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1、中国热带医学2 0 0 8 年第8 卷第3 期 C HIN A T R O P I C A L M E D I C I N E V o l . 8 N o . 3 M a r c h 2 0 0 8 4 6 9 检验医学 反相高效液相色谱法测定卤肉制品中硝酸盐及亚硝酸盐 杨华梅 摘要: 目 的采用反相高效液相色语 一 二极管阵列检浏器法浏定卤肉制品中箱酸盆及亚葫酸盆含贵。方法 选择四丁基澳化按( T B A B r ) 作为离子对试别， 与葫酸根和亚葫酸根阴离子形成中性缔合物， 在甲醉一 1 . 2 5 m m o l / L 混合 磷酸盆流动相中， 被非极性健合相柱( O D S ) 分离
2、并定I检山。结果在此检浏条什下峭酸盆和亚葫酸盆有很好的 线性， 相关系 数均人于0 . 9 9 9 9 ， 两者的最小检出限分别为0 . 0 1 m 岁 L 和0 . 0 0 5 m g / L ， 相付标准差均小于5 %， 回收率在 8 6 . 3 %- 9 9 . 1 %之间。结论该法适用于卤肉制品中稍酸盐及亚峭酸盆含I的同时浏定。 关健词: 反相高效液相色谙; 卤肉制品; 稍酸盆; 亚峭酸盆 中图 分类号: R 一 3 3丈故标识码: B文章编号: 1 0 0 9 一 9 7 2 7 ( 2 0 0 8 ) 3 一 4 6 9 一 0 2 D e t e c t i o n o f n
3、i t r a t e a n d n i t r i t e i n c o o k e d m e a t w i t h r e v e r s e d h i g h p e r f o r m a n ce l i q u i d p h a s e c h r o m a t o g r a p h y . Y A N G H u a 一 m e i . ( T a i z h o u M u n ic i p a l C e n te r fo r D i s e a s e C o n tr o l a n d P r e v e n ti o n , T a iz h o u
4、 2 2 5 3 0 0 , J i a n g s u , P . R . C h i n a ) A b s t r a c t : O b j e c t i v e T o d e t e r m i e t h e c o n t e n t s o f n i t r a t e s a n d n i t r i t e s i n c o o k e d m e a t p ro d u c t s 勿u s i n g d i o d e a r r a y d e t e c t o r a n d h ig h p e r f o r m a n c e li q u i
5、d c h r o m a to g r a p h y( H P L C ) . M e th o d s 、 s e p a r a tio n w a s p e r fo r m e d w ith 3 m M t e t r a b u t y l a m m o n iu m d i s s o lv e d in m e t h a n o l 一 m i x e d p h o s p h a te ( 巧: 8 5 ) b u ff e r a s i s o c a t ic m o b i le p h a s e a t a fl o w r a t e o f 1 .
