内毒素诱导犬急性肺损伤TOLL样受体4的变化.pdf

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1、实用临床医学2 0 0 8 年第9 卷第7 期P ，- 口c I l fd i 开i fM 甜l d 刖2 0 0 8 ，V o l9 ，N 0 7 1 内毒素诱导犬急性肺损伤T O L L 样受体4 的变化 吴明1 ，曾振国2 ，聂成2 ，钱克俭2 ( 1 深圳市第二人民医院I C U ，广东深圳1 0 0 7 3 0 ；2 南昌大学第一附属医院I C U ，南昌3 3 0 0 0 6 ) 摘要：目的 探讨T O L L 样受体4 ( T L R 4 ) m R N A 基因表达在内毒素休克犬急性肺损伤变化的规律方法选择 健康成年杂种雄性犬1 6 条，随机分为对照组和实验组( 咒= 8 )

2、，实验组经心静脉3 0m i n 注入内毒素( L P S ) 6 5 0 弘g k g ，诱导犬急性肺损伤模型。用R T - P C R 分别检测各组肺组织T L R 4 的表达。结果实验组与对照组相比，成模 后4hT L R 4 m R N A 在实验组表达上调，2 组比较差异有显著意义( P 3 ，扩增片段为2 0 7b p ；G A P D H 妇引物序列为P 一1 57 一T G C C C C C A T G T T G T G A T G 一37 。P l _ 257 一 C C A G C C C C A G C G T C A A A G G T G 37 ，扩增片段为 5

3、1 9b ；2 5 肛L 总反应体系，扩增参数如下：9 4 预 变性3m i n ，9 4 变性3 0s ，6 0 退火3 0s ，7 2 延伸9 0s ，3 0 个循环后7 2 延伸1 0m i n 。产物经 2 琼脂糖凝胶电泳后，用B I o R A DG E L D O CX R 凝胶成像仪对扩增条带进行扫描，B a n d S c a n 5 o 进 行图像分析，以目的产物与内参产物的灰度值之比 作为目的产物m R N A 的相对表达水平。 1 4 统计学处理 所有数据用S P S S l 2 Of o rw i n d o w s 统计软件 分析，计量数据结果以均数标准差( i 土s

4、 ) 表示。 T L R 4 表达水平变化的组间差异用检验，P O 0 5 表示差异有显著性，P O 0 1 表示差异有非常显著 意义。 2 结果 2 1 血气 静脉注入L P S 后，实验组动物血气分析基础与 成模时结果见表1 。 表1实验组内毒素诱导犬A L I 的血气变化( i 士s ，n = 8 ) 与基础组相比* P O 0 5 2 2T L R 4 m R N A 的表达水平 经采用R T P C R 法测定显示：成模4h 后， T L R 4 m R N A 在对照组、实验组的表达分别是0 8 9 5 士 o 0 4 8 、O 9 8 7 O 0 3 6 ( P O 0 1 )

5、，说明内毒素可以 上调急性肺损伤犬肺T L R 4 的表达。T L R 4 在对照 组、实验组的表达见图1 ：其中( 卜6 ) 为对照组，( 7 1 1 ) 为实验组。 图1 急性肺损伤犬肺T L R 4 的表达 3讨论 T O L L 样受体最早是在研究果蝇胚胎中母体基 因调控背腹侧体轴分化发育途径中发现的n 。其配 体是以前体蛋白的形式被分泌的，可以作为丝氨酸 蛋白酶而激活T O L L 受体，随后引起胞内级联反 应，包括d M y D 8 8 ，I R A K 样激酶P e l l e ，接合蛋白 T u b e 。其信号通路参与了血液细胞的增殖与分化、 抗细菌免疫应答、抗真菌免疫应答以

6、及细胞的黑化 等许多生理病理过程。近年来在哺乳动物体内也发 现了与T O L L 同源的蛋白，对机体天然免疫和炎症 反应同样具有重要作用。到目前为止已有1 2 种人 类T L R 被发现。T L R s 蛋白广泛分布十分广泛，主 要表达于单核巨噬细胞、淋巴细胞、内皮细胞、成纤 维细胞等细胞表面 5 。最近研究发现T L R 4 是革 万方数据 实用临床医学2 0 0 8 年第9 卷第7 期P r 口c 疵“a 妞c 口lM e d i c i n e ，2 0 0 8 ，V o l9 ，N 0 7 兰阴性菌L P S 信号转导的主要受体，介导了核因子 K B ( N F - K B ) 的活化

7、和炎症介质的生成，是细胞信号 转导中最早的信号分子之一。目前研究表明， T L R 4 主要经以下两条途径进行信号转导：即 T L R 4 一M y D 8 8 白介素一1 受体相关激酶一N F K B 诱导 激酶N F K B 途径和T L R 4 一M y D 8 8 I L 1 受体相关 激酶一丝裂原活化蛋白激酶途径，最终导致炎症因 子( 如T N F a 和【卜6 等) 的合成与释放 6 叶j ，提示 T L R 4 在内毒素休克所致的炎症反应的发生、发展 中起重要作用。本实验显示在注射内毒素后， T L R 4 m R N A 在对照组、实验组的表达分别为0 8 9 5 士O 0 4

8、 8 、O 9 8 7 O 0 3 6 ( P O 0 1 ) ，提示内毒素可 以上调急性肺损伤犬肺T L R 4 的表达。但因T L R 4 基因多态性，其对L P S 的敏感性不甚相同，其反应 性也不尽相同 8 。因此，针对T L R 4 这一重要环 节，进行特异性调节可能为预防和治疗急性肺损伤 提供新的途径。 参考文献： 1 F l oTH ，H a l a a so ，T o r ps ，e ta I D i f f e r e n t j a lE x p r e s s i o no f 3 T o l l 1 “eR e c e p t o r 2i nH u n m a n c

