再造组织工程尿路移行上皮组织的实验研究.pdf

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1、再造组织工程尿路移行上皮组织的实验研究再造组织工程尿路移行上皮组织的实验研究 侯卫平1袁发焕1王常勇2郭希民2叶本兰1赵强2 【摘 要】目的采用组织工程技术,将培养扩增的膀胱移行上皮细胞与可降解的聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物 ( p o l y l a c t i c a l / g l y c o l i ca c i dc o p o l y me r ,P L G A)支架材料复合并植入裸鼠体内进行培育,探讨构建尿路移行上皮组织的可 行性。方法取幼兔膀胱,机械分离与酶消化法获取膀胱移行上皮细胞,并在体外行原代培养与传代扩增,将第4 5 代扩增的上皮细胞接种至8个P L G A聚合材料的表面作

2、为实验组, 4个单纯支架材料作为对照组。实验组:细胞材料复合 体培育4周和8周各4个,对照组:单纯支架培育4周和8周各2个,分别植入各组裸鼠体内进行培育,按各时间点取出标 本后进行大体观察、组织学及免疫组织化学检测。结果实验组标本经HE和马森染色, 4周显示在材料表面形成数层 上皮细胞; 8周移行上皮细胞进一步增殖形成上皮组织,抗角蛋白免疫组织化学染色,胞浆呈棕黄色阳性。对照组4周和 8周经HE染色材料表面见少量成纤维细胞沉积,马森染色呈蓝色,经抗角蛋白免疫组织化学染色为阴性。 结论 采用组织工程技术可再造人尿路移行上皮组织,为尿路组织工程进一步实验研究奠定了基础。 【关键词】 组织工程膀胱移

3、行上皮细胞聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物 中图分类号:Q8 1 3 . 1 R 3 1 8文献标识码: A R E C O N S T R U C T I O N O F U R O T HE L I U M T I S S U E U S I N G I S S U E - E N G I N E E R I N G T E C HN I Q U E /HO U We i p i n g , Y UAN F a h u a n , WANGC h a n g y o n g ,e t a l .Ki d n e yC e n t e ro fP L Aa n dDe p a r t e me n

4、t o fNe p h r o l o g y ,Xi n q i a oHo s p i t a l , T h i r dMi l i t a r yMe d i c a l Un i v e r s i t y ,C h o n g q i n g ,4 0 0 0 3 7 , P.R . C h i n a C o r r e s p o n d i n ga u t h o r : WANGC h a n g y o n g , E - ma i l : wc y 2 0 0 0 y a h o o . c o m 【 A b s t r a c t 】O b j e c t i v

5、 e T oe v a l u a t et h ef e a s i b i l i t yo fr e c o n s t r u c t i o no fu r o t h e l i u m t i s s u ei nv i v ou s i n gt i s s u e - e n g i n e e r i n gt e c h n i q u e .Me t h o d sT h eu r o t h e l i u m c e l l swe r eo b t a i n e df r o m y o u n gr a b b i t ,b l a d d e rb yme

6、c h a n i c a l a n d e n z y med i g e s t e dme t h o d s .Af t e re x p a n d e di nv i t r o ,t h e4 t ht o5 t hg e n e r a t i o nu r o t h e l i u m c e l l swe r es e e d e do n t ot h e s u r f a c eo f8P o l y l a t i c a l / g l y c o l i ca c i dc o p o l y me rp o l y me r , t h ep o l y

7、 me rma t r i xwi t h o u ts e e d i n gc e l l ss e r v e da sc o n t r o l g r o u p .At o t a l o f 8c e l l - p o l y me r s c a f f o l d s a n d4s i mp l ys c a f f o l d s we r es e p a r a t e l yi mp l a n t e di n t os u b c u t a n e o u s p o c k e t s o f a t h y mi cmi c e .T h ee x p

