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1、7 6 8 郑州大学学报( 医学版) 2 0 0 4 年9 月第3 9 卷第5 期 促性腺激素作用下豫医无毛小鼠超排卵效果观察 杜 春燕 凸 李 洪 涛 史 崇 敏 王 纯 耀 杜 献 堂 郑州大学实验动物中 心 郑州4 5 0 0 5 2 女， 3 6 岁。 大学本科， 实验师， 研究方向: 实验动物学 关健词近交系; 豫医无毛小鼠; 超排卵 中图分类号R - 3 3 2 摘要目的: 探讨近交系豫医无毛小鼠 超排卵的最佳条件， 提高超排卵效果。方法: 3 0 只近交系 豫医无毛小鼠 随机分为3 组， 分别用5 I U , 8 I U , 1 0 I U的孕马血清促性腺激素( P M S G
2、) 和人绒毛膜促性腺激素( H C G ) ， 间隔4 8 h 注射， 比较排出卵母细胞的数量。结果与结论: 腹腔间隔4 8 h 各注射8 I U的P M S G和H C G超排卵效果最好; 各剂 量组右侧卵巢比左侧卵巢超排卵效果好( P 0 . 0 5 ) 0 S t u d y o n P M S G - s t i m u l a t e d s u p e ro v u l a t i o n i n Y u y i h a i r l e s s m i c e D U C h u n y a n , L 1 H o n g t a o L a b o r a t o r y A n
3、 i m a l C e n t e r , S H L C h o n g m i n , W A N G C h u n y a o , D U o f Z h e n g z h o u U n i v e r s i t y , Z h e n g z h o u Xi a n t a n g 4 5 0 0 5 2 Ke y w o r d s Ab s t r a c t i n b red s t r a i n ; Y u y i h a i r l e s s mi c e ; s u p e r o v u l a t i o n A i m; T o fi n d o u
4、 t t h e b e s t w a y o f s u p e r o v u l a t i o n i n Y u y i h a i r l e s s m i c e . M e t h o d s : A t o t a l o f 3 0 m i t e s w e r e d iv id e d i n t o 3 g r o u p s ra n d o m l y . 5 I U + 5 I U , S I l l + 8 1 U o r 1 0 I U + 1 0 I ll P M S G a n d H C G w e r e u s e d t o s t im
5、u la t e s u p e r o v u - l a t i o n i n Y u y i h a i r l e s s m i c e . A f t e r P M S G g i v e n o n t h e f i r s t d a y , H C G w a s i n j e c t e d o n t h e t h i r d d a y ( 4 8 h l a t e r ) . O v a w e r e fl u s h e d。 川o f t h e o v i - d u c t 1 8 h a ft e r a d m i n i s t r a t
6、 i o n o f I I C G . T h e o v a s a m o u n t o f e a c h g r o u p w a s c o m p a r e d . R e s u lt s a n d c o n c l u s i o n : T h e s u p e r o v u l a t i o n o f t h e s e c o n d g ro u p ( 8 I U + 8 I U P M S G a n d H C G, 4 8 h ) w a s t h e b e s t . T h e a m o u nt o f r i g h t o v
7、 a w a s m o r e t h a n t h a t o f t h e l e f t . h r s u p e r o v u l a t i o n . 豫医无毛小鼠是从昆明小鼠中培育出来的一种 突变系小鼠， 现已培育到第3 6代近交系， 在育种过 程中发现， 雌性无毛小鼠怀孕困难， 即使受孕产仔， 也因乳腺无泌乳能力， 导致仔鼠死亡 。同时无毛 小鼠 生理牛育 时间极短t 。为保护该资源， 作者对 其进行超排卵处理， 并比较不同剂量的激素作用下 豫医无毛小鼠的超排卵效果， 从而获得无毛小鼠超 排卵的最佳条件。 1 材料与方法 1 . 1 试剂孕马血清促性腺激素( P M
8、S G ) 1 0 0 0 I U / 支， 天津华浮生物工程有限公司， 批号: 津兽药字 ( 9 4 ) 第 5 1 0 0 4号; 人绒毛膜促性腺激素( H C G ) 5 0 0 l ti / 支， 仁 海第一生化药业有限公司， 批号 沪卫药准 字( 1 9 9 5 ) 第0 0 1 0 1 2 号; M M 。 培养液、 透明质酸 酶、 优质石蜡油， 均购自S 该 m a公司; 体积分数为 * 河南省自然科学基金资助项E l 3 1 1 0 4 3 6 1 1 0 7 5 %乙醇 1 . 2 仪器设备3 5 m m塑料平皿 ， 无菌手术器械 ( 眼科剪、 眼科镊、 钟表镊、 消毒7号针
