分子佐剂C3D3与HCGβ基因融合增强HCGβ基因疫苗体液免疫应答.pdf

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1、 生殖免疫学 分子佐剂 C3d3 与 hCG 基因融合增强 hCG基因疫苗体液免疫应答 余敏赵欣荣李大金王秀丽袁敏敏姚晓英 （复旦大学附属妇产科研究所生殖免疫室， 上海 200011） 中国图书分类号R392.3文献标识码A文章编号1000-484X （2005） 07-0513-05 摘要 目的： 提高 hCG 在真核细胞中的表达效率， 观察分子佐剂 C3d3 增强 hCG基因疫苗的体液免疫应答。方法： 构建带有增强目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽 （DPPISS） 的高效真核表达质粒 pCMV4-hCG-C3d3、 pCMV4-hCG和 pCMV4-C3d3。分别用 pCMV4-DPP

2、ISS-hCG-C3d3、 pCMV4-DPPISS-hCG和 pCMV4-DPPISS-hCG联合 pCMV4-DPPISS-C3d3 免疫 BALB/c 小鼠， 各组免疫剂量分别为 5、 10、 50、 100、 500 pmol， 间隔 3 周相同剂量加强免疫 1 次。间接 ELISA 法分析免疫小鼠外周 血抗 hCG抗体动态变化以及 IgG 亚型。结果： 含有 DPPISS 的 pCMV4-hCG -C3d3 较无 DPPISS 的 pCMV4-hCG-C3d3 在 COS-7 细 胞中的表达效率明显提高。50 pmol 是 BALB/c 小鼠 hCG基因免疫的最佳免疫剂量。C3d3

3、使得 BALB/c 小鼠 hCG的免疫原 性增强了 400 倍。hCG-C3d3 免疫组 IgG1/IgG2a 比值明显高于 hCG免疫组和 hCG与 C3d3 联合免疫组。结论： 分子佐剂 C3d3 与 hCG基因融合能够显著增强 hCG基因避孕疫苗的体液免疫应答及抗体类型转换。 关键词 分子佐剂 C3d3； hCG基因疫苗； 体液免疫 Gene fusion of molecular adjuvant C3d3 to hCG enhances humoral response to the hCG DNA vaccine YU Min， ZHAO Xin-Rong， LI Da-Jin，

4、WANG Xiu-Li， YUAN Min-Min， YAO Xiao-Ying. Laboratory for Reproductive Im- munology， Institute of Obstetrics and Gynecology， Fudan University， Shanghai 200011， China Abstract Objective： To increase the expression efficiency of hCGin eukaryotic cell and to enhance humoral response to the hCG DNA vacci

5、ne via the molecular adjuvant C3d3. Methods： The eukaryotic expression plasmids of pCMV4-hCG-C3d3， pCMV4-hCGand pCMV4-C3d3 with dog pre-pro-insulin signal sequence （DPPISS）were successfully constructed by way of molecular cloning.BALB/c mice were inoculated intramuscularly with pCMV4-DPPISS-hCG -C3d

6、3， pCMV4-DPPISS-hCGalone and pCMV4-DPPISS-hCGplus pCMV4-DPPISS- C3d3 respecitively.The immunizing dosage was 5， 10， 50， 100， 500 pmol respectively in each group.The immunized mice got a boost immuniza- tion in the same dosage and immunizing pathway in 3 week interval.The titers of serum and subclass

7、es of anti-hCG IgG antibody were deter- mined by indirect enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） . Results： The expression efficiency of pCMV4-hCG -C3d3 with DPPISS was higher significantly than that of pCMV4-hCG -C3d3 without DPPISS in COS-7 cell.It was found that 50 pmol was the most suitable d

8、osage for hCG DNA immunization to BALB/c mice.The anti-hCGantibody titers of pCMV4-DPPISS-hCG-C3d3 immunization was 400-fold higher than that of pCMV4-DPPISS-hCG immunization in BALB/c mice.The IgG1/IgG2a ratio of the hCG-C3d3 immunizing group was apparently higher than that of the hCG immunizing gr