9、 e l l s J L e u k o cB i o l ，2 0 0 1 ，6 9 ( 3 ) t 4 7 4 z 罗小星，王大伟，赵永华，等开心胶囊对复苏犬心肌细胞免疫 炎症因子基因表达的抑制作用 J 广州中医药大学学报， 2 0 0 4 ，2 1 ( 5 ) ：3 7 9 3 8 1 3 G u e s tTM ，R a m n a n a t h a nAV ，T u t e u rPG ，e ta 1 M y o c a r d i a l I n j u r yi nC f i “c a 儿y I l lP a “叻t s AF r e q u 曲t J ，rU n r e c

10、o g n j 2 e d c o m p l i c a t i o n J J A M A ，1 9 9 5 ，2 7 3 ( 2 4 ) ：1 9 4 5 4 A n d e r s o nKV T o l l $ n g n a l i n gP a t h w a y si nt h eI n n a t eI m m u n eR e $ p o n s e 口 C u r ro p i nI m m u n o l ，z 0 0 0 ，1 2 ：1 3 - 1 9 。 5 M u z i oM ，B o s i s oD ，P o l e n a 邝tN ，e ta 1 D i

11、“e r e n t i a lE x p r e s s i o n A n d r e g u l a t i o no fT o I l 一1 i k eR e c e p t o r s ( T L R s ) i nH u m a nL e u k c o c y t e s ：s e l e c t i v eE x p r e s s i o no fT L R si nD e n d t i cC e n s J I m m u n o l ，2 0 0 0 ，1 6 4 ：5 9 9 8 6 0 0 4 6 K i r s c h n i n gcJ 。B a u e rS

12、T o l l I i k eR e c e p t o r s ：c e l l u l a rs i g m l T r a n s d u c e r sf o rE x o g e n o u sM o I e c u l a rP a t t e m sC a u s i n gl m m u n eR e s p o n s e s 口 I n tJM e dM i c r o b i o l ，2 0 0 l ，2 9 1 ：2 5 1 2 6 0 7 S a q u i bA ，c l i f f o r dw B 0 9 u e ，T o l l _ l i k eR e c

13、 e p t o rS i g n a l i r I gi n S e p s i s J c u r rO p j nP e d i a t r ，z 0 0 3 ，1 5 ：2 7 8 2 8 2 8 D u a nz h a 0 - 五a 。z h uP e i f a n g ，D D n gH o n g ，e ta 1 F u n c t i o n a lS i g n i f c i a n c eo ft h eT L R 4 1 1 3 6 7P o l y m o r p h i 锄l d e n t i f i e di nC h i n 髂eH a nP o p u

14、 l a t i o n J S h o c k ，z 0 0 7 ，2 8 ( 2 ) ：1 6 0 - 1 6 4 ( 责任编辑：刘大仁) 三磷酸腺苷致过敏反应一例报告 钱思兰 ( 江西省人民医院门诊注射室，南昌3 3 0 0 0 6 ) 关键词：三磷酸腺苷；过敏反应；病例报告 中图分类号：R 9 6 9 3文献标识码：B 文章编号：1 0 0 9 8 1 9 4 ( 2 0 0 8 ) 0 7 一o 0 0 3 一0 1 三磷酸腺苷( A T P ) 为临床常用药，引起过敏反应者极 少，本科遇到1 例报告如下。 l 临床资料 患者，女，3 6 岁，因突发性耳聋于2 0 0 7 年l O

15、月1 0 日到 本院五官科门诊就诊，给予生理盐水2 5 0r n L + A T P4 0m g + 维生素B B 2 0 0m g 静脉点滴，按每分钟6 0 滴输入，2m i n 后患 者诉胸闷、气逼、心慌、发音困难，口唇面色紫绀。查体：血压 1 6 0 8 5m mH g ( 1m mH g o 1 3 3k P a ) ，脉搏6 5 次m i n ，呼 吸2 6 次m i n 。立即拔除点滴。给予吸氧、地塞米松1 0m g 肌 肉注射、非那根2 5m g 肌肉注射，2 0m i n 后症状缓解。 2 讨论 A T P 为高能磷酸化合物，是人体代谢必须的一种辅酶， 用于肝功能不全、冠心病、

16、肌肉萎缩性疾病及听神经损害等 治疗。该患者在输液开始2m i n 后立即出现过敏反应，可能 与过敏体质有关，因该患者输入体内的A T P 极少，且抢救及 时，症状缓解较快李德芹【1 3 、周林贤站也曾报道过A T P 过 敏反应。作者体会，临床上应用A T P 时应注意：( 1 ) A T P 引 起的过敏反应症状严重，变化迅速，因此医护人员应加强巡 视，严密观察，应告知患者如有不适及时报告。并随时做好抢 救准备，确保患者用药安全。首次静脉点滴速度应慢，观察 1 5 2 0m i n 无反应，方可根据病情调节滴速。 参考文献： 1 李德芹三磷酸腺苷致过敏反应1 倒 J 潍坊医学院学报， 1 9 9 7 ，1 9 ( 2 ) ：9 6 2 周林贤三磷酸腺苷致过敏性休克1 例 J 大理医学院学报， 2 0 0 0 9 ( 3 ) ：8 2 ( 责任编辑：钟荣梅) 万方数据