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1、医药论坛杂志2 0 0 6 年7月第2 7 卷第1 4 期 乳酸杆菌的安全性研究 李 明林海红 河南大学药学院药理教研室 摘要目的观察乳酸杆菌的急性毒性及制剂的安全性 阴道粘膜刺激及皮肤过敏试验观察乳酸杆菌的安全性。结果 开封市 4 7 5 0 0 1 ， 为临床试验提供保障。方法通过急性毒性、 给小鼠一次性灌胃或腹腔注射最大剂量， 一周内 未见小鼠有任何异常 体未见明显毒性作用 ; 家兔阴道内置入或豚鼠皮肤涂敷乳酸杆菌未见有刺激或过敏反应。结论乳酸杆菌对机 关键词乳酸杆菌 安全性 急性毒性 中图分类号: R - 3 3 2文献标识码: A文章编号: 1 6 7 2 - 3 4 2 2 ( 2
2、 0 0 6 ) 1 4 -0 0 8 8 -0 2 S t u d y o n S a f e t y o f L a c t o b a c i l l u s L I M i n g , L I N H a i h o n g P h a r m a c e u t i c a l C o l l e g e o f H e n a n U n i v e r s i t y , K a 诉n g 4 7 5 0 0 1 ， C h i n a A B S T R A C T O b j e c t i v e T o o b s e r v e a c u t e t o x i c
3、i t y a n d s a f e t y o f l a c t o b a c i l l u s . Me t h o d s s a f e - t y o f l a c t o b a c i l l u s w a s d e t e c t e d b y o b s e r v i n g a c u t e t o x i c i t y ， s t i m u l a t i o n t o m e s o v a g i n a a n d s k i n h y p e r - s e n i t y . R e s u l t s A b n o r m a l
4、 i t y o f m o u s e i n a w e e k w a s n t f o u n d a f t e r m o s t d o s a g e w a s g i v e n o n c e a d a y b y i g o r i p , s t i m u l a t i o n a n d h y p e r s e n i t y w a s n t o b s e r v e d a f t e r l a c t o b a c i l l u s w a s g i v e n t o v a g i n a a n d s k i n t o o .
5、 C o n c l u s i o n L a c t o b a c i l l u s w a s n t t o x i c t o b o d y . K E Y WO R D S L a c t o b a c i l l u s ; S a f e t y ; A c u t e t o x i c i ty 乳酸杆菌是人体内常见的有益菌， 河南大学 药物研究所对其进行分离培育研究， 使对乳酸杆 菌药用价值及相关产品的开发有了充足的材料来 源。为探讨乳酸杆菌是否能够药用， 我们对乳酸 杆菌冻干粉进行安全性研究。 1 实验材料与方法 1 . 1 实验动物 昆明小鼠， 1 8 一 2
6、 2 g ， 雌雄各半; 日 本大耳白家兔， 2 . 0 - 2 . 5 K g ， 雌性; 纯白豚 鼠, 2 5 0 一 3 0 0 g ， 雄性。均由河南省医学动物中心提 供， 合 格 证 号: 9 9 0 1 0 0 1 . 2 样品与试剂乳酸杆菌冻干粉， 每I g 含活菌 数3亿个， 由河南大学药物研究所提供， 批号: 0 0 0 0 5 0 3 ; 2 , 4 一 二硝基氯苯( D N C B ) ， 中国医药公 司北京公司经销部， 批号: 9 9 0 4 0 6 0 1 . 3 实验方法 1 . 3 . 1 急性毒性试验 I 小鼠4 0 只， 均分为2 组， 每组2 0 只， I
7、组给乳酸杆菌混悬液0 . 4 m l/ l 0 g ( 用无菌生理盐水将乳酸杆菌冻干粉配成2 5 %悬 液) , I I 组以相同途径给等容量的生理盐水， 一次 性灌胃或腹腔注射给药， 观察给药后0 - 7 d 内小鼠 存活及健康情况。 1 . 3 . 2 阴 道粘膜刺激试验 z 1 家兔1 6 只， 均分 为2 组， 每组8 只。I 组于阴道内滴人2 5 %的乳酸 杆菌混悬液0 . 5 m 1 / 只; I I 组滴人等容量生理盐水， 给药6 h 后以无菌生理盐水冲洗除去受试物， 每日 1 次， 连续7 d ， 末次给药后2 4 h 处死动物， 观察动物 阴道粘膜有无红肿、 充血等现象， 必
8、要时进行病理 切片检查。 1 . 3 . 3 皮肤过敏试验 2 1 豚鼠3 0 只， 均分为3 组， 每组1 0 只。 试验前I d 将豚鼠 背部两侧毛剪去， 每侧约3 x 3 c n ? , I 组于左侧去毛处滴2 5 %乳酸杆 菌混悬液 0 . 1 m l , I I 组 于左侧 去 毛处滴 1 % D N C B O . 1 m l , I I I 组于左侧去毛处滴生理盐水0 . 1 m 1 , 各药均于滴后6 h 用蒸馏水从给药部位洗去， 试验第 7 d 及第1 4 d 以同样方式重复给药1 次。末次给药 后第1 4 d ， 相应各组分别于右侧脱毛处滴5 %乳酸杆 菌混悬液0 . 1