9、oup and that of the hCGplus C3d3 immunizing group.Conclusion： Gene fusion of molecular adjuvant C3d3 to hCGcan significantly increase the antigen-specific antibody response， and promote antibody IgG subclass turnover in hCGDNA vaccine. Key words Molecular adjuvant C3d3； hCGDNA vaccine； Antibody resp

10、onse 免疫避孕疫苗的研究主要集中在三类靶抗原， 即生殖激素抗原、 卵透明带抗原和精子抗原。人绒 毛膜促性腺激素 （hCG） 是受精后第 6 天即开始分泌 的一种妊娠期一过性激素， 阻断 hCG 的生物学作 用， 可不在干扰其它生殖生物学功能的情况下终止 本课题为国家自然科学基金 （30271235） 、 上海市自然科学基金 （00ZB14058） 、 教育部博士学科点专项科研基金 （9941） 及卫生部优 秀青年人才专项科研基金 （97031） 资助项目 作者简介： 余敏 （1978 年 - ） ， 女， 生殖免疫学博士研究生； 指导教师及通讯作者： 李大金 （1957 年 - ） ， 男

11、， 博士生导师， 主要从 事生殖免疫学研究。 妊娠。因此， hCG 是免疫避孕较为理想的靶抗原。 目前， 以亚基为基础的 hCG 避孕疫苗是研究得最 为成熟的一种免疫避孕疫苗。但是， 传统的 hCG 避孕疫苗存在着免疫效果个体差异大以及外源性载 体介导的表位抑制效应等问题， 导致其抗生育作用 不完全。因此， 进一步增强具有抗生育作用的 Th2 型及体液免疫效应， 减弱 Th1 型及 CTL 效应， 是现阶 段 hCG 避孕疫苗的追求目标。 血清补体蛋白 C3 是宿主先天性免疫防御系统 的中心分子， 在补体活化的经典途径、 替代途径以及 甘露聚糖结合凝集途径中均发挥枢纽作用。C3d 是 315余

12、敏等分子佐剂 C3d3 与 hCG基因融合增强 hCG基因疫苗体液免疫应答第 7 期 补体 C3 分子不能再被蛋白酶裂解的最小片段， 能与 抗原保持结合。C3d 是迄今为止唯一被发现具有选 择性增强体液免疫效应的分子佐剂 1-3 。本室在前 期工作中， 引入选择性增强体液免疫效应的新型分 子佐剂 C3d3， 成功构建了 hCG 基因避孕疫苗 pcD- NA3-hCG -C3d3， 通过免疫 BALB/c 小鼠， 显示分子 佐剂 C3d 能够实现免疫效应从 Th1 型细胞免疫向 Th2 型体液免疫的偏倚 4， 5 。本研究在此基础上， 选 择高效真核细胞表达质粒 pCMV4， 构建含有能够增 强

13、目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽 （dog pre-pro-insulin signal sequence， DPPISS） 的 hCG 及携 有分子佐剂 C3d3 的 hCG 基因避孕疫苗， 分别免疫 BALB/c 小鼠。通过测定免疫小鼠外周血抗 hCG 抗 体效价的动态变化以及抗 hCG IgG 抗体亚型， 进一 步观察了 C3d3 显著增强 hCG 基因避孕疫苗特异性 体液免疫应答及最佳免疫剂量， 为研制高效安全的 hCG 基因避孕疫苗奠定基础。 1材料与方法 1.1材料真核细胞表达质粒 pCMV4 由 Dr. DW Russell（ SouthwesternMedicalCente

14、r，Universityof Texas） 馈赠， 含 3 个拷贝小鼠 C3d 的质粒 pSG5. C3d3. YL 由 Dr. Paul W. Dempsey （School of Clinical Medicine， University of Cambridge） 馈赠， pCMV4-hCG - C3d3 真核表达质粒为本实验室前期构建 4 ， 真核表 达载体 pcDNA3 和大肠杆菌菌株 E. coli Top10由复旦 大学妇产科研究所分子生物学实验室保存， PCR 试 剂、 DNA 合成酶、 内切酶和连接酶等购自 Takara 公 司， 质粒大量抽提及胶回收试剂盒购自 QIAgen