6、 0 m l/ m in a n d a c c o m p l i s h e d 场 O D S 一 C 1 8 c o l u m n . R e s u lt s T h e r e w a s a g o o d li n e a r c o r r e l a t io n ( r = 0 . 9 9 9 9 ) o v e r th e w o r k i n g r a n g e a n d d e t e c t io n li m i ts o f 0 . 0 1 m g / L a n d 0 . 0 0 5 m g / L f o r d e t e r m i n
7、a t i o n o f n i tr a t e s a n d n i t r i t e s , re s p e c t i v e l y . T h e r e c o v e r i e s .fr o m 8 6 . 3 % t o 9 9 . 1 %. T h e r e l a t iv e s t a n d a r d d e v i a t i o n s w a s b o t h l e s s t h a n 5 % a . C o n c l u s i o n T h e m e t h o d w a s s i m p l e , r a p i d
8、a n d a c c u r a te f o r d e t e r m i n a t io n o f n i t r a t e s a n d n i t r i t e s . K e y w o r d s : H i g h p e r f o r m a n ce li q u i d c h r o m a t o g r a p h y ; N i t r a t e s ; N i t r i t e s ; C o o k e d m e a t p r o d u c t s 在长期的肉 类食品生产过程中， 硝酸盐和亚硝酸盐被广泛 地用来作为肉制品的发色剂和抑菌剂
9、， 但研究结果表明， 加人 食品中的硝酸盐和亚硝酸盐会使食物中的某些胺类物质转变 成有害的致癌物一 亚硝胺， 因此各国已把硝酸盐和亚硝酸盐作 为卤肉制品卫生监测的重要指标， 食品中的硝酸盐和亚硝酸盐 含量的测定方法文献报道很多 2 , 3 1 ， 最常用的仍是盐酸蔡乙二 胺比色法， 但其只能测定亚硝酸盐， 而硝酸盐必须经福柱定量 还原为亚硝酸盐才能测定， 操作麻烦费时。本文研究了用反相 高效液相色谱法同时测定卤肉制品中硝酸盐和亚硝酸盐含量， 操作简便、 准确、 无需分离， 回收率、 精密度、 检出限均得到较满 意的结果。 1 实验部分 1 . 1 主要试剂与仪器甲 醇( 光谱纯) ; 去离子水
10、( 1 8 . 3 6 M Wc m ) ; 饱和硼砂溶液( 5 0 . 0 g / L ， 称取5 . 0 硼酸钠( N a 2 B 4 Q , 1 O H 2 0 ) ， 溶于 1 0 0 m l 热水中， 冷却后备用) 亚铁氰化钾溶液( 1 0 6 . O g / L ， 称取 1 0 6 . 0 g 用水溶解， 并稀释至1 O O O m l ) ; 醋酸锌溶液( 2 2 0 .0 岁 L ， 称 取2 2 0 . 飞加3 0 m l 冰乙酸溶于水， 并稀释至1 O O O m l ) ; 硝酸盐标 准溶液( 2 0 0 m g / L ， 准确称取0 . 2 0 0 0 g 于1 1
11、 0 一 1 2 0 干燥恒重的 硝酸钠， 加水溶解， 移于1 O O O m l 容量瓶中， 并稀释至刻度， 至于 冰 箱保存) ; 亚硝酸 盐标准溶液( 2 0 0 m g / L ， 准确称取。 . l o 0 0 g 于 硅胶干燥器中干燥 2 4 h的亚硝酸钠， 加水溶解并稀释至 5 0 0 M L ) ; 岛津L C 一 1 0 A 液相色谱仪( C l a s s 一 V P 5 . 0 型二极管阵 列检测器、 L C 一1 0 A溶剂输送泵、 H S 色谱数据工作站 V 6 . 2 ) : 0 . 4 5 u m微孔滤膜; 艾科浦 U系列纯化水机( A W J 2 6 一1 0