8、e r i me n t g r o u p si n c l u d e dc e l l - p o l y me rs c a f f o l d s4we e k sa n dc e l l - p o l y me rs c a f f o l d s8we e k s .T h e c o n t r o l g r o u pi n c l u d e ds i mp l ys c a f f o l d4we e k sa n ds i mp l ys c a f f o l d8we e k s . Af t e r4a n d8we e k s ,t h es p e c

9、i me n swe r e o b t a i n e da n de x a mi n e db yg r o s si n s p e c t i o n ,h i s t o l o g i c a l l ya n di mmu n o h i s t o c h e mi c a l l y .R e s u l t s T h er e s u l t so f HEa n d Ma s s o ns t a i n i n gs h o we dt h a t t h ep o l y me rwe r ec o v e r e db yu r o t h e l i u m

10、c e l l sl a y e r sa n dc e l l sl a y e r si n c r e a s e dma r k l yi n e x p e r i me n t a lg r o u p .I mmu o c y t o c h e mi c a ls t u d i e sr e v e a l e dt h a tt h ec e l l swe r es t a i n e dp o s i t i v e l yf o ra n t i - c y t o k e r a t i n s ( AE 1 / AE 3 )i ne x p e r i me n

11、t a l g r o u p .F i b e rt i s s u ed e p o s i t i o nwe r ef o u n do nt h es u r f a c eo f p o l y me r si nc o n t r o l g r o u pb y HE a n dMa s s o ns t a i n i n g .I mmu n o c y t o c h e mi c a ls t a i n i n go fi mp l a n t ss h o we dt h en e g a t i v er e s u l tf o rc y t o k e r a

12、 t i n si n c o n t r o lg r o u p . C o n c l u s i o nI ti s f e a s i b i l i t y t h a tr e c o n s t r u c t i o n o fu r o t h e l i u m t i s s u e u s i n g t i s s u e - e n g i n e e r i n g t e c h n i q u e , wh i c hp r o v i d e sb a s i cu n d e r s t a n d i n g sf o rf u r t h e rd

13、e v e l o p me n to ft h eb l a d d e ra n du r e t e r a lt i s s u ee n g i n e e r e d r e s e a r c h . 【 Ke yw o r d s 】T i s s u ee n g i n e e r i n gB l a d d e ru r o t h e l i u m c e l lP o l y l a c t i / g l y c o l i ca c i dc o p o l y me r F o u n d a t i o ni t e m:Na t i o n a l Na

14、 t u r a l S c i e n c eF o u n d a t i o no f C h i n a ( 3 0 1 7 0 2 5 6 ) 多种输尿管、膀胱及尿道疾病最终需要进行外科 修复重建术,理论上自体的泌尿系组织是修复重建尿 路的最佳移植物,同时可避免免疫排斥等并发症 1 。实 验和临床表明应用膀胱黏膜修复输尿管、尿道下裂可 基金项目:国家自然科学基金资助项目( 3 0 1 0 2 5 6 ) 作者单位: 1第三 军 医 大 学 新 桥 医 院 全 军 肾 病 中 心 (重 庆, 4 0 0 0 3 7 ) ; 2军事医学科学院基础医学研究所 通讯作者:王常勇,副研究员,研

15、究 方 向:软 骨 等 组 织 工 程 研 究, E - ma i l : wc y 2 0 0 0 y a h o o . c o m 取得良好效果 2 , 3 。但由于尿路组织来源有限使其在临 床外科重建中的应用受到限制。组织工程技术的发展 应用,可能最终解决泌尿系组织来源受限问题,这将为 泌尿系外科重建提供最佳的修复材料 4 。组织工程是 跨学科的新领域,它是应用工程学和生命科学的基本 原理试图建造能够用于重建、维持或提高缺损组织功 能的生物性人体组织 5 。我们在前期实验室膀胱移行 上皮种子细胞研究的基础上 6 ,采用组织工程技术,尝 试将培养扩增的膀胱移行上皮细胞与国产可降解聚合 3