15、 公 司， 引物合成及测序分析由上海博亚生物技术有限 公司完成， COS-7 细胞株由复旦大学医学院病理教 研室提供， DMEM 培养基购自 Gibco BRL 公司， TfxTM- 10 Reagent 转染试剂盒购自 Promega 公司， 偶联辣根 过氧化物酶 （HRP） 的羊抗小鼠 IgG （H + L） 、 羊抗小鼠 IgG1、 羊抗小鼠 IgG2a 均购自 Southern Biotechnology As- sociates， Inc， TMB 底物为 Sigma 公司产品， BALB/c 小鼠 购自中国科学院上海分院实验动物中心。 1.2pCMV4-DPPISS-hCG 和 p

16、CMV4-DPPISS-hCG - C3d3 的构建PCR 方法在 hCG cDNA 两端分别引 入 Bgl和 Xba位点， 将 hCGcDNA PCR 产物纯 化后以 Bgl/Xba双酶切后再纯化， 同时以 BamH和 Xba双酶切 pSG5.C3d3.YL。因内切酶 BamH和 Bgl具有相同的粘性末端， hCG cDNA 插入 pSG5.YL 载体的双酶切位点、 DPPISS 的下游串 连构建成质粒 pSG5. YL-DPPISS-hCG 。将 DPPISS- hCG 片段从 pSG5. YL-DPPISS-hCG的 EcoR和 Xba位点之间切出， 同时以 EcoR和 Xba双酶 切

17、pcDNA3， 连接得到 pcDNA3-DPPISS-hCG 质粒。 以 Hind和 Xba双酶切从 pcDNA3-DPPISS-hCG 得到 DPPISS-hCG 片段， 同时以 Hind和 Xba双 酶切载体 pCMV4， 将 DPPISS-hCG 片段插入 pCMV4 的真核启动子 CMV 下游， 得到质粒 pCMV4-DPPISS- hCG 。 以 pSG5. YL-DPPISS-hCG 为模板， PCR 方法在 DPPISS-hCG 片段的 3端引入 BamH位点， 纯化带 有 BamH位点的 DPPISS-hCGcDNA 的 PCR 产物， 以 EcoR/BamH双酶切， 同时以

18、EcoR/Bgl 双酶切 pSG5.C3d3.YL。因内切酶 BamH和 Bgl 具有相同的粘性末端， 连接得到 pSG5-DPPISS-hCG - C3d3-YL cDNA。以 EcoR和 Xba双酶切质粒 pSG5-DPPISS-hCG -C3d3-YL 得到 DPPISS-hCG -C3d3 片段， 同时以 EcoR和 Xba酶切载体 pcDNA3， 连 接得到 pcDNA3-DPPISS-hCG -C3d3。以 Hind和 Xba双酶切从质粒 pcDNA3-DPPISS-hCG -C3d3 得 到 DPPISS-hCG -C3d3 片段， 同时以 Hind和 Xba 双酶切载体 pCM

19、V4， 将 DPPISS-hCG -C3d3 片段插入 pCMV4 的真核启动子 CMV 下游， 得到质粒 pCMV4- DPPISS-hCG -C3d3. 1.3细胞转染及表达效率比较pCMV4-DPPISS- hCG -C3d3 和 pCMV4-hCG -C3d3 重组质粒转染 COS- 7 细胞按照 TfxTM-10 Reagent 转染试剂盒说明书操 作。用 脂 质 体 法 将 pCMV4-DPPISS-hCG -C3d3 和 pCMV4-hCG -C3d3 在 1.33 pmol 及 2.66 pmol 两种转 染剂量下， 分别转染 1.0 105COS-7 细胞。培养 72 小时后

