半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 MRNA在淋巴滞留性脑病大鼠脑皮质及海马的表达.pdf

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1、6 6 中国临 床康复 第 )0 春 男2 6 朋 2 0 0 6 - 0 7 - 1 5 出 版 C h i n e s e J o u r n a l o f C l i n ic a l R e h a b i l i t a t i o n , 五 行1 5 2 0 0 6 V o l . 1 0 N o . 2 6 蔽础研 究 半 胧 氨 酸 天 冬 氨 酸 蛋白 酶3 m R N A 在 淋 巴 滞 留 性 脑 病 大 鼠 脑 皮 质 及 海 马 的 表 达* 夏作理 ， 李修彬 ， 叶文静 ， 翟西菊 2 ， 泰山医学院脑微循环研究所，山东省泰安市2 7 1 0 0 0 ;a 泰

2、安市肿瘤防 治院， 山东省泰安市2 7 1 0 0 0 夏作理， 男， 1 9 4 4年生， 山东省泰安市人， 汉族， 1 9 6 6年山东医学院毕 业， 教授， 主要从事脑淋巴及脑微循环研究。 通讯作者: 李修彬， 泰山医学院脑循环研究所， 山东省泰安市 2 7 1 0 0 0 山东省自然科学基金项目( Z 2 0 0 2 C 4 0 ) * 中图分类号: R 7 4 2 文献标识码: A 文章编号: 1 6 7 1 - 5 9 2 6 (2 0 0 6 ) 2 6 - 0 0 6 6 - 0 3 收稿日 期: 2 0 0 5 - 1 2 - 2 3 修回日 期: 2 0 0 6 - 0 4

3、 - 3 0 ( 0 5 - 5 0 - 9 - 6 7 1 1 / G W“ Q 性脑病大鼠 脑皮质及海马的表达比中国临 床康复， 2 0 0 6 , 1 0 ( 2 6 ):6 6 - 8 IW w w .z g 1C k f .C o tn l C a s p a s e - 3 m R N A e x p r e s s io n in c e r e b r a l c o r t e x a n d h ip - p o c a m p u s o f r a t s w i t h l y m p h o s t a t i c e n c e p h a l 叩a t h y

4、X i a Z u o - li, L i X i u - b in , Y e W e n - j in g , Z h a i X i- ju t C e r e b r a l M i c r o c i r c u l a t i o n I n s t i t u t e , T a i s h a n M e d i c a l C o l l e g e , T a i a n 2 7 1 0 0 0 , S h a n d o n g P r o v i n c e , C h i n a ; T a i a n T r e a t m e n t a n d P r e v

5、e n t i o n o f T u m o r H o s p i t a l , T a i a n 2 7 1 0 0 0 , S h a n d o n g P ro v i n c e , C h i n a X ia Z U O - II, P ro f e s s o r , C e r e b r a l M i c ro c i r c u l a t i o n I n s t i t u t e , T a i s h a n M e d i c a l C o l l e g e , T a i a n 2 7 1 0 0 0 , S h a n d o n g P

6、ro v i n c e , C h i n a C o r r e s p o n d e n c e t o : L i X lu - b in , S t u d y i n g f o r d o c t o r a t e , C e r e b r a l M i c ro c i r - c u l a t i o n I n s t i t u t e , T a i s h a n M e d i c a l C o l l e g e , T a i a n 2 7 1 0 0 0 , S h a n d o n g P ro v i n c e , C h i n a S

7、 u p p o r t e d b y : t h e N a t u r a l S c i e n c e F o u n d a t i o n o f S h a n d o n g P r o v i n c e , N o . Z 2 0 0 2 C 4 0 * R e c e i v e d : 2 0 0 5 - 1 2 - 2 3 A c c e p t e d : 2 0 0 6 - 0 4 - 3 0 Ab s t r a c t A I M: T o i n v e s t i g a t e e x p r e s s i o n o f c a s p a s e

8、 3 m R N A i n t h e c e re b r a l c o rt e x a n d h i p p o c a m p u s o f r a t m o d e l s w i t h l y m p h o s t a t i c e n c e p h a l o p a th y a n d t h e re l a t i o n s h i p b e t w e e n n e u r o n a l a p o p t o s i s a n d l y m p h o s t a t i c e n c e p h a l o p a t h y . M