16、12 中国修复重建外科杂志2 0 0 6年第2 0卷第3期 材料构建并经裸鼠体内培育,观测其可否培育形成尿 路移行上皮组织,为泌尿外科重建提供最佳的替代修 复材料。 1 材料与方法 1 . 1 主要材料和设备 角 化 上 皮 培 养 基 ( G i b c o ,美 国) ;胰 酶 ( P h a r ma c i a ,美 国) ;鼠 抗 人 上 皮 细 胞 角 蛋 白 单 抗 ( D o k e ,美国) ;聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物( P o l y l a c t i c / g l y c o l i ca c i dc o p o l y me r ,P L G A)三维多孔材料(中

17、国 科 学院化学所研制) :孔径 2 5 0 3 5 0 m,孔隙率为 9 0 %, 6 0 C o消毒后备用; 支架材料制为1 0mm5mm 的小片。新西兰幼兔4只(军事医学科学院实验动物中 心) ; 4周龄雌性裸鼠1 2只,约2 0g/只(中国生物制品 鉴定所) 。细胞培养设备: He r a u s B B 5 0 6 0型C O2孵箱, 倒置显微镜( Ol y mp u s , 1 7 0 ,日本) 。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 膀胱移行上皮种子细胞的原代培养从幼兔 体内获取膀胱,在超净台内显微分离膀胱移行上皮细 胞 层,将分离的上皮组织用眼科剪剪成约1mm 1mm 1mm

18、大 小 的 组 织 块,采 用0 . 1 2 5 %胰 酶 和 0 . 0 1 % E D T A的混合液消化。 显微镜下观察消化液中 有大量游离上皮细胞时终止消化,收集细胞悬液,离心 半径8 . 8c m,10 0 0r / mi n离心1 0mi n ,用角化细胞培 养基培养细胞。角化细胞培养基内添加的附加成分有: 5 0 g / ml 牛垂体提取物和5n g / ml表皮细胞生长因 子。每代细胞培养生长至8 0 %9 0 %汇合时即可传代, 传代比率为1 :2 。 1 . 2 . 2 膀胱移行上皮种子细胞的传代培养、鉴定与聚 合材料的复合构建取生长稳定期的上皮细胞接种到 无菌盖玻片上制作

19、细胞爬片, 1 0 %福尔马林固定液固 定后采用S P法进行免疫组织化学染色,以抗角蛋白单 克隆抗体( AE 1 / AE 3 )为一抗鉴定移行上皮细胞。将已 消毒的聚合材料用7 5 %乙醇预湿后置于无菌培养皿 内。消化收集4 5代生长状态良好的移行上皮细胞, 以离心半径8c m, 8 0 0r / mi n离心1 0mi n后制为1 . 0 1 0 6/ ml 细胞悬液3 4ml ,均匀接种至8个P L G A聚合 支架材料表面。将细胞材料复合体置于培养皿内,在 3 7 的孵箱内进行培育,待细胞贴壁后补加培养基。4 个未接种细胞的支架材料添加培养基后作为对照组。 实验组细胞材料复合体和对照组

20、单纯支架材料在孵箱 内培育1 3d后,分别植入4周龄裸鼠体内进行培养。 1 . 2 . 3 细胞-聚合材料复合体的体内培育按材料在 裸鼠体内培育时间分组:实验组,细胞-材料复合体植 入裸鼠体内培育4周和8周各4个;对照组,单纯聚合 支架材料植入裸鼠体内培育4周和8周各2个。以体重 约2 0g雌性裸鼠1 2只,分别将各组材料植入裸鼠体内 进行培养。 具体步骤:将裸鼠麻醉后在无菌操作台内剪开其 背部皮肤,并用组织钳分离形成皮下袋。根据随机分组 的原则,分别将实验组材料和对照组材料植入裸鼠的 背部皮下,每只裸鼠植入一个材料。植入后缝合皮肤, 继续饲养。 1 . 2 . 4 复合体体内培育产物的检测植