20、， 收集上清， 采用 Beckman-Coulter 免疫化学发光 法测定其 hCG 含量， 以比较两种质粒的表达效率。 1.4质粒抽提按照 QIAgen 质粒抽提试剂盒说明书 操作。质粒纯度及浓度采用紫外分光光度计测 OD260、 OD280光密度值确定。 1.5动物免疫BALB/c 小鼠 （鼠龄 6 8 周， 体重 20 22 g） 随机分为 3 组， 分别用质粒 pCMV4-DP- PISS-hCG -C3d3、 pCMV4-DPPISS-hCG 及 pCMV4-DP- PISS-hCG 联合 pCMV4-DPPISS-C3d3 免疫。每组质 粒组免疫剂量分别为 5、 10、 50、 1

21、00、 500 pmol。每一 免疫剂量组样本量均为 5， 左后腿胫前肌注射免疫， 3 周后相同剂量加强免疫一次。 1.6抗 hCG IgG 抗体效价分析 初次免疫及加强 免疫后每周于小鼠眼眶后静脉丛采血。每次采血 100 150l， 分离血清 20 25l， - 20贮存待测。 用间接酶联免疫吸附法 （ELISA） 测定抗 hCG IgG 抗 415中国免疫学杂志 2005 年第 21 卷 体效价。用 hCG 抗原包被 96 孔酶标板， 包被浓度为 0.5g/ml。封闭后复孔加入 1:100 1:100 000 系列 稀释的待测小鼠血清， 二抗为偶联 HRP 的羊抗小鼠 IgG （H + L

22、） ， H2O2-TMB 系 统 显 色， 酶 标 仪 读 取 OD450 nm值。样品 OD 值/PBS 阴性对照 OD 值 2.1 为阳性， 抗血清最高稀释度呈阳性者， 其稀释度的倒 数即为抗血清效价。 1.7抗 hCG IgG 抗体亚型检测 以 HRP 标记的羊 抗小鼠 IgG1 或者 IgG2a 为第二抗体， 采用间接 ELISA 法 （同上） 检测加强免疫后 2 周各组小鼠血清 抗 hCG IgG1、 IgG2a 水平。 1.8统计学方法应用统计软件 SPSS 11.0 进行结 果分析。 2结果 2.1pCMV4-DPPISS-hCG 和 pCMV4-DPPISS-hCG - C3d

23、3 的构建与鉴定带有 DPPISS 的质粒 pCMV4- hCG -C3d3、 pCMV4-hCG 和 pCMV4-C3d3 经酶切鉴 定的电泳图谱， 见图 1。酶切及测序结果证实， 目的 基因克隆入真核细胞表达质粒正确。 2.2pCMV4-DPPISS-hCG -C3d3 在 COS-7 细胞的表 达效率图 2 显示， COS-7 细胞能有效表达相应融 合 蛋 白，且 pCMV4-DPPISS-hCG -C3d3 较 pCMV4- hCG -C3d3 表达效率明显提高 （P 0.01） 。 2.3各组质粒免疫效力的比较ELISA 结果显示 pCMV4-DPPISS-hCG -C3d3 免疫组

24、中， BALB/c 小鼠 外周血抗 hCG 抗体的产生在初次接种后第 2 周达 到高峰， 以后逐渐下降， 加强免疫后抗体效价再次升 高， 于第 5 周左右达到高峰， 并维持在较高水平。 pCMV4-DPPISS-hCG 和 pCMV4-DPPISS-hCG 联 合 pCMV4-DPPISS-C3d3 免疫组， 初次免疫后产生的抗 hCG抗体水平较低或者在加强免疫后才见抗体生 成， 其 中 以 pCMV4-DPPISS-hCG 联 合 pCMV4-DP- PISS-C3d3 免疫所产生的体液免疫应答能力最弱， 见 图 3。 结果还显示， 当免疫剂量为5 pmol 时， 各免疫组 小鼠均检测不到抗