9、E T HOD S : A t o t a l o f 8 8 m a l e a d u l t Wi s t a r r a t s w e r e s e l e c t e d a n d r a n - d o m l y d i v i d e d i n t o 3 g r o u p s : o p e r a t i o n g r o u p ( n = 4 0 ) , s h a m o p e r a t i o n g ro u p ( n = 4 0 ) a n d n o rm a l c o n t ro l g ro u p ( n = 8 ) . T h e

10、 r a t s i n t h e o p e r a t i o n g r o u p a n d s h a m o p e r a t i o n g r o u p w e r e a s s i g n e d i n t o 1 , 3 , 5 , 7 a n d 1 4 d a y s t i m e p o i n t s a f t e r o p e r a t i o n w i t h 8 r a t s i n e a c h g r o u p . T h e r a t m o d e l s w i t h l y m p h o s t a t i c e

11、 n c e p h a l o p a t h y i n t h e o p e r a t i o n g r o u p w e r e e s t a b l i s h e d . T e m p o ro p a r i e t a l c o rt e x a n d h i p p o c a m p a l t i s s u e s w e r e i s o l a t e d a t e a c h t i m e p o i n t s a f t e r i n - j u ry . O n l y g l a n d u l a l y m p h a t i

12、c a i n t h e s h a m o p e r a t i o n g ro u p w a s r e m o v e d a n d e x p o s e d , b u t t h e l y m p h a t i c v e s s e l w a s n o t l i g a t e d , a n d t h e g l a n d u l a l y m p h a t i c s w a s n o t e x t r a c t e d . T h e e x p r e s s i o n o f c a s p a s e - 3 m R N A w a

13、 s o b - s e r v e d a f t e r i n j u ry i n r a t s w i t h l y m p h o s t a t i c e n c e p h a l o p a t h y w i t h s e m i - q u a n t i t a t i v e r e v e r s e t r a n s c ri p t i o n - p o l y m e r i s e c h a i n re a c t i o n . R E S U L T S : T o ta l ly 8 8 r a t s w e r e i n v o

14、l v e d i n t h e r e s u l t a n a l y s is . C a s - p a s e - 3 m R N A w a s u p - r e g u l a t e d i n t e m p o r o p a r i e t a l c o rt e x w i t h i n 3 d a y s a f - t e r l y m p h a b l o c k . T h e e x p re s s i o n w a s t h e h i g h e s t i n t h e 1 d a y . T h e e x - p r e s s

15、 i o n o f c a s p a s e - 3 m R N A w a s h i g h e r t h a n t h a t i n t h e s h a m o p e r a t i o n g r o u p a n d c o n t r o l g ro u p w i t h i n 3 d a y s , w h i c h h a d s t a t i s t i c a l s i g n i f i c a n c e ( F = 2 9 . 8 9 2 , P = 0 .0 0 1 0 .0 1 ) .T h e e x p r e s s i o n

16、 a f t e r 3 d a y s b l o c k w a s n e a r 摘要 目的: 探讨半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 m R N A在淋巴滞留性脑病大鼠 脑皮质及海马中的表达情况及其与神经元凋亡之间的关系。 方法: 选取成年雄性 Wi s t a r 大鼠8 8 只， 随机分为脑淋巴引流阻断组 4 0 只、 假手术组 4 0只及正常对照组 8只。脑淋巴引流阻断组和假手术组 分为术后 1 , 3 , 5 , 7 , 1 4 d 5 个时间点， 每个时间点8 只。 脑淋巴引流阻断 组建立淋巴滞留性脑病动物模型， 在损伤后各时间点取颖顶皮质、 海马 区脑组织。假手术组只分离和暴露淋巴

17、结， 但不结扎淋巴管， 亦不摘除 淋巴结。 用半定量反转录一 聚合酶链反应方法观察淋巴滞留性脑病大鼠 损伤后半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 m R N A的表达情况。 结果: 8 8 只 大鼠 均进 人结果分 析。 在颖顶皮质， C a s p a s e 3 m R N A在 淋巴阻塞后3d内表达上调， 以第 1 天表达最高， 淋巴阻塞后 3d内 C a s p a s e 3 m R N A表达比 假手术组及对照组高， 且有统计学意义( F = 2 9 . 8 9 2 , P = 0 . 0 0 1 0 .0 1 ) 。淋巴 阻塞3 d 后表达接近正常对照及假手 术组。 对照组与假手术组之间 差

