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1、6 0 毒理与检验 低剂量氯化镉对大鼠睾丸组织酶活性的影响 韦凌娅1 ，吕中明2 ，顾呈华2 ，王民生2 ( 1 东南大学公共卫生学院， 江苏南京2 1 0 0 0 9 ；2 江苏省疾病预防控制中心，江苏南京2 1 0 0 0 9 ) 【文献标识码】B【中图分类号】R 一3 3 【文章编号】1 0 0 6 - - 9 0 7 0 ( 2 0 0 8 ) 0 2 - - 0 0 6 0 - - 0 3 【关键词】氯化镉；睾丸组织酶；氧化损伤 镉对雄性生殖系统的影响被认为是影响人类生 育的重要因素，已受到普遍关注。有报道显示，亚慢 性镉染毒可使睾丸体积变小，重量减轻，肉眼观察出 现睾丸病理改变，镜
2、检发现曲细精管呈不同程度的 萎缩、变性，管内生精细胞数少或缺如，无精子形成 或极少，管腔内可见坏死的细胞碎片 1 2 ，说明镉可 以严重干扰破坏大鼠睾丸曲细精管上皮的生精过 程，对大鼠的生殖功能产生影响。 睾丸是许多具有生殖毒性的化学物质的靶器 官。精子发生是一个多时相的复杂过程，要经历精 原细胞增殖、精母细胞成熟分裂和精子形成等多个 阶段，这一过程与睾丸中多种酶的活性存在相关关 系。研究表明，在形态学尚无明显改变时，往往其生 化过程已经发生改变，表现为睾丸组织中一些酶的 活性出现了变化，如乳酸脱氧酶同功酶X ( L D H x ) 、酸性磷酸酶( A C P ) 、碱性磷酸酶( A K P
3、) 及口一葡 萄糖醛酸苷酶等。睾丸中还含有丰富的抗氧化物 质，如s 0 D 、还原型谷胱甘肽( G S H ) 、维生素C 和维 生素E 等，这些物质在精子生成过程中也起着重要 的作用，同时可保护生殖细胞免于氧化损伤。许多 研究认为镉的毒性与氧化损伤密切相关，镉可通过 膜脂质过氧化或改变机体的抗氧化系统来诱发不同 组织的氧化损伤一 。在这些酶中，有的作为特异性 标志酶，可以特征性地反映睾丸各类细胞受化学毒 物作用而引起的生化过程的变化。本研究通过对睾 丸上清液中的酶活性的检测，研究低剂量氯化镉对 睾丸组织的损伤及可能的作用机制。 1 材料与方法 1 1 实验动物成年雄性S p r a g u
4、e - - D a w l a y ( S D ) 大鼠4 0 只，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提 基金项目：江苏省疾病预防控制中心青年科研基金资助项目( J S 0 2 0 0 5 0 9 ) 收稿日期：2 0 0 8 0 3 2 2 作者简介：韦凌娅( 1 9 8 2 一) ，女。浙江东阳人，研究生。 供，清洁级，动物证号：S C X K ( 沪) 2 0 0 3 0 0 0 3 号；体 重1 8 0 - - 2 2 0 9 ，自由饮水和进食，在S P F 级动物房饲 养，室温控制在2 5 左右，相对湿度5 0 - - - - 7 0 ，1 2 1 2 h 昼夜交替光照周期；饲料号：苏
5、A 饲生字2 0 0 2 ( 0 0 9 ) ，江苏省协同医药生物工程责任有限公司。 1 2 主要试剂及仪器氯化镉( C d C l 2 上海金山亭 新化工试剂厂，分析纯) ，试剂盒( 南京建成生物工程 研究所) ，生理盐水( 南京小营制药有限公司) 。7 2 0 0 型可见分光光度计( 尤尼柯仪器有限公司 R 0 3 1 0 0 4 7 ) 。J Y 9 2 一型超声波细胞粉碎机( 宁波 新芝科器研究所) 1 3 实验方法 ( 1 ) 动物分组和染毒：将动物随机分成对照组、 低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组1 0 只。用生理 盐水配制C d C l ：溶液，腹腔注射染毒，染毒剂量为： 0
6、、0 1 、0 2 、0 4m g k g b w 。每周染毒5d ，休 2d ，共染毒8 周( 4 5 个生精周期) 。实验结束颈椎 脱臼处死，立即取出单侧睾丸，一2 0 保存。 ( 2 ) 各种酶含量的测定：先制备睾丸匀浆，称取 0 5g 的睾丸组织，去除表层被膜，用眼科剪剪碎睾 丸实质，加入4 5m l 的生理盐水，用超声波细胞破 碎仪制备成1 0 的睾丸匀浆。30 0 0r p m m i n 离心 1 0r a i n ，静置片刻，取上清酶液，4 保存待测。采用 分光光度计比色法测定酶活力，严格按说明书操作。 乳酸脱氢酶同工酶X ( L D H x ) 活力的测定时，先 将上清酶液与