21、入术后4周 和8周时,分别处死各组裸鼠,打开背部皮肤,先行大 体观察,之后将培育的复合体与裸鼠皮肤和周围组织 分离,取出标本立即置于1 0 %福尔马林固定液固定,行 HE及马森染色进行组织学观察。同时应用S P法进行 免 疫 组 织 化 学 染 色,一 抗 为 抗 角 蛋 白 单 克 隆 抗 体 ( AE 1 / AE 3 ,工作稀释浓度为1 :5 0 ) ,对培育复合体中 的组织细胞进行鉴定。 2 结果 2 . 1 膀胱移行上皮种子细胞的鉴定 光镜下见第3 4代培养的移行上皮细胞呈多角 形,如铺路石状汇合成片。移行上皮细胞抗角蛋白单克 隆抗体免疫组织化学染色胞浆呈棕黄色,胞核淡蓝色, 实验组

22、为阳性染色(图1 ) ,对照组为阴性染色。 2 . 2 大体观察 术后动物伤口愈合良好,饮食活动正常。实验组: 4周时复合体表面有薄层组织形成,聚合材料较植入 前薄; 8周时材料表面组织层明显增厚,肉眼已分不清 组织与材料的界线。对照组: 4周时移植物表面有少量 纤维包绕,外观上均无组织形成,聚合支架材料明显疏 松; 8周时材 料 进 一 步 降 解,移 植 区 仅 有 少 量 残 留 材料。 2 . 3 组织学观察 实验组植入物HE染色, 4周可见复合体表面增生 有多层上皮细胞层(图2 ) , 8周时上皮细胞层明显增厚 (图3 ) 。马森染色,实验组8周时材料表面生长的上皮 细胞呈红色,去除

23、其外包绕的数层成纤维细胞呈蓝色 ( 图4 ) 。对照组4周时马森染色植入物外壁见部分成纤 维细胞浸润,无红染的上皮细胞生长(图5 ) 。 2 . 4 免疫组织化学 实验组复合体免疫组织化学染色,聚合材料的表 面均可见数层细胞对抗角蛋白单克隆抗体免疫组织化 学染色阳性反应,胞浆呈棕黄色,胞核淡蓝色(图6 ) ,且 8周的细胞层厚度较4周时增厚。对照组4周免疫组织 化学染色,均未见阳性的细胞染色。 412C h i n e s eJ o u r n a l o f R e p a r a t i v ea n dR e c o n s t r u c t i v eS u r g e r y ,2

24、 0 0 6 ,Vo l 2 0 ( 3 ) 图1实验组膀胱移行上皮细胞抗角蛋白免疫组织化学染色阳性( 1 0 )图2体内培育4周,实验组复合体外壁的移行上皮细胞层( HE 1 0 ) 图3体内培育8周,实验组复合体表面的移行上皮细胞层( HE 4 )图4体内培育8周,实验组复合体表面包成纤维细胞呈蓝染(马森染色4 ) 图5体内培育4周,对照组材料外壁无红染的移行上皮细胞(马森染色1 0 )图6体内培育8周,实验组复合体表层细胞抗角蛋白抗体免疫组织 化学染色阳性( 1 0 ) F i g .1 T h e u r o t h e l i u mc e l l s w e r e s t a i

25、 n e dp o s i t i v e l yf o r c y t o k e r a t i n s i nt h e e x p e r i me n t a l g r o u p ( 1 0 ) F i g .2 A f t e r c u l t u r e i nv i v of o r 4w e e k s ,t h e o u t e rw a l l o f p o l y me rw a s c o v e r e db yt h eu r o t h e l i u m c e l l si nt h ee x p e r i me n t a l g r o u