18、异无统计学意义。 在海马， C a s p a s e 3 m R N A较颖顶皮质表达上调更明显， 以第1 天表达最高， 淋巴阻塞后 5 d 内C a s p a s e - 3 m R N A 表 达比 假 手术 组 及对照 组高， 差异有 统 计学意 义 ( P 0 .0 5 ) , 5 d 后表达接近正常对照及假手术组。 结论:在淋巴滞留性脑病大鼠模型中神经元凋亡的发生可能与半胧氨 酸天冬氨酸蛋白酶- 3 m R N A的激活有关。 主题词: 脑水肿/ 病理学; 半肌氨酸天冬氨酸蛋白酶/ 代谢; 细胞凋亡; 大 鼠 w a s t h e h i g h e s t i n t h e

19、 1 d a y . T h e e x p r e s s i o n o f c a s p a s e - 3 m R N A w a s h ig h e r t h a n t h a t i n t h e s h a m o p e r a t i o n g r o u p a n d c o n t r o l g ro u p w it h i n 5 d a y s , w h i c h h a d s t a t i s t i c a l s i g n i fi c a n c e ( P0 .0 5 ) . T h e e x p r e s s i o n a

20、 f t e r 5 d a y s b l o c k w a s n e a r t o t h a t i n t h e n o r m a l c o n t r o l g r o u p a n d s h a m o p e r a t i o n g r o u p - C O N C L U S I O N : I n r a t m o d e l s w i t h l y m p h o s t a t i c e n c e p h a l o p a t h y , n e u r o n a p o p t o s i s i s p r o b a b l y

21、 r e l a t e d t o t h e a c t i v a t i o n o f c a s p a s e - 3 . X ia Z L , L i X B , Y e W J , Z h a i X J .C a s p a s e - 3 m R N A e x p r e s s io n in c e r e b r a l c o rt e x a n d h ip p o c a m p u s o f r a t s w it h ly m p h o s t a t ic e n c e p h a to p a th y .Z h o n g g u o L

22、 i n c h a a n g K m t妒止 2 0 0 6 ;1 0 12 6 1:6 6 - 8 1C h in a l 夏作理， 李修彬， 叶文静， 翟西菊. 半眺氨酸天冬氨酸蛋白酶3 rn R N A在淋巴滞留 0 引言 脑内没有淋巴管， 却存在淋巴引流。 近年来脑淋巴 引流的生理及病理生理意义， 已引起众多学者的关注。 任何原因引起的脑淋巴液产生过多或引流障碍，均可 导致淋巴滞留性脑水肿， 临床上称“ 淋巴滞留性脑病” 。 半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶， 是细胞凋亡程序一类关键 同源半胧氨酸蛋白酶，特异性在夭冬氨酸残基后裂解 靶蛋白， 半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 与脑缺氧缺血后 早期损伤

23、密切相关， 在神经元凋亡中起关键作用。 本文 主要从基因水平阐述淋巴 滞留 性脑水肿大鼠 模型中 半 胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 m R N A表达的时空变化及 其与神经元凋亡之间的关系。 1 材料和方法 设计: 随机对照动物实验。 单位: 泰山医学院脑微循环研究所。 材料: 实验动物与分组: 健康雄性Wi s t a r 大鼠( 由 山东大学实验动物中心提供， 检疫号: 鲁动2 0 0 2 1 0 2 4 ) 8 8 只， 体质量1 8 02 5 0 g ， 随 机分为 脑淋巴 引流阻 断组 4 0 只、 假手术组4 0 只及正常对照组8 只。 脑淋巴引流 阻断组和假手术组又分为术后 1 , 3

24、 , 5 , 7 , 1 4 d 5 个时 间点， 每个时间点8 只。各组到达规定时间后， 动物快 速断头取脑，经 D E P C水处理液氮速冻后置一 8 0冰 I S S N 1 6 7 1 - 5 9 2 6 w w w a g lc 尽c o m C N 2 1 - 1 4 7 0 / R k j 2 3 3 8 5 0 8 3 s i n a c o m 夏作理， 等 半恍氨酸天冬氨酸蛋白酶 3 m R N A在淋巴滞留性脑病 大鼠脑皮质及海马的表达 箱保存备用。 设计、 实施、 评估者: 实验设计、 资料收集、 实施及 评估由本文全体作者完成， 均经过相关培训。 方法: 淋巴滞留性脑