7、0 2 5M 的葡萄糖溶液以1 ：3 的体 积混合，然后将混合液通过0 4 5 9 m 孔径的滤器，将 滤液用于L D H x 的测定L 4 J 。 1 4 数据统计用S P S Si i 5 统计软件进行，方差 齐性检验、单因素方差分析，相关分析，结果以z s 万方数据 的形式表示，a = 0 0 5 。 2 结果 2 1 大鼠睾丸标志酶的测定不同剂量氯化镉染 毒对大鼠睾丸标志酶的影响结果见表1 。乳酸脱氢 酶同工酶X ( I D H x ) 、8 一葡萄糖醛酸苷酶、酸性 磷酸酶、碱性磷酸酶活力在各组间的差异均有统计 6 l 学意义( P 间的差异有统计学意义( P o 0 5 ) 。 0
8、0 5 ) 。各染毒组的S O D 活力均低于对照组，差异。 。；j - 、?乳 。一， 7 表2 不同剂量氯化镉染毒对大鼠睾丸氧化损伤指标的影响( ：士s ”= l o ) 注：与对照组比较P 0 0 5 。 3 讨论 L D H x 是精子的一种特异酶 5 | ，参与能量代 谢并与生精上皮成熟有关，其活性降低表明精子发 生过程中能量供应和代谢受阻。由于L D H x 与 精子发生关系密切，因此，该酶的活性测定可作为生 殖毒理研究中评价精子质量的可靠而简便的方法。 本实验结果显示，各染毒组的L D H x 活力均下 降，认为在本实验剂量范围内氯化镉对睾丸能量代 谢已产生影响。A K P 的活
9、性在精原细胞和早期发 育时期的初级精母细胞较强r 6 ，与睾丸生精细胞的 分裂活动及葡萄糖向各级生精细胞的转运有关。p G l u 和A C P 主要在睾丸组织中支持细胞的溶酶 体内，是支持细胞标志酶r 7 。A C P 活性降低与生精 上皮变性有关；| 3 一G l u 参与各种葡萄糖苷酸的水 解，还可与其他溶酶共同参与细胞器的降解及细胞 更新。本次实验的结果显示，亚慢性氯化镉可使 A C P 、A K P 和B G 1 u 活性均显著下降，通过机体这 一系列生化过程的改变，对睾丸的各级生精细胞产 生直接或间接的毒性作用，从而影响精子发生，产生 生殖毒性作用。 有报道称镉对睾丸产生毒性的原因
10、是由于机体 内氧自由基含量的增高，经镉处理的动物睾丸、生精 细胞及睾丸间质细胞内铁浓度升高，氧自由基含量 增高，过氧化物的含量显著增加 8 ，镉诱发了睾丸生 精细胞及睾丸间质细胞的脂质过氧化作用，从而导 致睾丸组织损伤9 。本实验采用G S H P x 、N O S 、 M D A 、S o D 作为镉对机体造成氧化损伤的生物指 标。本次实验研究观察到M D A 含量增加，而S O D 活性降低，说明机体受到自由基的攻击且清除自由 基的能力下降，中、高剂量组的N O S 活性出现增 加，G S H P x 活性出现降低，均提示机体产生脂质 过氧化，而抗氧化能力的降低，其原因可能是由于镉 万方数
11、据 6 2 通过与巯基结合或通过竞争或非竞争性替代作用， 置换出细胞内抗氧化酶系中的金属辅基，降低机体 抗氧化酶的活性，使机体清除自由基的能力下降。 参考文献 1 姜声扬庄勋马振祥，等亚慢性镉中毒所致小鼠睾丸、精子 损伤及锌保护作用研究F J 中国工业医学杂志，2 0 0 4 1 7 ( 1 ) ： 7 - 1 0 2 3M o h a nJ ，M o u d g a lR P ，P a n d aJN 。e ta 1 E f f e c t so fc a d m i u m s a l to np h o s p h o m o n o e s t e r a s e sa c t i v
12、 i t ya n df e n i l i z i n ga b i l i t yo f f o w ls p e r m a t o z o a J I n d i a nJE x pB i o l ，1 9 9 2 。3 0 ：2 4 卜2 4 3 3 3K a r m a k a rR B a n i kS 。B a n d y o p a d h y a yS ，e ta L C a d m i u mi n d u c e da l t e r a t i o no fh e p a t i cl i p i dp e r o x i d a t i o n 。g l u t a
13、 t h i o n eS - - t r a n s f e r a s ea c t i v i t ya n dr e d u c e dg l u t a t h i o n eL e v e la n dh e i rp o s s i b l ec o r r e l a t i o nw i t hc h r o m o s o m a la b e r r a t i o ni nm i c e ，at i m e c o u r s es t u d y J M ur a tR e s ，1 9 9 8 ，3 9 7 ：1 8 3 1 9 0 4 l h a m e dH T
