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1、巾 国巾 队眼科杂 屯 、 岌 盯 7 年 ro月第 1 7 卷第 期 兔眼房水及玻璃体中川芍嗓含量的 高效液相色谱法测定 王燕吴媛媛黎周柯雪红 关键词 川芍 哈; 高效液相色 谱法; 房水; 玻璃 体 摘 要 目的 用高效 液相色 谱法 测定兔眼房水、 玻璃体中 川芍 嗓的含量， 了 解川芍 嗓注 射液直流电离 子导入后的有效成分在兔眼房水和玻璃体中的吸收、 分布、 代谢及排泄情况。方法色谱柱为 Wat e 。公司 、 ” : 。 ， Ic t ， C 1 8 ( 5 厂 。 1 ， 4 . 6 x 1 5 o mm ) ， 流动相: 甲醇: 水= 叨: 团， 1 溯 m 中 含5 1 洲
2、. 9 1 3 0 9 ， 磷酸二氢 钾067 7 0 9 ， 冰 醋酸1 血; 检则波长: 294 几 n ， 流速: L 司/ m in ， 室温 操作。结果 在1 . 25一 36科 9 八 己范围内， 房水中 川芍 嗓平均 回 收率均 在80% 左右， 日内 精密 度在5 % 左右， 日 间 精密 度在 ro%左右; 在0 . 3 1 25一 10尸 岁1 111范围内， 玻璃 体中川芍 秦平 均回 收率 均在8 0 % 左右， 日 内 精密 度及日 间精密 度均在10%左右。结论当川兮噪浓度在 一定范围内时， 兔眼房水和玻璃体中川芍噪峰面积与浓度呈良好线性关系。 中图分类号: H 一
3、3 32文献标识码: A 文章编号: 1 1义 粗一 4 3 7 9 恤) 7 ) 05一倪79一03 L 陀 忱 n l l i ll a 廿 。 Il of触 。 m沈 咐of 舫 孚 戚口幼 . ein份油ft侧 I u 曰 ll l s h u l l 饭 l ra l饭 I vi tr 印us 杭th hi gh 碑d 加 们 l a n ce ll q u i d c l l r 阴. 吸 侧 ， 习 训 l y l 不 月 八 交 ; K 砚， 俐门 认 即 1妇 “ U 己 ， IJZ 六 o u ， 以al注 峋 a 呻ofOP 石 工 人 甘汉 阴 。 6 渭 ， 服 Fi
4、 rst选 口 主俪 ed 从 哪ital 不艳 姐 刀 脚 。 “Un沁rs 妙 of八 协 少 ， 段 泊 月 却 应 叭 951( 川 旧 5 汉人敌 忑 K ey讯 团 “ 邵 5 比ine月 li ghpe d b 力 1 坦 Il c e l i q u jd c l u 刀 耐吧蒯】y ， 印 ， 城 ; 叩eous hu m or ; vit reo u ， A 加 坛 舰 吐 。 B 担C T n 飞 Tod e te rmine 胶 c o n tenl ofl i笋魄1 o e in l 习 bbit 呷。s h u m o r 皿 d v i腼 。w i 山h i砂 1
5、 伴 币 一门 几 川 c e li 甲id c h 功 n 扭 加 孚 即 hy出 l d to l u 记 c l石 t a ld 阮 ab s o 甲 t io n ， d i ， tri b u 里 i o n ， met沛 0 1 1 oan d ex o re t i 二ofd i。 。 t 二 ren t of恤 。 t ti n g the i onofacti v e c O 11 11 洲 jn ot . h 1 E 了 H O 6 1 1 记朋司 西。 习c o l u m nw asa s ) ， 11 1l le t 叮C 1 8 s 面n l， s t e e l