12、一 U ) 1 . 2 色谱条件色谱柱 S h im 一 p a c k C L C 一 O D S cp 6 x 1 5 0 m m ; 预 柱: S h i二 一 p a c k G 一 O D S ; 流动相: 甲醉+ 1 . 2 5 m m o l / L 混合磷酸 盐， 含 3 m m o l / L四丁基澳化按， 配比为 1 5 +8 5 ; 流速: 1 . 0 m I J m i n ; 柱温: 2 5 C; 检测波长2 2 0 n m ; 进样量: 2 0 u L : 保留时间定性， 峰面积外标法定量。 1 . 3 样品预处理称取5 g 左右样品经纹碎混匀的试样于 I O O
13、M L 烧杯中， 加1 2 . 5 m L 硼砂饱和液搅拌均匀， 以7 0 左右的 水 约3 0 0 m L 将试样洗人 5 0 0 容量瓶中， 于沸水浴中加热 1 5 m in ， 取出后冷却至室温， 然后一面转动， 一面加人5 m L 亚铁 氛化钾溶液， 摇匀， 再加人5 m L 醋酸锌溶液， 以沉淀蛋白质。加 水 至刻度， 摇匀， 静置片刻。 取上清夜经。 . 4 5 p m滤膜滤过， 待 测。 1 . 4 标准曲线的制作配制系列浓度的标准溶液， 采用多点 线性校正， 建立峰面积一 浓度标准曲线或直线回归方程。根据 I U P A C的规定倍噪音为样品检出限。本方法的线性范围、 相关 系
14、数、 检出限如表 1 所示。 表 1 方法的线性浓度范围， 相关系数和检出限 组分 线性浓度范围 ( m g / L ) 相关系数 检出限 ( m g / L ) 亚硝酸盐 硝酸盐 0. 0 18 0. 0 0 0. 0 1 8 0. 0 0 . 9 9 9 9 0. 佣 5 . 9 9 9 9 0. 0 1 2. 1 结果与讨论 色谱条件的选择比较了几种比例流动相， 分别为甲醇: 盐水溶液( 1 0 : 9 0 ) 、 甲醇: 盐水溶液( 1 5 : 8 5 ) 、 甲醇: 盐水溶液( 1 8 : 8 2 ) ， 发现甲醇: 水溶液( 1 5 : 8 5 ) 条件下亚硝酸盐及硝酸盐和样 。作
15、者单位: 秦州市疾病预防控制中心， 江苏秦州 2 2 5 3 0 0 . 万方数据 4 7 0 C H I N A T R O P I C A L M E D I C I N E V o l . 8 N o . 3 M a r c h 2 0 0 8 中国 热带医学2 0 0 8 年第8 卷第3 期 品中干扰物能达到较好的基线分离， 并且亚硝酸盐峰之前的负 峰对测定无干扰; 改变流动相流速， 当流速为 1 . 0 m I J m i n 亚硝 酸盐及硝酸盐出峰时间合适， 峰形较好; 在方法测试条件下， 亚 硝酸盐和硝酸盐测得的灵敏波长分别为2 1 4 , 2 1 3 n m ， 为避免低 紫外
16、波长的 影响， 使色谱基线稳定， 故定为2 2 0 n m 5 l 。 综合考 虑， 确定测定的色谱条件为: 流动相为甲醇: 盐水溶液( 1 5 : 8 5 ) , 流速1 . 0 m um in ， 柱温2 5 9C , 检测波长2 2 0 n m ， 进样量为2 0 P L , 测 定结果令人满意。 2 . 2 精密度和回收试验精密度试验分别配制低、 中、 高浓度三 种标准溶液， 各进行7次测定， 亚硝酸盐 R S D为0 . 4 5 % 2 . 6 %， 硝酸盐 R S D为0 . 3 6 %一 2 . 0 %， 结果见表2 ; 采集市场售 卖的卤肉制品， 加人不同量的标准溶液进行测定，
17、 亚硝酸盐回 收率为8 8 . 9 %一 9 9 . 1 %， 硝酸盐回收率为8 6 . 3 %一 9 8 . 6 %， 结 果见表 3 0 2 . 3 方法可靠性试验 对同 一样品用本法与国标法同时测定 亚硝酸盐和硝酸盐两组分， 通过F 检验和名 检验， 本法与国 标 法所测定的结果均无显著性差异， 并且操作简便， 易于掌握。 结果见表4 0 表4 样品中亚硝酸盐和硝酸盐含里 两种方法的测定结果比对( n 二 7 ) 被测物 反相高效溶 相色谱法 同标法 亚硝酸盐 硝酸盐 1 0. 0 1:t 0. 0 8 0 5 . 3 8士0 . 0 7 6 1 0. 0 3 t 0 . 8 5 5.