25、水肿实验动物模型的制备: 参照文 献 1 用阻断颈部淋巴引流的方法制备大鼠淋巴滞留 性脑病模型。1 0 留L 戊巴比妥钠( 3 0 m g / k g ) 腹腔麻 醉， 无菌条件下， 沿颈部正中切开皮肤， 依次分离颈部 两侧颈浅、 下领及颈深淋巴结( 各 3 - 5个) ， 结扎其两 端的输人、 输出淋巴管， 摘除相应淋巴结， 注意勿损伤 颈部血管和神经， 然后逐层缝合切口。假手术组只分 离和暴露淋巴结， 但不结扎淋巴管， 亦不摘除淋巴结， 其余手术步骤同实验组。术后出现明显的行为改变， 切口无渗出、 肿胀及感染， 显微镜下典型的脑水肿改 变为模型制作成功。 反转录一 聚合酶链反应: 用半定量

26、反转录一 聚合酶链 反应检测半胧氨酸天冬氨酸蛋白 酶3 m R N A表达水平。 引 物 设 计: C a s p a s e - 3 m R N A 序列 来自G e n B a n k N M 0 1 2 9 2 2 , p - a c t i n m R N A 检 索 来 自 G e n B a n k N M 0 3 1 1 4 4 。 应用P r i m e r 3 软件设计C a s p a s e - 3 及内参照 p - a c t i n引物序列， 引物合成由上海博亚生物制品有限 公司合成。通过产物测序来验证引物特异性。引物序 列为: C a s p a s e - 3 :

27、上游引物: 5 - G A A A C C T C C G T G G A T T C A A A - 3 ;下游引物: 5 - A T A C C G C A G T C C A G C T C T G T - 3 ，目的片断大小为5 0 3 b y ; p - a c t i n : 上 游引物: 5 - G G G A A A T C G T G C G T G A C A T - 3 ; 下 游引物: 5 - C A G G A G G A G C A A T G A T C A TT- 3 ， 目 的 片 断大小为3 8 6 b p , ( 2 3 组动物分别在上述时间断 头取脑，

28、快速取两侧M顶皮质、 海马脑组织， 采用基因 公司提供的T R I Z O L 试剂抽提总R N A ,c D N A 第一 链合成: 分光光度计测R N A浓度， 1 ji g R N A进行逆转 录: 反应体系2 0 w L ， 模板R N A 1 p ,g ， 引物O l i g o (d 叨 1 8 0 .5 R g ， 无R N A酶去离子水定容至1 2 R L ; 反应混合 物在7 0水浴5 m i n 后， 冰浴3 0 s ， 再加人以下组分: 5 x R e a c t i o n B u f f e r 4 p ,L , R N A酶抑制剂2 0 U , d N T P s

29、( 1 0 m m o l / L ) 2 p ,L , M - M L V 0 .5 L L ， 混匀后置下列温度 反应: 3 7 C C 6 0 m i n , 7 0 T 1 0 m i n , 4 保存，产物即为 C D N A , 灭菌双蒸水代替逆转录酶作为阴性对照。 聚 合酶链反应扩增:在5 0 反应体系中分别加人去离子 水3 1 .5 f L L , l O x P C R B u f f e r 5 R L , M g C 12 9 W L , 1 0 m m o V L d N T P 1 p ,L ， 上下游引物、 c D N A各1 p ,L , r T a q 1 w

30、L 。 每 份样品重复聚合酶链反应各4次。灭菌双蒸水代替 c D N A作为阴性对照。 按以下程序进行反应: C a s p a s e - 3 : 9 5 预变性4 m i n , 9 4 变性3 0 s , 6 2 腿火3 0 s , 7 2 延伸4 0 s ( 进行3 2 个循环) 7 2 终末延伸4 m i n ; p - a c t i n : 9 54 m i n , 9 43 0 s , 5 63 0 s , 7 24 0 s( 进行 2 8 个循环) 7 2 终末延伸4 m i n a 聚合酶链反应产物 鉴定: 巧w L 经1 0 g / L 琼脂糖凝胶电泳， 嗅化乙陡显 色，