6、伪 l unm ( 5 娜， 4 . 6 x l 5 0 。 ) ， w al e r ，th an ol ( 60: 40) ， i n l l】 1 ! 而m i x tu reofth e l l lob i l e 户 as e t he rea 二0 . 9 1 3 0 9 印5 ， 0 . 6770 9 幻1 2 】 心落 班 l dl n d 引即1 司韶 e 奄 ic 况i d . Thefl ow 毗 1 51 . 0111 】 / nnn . Tho w ave le 卿1 : Ofil :e流t e c t o r i 。 2 9 4 ， m l . R 五 s t 几
7、I S W e n c 。 ， Ic c ，l t ra l io : l o f l i q o t 椒i n e i ， i n th e ran罗o f l . 2 5 一 3 6 拜 剖n u i n a q l ， h 二 n o r . 皿 le a 、 e l 叫 岁。 c 二 - e 可was 8 0 %， R S D证i n 此一 d 即w 邸5 %， w h il e i n te 卜d 即w asl o %. W ll e l】 c o n c e n 之 rati o n o f li 明s t 做i n e i s in t 卜 e ran即o f 0 3 1 2 5
8、 一 1 0 科 酬 司 1 。 v i lo o us . 1 七 c a v e l 飞 】9，o v e 即w 、8 0 %， R S D证i n t ra一 d 叮an d i n t e r 一 d 叮二 1 0 %. C ) N ( lt 15 1 ) N S The此 la ti o n s h i p b e 饰e e nlh c伴ak aJ aand c onc e n 加t i o n o f th ed ru gis 1 i n e a r w e l l w i thth ee o 们 c 朗- t rat i o ni们5 附 ei n v anabl y门1 1罕.
9、 中 药川芍来源 r 伞形科植物川芍的十燥根茎， ) 11 芍辛香行散， 卜 行头颠， 下走血海， 活血行气 ， 祛风 止痛， 被前人誉为血 1 ， 之气药， 川芍嗦为川芍中 提取 的生物碱， 是川芍的 有效成分， 近年来， 大量的研究 证实， 川芍 嗓有活血化疲作用， 川以 抗血 小板凝集和 解聚已凝集的血 小板， 抗凝血， 抗血栓形成及溶解血 栓， 可 以降低血 液粘稠度， 减少血浆纤维蛋白 原， 改 善血液高凝状 态， 改善微循环， 减轻脑缺血 再灌注损 伤 后血管内皮 细胞与白 细胞的豁附 作用， 对缺氧缺 血性脑损伤具有保护作用。日 前， 川芍嗦已广泛应 用于脑血栓、 心血管以及眼底
10、出血等循环障碍性 疾 病。为了 进一步研究 探讨经直流电离子导 人 后川芍 嗓在眼内 作用的机理， 我们用高效液相色潜法进行 兔眼房水及玻璃体内川芍嗓的含量测定 ， 报告如下C 1 基 金项 目: 广东 省科技 日划项 目 作者单位: 广州中队药人学第一附属医院眼科， 广州5 1 O 1 O 5 收稿日期二 Z IX 介一 05一 08 1 材料和方法 材料: 仪器有w ate二 2 69 5 型高效液相色潜 仪 ( 美国惠普公司) 、 5 1 9 1 1江 3 k 30型离心机( 上海万达生 物工程有限公司) 、 A-E一 2 1 川型电子分析天平( 瑞上 梅特勒公司) 和眼科直流电疗机(