9、m 1 , 0 . 1 % D N C B O . 1 m l , 6 h 后用蒸馏水 洗去 受试物， 观 察受 试物 去除 后O h , 2 4 h , 4 8 h , 7 2 h 各 组动物全身过敏及皮肤过敏反应情况。 万方数据 J o u rna l o f Me d i c a l F o r u m V o l . 2 7 N o . 1 4 J U L Y 2 0 0 6 8 9 2 实验结果 小鼠灌胃及腹腔注射给药后， 对照组及给药 组均无动物死亡， 且毛色、 活动等方面均未见异 常， 体重较给药前增加， 见表1 。 表 1 乳酸杆菌急性毒性对小鼠体重的影响( n = 2 0 )
10、 体重( X g ) 组别给药途径 剂量 ( 活菌数/ k g ) DO D7 .nU . 生理盐水 乳酸杆菌 乳酸杆菌 3 0 亿 3 0 亿 2 0 . 8. 8 2 5 . 0 2 0 . 6 . 7 2 4 . 8 2 0 . 7. 7 2 5 . 2. 2 PgP :且11 与对照组比 较， 乳酸杆菌连续给药1 周对家兔 阴道未见充血、 水肿及糜烂现象等。与对照组比 较， 乳酸杆菌对豚鼠无全身及皮肤过敏反应， 见 表2 0 表2 乳酸杆菌对豚鼠的过敏反应作用( n = 1 0 ) 红斑分值( 只)水肿分值( 只) 料证明其有致病性。本文试验结果显示， 小鼠灌 胃 及腹腔注射给乳酸杆菌
11、3 0 亿个/ k g ， 相当于人临 床用量( 每次用量含乳酸杆菌6 0 0 万个， 每日1 次) 1 2 万个/ k g 的2 5 0 0 倍， 未见有动物死亡或中毒 反应; 家兔阴道内置入乳酸杆菌1 . 5 亿个/ 只， 未见 有 任 何 刺激反应 ; 皮肤接触对豚鼠 也未有全身 或皮肤过敏反应。上述结果表明， 乳酸杆菌对动 物体无明显毒性作用。乳酸杆菌目 前已有多种制 剂应用于临床， 其胞外多糖有较好的免疫调节作 用 8 。 我 们已 有的 研究表明， 乳酸杆菌的 安全性 与其纯化程度有关， 其保存方式也关系着活性的 稳定。我们通过本实验研究考察了我们分离纯化 的乳酸杆菌的安全性， 目
12、的是提供一种临床可用 的菌种， 进一步研究其活性保存方式和其活性组 分( 如胞外多糖) ， 为临床提供更安全、 可靠的天然 治疗药物。从本实验的结果， 结合目前对乳酸杆 菌的研究状况， 我们认为我们所分离纯化的乳酸 杆菌是安全可用的， 对其深一步的研究正在按上 述设想进行。 参考文献 3 讨论 近年来随着医学微生态学的迅速发展， 微生 态制剂作为免疫赋活剂在防治疾病方面越来越受 重视 1 。 乳酸 杆菌 是健康妇女阴 道正常菌群中 优 势 菌 4 1 ， 有 实 验 证明 乳酸 杆菌有 免疫增强 作用， 可 提高机体巨噬细胞的吞噬功能， 在妇女阴道炎发 病有非常重要的生物拮抗作用 5 ,6 ，
13、 目 前无任何资 陈奇. 中药药理研究方法学. 北京: 人民卫生出版社， 1 9 9 7 : 2 7 5 卢芳国， 胡建中， 伍参荣. 阴道乳酸杆菌生物拮抗作用 的调查研究 实用预防医学， 2 0 0 1 , 8 ( 1 ) : 1 9 - 2 1 任月， 袁杰利. 乳酸杆菌及其免疫治疗作用研究进展. 中国微生物学杂志， 2 0 0 5 , 1 7 ( 0 5 ) : 3 9 2 任力， 葛凤霞， 袁小林. 乳酸杆菌对小鼠巨噬细胞受体 介导内 吞及抗肿瘤作用的 研究. 吉林医 学院学报， 1 9 9 9 , 1 9 ( 1 ) : 1 9 - 2 1 马秀英. 阴道乳酸杆菌在细胞性阴道病诊断中
14、的意义. 临床医药实践杂志， 2 0 0 4 , 1 3 ( 2 ) : 1 2 1 徐灵龙， 王知非， 崔林， 等. 乳酸杆菌对大肠埃希菌拮抗 作用的 研究. 电 子显 微学报， 2 0 0 5 , 2 4 ( 4 ) : 4 0 1 王丽莉， 陈其御. 人阴道乳酸杆菌的优选和鉴定. 皖南 医学院学报， 2 0 0 5 , 2 4 ( 2 ) : 9 4 许启泰， 张瑜， 杜钢军， 等. 嗜酸乳杆菌胞外多糖对小鼠 免 疫功能的 影响. 中国 药理学通 报， 2 0 0 4 , ( 1 2 ) : 8 5 - 8 7 2 0 0 6 -0 4 -0 6 收稿 ( 接8 7页) 参考文献 常 玉
15、 英， 欧 阳 钦， 胡 仁 伟， 等 . 我 国 炎 症 性 肠 病 诊 断 的 文5 献复习. 四川医学， 2 0 0 5 , 2 6 ( 4 ) : 3 7 3 曹友平. 综合疗法治疗U C 4 3 例. 新中医， 2 0 0 5 , 3 7 ( 3 ) : 8 9 田f， 俞腾飞， 杜文华， 等. 溃疡性结肠炎的药物治疗进 展 药学进展， 2 0 0 5 , 2 4 ( 3 ) : 2 1 2 吴焕淦， 黄臻， 刘慧荣， 等. 针灸对大鼠U C结肠上皮细 胞凋亡 影响的 试验研究. 中国针灸， 2 0 0 5 , 2 5 ( 2 ) ; 1 1 9 R o b e r t O d z e r . D i a g n e s t i c P r o b l e m a n d a d v a n c e s i n i n fl m a - t a ry b o w e l d i s e a s e s . M o d P a t h o l , 2 0 0 3 ， 1 6 ( 4 ) ; 3 4 7 - 3 5 8 2 0 0 6 -0 3 - 2 0收稿 万方数据