25、 hCG 抗体生成。三组质粒免疫 组中， 随着免疫剂量的增高， 抗体效价均呈上升趋 势， 均在 50 pmol 的免疫剂量时呈现最强的体液免疫 效应。此后再增加免疫剂量， 并不能使体液免疫应 答能力相应增加， 见图 3。当免疫剂量为 50 pmol 时， BALB/c 小鼠 pCMV4-DPPISS-hCG -C3d3 免疫组 加强免疫后抗体滴度峰值达 1:10 000 （104） ， 分别是 pCMV4-DPPISS-hCG 组的 400 倍和 pCMV4-DPPISS- hCG + pCMV4-DPPISS-C3d3 组的 1 667 倍， 见图 4。 2.4各组质粒抗 hCG IgG 抗

26、体亚型的比较 加强 免疫后 2 周， 50 pmol 各组质粒免疫组小鼠血清抗 hCG IgG1、 IgG2a 水平和 IgG1/ IgG2a 比值， 见图 5、 表 1。 和 pCMV4-DPPISS-hCG 组 及 pCMV4-DPPISS- hCG 联合 pCMV4-DPPISS-C3d3 组相比， pCMV4-DP- PISS-hCG -C3d3 组 的 抗 体 为 IgG1 抗 体 亚 型， 而 pCMV4-DPPISS-hCG 免疫组则不然， 说明 C3d3 能够 明显促进 Th2 型体液免疫应答。 图 1携有 DPPISS 的 pCMV4-hCG -C3d3、 pCMV4-hCG

27、和 pCMV4-C3d3 质粒酶切鉴定 Fig.1The identification of pCMV4-hCG-C3d3，pCMV4- hCGand pCMV4-C3d3 with DPPISS with restriction endonucleases Note： Lane 1.The DL2000 marker； Lane 2.The digested products of pCMV4- DPPISS-hCGwith Hindand Xbahave two bands with sizes of 4.9 kb and 695 bp， corresponding to pCMV4 an

28、d DPPISS-hCG； Lane 3.The digested products of pCMV4-DPPISS-hCG-C3d3 with Hind and EcoRhave two bands with sizes of 4.9 kb and 3.6 kb， corre- sponding to pCMV4 and DPPISS-hCG-C3d3； Lane 4.The digested products of pCMV4-DPPISS-C3d3 with Hindand EcoRhave two bands with sizes of 4.9 kb and 2.9 kb， corre

29、sponding to pCMV4 and DPPISS-C3d3； Lane 5.The digested product of pCMV4 with Hind has one band with the size of 4.9 kb， corresponding to pCMV4； Lane 6.TheHindmarker. 图 2 pCMV4-DPPISS-hCG-C3d3 在 COS-7 细胞中的表达 效率 Fig.2Exressing efficiency of pCMV4-DPPISS-hCG-C3d3 in COS-7 cell Note： 1）Compared with the

30、 other group， P 0.01. 515余敏等分子佐剂 C3d3 与 hCG基因融合增强 hCG基因疫苗体液免疫应答第 7 期 图 3 BALB/c 小鼠三种质粒不同剂量免疫组 hCG抗血清效价的动态变化 Fig.3The dynamics of anti-hCGantibody titer of different doses in three groups of BALB/c mice Note：.The boost time. 图 4 50 pmol 不同质粒免疫组 BALB/c 小鼠 hCG抗血清 效价的比较 Fig.4The comparison of anti-hCGan

31、tibody titer of the dif- ferent immunizing groups at 50 pmol dosage in BALB/c mice Note：.The boost time； *.Compared with other groups， P 0.05. 图 5 50 pmol 各组质粒免疫组小鼠血清抗 hCG IgG1、 IgG2a 水平 Fig.5The IgG1， IgG2a level of anti-hCG antibody in the sera of different groups at the dosage of 50 pmol at secon

32、d week after boost Note：*.Compared with the other groups， P 0.01. 表 1 加强免疫后 2 周， 50 pmol 各组质粒免疫组小鼠血清抗 hCG IgG1/IgG2a 比值 Fig.1The ratio of IgG1/IgG2a of anti-hCG antibody in the sera of different groups at the dosage of 50 pmol at sec- ond week after boost GroupsIgG1IgG2aIgG1/IgG2a pCMV4-hCG-C3d31:10