9、头) ， 洗卵管 ( 自 制) ， 超净工作台、 体视显微镜, C O , 培养箱、 加 样器( 口 本) 。 1 . 3 实验动物近交系豫医无毛小鼠， 由郑州大学 实验动物中心提供， 雌性， 3 0 只， 6 一 1 1 周龄， 体重 2 1 g 左右。 1 . 4 超排卵过程将3 0只无毛雌性小鼠随机分为 A , B , C 3 组， 每组1 0只， 于第 1 d厂 午3 : 0 0 腹腔分 别注射P M S G ， 第3 d 下午3 : 0 0再分别注射H C C , 腹 腔注射 P M S G和H C G的剂量， A组均为 5个 I U , B 组均为8 个1 U , C 组均为1 0
10、 个I U 。第4d 上午9 : 0 0 用颈椎脱臼法处死小鼠， 在超净工作台上打开腹腔， 分别取出 双侧输卵管， 放人盛有M : 的培养皿中， 在 体视显微镜下， 用钟表镊撕开输卵管膨大部， 逸出絮 状物， 即卵母细胞一 卵丘细胞复合体。将卵母细胞- 卵丘细胞复合体收集到装有 M 2液滴的培养皿巾， 万方数据 J o u r n a l o f Z h e n gh o u U n i e r s i t y ( M e d i c a l S c i e n c e s ) S e p . 2 0 0 4 V o l . 3 9 N o . 5 7 6 9 再加人3 g / L 透明质酸酶
11、， 消融5 m i n ， 同时用加样 器轻微吹打， 用 M ,s 洗卵并计算每只豫医无毛小鼠 超排的总卵毋细胞数一 ， 左、 右侧卵巢卵母细胞数。 1 . 5 统计学处理用 S P S S 1 0 . 0软件进行统计分 析。数值变量资料以无 土 、 表不， 均数问比较采用单 因素方差分析和双因素方差分析。均数间两两比较 采用 L S D方法， 以 。二 0 . 0 5为检验水准。 2 结果 3 组超排卵结果比较见表 I 表 1 3组无毛小鼠左右侧 卵攫超排卯数 活川。 常规育种采取雄性纯合子无毛小鼠和雌性 杂合子有毛小鼠 交配 5 1 。目 前为保护该资源， 作者 刘无毛雌性小鼠进行超排卵，
12、 以获取大量的受精卵。 影响超排卵的因素很多， 主要有动物的品种品 系、 激素 剂量、 动物年龄、 健康状况等影响16 1 。 有报 道认为小鼠最适合的激素剂量为5 一1 0 I U , 注射间 隔时间为4 2 一 4 8 h 0 。激素注射剂量是否合适是 超排卵能否成功的关键。本实验结果表明， 豫医无 毛小鼠超排卵的最适激素剂量为8 I U o 本实验证明， 左、 右侧卵巢超排卵后的排卵数有 差异， 一般右侧比左侧多。这个现象在金黄地鼠的超 排卵实验中 有发现叫， 具体原因 还有待进一步分析。 组别 几 O 1 0 1 0 1 3 . 4 0士1 . 2 7 1 5 . 7 0士1 . 1
13、6 “ 1 2 _ 7 0士1 _ 4 2 1 5 . 6 0士1 . 0 7 5 2 0 . 9 0士1 . 3 7 0 0 1 5 . 5 0士2 . 2 4 5 参考文献 杜春燕， 章金涛 杜献堂， 等. 突变系无毛小鼠近交系的繁 殖性能观察 郑州大学学报( 医学版) ， 2 0 0 2 , 3 7 ( 2 ) : 1 5 9 杜春燕， 李洪涛 章金涛， 等豫医无毛小鼠寿命观察. 郑 州大学学报( 医学版) , 2 0 0 3 , 3 8 ( 2 ) : 1 9 6 田小利， 陈兰英， 息荣良主编 转基因动物原理、 技术与 应用 民春: 吉林科学技术出版社， 1 9 9 5 廉颖， 李劲
14、松， 朱子玉， 等. 影响兔超数排卵因素的研究. 中国兽医科技， 2 0 0 1 , 3 1 ( 4 ) ; 1 4 魏乱主编.医学实验动物学.成都: 四川科学技术出版 社， 1 9 9 8 . 5 0 伊亚玲， 郎景华， 张耀玲， 等 金黄地鼠 超数排卵的研究 黑龙江畜牧兽医, 1 9 9 9 , ( 7 ) : 3 ( 2 0 0 4 -05 - 1 4收稿责任编辑赵秋民) 人八FC a与 A, C比较 ， P 0 . 0 0 1 ; * 与右侧卵巢比较 . P 0 . 0 0 0 1 3 讨论 胚胎工程技术是动物品种、 品系培育、 动物资源 保存的重要手段。它是采用超数排卵的方法， 用外
15、 源激素处理雌性动物， 改变其性周期， 使之按照预定 时间超常量的排卵o f 。作者在培育无毛小鼠的过 程中发现其育种很难， 因为无毛小鼠寿命短， 平均寿 命不到I x ， 生理生育时间更短 ; 经多次实验证明 雌性无毛小鼠受孕难 ， 即使怀孕所生仔 鼠基本不成 应用人类特异性引物扩增无毛小鼠S R Y及A M 基因 王 纯 耀 ) 刘 永 波 2 )宋 国 英 ， )李 晓 文 2 )陈 辉 2 ) I ) 郑州大学实验动物中心 郑州 4 5 0 0 5 2 2 ) 郑州大学细胞生物学 与 遗传学教研室 郑州 4 5 0 0 5 2 男， 4 1 岁， 大学本科， 副教授. 研究方向: 实验
16、动物 关键词无毛小鼠; 皋丸决定基因; 生精基因; 繁殖 中图分类号R - 3 3 2 摘要目的: 了解人类 S R Y和A Z F基因与雄性无毛小鼠生精基因的相关性。方法: 应用人类特异性引物扩增 近交系无毛小鼠、 昆明小鼠, D B A小鼠, H I , C近交系小鼠的S H Y和 A Z F . , A Z F b , A Z F , 基因。结果; 4种小鼠均能扩 增出 S H Y和 A Z F . , A Z F b , A Z F c 基因， 但小鼠的 S H Y和 A Z F b 基因的Y C R产物片段大小与人类的不一致。结论: * 河南省医学科技创新人才1 . 程项目 2 0 0 1 0 9 0 7 万方数据