11、佛山市光学研究 所) 。 试剂: 盐酸川芍嗓 对照品: 中国药品生物制造 检定所， 批号: 817 一9307， 盐酸川芍嗦注射液: 常州 万方数据 2 8 0 制药厂 有限 公司， 批号: 05的巧 1 ， 甲醇( 色谱纯) 天津 市四友生物医学技术有 限公司， 标准号: Q / 阳IE L 以 x ) 1 ， 冰乙酸( 分析纯) ， s DS( 分析纯) ， 磷酸二 氢 钾( 分析纯) 。 实验动物: 1 比一 Z k g 普通级健康新 西兰 纯种大自 兔6 只， 雌雄各 半， 由 广州穗北实验兔 养 殖场提供， 合格证号: 001 2 51 20 方 法: 色1 普 条件 : 色谱柱:
12、wa比 公司5 哪 e - 卿Cl8(5 脚， 4 . 6 x巧 。 m m ) ， 流动相: 甲醇: 水= 40: 印， 1 仪 旧 耐中含s D 印. 91309 ， 磷酸二氢钾0 . 6 77 o 9 ， 冰醋酸1 间， 检测波长: 29 4 I-irn， 流速: 1 而/ 而n ， 室温 操作 样品的 制备、 采集与预处理: 1)含药兔房水、 玻 璃体样品的 制备: 将家兔固定于兔 笼中， 用注射器抽 取盐酸 川芍嗦 注射液2 诫， 滴4 滴于眼结膜囊内， 剩 余药液均匀撒于4 x 4 c m的治疗眼垫上， 置于兔眼 睑皮肤表面， 8 x 6 。 m非治疗电极眼垫( 生理盐水浸 湿)
13、置于家兔须枕部( 眼一 枕导人法) ， 导人电极: 阳 极。电 流强度: 1 o A ， 15而n / 次。2)房水标本的采 集: 分别在导人后的5 、 巧、 30分钟采样， 将家兔固 定于兔笼中， 4 %戊巴比妥钠(ln 山 掩) 耳缘静脉注 射麻醉， 0 . 5 %丁卡因 眼药水做表面麻醉， 有齿镊固 定眼 球， 用1 司一次性注射器自 角膜缘刺人前房， 缓慢抽出 房水0 . 2 而后退出， 置于消毒过的具塞子 弹头式试管， 卜 ， 一ZD冰箱中冷藏待检。3)玻璃体 标本的采集: 采样时间和麻醉条件同上， 有齿镊固定 眼 球后， 于 1 点钟方位距角巩缘3 一 4 mtn 处用带7 号针头
14、的1 而注射器直接穿透巩膜， 缓慢抽取玻璃 体0 . 2 而后退出， 置于消毒过的具塞子弹头式试管 中， 一 20冰箱中冷藏待检。 4)样品预处理: 从冰 箱 ， 取出 样品( 房水或玻璃体)0. 1 而， 室温解冻， 加 人 O t 25 而的甲醇， 涡旋震荡 30秒后， 离心 巧 分钟 ( 1 2 x X ! r/l证 n)。取上清液10拜 L 进样测定 对照品溶液的配备: 电子分析天平精密 称取川 芍 嗓 对照 品0 . 01 029 ， 加甲 醇5 耐溶解， 混 匀， 得浓 度为2 卜 以m g / 时的 储备液 中国中 医眼 科杂 壶洲 坦 口 年10月第17 卷第5 期 18、 9
15、 、 4 . 5 、 2 . 25和 1 . 25滩 / 回浓度的标准液， 按“ 样 品预处理” 方法进行处理， 进样。以峰而积为纵坐标 行 ) ， 浓度为横坐标( X) ， 进行回归计算， 求得网归线 性方程: Y :l 27x l 了 x + 1 . 的x l 口; = 0 . 9 卯97 4 ， 结 果 表 明， 房 水中 川 芍 嗦的 浓 度 在1 . 25一 36卜 州 ml范 围内线性关系良好。 表 1 药物导人后各时间点测定的房水和 玻璃休内的川芍臻的含量 房水玻璃体 时间( 分 钟) 出峰时 间 ( 秒 ) 药物 浓 度 出 恕间键 黔 一巡 黑 闻 耐 1 4 叭 6 既 3