33、4.21:102.640 pCMV4-hCG1:101.81:101.24 pCMV4-hCG+ pCMV4-C3d31:101.21:101.6 3讨论 C3d 与 B 细胞和滤泡树突状细胞 （FDC） 上的受 体 （CR2， CD21） 的相互作用对于正常体液免疫应答 的诱导和维持至关重要 6 。自从 1996 年 Dempsy 等 1 首次报道 C3d 是一个能显著增强体液免疫效力 的分子佐剂以来， 此后许多研究相继证实 C3d 是具 有巨大潜能的疫苗佐剂。分子佐剂 C3d 通过与抗原 分子的偶联， 能够提高抗原的免疫原性， 降低 B 细 胞的活化阈， 增强免疫应答的强度。虽然 Sani

34、pa 等 7 提出一个拷贝的 C3d 分子可以抑制免疫效应， 但他们同时也肯定了 2 3 个拷贝的 C3d 分子增强 体液免疫应答的能力。 本研究首先成功构建了含有增强目的基因表达 效率的狗胰岛素前原信号肽 （DPPISS） 的 pCMV4- hCG -C3d3 基 因 疫 苗， 通 过 与 前 期 无 DPPISS 的 pCMV4-hCG -C3d3 质粒同时转染真核 表 达 系 统 COS-7 细胞的比较分析， 显示在两种不同剂量下， 含 DPPISS 的 pCMV4 质粒表达效率均较不含 DPPISS 的 pCMV4 质粒显著提高。 615中国免疫学杂志 2005 年第 21 卷 为了验

35、证分子佐剂 C3d 增强 hCG 基因避孕疫 苗体液免疫效应， 我们对此基因疫苗的免疫效果进 行了比较分析。结果显示， 各剂量组 BALB/c 免疫 小鼠中， 质粒 hCG -C3d3 组诱导生成的抗 hCG 抗体 的出现时间和抗体效价均明显早 （高） 于 hCG 组和 hCG 与 C3d3 联合免疫组。各质粒免疫组在 5 pmol 剂量时均无法诱导机体产生抗 hCG 抗体， 说明该免 疫剂量不足以刺激机体产生有效地免疫应答。随着 剂量增加， 抗 hCG 抗体效价逐渐提高， C3d3 的佐剂 作用逐渐显现， 显示 C3d3 分子佐剂提高 hCG 免疫 原性的作用呈现剂量依赖性， 于 50 pm

36、ol 时达到峰 值， 此时其佐剂作用最为明显， 其后再增加免疫剂 量， 并不能诱导机体更强的免疫应答， 说明抗原的饱 和性影响机体的免疫应答。 为了进一步研究 C3d3 选择性增强体液免疫原 性的效力， 我们检测了加强免疫后 2 周， 50 pmol 各 组质粒免疫组小鼠血清抗 hCG IgG1、 IgG2a 水平。 hCG -C3d3 组 IgG1/ IgG2a 为 40， 明显高于 hCG 组 （IgG1/ IgG2a = 4） 和 hCG 与 C3d3 联合免疫组 （IgG1/ IgG2a = 1.6） ， 结果表明了 C3d3 显著促进 Th2 型体液 免疫及抗体亚型转换。 C3d 分

37、子佐剂作用的可能机制是： C3d 偶联抗原 增强了 B 细胞、 FDC 等 CR2+细胞对抗原的摄取； 通过 影响 CD21/CD19 信号传导复合物， 促进 B 细胞的活 化； 通过滤泡树突状细胞 CD21 受体， 可维持抗原停留 时间， 促进抗体亲合力的成熟， 诱导记忆型 T 细胞的 产生， 维持免疫记忆； C3d/CD21/CD19 复合物的形成， 上调了 B 细胞表面 B7-1 （CD80） 、 B7-2 （CD86） 的表达， 进一步增强了 B 细胞与 T 细胞的相互作用 1， 8， 9 。 本研究结果表明， C3d3 使得 BALB/c 小鼠 hCG 的免疫原性增强了 400 倍，