18、6 2士0. 0 8 2 表2 精密度试验结果( n 二 7 ) T a b 2 P a r n l l e l d e t e r mi n a ti o n 组分 标准浓度 ( Fi g / m L ) x 士 巴 R S D ( %) 3 小结 本法能够同时测定卤肉制品中硝酸盐和亚硝酸盐含量， 具 有快速、 准确、 灵敏、 线性范围大等优点， 样品中的其他组分如 色素、 动物性蛋白等对其检测不构成干扰， 与国家标准法比较， 测定结果无显著性差异。对已 装备了液相色谱仪的实验室， 本 方法扩展了仪器的检测范围， 并且大大提高工作效率， 很值得 推广。 ( ra g / m L ) 亚硝酸盐
19、1 . 0 5. 0 参考文献: .000.0 20.5.20 硝酸盐 0. 9 4土0 . 0 2 4 3 4. 9 7 t 0. 0 5 8 3 1 9. 卯 t 0 . 0 9 0 9 0. 9 7: t 0. 0 1 9 0 4 . 9 5 t 0 . 0 5 3 1 1 9. 8 5士0. 0 7 0 9 2 . 6 1 . 2 0 . 4 5 2 . 0 1 . 1 0. 3 6 表3 样品中亚硝酸盐和硝酸盐加标回收率试验结果 样品 编 号 亚硝酸盐 本底加人 测定 硝酸盐 回收本底加人 量u S 测定回收 ug 率( %) 沁 . 0 9 6 . 2 1 张有贤， 冯彦琳， 张生
20、万等. 导数一三波长光度法同时测定肉制品 中亚 硝酸盐和硝酸盐的研究 1 l . 分析化学. 1 9 9 0 , 1 8川 1 0 1 1 - 1 0 1 5. 【 幻 周彤， 戈早川 . 多波K线性回归四阶导数分光广度法同时测定卤 肉制品中硝酸盐及亚硝酸盐 7 l . 中国卫生检验, 1 9 9 9 , 9 ( 1 ) 4 1 - 4 3 . 3 张莹， 陈波. 高效离子色谱法测定食品中的硝酸盐及亚硝酸盐 J . 中国国境卫生检疫杂志, 1 9 9 6 , 1 9 ( 4 ) 2 17- 2 1 8 . 4 食品卫生检验方法( 理化部分) S . 北京: 中国标准出版社， 2 0 0 4 :
21、 2 5 9-2 6 4 . 5 播芸茜， 反相离子对高效液相色谱法测定水中N O一 2 一 N与N O 一 3 - N含蚤 J . 中国卫生检验杂志, 2 0 0 6 , 2 ( 1 6 ) ; 2 1 8 6 - 2 1 8 7 . 收稿 日期 : 2 0 0 7 -1 1 -0 8 了07 . 值一夕 加匆 孟U6 : 值一刀 量u 8值u B 率( %) 2 0 7 0 . 1 5 6 . 0 5 0 1 0 6 . 7 9 5 . 6 值-58 5 8 . 9 3 5 8 . 9 1 0 0 1 5 7 . 5 9 8 . 6乃. 6 1 0 0 1 2 1 . 9 9 8 . 3
22、检验医学I 心肌肌钙蛋白I 测定中假阳性的结果分析 陈波， 黄海樱 摘要: 目 的 探讨引起心肌从钙蛋白I ( c T n I ) A定结果很阳性的原因。 方法浏定非急性心肌梗塞的入院患者 的血清。 T n l ， 统计病种和计算假阳性率。 结果 被确诊非心脏疾病患者有1 6 4 例， 其中2 2 例c T n I 为假阳性( 男性有 巧例， 女性有7 例) ， 引起 c T n l 很阳性病种分布知下: 消化道疾病 1 例( 4 . 5 5 %) 、 脑疾病5 例( 2 2 . 7 3 %) , 肾脏疾病 2 例 ( 9 . 0 9 %) , 糖尿病3 例( 1 3 . 6 4 %) , 高血压5 例( 2 2 . 7 3 %) 、 呼吸道疾病5 例( 4 . 5 5 %) , 肝脏疾病 1 例( 4 . 5 5 %) o结论 c T n l 目 前被认为是最具心脏特异性， 且最有价值的心肌损伤指标之一， 但其检测方法尚未标准化， 循环中c T n l 浓度的 检浏也受多种因素干扰， A M I 和A C S 以外的疾患的。 T n l 的假阳性也值得临床注意。 作者单位: 广州医学陇第二附属医院. 广东广州 5 1 0 2 6 0 . 万方数据