31、 D L 2 0 0 0 M a r k e r 作为分子量标准， 电压 1 0 0 v电泳 3 0 m i n 后， 应用凝胶成像系统( B i o - R a d 公司 ) 采集图像。 皮质、 海马C a s p a s e - 3 / 0 - a c t i n 面积光强度比 值: 用 Q u a n t i t y O n e 凝胶分析软件测定各电泳条带面积光强 度值， 分别计算皮质、 海马C a s p a s e - 3 扩增产物电泳条 带面积光强度值与其相应的p - a c t i n 面积光强度的比 值， 每组取其平均值进行比较。 主要观察指标:淋巴滞留性脑病大鼠损伤后半胧 氨

32、酸天冬氨酸蛋白酶3 m R N A的表达情况。 统计学分析:应用S P S S f o r Wi n d o w s 1 2 .0 软件对 成组设计的多个样本均数比较进行单因素方差分析 ( O n e - Wa y A N O V A ) 。两组C a s p a s e - 3 m R N A相对含量 以 表示， 两两比较采用t 检验， 以P 0 .0 5为有统计 学意义。 2 结果 2 . 1 实验动物数量分析8 8 只大鼠均进人结果分析。 2 . 2 行为学观察脑淋巴阻断组动物表现为精神萎 靡， 厌食， 自 主运动减少， 对外界刺激发应淡漠。 上述症 状于术后2 d出现， 3 d 和5

33、d 最突出。假手术组动物 一般状况良好， 与对照组相比 无明显差别。 2 .3 C a s p a s e - 3 基因 表达 见表t o 表 1 水平 各组大鼠濒顶皮质区、海马区组织中C as p a s e - 3 m R N A相对表达 ( x 1 s ) 组别颖顶皮质 海马 脑淋巴引流阻断组 7d 1 4d 假手术组 正常对照组 1 . 0 5 0 1 0 . 1 0 2 1 . 0 2 0 1 0 . 0 8 4 0 . 8 0 8 1 0 . 0 7 9 0 . 7 7 5 1 0 . 0 5 4 0 . 7 8 1 1 0 . 0 6 8 0 . 6 7 5 1 0 . 0 6

34、2 0 . 6 6 0 1 0 . 0 6 5 1 .4 2 0 1 0 . 1 1 6 0 1 . 3 0 9 1 0 . 1 0 3 1 . 1 9 8 1 0 :0 8 5 0 . 9 0 1 1 0 .0 7 8 0 . 6 8 2 1 0 .0 6 4 0 . 6 7 4 1 0 .0 8 4 0 . 7 1 5 士 0 .0 9 2 OnonO八n汽0八0八00 JUJUJU ，1内、 与正常对照组及假手术组比较， P 0 .0 5 经琼脂糖凝胶电泳可见其反转录一 聚合酶链反应 产物为5 0 3 b y 。 经D N A测序证实片断为C a s p a s e - 3 。 在 颖顶

35、皮质， C a s p a s e - 3 m R N A在淋巴阻塞后3 d内表达 上调， 以第 1 天表达最高， 淋巴阻塞后3 d 内C a s p a s e - 3 m R N A表达比假手术组及对照组高，且有统计学意义 ( F - 2 9 .8 9 2 , P = 0 .0 0 1 0 .0 1 ) , 淋巴阻塞3 d 后表达接近 正常对照及假手术组。对照组与假手术组之间差异无 统计学意义， 见图t o 在海马， C a s p a s e - 3 m R N A 较颖顶皮质表达上调更 明显， 以第1 天表达最高， 淋巴阻塞后5 d 内C a s p a s e - 3 m R N A

36、表达比 假手术组及对照组高， 且有统计学意义 伊 0 .0 5 ) , 5 d 后表达接近正常对照及假手术组， 见 图 2 0 3 讨论 中枢神经系统没有衬有内皮细胞的淋巴管， 但 I S S N 1 6 7 1 - 5 9 2 6 C N 2 1 - 1 4 7 0 / R中国临床康复2 0 0 6 年7 月1 5 日第1 0 卷第2 6 期 却存在着淋巴引流2 1 。以往的研究发现， 注人大脑实 质的示踪剂可以引流刀颈部淋巴系统，而且注人大 脑蛛网膜下腔的放射性物质约有5 0 %经颈部淋巴系 统引流3 ,4 。可见脑淋巴引流在维持脑组织内环境稳 定和调整颅内压等方面都具有重要作用。该途径的