16、 所)道 刃 51 1 不 冷 : 月 三 了 7 0 夕 议 石 14】 7 1臼 此 宁 5巧即 用空白玻璃体将川芍嗦标准品储备液稀释成 1 0、 5 、 2 . 5 、 1 . 2 5 、 0 . 6 2 5 、 0 . 3 1 2 5 1， 酬 m l 浓J变的标准 液， 按“ 样品预处理” 方法进行处理， 进样。以峰面积 为纵坐标( Y)， 浓度为横坐标( x)， 进行回归计算， 求 得回归线性方程: Y= 9 . 02xl 护 x + 2 . 65x l 口 ， : = 。 注 魏 沁 魂 6 ， 结果表明， 玻璃体中川芍嗦的浓度在 0 . 31 25一 101 侣 / ml范围内
17、线性关系良 好 2.3 回 收率与精密度 2 3 . 1 川芍嗦在房水中的回收率与 精密度: 取空白 房 水， 加人标准品溶液， 使其浓度分别为 36、 6和 1 产州而， 各3 份， 均按“ 样品预处理” 方法进行处理， 分别在1 天内 及不同日 反复进样， 求得低、 中、 高浓 度的回收率均在 80%左右， 口内精密度在5 %左 右， 日 间精密度在 用% 左石， 结果见 表2 表2 房水中川芍嗓标准品加样的回收率及精密度 浓度. 材司)回 收率( %) 精密度 ( % ) 口内日p ll 划比21 田 6. 00 孙 . 田 】 仍 4 7 8 名 的 2 8 . 7 】 0 ， 1 )
18、 9 4 2 2 结果 2 . 1 兔眼房水和玻璃休中川芍嗦含量测 定结果 导入后5 分钟， 房水中川芍嗦的 峰面积及浓度 即 达高峰; 巧分钟后， 玻璃体中 川芍嘴的峰面积及 浓度才达到高峰( 表1 ) 。 2 . 2 线性关系 用空自 房水将川芍嗓 标准品储备 液稀释成36、 2.3. 2 川芍嗓在玻璃体中的回收率与 精密度: 取空 白 玻璃体， 加人标准品溶液， 使其浓度分别为 0、 2 . 4 和0 . 6 昭创， 各3 份， 均按 ， 样 品 预 处 理” 方 法 进 行处理， 分别在上 天内及不同日 反复进样， 求得低、 ， ! 1 、 高浓度的回收率均在80%左右， 日内 精密度
19、及 日 间精密度 均在 10% 左右， 结果见表3 表3 玻璃体中川今嗓标准品加样的回收率及精密度 浓度(l 可耐)同收率( %) 精 密度 ( % ) 内，之2 日魂117 : : 1 02 3 99 . 8 761 碧 : :5 万方数据 中 国中 医眼科杂 志2 盯 ) 年 10 月 第 J7卷第 5 期 3讨论 由于眼房水及 玻璃休的量有限， 可供采集的标 本 量更少， 加上眼房水或玻璃体中的内源性杂质、 降 解产物及被吸收的其他成分均可能一扰被测药物成 分的 分离 测定， 因此， 实验要求选择的 检测方法须有 足 够的灵敏度。本实验采用的高效液相色谱法 ( 比LC 法) ， 在 室温
20、下 操作， 避免了 药物的热分解， 且 具有较高的分辨能力， 可分离结构相似的药物及其 代谢产物， 分析时问短。专一性及灵敏度高， 对标本 需求量小， 结果精确可靠， 可以达到实验要求。我们 经多次实 验证 实本力 一 法较稳定， 重现性和回收率结 果良好。 已 有相关文章报道 浏， 用高 效液相色谱法可 以 测定 兔眼 玻璃体中川芍嗦的 含量。 本实 验分别于 眼部川芍嗦直流电离子导人后5 、 巧和30分钟时间 点， 抽取房水或玻璃体， 检测 房水及玻璃体中 川芍嗦 的含量， 结果显示: 盐酸川苟嚷直流电离子导人兔眼 后， 在兔眼房水、 玻璃体中均能测到其药物浓度， 导 人后 5 分钟， 房
21、水中川芍嗦的含量即达高峰; 巧分 钟后， 玻璃体中川芍嗓的 含量亦达到高峰， 此后， 房 水及玻璃体中药物的浓度逐渐降低 此次实验再次证明r， 用 1 11 生 1乙 方法测定眼部 川芍嚓直流电 离子导入后药物含量的可行性及nJ 靠 性， 为临 床应用活血化疲中药直流电离子导 人治疗 眼部疾病提供了 理论依据。另外， 我们还观察了 活 血化痕中 药一川芍嗓注射液 J 丹参注射液直流电离 子导 人治疗兔实验性玻璃体积血的情况， 发现活血 化畏 贫 中药直流电离子导人治疗后， 兔眼玻璃体积血 的 吸收较空白 对照组或注射用水直流电离子导入治 疗组快( 另篇文章报道) 。 参考文献 1 薛淑红， 柯