26、p ( HE1 0 )F i g .3 A f t e rc u l t u r ei nv i v of o r8w e e k s ,t h e s u r f a c eo f p o l y me rw a s c o v e r e db yt h eu r o t h e l i u m c e l l s i nt h ee x p e r i me n t a l g r o u p( HE4 ) F i g .4 A f t e rc u l t u r ei nv i v of o r8w e e k s ,t h es u r f a c e o f p o l y me

27、 rw a s c o v e r e db yf i b e rc e l l s i nt h ee x p e r i me n t a l g r o u p ( Ma s s o n 4 ) F i g .5 A f t e rc u l t u r ei nv i v of o r4w e e k s ,t h eo u t e rw a l l o fp o l y me r w a su n c o v e r e db yt h eu r o t h e l i u m c e l l s i nt h e c o n t r o l g r o u p( Ma s s o

28、n1 0 ) F i g .6 A f t e r c u l t u r e i nv i v of o r8w e e k s ,t h e c e l l s o nt h e s u r f a c e o f t h e p o l y me rw e r es t a i n e dp o s i t i v e l yf o rc y t o k e r a t i n s i ne x p e r i me n t a l t h ee x p e r i me n t a l g r o u p ( 1 0 ) 3 讨论 多年来研究人员一直在寻找适宜于修复重建泌尿 系组织的替

29、代物。不同的天然组织和合成材料已被用 于实验和临床,如网膜、尼龙、海绵等,但这些尝试均不 能产生结构和功能良好的尿路结构。尽管临床已将肠 壁组织用于膀胱泌尿道的重建,但仍存在许多并发症。 近年来,随着组织工程的兴起和发展,国外研究尝试应 用组织工程技术进行泌尿系的外科重建术,并已获得 了突破性进展 7 , 8 ,国内膀胱尿道组织工程的研究报道 较少。 组织工程研究是未来医学由替换向重建发展的重 要手段之一。其最基本的思路是在体外分离培养细胞, 将一定数量的细胞接种至具有一定空间结构的支架 上,通过细胞间的相互黏附、生长繁殖、分泌细胞外基 质,从而形成具有一定结构和功能的组织或器官。进行 泌尿系

30、组织工程研究成功的关键主要取决于有效地为 种子细胞提供适宜的能长期生存、分化和生长的条 件 9 。目前作为泌尿系组织工程的细胞支架材料主要 分 为 天 然 的 细 胞 外 基 质 和 合 成 的 可 降 解 聚 合 材 料 1 0 , 1 1 :前者如小肠黏膜下基质和膀胱黏膜下基质, 后者有聚乳酸、 P L G A等聚合物。这些细胞支架材料 不仅具有良好的生物相容性,而且具有一定机械力学 特性,因此适宜于进行工程化组织构建 1 2 。我们的研 究所选用国产P L G A,具有较好的生物相容性和生物 降解性,孔隙率较高,孔径大小适合细胞长入,且均匀, 体内完全降解时间在2个月左右。当细胞支架复合

31、物 植入体内后,营养物质可通过最短的扩散距离到达细 胞。我们的研究在既往膀胱种子细胞研究的基础上 6 , 将培养扩增后的膀胱移行上皮细胞接种到可降解聚合 材料的表面,之后再植入到裸鼠体内进行培育,经组织 学观察,并行免疫组织化学染色对组织细胞鉴定。实验 结果表明,移行上皮细胞可在聚合支架材料表面增殖 形成数层移行上皮细胞,随着培育时间的延长,支架材 料逐渐降解,而移行上皮细胞进一步增殖,从而在体内 成功地培育出组织工程尿路上皮组织。该实验初步摸 索了再造尿路移行上皮组织构建与培育条件,结果提 示 以国产P L G A材料为支架,可进行组织工程尿路上 皮组织的构建,从而为膀胱、输尿管及尿道组织工