37、 受阻可引起脑组织血浆蛋白等大分子储留，由此导 致脑水肿以及脑形态结构和功能等改变，即形成淋 巴滞留性脑病。 在细胞凋亡分子生物学的研究中， 许多蛋白酶尤 其是许多蛋白酶同源物的发现， 使蛋白酶在细胞凋亡 中的重要地位越来越为人关注。对线虫C a e n o r h a b - d it is E l e g a n s 的 研 究 发 现 基因c e d - 3 编 码 一 种 半 胧 氨 酸蛋白酶在细胞凋亡中起关键作用， 与白细胞介素 1 p 转换酶有高度同源性，目 前在人体已发现 1 4 种 c e d / I C E家族蛋白， 称为半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶， 当 细胞表面死亡受体被激活或

38、细胞内死亡信号存在时， 始动半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶活化并引发下游效应 半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶蛋白水解激活的级联反应。 它们通过选择性降解核蛋白、 细胞骨架、 内质网等最 终激活核酸内切酶， 导致细胞凋亡5 。 根据半胧氨酸天 冬氨酸蛋白酶在级联反应中的作用位置分为在上游 调控其他半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶活化的始动半胧 氨酸天冬氨酸蛋白 酶 ( 半胧氨酸天冬氨酸蛋白 酶 1 , 2 , 4 , 5 , 8 , 9 , 1 0 ) 和下游直接介导凋亡实施的效应半胧 氨酸天冬氨酸蛋白酶 ( 半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶 3 , 6 , 7 , 1 4 ) fl 。 其中半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 处于核心 位

39、置， 发挥非常重要的作用， 被称为死亡蛋白酶。半胧 氨酸天冬氨酸蛋白酶3 ( C P P 3 2 ) ， 凋亡的主要效应分 子， 半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 基因敲除的小鼠出现 严重的神经细胞和大脑的发育异常， 往往造成胚胎致 死 ， 表明半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 在体内具有重要 功能阴 。 正常情况下， 半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 存在于 胞浆中， 活化的C a s p a s e - 3 裂解激活的D N A酶抑制因 子， 导致C A D释放， D N A降解。半胧氨酸天冬氨酸蛋 白酶3 还裂解参与D N A损伤修复的多聚 ( A D P 一 核糖 核酸) 聚合酶和众多参与组成细胞骨架、 含有

40、半胧氨 酸一 天冬氨酸结构的 蛋白， 最终导致细胞凋 亡。 以往研究证实脑缺血后下游效应半胧氨酸天冬 氨酸蛋白酶3 m R N A表达增加， 酶活性增强。 C h e n 等8 ) 较早检测脑缺血模型大鼠海马和尾状核等处， 发现脑 缺血8 , 2 4 h 后， 半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 m R N A表 达分别较正常组织高 1 . 8 和2 . 3 倍。脑淋巴阻塞后， 由 于淋巴液回流受阻，可产生类似脑缺血的病理变化。 本研究发现， 在颖顶皮质， 半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 m R N A在脑淋巴阻塞后 3 d内表达上调，以第 1 天表 达最高， 淋巴阻塞后3 d 内半胧氨酸矢冬氨酸蛋白 酶 3

41、 m R N A表达比假手术组及对照组高，且有统计学意 义， 3 d 后表达接近正常对照及假手术组。在海马， 半 胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 m R N A较颖顶皮质表达上 调更明显， 以第 1 天表达最高， 淋巴阻塞后5d内半 肤氨酸天冬氨酸蛋白酶3 m R N A表达比假手术组及 对照组高， 且有统计学意义， 5d 后表达接近正常对照 及假手术组。 说明在淋巴滞留性脑病实验性大鼠模型 中， 神经元凋亡的发生可能与半胧氨酸天冬氨酸蛋白 酶3 m R N A的表达上调有关， 并且由于半胧氨酸天冬 氨酸蛋白酶3 m R N A在海马表达升高幅度较大， 说明 海马对于脑淋巴阻滞所引起的缺血缺氧损害较颖

42、顶 皮质更明显且持续时间更长， 海马组织对缺血缺氧的 耐受力更弱。 以往研究发现在大鼠淋巴滞留性脑病实 验模型中， 神经细胞凋亡在术后5d 时最明显19 1 ， 半胧 氨酸天冬氨酸蛋白酶3 m R N A表达上调最先发生， 在 术后第 1 天即达到高峰， 持续约7 2 h ， 后逐渐降低， 直 到 接 近 正 常 对 照 友 假 手 术 组。 目 前 还 没 有 确 切 的 证 据 证明， 淋巴滞留 性脑病大鼠 模型中神经元的凋亡是通 过激活半肤氨酸天冬氨酸蛋白酶3 通路诱发的， 但本 实验中观察到半肤氨酸天冬氨酸蛋白酶 3 m R N A表 达上调， 可能引起半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶3 蛋白的