14、 e s t i e u l a rt o x i c i t yo fd i b r o m o a c e t o n i t r i l e 州 ，p o s s i b l ep r o t e c t i o nb yt e r t i a r yb u t y l h y a r o q u i n o n e J P h a r m a c o l o g i c a lR e s e a r c h ，2 0 0 3 ，4 7 ：5 0 9 5 1 5 5 朱善良。陈龙，高伟。等镉致大鼠睾丸脂质过氧化及酶活性 变化研究 J 中国公共卫生，2 0 0 3 坳( 6 ) ：7 0
15、7 7 0 9 6 徐宏伟马爱国维生素A 缺乏对大鼠生精能力及睾丸标志 酶活性的影响E J 中国公共卫生2 0 0 2 。1 8 ( 1 1 ) ：12 9 8 1 2 9 9 7 3 段志文。李海山，张玉敏。等丙烯腈对小鼠睾丸组织标志酶 活性影响的研究 J 中国工业医学杂志，2 0 0 1 。1 4 ( 1 ) ：1 7 1 9 8 3 L i uJ ，C 0 1 t o nC D i xD e ta LG e n e t i cb a e k g r o u n db u tn o t m e t a l l o t h i o n e i np h e n o t y p ed i c
16、t a t e ss e n s i t i v i t yt Oc a d m i u mi n d u e e dt e s t i c u l a ri n j u r yi nm i c e J T o x i c o l o g ya n dA p p l i e d P h a r m a c o l o g y ，2 0 0 1 1 7 6 ( 1 ) ：卜9 9 K a r b o w n i kM ，G i t t oE ，L e w i n s k iA ，e ta L I n d u c t i o no fl i p i d p e r o x i d a t i o
17、ni nh a m s t e ro r g a n sb yt h ec a r c i n o g e nc a d m i u m ：a m e l i o r a t i o nb ym e l a t o n i n J C e l lB i o l o g ya n dT o x i c o l o g y ， 2 0 0 1 1 7 ( 1 ) ：3 3 q o 毒理与检验 缬草胶囊亚慢性经口毒性试验研究 王丽云，凌宝银，施伟庆，赵荣 ( 江苏省疾病预防控制中心，江苏南京2 1 0 0 0 9 ) 【文献标识码】B【中图分类号】R 一3 3【文章编号11 0 0 6 - - 9
18、0 7 0 ( 2 0 0 8 ) 0 2 - - 0 0 6 2 - - 0 2 【关键词】缬草胶囊；亚慢性毒性；大鼠 缬草属败酱科缬草属植物，主要含挥发油、环烯 醚萜类、黄酮、有机酸、生物碱、多糖、多种氨基酸和 微量元素，具有多种药理作用u 2 。作为新食品资 源，对其毒理学研究报道较少。为保护消费者身体 健康，在完成二阶段毒性测试的基础上，本文进行了 缬草胶囊的亚慢性经口毒性试验，旨在为食用安全 评价方面提供实验依据。 l 材料与方法 1 1 材料受试物为缬草提取物，均匀拌入基础饲 料中。实验动物为断乳的S D 大鼠8 0 只，清洁级， 体重6 5 8 0g ，雌雄各半，上海斯莱克实验动
19、物有限 责任公司提供。仪器为7 0 2 0 型全自动生化分析仪、 全自动菌落成像仪、五分类血细胞计数仪等。 1 2方法按卫生部食品安全性毒理学评价程序 和方法( 2 0 0 3 ) 进行L 3 J 。 收稿日期：2 0 0 8 - - 0 1 - - 0 9 作者简介：王丽云( 1 9 5 5 一) ，女安徽灵壁人剐主任医师。 ( 1 ) 实验分组：将试验大鼠随机分成4 组，每组 2 0 只，雌雄各半。设6 6 6 、13 3 3 和20 0 0m g k g 3 个剂量组( 相当人体推荐摄入剂量的1 0 0 、2 0 0 和 3 0 0 倍) ，1 个空白对照组( 基础饲料组) ，连续喂养
20、9 0d 。 ( 2 ) 观察指标：一般情况及生长发育，每周称体 重1 次，每天记录进食量，1 周退食2 次，计算食物 利用率。血液学检查，分别于试验中、末期取血测定 红细胞、血红蛋白、血小板，并进行白细胞计数及分 类。血液生化检查，试验末期取血测定谷丙转氨酶 ( A L T ) 、谷草转氨酶( A S T ) 、尿素氮( B U N ) 、肌酐 ( C R ) 、血糖( G L U ) 、血清白蛋白( A L B ) 、总蛋白 ( T P ) 、总胆固醇( C H O 、甘油三脂( T G ) 。脏体比， 试验末期剖杀动物并称其脏器重量，计算雌雄动物 肝体比、肾体比、脾体比、睾体比。组织学检查，肝、 万方数据