32、程的 进一步研究及其在泌尿外科重建应用奠定基础。 512 中国修复重建外科杂志2 0 0 6年第2 0卷第3期 4 参考文献 1At a l aA.F u t u r ep e r s p e c t i v e si nb l a d d e rr e c o n s t r u c t i o n . Ad vE x p Me dB i o l ,2 0 0 3 , 5 3 9 ( P t B ) : 9 2 1 - 9 4 0 . 2At a l a A. E x p e r i me n t a l a n d c l i n i c a l e x p e r i e n c e w

33、i t h t i s s u e e n g i n e e r i n g t e c h n i q u e s f o r u r e t h r a lr e c o n s t r u c t i o n .Ur o lC l i n No r t hAm, 2 0 0 2, 2 9 ( 2 ) : 4 8 5 - 4 9 2 . 3 陈宁,余祖辉,李辉华,等.膀胱黏膜尿道成形术一期治疗尿道下 裂.中国修复重建外科杂志, 2 0 0 4 , 1 8( 3 ) : 1 9 8 - 1 9 9 . 4D ef i l i p p oR E , Yo oJ J ,At a l aA.Ur

34、 e t h r a l r e p l a c e me n tu s i n gc e l l s e e d e dt u b u l a r i z e dc o l l a g e nma t r i c e s . JUr o l , 2 0 0 2 , 1 6 8 ( 4P t2 ) : 1 7 8 9 - 1 7 9 2 . 5 杨志明,主编.组织工程基础与临床.成都:四川科学技术出版社, 2 0 0 0 . 1 9 8 . 6 侯卫平,王常勇,叶本兰,等.兔膀胱移行上皮种子细胞的培养及 扩增.重庆医学, 2 0 0 3 , 3 2 ( 6 ) : 6 6 6 - 6 6 8

35、. 7S c h o e l l e r T ,L i l l eS ,S t e n z l A, e t a l .B l a d d e r r e c o n s t r u c t i o nu s i n g ap r e v a s c u l a r i z e dc a p s u l a rt i s s u es e e d e dwi t hu r o t h e l i a lc e l l s . J Ur o l , 2 0 0 1 , 1 6 5 ( 3 ) : 9 8 0 - 9 8 5 . 8Ob e r p e n n i n gF ,Me n gJ ,Y

36、o oJ J , e t a l .D e n o v or e c o n s t i t u t i o no f a f u n c t i o n a l ma mma l i a nu r i n a r yb l a d d e rb yt i s s u ee n g i n e e r i n g . Na t B i o t e c h n o l , 1 9 9 9 , 1 7 ( 2 ) : 1 4 9 - 1 5 5 . 9B a r t s c hG J r ,At a l aA.T i s s u ee n g i n e e r i n gi nu r o l o

37、 g y .B a s i c p r i n c i p l e sa n da p p l i c a t i o n . Ur o l o g eA,2 0 0 3 , 4 2 ( 3 ) : 3 5 4 - 3 6 5 . 1 0G a b o u e v AI , S c h u l t h e i s s D , Me r t s c h i n g H,e ta l . I n v i t r o c o n s t r u c t i o no fu r i n a r yb l a d d e rwa l lu s i n gp o r c i n ep r i ma r y

38、c e l l s r e s e e d e d o n a c e l l u l a r i z e d b l a d d e rma t r i x a n d s ma l li n t e s t i n a l s u b mu c o s a . I n t JAr t i f Or g a n s ,2 0 0 3 , 2 6 ( 1 0 ) : 9 3 5 - 9 4 2 . 1 1Ki m B S ,B a e zC E ,At a l aA.B i o ma t e r i a l sf o rt i s s u ee n g i n e e r i n g . Wo