43、 表达量升高， 提示淋巴滞留性脑病中神经细胞凋亡的 发生可能与半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶 3 m R N A的表 达密切相关。 淋巴滞留性脑病在临床尚并不少见。原发性或继 发性头颈淋巴引流障碍所致的脑水肿患者可出现淋巴 滞留性脑病， 一般表现为自主活动减少， 记忆力减退， 精力不集中， 表情淡漠， 易发生惊厥， 常有头痛、 眩晕、 恶心及呕吐等症状。因此对淋巴滞留性脑病的病理机 制进行深人研究具有重要意义。 ( 图1 - 2 见插图2 6 - 1页) 4 参考文献 1 C h e n Y S , X i a Z 1 , Y a n g M F ,e t a l . S t u d y o n t

44、h e n e u ro n a l m o r p h o l o g y o f ly m - p h o s t a t i c c e r e b r o e d e m a in r a t s . C h i n J P a t h p 梅2 0 0 1 ; 1 7 (4 ) : 3 5 6 - 8 2 F o ld i M . P r e l y m p h a t i c - l y m p h a t ic d r a i n a g e o f t h e b r a i n .A m H e a rt J 1 9 7 7 ; 9 3 ( 1 ) : 1 2 1 - 4 3

45、 Y a m a d a S , D e P a s q u a l e M , P a t l a k C S , e t a l . A l b u m in o u tfl o w i n t o d e e p c e r v i c a l l y m p h f ro m d iff e r e n t r e g io n s o f r a b b it b r a i n . A m J P h y s io l 1 9 9 1 ;2 6 1 ( 4 P t 2 ) : H1 1 9 7 - 2 0 4 4 B o u l t o n M , F l g s s n e r

46、M , A r m s t r o n g D , e t a l . C o n t r i b u t i o n o f e x t r a c r a n ia l l y m - p h a t ic s a n d a r a c h n o i d v i ll i to t h e c l e a r a n c e o f a C S F t r a c e r i n th e r a t . A m J P h y s i o l 1 9 9 9 ; 2 7 6 ( 3 P t 2 ) : R 8 1 8 - 2 3 5 S r i n i v a s u l a S M

47、 , F e m a n d e s - A l n e m r i T , Z a n g r i ll i J , e t a l . T h e c e d - 3 / i n t e r l u k i n 1 b e t a c o n v e rt i n g e n z y m e - li k e h o m o l o g M c h 6 a n d t h e l a m i n - c le a v i n g e n z y m e M c h 2 a lp h a a re s u b s t r a t e s f o r th e a p o p t o ti c

48、 m e d ia t o r C P P 3 2 .J B i o l C h e m 1 9 9 6 ; 2 7 1 ( 4 3 ) :2 7 0 9 9 - 1 0 6 6 S t e n n ic k e H R , S a l v e s e n G S . P r o p e r ti e s o f c a s p a s e s . B io c h i m B io p h y s A c t a 1 9 9 8 ; 1 3 8 7 ( 1 - 2 ) : 1 7 - 3 1 7 P e tt m a n n B , H e n d e r s o n C E . N e u

49、 ro n a l c e l l d e a t h . N e u r o n 1 9 9 8 ; 2 0 ( 4 ) : 6 3 3 - 4 7 8 C h e n J , N a g a y a m a T , J i n K , e t a l . I n d u c t io n o f c a s p a s e - 3 - l i k e p r o t e i n a s e m a y m e d i a t e d e l a y e d n e u r o n a l d e a t h i n t h e h i p p o c a m p u s a f t e r t r a n s i e n t c e re b r a l i s - c h e m i a . J N e u r o s e i 1 9 9 8 ; 1 8 ( 1 3 ) :4 9 1 4 - 2 8 9李育娴， 夏作理， 陈连璧， 等. 大鼠颈部淋巴引流阻断后海马b c l - 2 , b a x 表达 和细胞凋亡的动态变化田.生理学报， 2 0 0