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1、优化流式细胞术测定保存血小板 !“#$%表达 欧阳锡林， 刘景汉， 石群， 高大勇!， “ （解放军总医院输血科， 解放军临床输血中心， 北京 !#$%5-3?/，TGR (+QB0/8!， “ （!“#$%1($； !1)“-181(“，?$80,“%$, 81“(8“ $(- A(“%:= A(:1(“%1(:，B(1C“%/1(),):1“/ )* 7;1($， 3“*“1 “1($；“!“#$%$(18$, A(:1(“%1(:，B(1C“%/14025+65-* +/ 0*-5.5) 160Z 3;) -0 ,)*6+3) NMF 56-50/；-4) .)-40060853+6 )
2、:+6+-50/ Z),) 3+,5) 0-J O);6-; ;40Z) -4+- #J! 06K *),;+/-5/) +/ !J ! 06K 7(LG +345):) -0 *,):)/- *6+-)6)-; +3-5:+-50/ ,5/8 -4) -);- *,03),)J L4) 1+:0,+6) /)8+-5:) 0, *0;5-5:) ;+.*6); Z),) *,)*+,) 10, 34)3? 01 160,);3)/3) +/-50+65-,) -4) :+655-6-;J H(D! Z+; ;) -0 5)/-513) 1( C1，+/ -4) *,)*+,) ;+.*6)
3、3+/ ) ;-)+,; +- Ca +1-), 15A) ) -4+- -45; 160Z 3“?)A 7“?)A 7:：（4$; 3JK LL);M C；0; FN, LL);M C；.+; F 3 LL);M C；4$!6J3F LL);M C；!/E/: 3- LL);M C； 4$!FE6O-NOLL);M C； 71+;%?)M C； /7I9 3N3 LL);M C Q! KNO）， 用前 FPR水浴 3P 分 钟。多聚甲醛溶液： 含 3S多聚甲醛的等渗Q! KNO E: （OR保存 3 周） 。人凝血酶： 3- T M C （:/ :Q“?#$ 血细胞分离机单采集健康献血者浓缩
4、 血小板 F- L;。 血小板 !“#$%的表达测定方法 标本处理方法将血小板标本用 FPR I: 调 节浓度至 （F- V O-） W 3-XM C， 潘生丁终浓度为 3- !L);M C； 在 8. 专用试管中加入抗 723 和抗 72FQ各 P!;， I: J-!;， OR避光保存待用； 然后加 入相应的血小板 P!;， 轻轻混匀后室温避光孵育 3P 分钟； 加 OR 3S多聚甲醛 P-!;， 避光固定 3P V J- 分钟； O, 小时内进行 8. 分析。 对照包括单纯血小板对照； 抗 723E“#E 单 染； 抗 72FQGE/ 单染， 用于校正流式细胞仪 :， 8: 和相应频道的荧
5、光参数。 流式细胞术结果分析方法 仪器校正89:$;“?)A 7, 6 , 704 425*6071+4 89 =! 704 !“#, %;21/+ 0 $ (*76 ;: 0+(71/+ 5;01*;B （:()*+ ?） ，%;21/+ 5;01*;B （:()*+ ）704 1.+* ;/+*B79 （:()*+ A）3.+0 C!“3=， ?3=或 !33=。测定相应的 +,)阳性率。 重复性取保存 ! 天的 !3 份新鲜富含血小板 血浆混合后测定 +,)阳性率， 重复 !3 次。 稳定性/ 份标本混合后分为 - 份， 按照以上 方法测定， 在 !=多聚甲醛固定后 3， 34/， )，
6、 -， ?， )- 或 -? 小时测定其 +,)阳性率。 结果 !“#$%阴性和阳性对照的选择 比较分析发现， 新鲜 *+, 全血 “#$ 标记的 % （7()*+ 0）= = .+(-48+ 95.4*5:，-./ 22;2 在有血小板 采集许可权的血站和血液中心获取较便利， 也可以 制作出良好的阴性、 阳性对照， 从而既可免购同型对 照试剂， 还可直接检验所购荧光抗体的质量， 保证实 验结果的有效性。 保证分析结果的准确性的前提是特异性而又准 确地获取血小板。)*+! 是泛血小板特异性标志物， 存在于各种激活和非激活血小板表面 - 。本研究首 先以 ?) 和 ?) 从大小和形态上 （;!）
7、 去除血小板 聚合物和其他杂质后， 再用泛血小板特异性标志物 )*+! （;59K I，FC:KCLC M$ ?NBBHLO CP H QCLR4SC, C: !“ #!#$ 5PP97H7O CP 8LH:4PN45K ,6H85658 7CB,C:5:84 H:K ,6H85658 4NT4893 8N854$ LH:4PN49C:，%& (，5K4$ E5N7C7O85 O,9:X VG，US985 )566 *9PP5L5:893 H89C: H:89X5:4$ YZPCLK :95L498O 2L544；!0(0：!#&% 欧阳锡林， 刘景汉$ 流式细胞术测定保存血小板再表达 )*+&2 方 法的建立及应用$ 中国输血杂志， &#&； !% （&） ： / 1 (! （&#! 1 #/ 1 # 收稿； &#& 1 #/ 1 #( 接受） %+优化流式细胞术测定保存血小板 )*+&+表达 万方数据