39、 r l dJUr o l , 2 0 0 0 , 1 8 ( 1 ) : 2 - 9 . 1 2 高春华,黄新友.组织工程与生物材料.上海生物医学工程, 2 0 0 3 , 2 4 ( 4 ) : 4 6 - 4 9 . (收稿: 2 0 0 4 - 1 1 - 0 3 修回: 2 0 0 5 - 0 2 - 2 1 ) (本文编辑:俞军 李古波) 致读者 关于文稿参考文献书写格式的要求关于文稿参考文献书写格式的要求 本刊参考文献按G B 7 7 1 4 - 8 7 文后参考文献著录规则采用顺序编码制著录,按照其在文中出现的先后顺序用阿拉伯数字加方 括号标出。参考文献中,作者1 3名全部列出

40、, 3名以上只列出前3名后加“等“ 、 “ e t a l “或其它相应文字。每条文献均需著录起止页。 引用参考文献,无论何种文字均需准确无误。将参考文献按引用先后顺序(用阿拉伯数字标出)排列于文末。 要求: 期刊作者,文题.刊名(外文缩写按I n d e xMe d i c u s格式) ,年份,卷(期) :起-止页.如: 1 周政,杨志明,解慧琪,等.组织工程肌腱低温贮存的初步研究.中国修复重建外科杂志, 2 0 0 2 , 1 6 ( 5 ) : 2 9 5 - 2 9 9 . 2P e l i s s i e r P , Vi l l a r sF , Ma t h o u l i n

41、 - P e l i s s i e r S , e t a l . I n f l u e n c e so f v a s c u l a r i z a t i o na n do s t e o g e n i cc e l l so nh e t e r o t o p i cf o r ma t i o nwi t h i nama d r e p o r i c c e r a mi ci nr a t s . P l a s t R e c o n s t r S u r g , 2 0 0 3 , 1 1 1 ( 6 ) : 1 9 3 2 - 1 9 4 1 . 书籍作者,

42、编著/主编.书名.卷次.版次,出版地:出版者,年份.起- 止页.如: 1 吴在德,主编.外科学.第5版.北京:人民卫生出版社, 2 0 0 1 . 8 0 5 - 8 0 6 . 2S u l l i v a nS , B r o c k b a n kKG M. S ma l l d i a me t e rv a s c u l a rg r a f t s . I n : L a n z aR . P r i n c i p l e so fT i s s u eE n g i n e e r i n g . 2 n de d . Ac a d e mi cP r e s s , 2 0

43、 0 0 . 4 4 7 - 4 5 4 . 关于投稿关于投稿、 、 修稿及退稿方式的要求修稿及退稿方式的要求 本刊接受纸质投稿及电子邮件投稿两种投稿方式。对投稿、修稿及退稿方式如下:通过电子邮件形式投稿。文稿以附件形式发 送。文字存为Wo r d格式,图稿存为J P G格式并插入文内相应位置。若图稿较多、文件较大,可用压缩格式。按稿约要求以及存档备 查之需,在电子邮件投稿同时应将单位证明、一份纸质文稿和稿件处理费寄到编辑部,并在电子邮件投稿时注明单位证明、纸质文 稿及稿件处理费是否同时寄出。纸质形式投稿,一式两份,纸质文稿用小4号字、 1 . 5倍行距打印,投稿时应附相应软盘或光盘(以光 盘

44、为好) ,彩色或黑白图片应提供原始图片(若为电子档可彩色打印并存储于电子文档中) 。同时应注明电子邮件地址及联系电话。 修稿尽量通过电子邮件进行。作者按修稿要求对稿件修改后,应将修改稿和原文稿尽快发回编辑部。若稿件不被采用,将主要 通过电子邮件的方式进行退稿,并注明理由。一般不再发退稿信和退纸质稿件。投稿时请自留底稿。特殊图稿如作者有退稿要求, 务必在投稿时注明。 本刊编辑部 2 0 0 6 - 0 3 - 0 8 612C h i n e s eJ o u r n a l o f R e p a r a t i v ea n dR e c o n s t r u c t i v eS u r g e r y ,2 0 0 6 ,Vo l 2 0 ( 3 )