肝小叶汇管 区周围有少量的纤维组织增生，大部分肝小叶结构完 整，病理分级程度主要为( _ ) 和S l 。中药高剂量治疗 组与中药复方低剂量组相比P 0 0 5 。结果表明中药
30、复方治疗组能够有效地改善实验性大鼠肝纤维化的程 度并有较为明显的剂量依赖性。该中药复方是通过何 种途径保肝护肝起到抗肝纤维化的作用，尚有待于进 一步研究。 参考文献： 【1 潘陈为，陈永平抗肝纤维化重组T G F B 疫苗的研究进 展 J 国外医学流行病学传染病学分册。2 0 0 5 ，3 2C 2 ) ： 9 6 9 8 【2 武哲丽，陈群，徐志伟，等论中药复方抗肝纤维化的证治 研究E J 中医药学刊，2 0 0 6 ，2 4 ( 1 ) ：4 8 9 4 9 H D 3 T A N GJ i e T i l l g ，F A N GJ i l l g Y u a n 。G UW e i Q
31、 i ，矗，a TC e l ll I l l m u l l eR e s p o n s ei sC e n e l a t e dw i t hF i b r o s i sa n dI n - f l a m m a t o r yA c t i v i t yi nH e p a t i t i sBC i r r h o t i c s 【J W o r l d G a s t r o e n t e r o l ，2 0 0 6 ，1 2 ( 1 9 ) ：3 0 1 5 3 0 1 9 【4 2 A m m e l P ，C o u v e l a r dA ，O T t o
32、o l eD ，e t ，a R e g r e s s i o no f L i v - e rf i b r o s i sa f t e rB i l l a r yD r a i n a g ei nP a t i e n t sw i t hC h z 伽曲 P a n c r e a t i t i sa n dS t e n o s i so ft h eC o m m o nB i l eD u c t J N e w E n d l a n dJ o u r n a l ，2 0 0 1 ，3 4 4 ：4 1 8 4 2 3 5 病毒性肝炎防治方案 J 】中华肝脏病杂志，2
33、 0 0 0 ，8 ( 6 ) ： 3 2 4 3 2 9 【6 赵进军，吕志平，王晓东，等白背叶根在肝纤维化动物模 型中的抗氧化作用的实验性研究 J 】中药材，2 0 0 2 ，2 5 ( 3 ) ：1 8 5 1 8 7 7 陈玮，陈维雄，陆允敏，等川芎嗪干预大鼠实验性肝纤 维化的研究 J 世界临床药物，2 0 0 7 ，2 8 ( 9 ) ：5 2 2 5 2 5 8 马周旺，杨俊杰，程卫东，等强肝丸预防四氯化碳诱导的 大鼠肝纤维化的实验研究E J 陕西中医，2 0 0 7 ，2 8 ( 1 1 ) ： 1 5 6 1 1 5 6 3 9 杨错，邢立国，刘玉兰柴胡对大鼠实验性肝纤维化的预 防作用 J 实用药物与临床，2 0 0 5 ，8 ( 5 ) ：1 2 1 4 【1 0 】余世锋，黄贤樟，童光东不同剂量丹参注射液抗肝纤维 化临床研究 J 中国中西医结合杂志，2 0 0 4 ，2 4 ( 1 ) ：1 7 ( 本文编辑：毕永江) 万方数据