22、雪红， 王 了 阮等 . 应用高效液相色潜法对玻璃休中 盐 酬11 芍嗦含级的测定 J 中国中探眼科杂志么 习 3 d 3 ( 2): 的一 71. 2 王 燕， 薛淑红， 余扬桂， 等_ 川芍嗦眼部电离子导人治疗玻滴体 出血 的实验研 究 一 J l 眼科 ， 2 川 片 ， 1 3 ( 1) :41 一 科 . 个案报告 眼眶内巨大植物性异物 1 例 林东 晓 王 彦 姚广鹏 陈钢锋 关键词 眼眶; 植物性异物 中图分类号: R779. 1 文献标识码: B 文章编号: 1 :】2 一 4379.仪口 ) 05一 msl一 02 患者男， 8 岁， 因摔倒致枯树枝插人左眼， 眼疼、 视物
23、不见， 伴头痛、 恶心、 呕吐 1 小时， 丁2 1 旧 7 年 5月 12 日10时 来院急诊。人院查患儿神清， 急性病容。眼部检查 右眼视 力 1 . 2 ， 左眼光感光定位存在。左眼上睑明显肿胀， 遮盖整 个角膜， 卜睑缘内卷，卜睑中外 1 /3 皮肤面可见一直径约 12mlu 植物性异物插入， 尾端外露 3 ， ( 图 1 ) 。眼球突出固 定， 各象限运动受限球结膜水肿、 允血.，角膜透明， 前房 清。瞳孔圆， 直径约6 mm 、 相对性传人性瞳孔障碍( R 虹，D ) 阳 性。晶状体、 玻璃体透明。因患儿合作困难眼底窥不清眶 压高右眼无异常， 瞳孔直径约 3 mm 。血常规检查;
24、白细胞 1720xl护 /L， 中性62. 30%， 淋巴2650%。cr扫描显示: 双侧眼球大小形态未见异常， 眼环完整， 晶状体清晰， 玻璃体 密度均匀， 左眼球下方见一条状空气低密度影 考虑异物 左眼眶积气积血， 左侧眼眶内侧壁骨折， 左侧筛窦积血。人 院诊断: 左眼眶内植物性异物; 左上额窦上壁和筛窦外下壁 骨折; 左视神经挫伤?禁食后于急诊全麻 卜 行左眼眶内植物 作者单位浙字 1 省温岭市第一人民医院眼科， 温岭3 1 75田 收稿 日 期 : Z J 力一 07 一17 性异物取出术， 术中经左眼下睑异物周围充分分离， 见异物 远端卡在眼眶内卜吠上额窦和筛窦问。用血管钳夹住异物
25、缓慢用力向外拔出一长55mln ， 直径 12tnn卜 远端为斜面的巨 大异物( 图2)， 后将探针循伤道探查定位， 血管钳夹出残余 异物皮屑， 用庆大霉素和生理盐水冲洗伤道， 吸引器吸出 逐层缝合关闭切口， 放置消毒引流条。检查左眼球完整， 泪 道无损伤。术后全身应用抗生素和神经营养药物并预防破 伤风术后 1 周， 左眼视力 1 . 0 。下睑创n愈合， 眼球外观正 常( 图3)， 各象限运动无受限， 瞳孔圆， 直径约3 . s mm 、 光反 应敏感L门 复查示左眼眶异物无残留， 左眼球及球后无异 常， 上额窦和筛窦有少量积血出院: 讨论: 本病例临床特点是巨大植物性异物经眼眶达 卜 额 窦和筛窦间， 患眼视力光感， 患侧瞳孔散大， 相对性传人性瞳 孔障碍( R气 P l ) ) 阳性， 即直接对光反应迟钝， 间接对光反应存 在1。 考虑植物性圆柱体异物的体积约 6 c 耐， 占儿童眼眶容 积 1 /4 多， 瞬间眶压增高阻断了视神经的供血， 导致球后视 神经急性缺血所致。经急诊手术取出眼眶内巨大异物， 降低 了 眶压， 视力得以 恢复。 此病例在临床上少见 川。眼眶内异 物可能存在的视神经损伤有间接损伤和直接损伤， 间接损伤 万方数据