38、 C3d3 在 pCMV4-DPPISS- hCG -C3d3 50 pmol 免疫剂量时显示出最强的佐剂作 用， 明显优于我们在前期研究中的免疫效果 10 ， 这 可能因为内含狗胰岛素前原信号肽增强目的基因的 体内表达效率之故。分子佐剂 C3d3 能够显著增强 hCG 基因避孕疫苗的体液免疫原性， 这将有助于我 们对 hCG -C3d3 基因避孕疫苗的深入研究， 以期最 终适合临床应用。 4参考文献 1Dempsey P W， Allison M E D， Akkarajuet S et al.C3d of complement as a molecular adjuvant： bridgi

39、ng innate and acquired immunityJ . Sci- ence， 1996； 271： 348-350. 2Ross T M， Xu Y， Bright R A et al. C3d enhancement of antibodies to hemagglutinin accelerates protection against influenza virus challenge J . Nat Immunol， 2000； 1 （2） ： 127-131. 3Ross T M， Xu Y， Green T D et al. Enhanced avidity matu

40、ration of anti- body to human immunodeficiency virus envelope： DNA vaccination with gp120-C3d fusion proteinsJ . AIDS Res Hum Retroviruses， 2001； 17 （9） ： 829-835. 4赵欣荣， 李大金， 蔡立荣 et al.分子佐剂 C3d 增强 hCG基因免疫 体液免疫效应J .中国免疫学杂志， 2003； 19 （9） ： 619-624. 5赵欣荣， 李大金， 袁敏敏 et al.分子佐剂 C3d 增强人绒毛膜促性腺 激素基因避孕疫苗的免疫效应

41、及转变免疫应答模式的研究 J .中华医学杂志， 2003； 83 （21） ： 1906-1909. 6Carroll M C. The role of cmplement in B cell activation and tolerance J .Adv Immunol， 2000； 74： 61-88. 7Suradhat S， Braun R P， Lewis P J et al. Baca-Estrada fusion of C3d molecule with bovine rotavirus VP7 or bovine herpesvirus type 1 glycopro- tei

42、n D inhibits immune responses following DNA immunizationJ . Vet Immunol Immunopathol， 2001； 83： 79-92. 8Hess M W， Schwendinger M G， Eskelinen E L et al. Tracing uptake of C3dg-conjugated antigen in B cells via complement receptor type 2 （CR2， CD21） J .Blood， 2000； 95 （8） ： 2617-2623. 9Konozo Y， Abe

43、R， Konozo H et al. Cross-linking CD21/CD35 or CD19 increases both B7-1 and B7-2 expression on murine splenic B cellJ .J Immunol， 1998； 160 （4） ： 1565-1572. 10赵欣荣， 李大金， 蔡立荣 et al. 真核细胞表达质粒 pCMV4 增强 hCG-C3d3 DNA 疫苗的表达效率和免疫效力J .中国免疫学杂 志， 2004； 20 （4） ： 228-230. 收稿 2004-09-30修回 2005-01-10 （编辑徐杰） 征订启事 上海

44、实验动物科学 征稿征订启事 上海实验动物科学 是我国实验动物科学领域第一本专业期刊， 创刊于 1981 年。20 多年来刊出有关实验动物和动物实 验的各类文稿近 2000 篇， 内容主要包括： 实验动物遗传育种、 饲养管理、 微生物控制、 人类各种疾病动物模型制作及应用、 动物 实验方法和技术、 人类与动物生理、 解剖、 病理、 毒理等方面的比较研究。 本刊已被国内外多种数据库如：Chemical Abstracts 、 中国生物医学文献数据库、 中国学术期刊综合评价数据库、 中文科技 期刊数据库等收录， 并已成为 中国期刊网 、“万方数据-数字化期刊群” 等的入网期刊。 欢 迎 投 稿 、订 阅 ！ 地址： 上海市徐汇区斜土路 2140 号邮编： 200032电话： 64184195， 64049215-2502、 2503 E-mail： http： / /SHSY.C 715余敏等分子佐剂 C3d3 与 hCG基因融合增强 hCG基因疫苗体液免疫应答第 7 期