吗啡对谷氨酸和天然辣椒碱引起的大鼠脊髓背角c-Fos蛋白表达的影响.pdf

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1、 2 4 吗啡对谷氨酸和天然辣椒碱 引起的大鼠脊髓背角c - F o s 蛋白表达的影响 金幼虹1 ，刘红宝1 ，姚雷芬1 ，胡建华1 ，竹村元秀轴，米原典史2 “ ( 1 南昌大学附属口腔医院口内科，南昌3 3 0 0 0 6 ； 2 日本大阪大学齿学院a 口腔解剖和神经生化系；b 药理学系，日本吹田5 6 5 - - 0 8 7 1 ) 摘要：目的探讨足底注射吗啡对谷氨酸和天然辣椒碱所引起的大鼠脊髓背角c - F o s 蛋白表达的影响，从而了解 阿片和谷氨酸受体在末梢神经痛觉传递中的相互作用。方法7 2 只健康S D 雄性大鼠。随机分为1 2 组，每组6 只。 在大鼠后肢左侧足底分别注射

2、( 正常对照组不用药) 生理盐水( S a l i n e 组) 、谷氨酸( G l u 组) 、天然辣椒碱( C a p 组) 、 吗啡( M O R 组) 、盐酸纳洛酮( N I 。X 组) 、谷氨酸+ 吗啡( G l u + M O R 组) ，谷氨酸+ 盐酸纳洛酮( G l u + N I 。X 组) 、谷 氨酸+ 盐酸纳洛酮+ 吗啡( G l u + N I 。X + M O R 组) 、天然辣椒碱+ 吗啡( C a p + M O R 组) 、天然辣椒碱+ 盐酸纳洛酮 ( C a p + N I ，X 组) 、天然辣椒碱+ 盐酸纳洛酮+ 吗啡( C a p + N L X + M

3、O R 组) I 注射药物2h 后对脊髓( L 4 s ) 背角出 现的c - F o s 阳性神经细胞的数量进行观察。结果在脊髓( L 一s ) 背角浅层的c - F o s 阳性神经细胞数，正常对照组 为0 个f S a l i n e 组、M O R 组、N l ，X 组分别为( 6 0 土5 ) 、( 5 0 士1 4 ) 、( 6 7 士2 2 ) 个，3 组比较差异无统计学意义( P 0 0 5 ) ；G l u 组、C a p 组分别为( 2 6 8 士2 1 ) 、( 4 8 9 3 4 ) 个，与S a l i n e 组比较差异有统计学意义( P O 0 5 ) ；( 2

4、6 8 2 1 ) a n d ( 4 8 9 土3 4 ) p i e c e sf o rG l ua n dC a pg r o u p ，r e s p e c t i v e l y T h e r e w e r er e m a r k a b l es t a t i s t i cs i g n i f i c a n tc o m p a r e dw i t hs a l i n eg r o u p ( P 0 0 1 ) ；( 6 5 士1 0 ) p i e c e sf o r G l u + M O R g r o u pw a sl o w e rt h a

5、nG l ug r o u p ( P O 0 5 ) l ( 3 2 1 3 3 ) p i e c e sf o rG l u + N L X + M O R g r o u pw a sh i g h e rt h a nG l u + M O Rg r o u p ( P O 0 5 ) ；( 2 5 9 土5 2 ) p i e c e sf o rC a p + M O Rg r o u pw a s l o w e rt h a nC a pg r o u p ( P O 0 5 ) l ( 4 9 1 士4 4 ) p i e c e sf o rC a p + N I 。X

6、+ M O Rg r o u pw a sh i g h e rt h a n C a p + M O Rg r o u p ( P O 0 5 ) C o n c l u s i o nS u c hr e s u l t si l l u s t r a t et h a tg l u t a m a t er e c e p t o r sp a r t i c i p a t ei nl , e g u l a t eo fC - F o se x p r e s s i o ni nt h es u p e r f i c i a ll a y e ro fs p i n a lc

7、o r dd o r s a lh o r n ，a c t i v a t i o n o fo p i o i dr e c e p t o r si n d u c ead e c r e a s eo ft h el e v e lo fc - F o se x p r e s s i o ne v o k e db ye x o g e n o u sa n de n d o g e n o u sg h 】f t a m a t e ，a n dn a l o x o n ec o u l dr e v e r s et h ee f f e c to fm o r p h i n

8、 e K E YW O R D S ：m o r p h i n e ；i n t r a p l a n t a r ；c - F o s ；g l u t a m a t er e c e p t o r ；o p i o i dr e c e p t o r ；s p i n a lc o r d ； a n i m a l ，I a b o r a t o r y ；r a t s 阿片的抗痛觉效果被认为与位于中枢神经系统 的阿片受体激活有关 1 J 。H o n o r 6P 等 2 已经报道 了足底注射吗啡可以剂量依赖性抑制由角叉菜胶而 不是由有害热刺激引起的脊髓c - F o s

9、 的表达，这种 效果可以完全被足底注射盐酸纳洛酮所阻断。外源 性的阿片类可以通过与位于白鼠和人类的感觉神经 末梢的阿片受体的结合产生抗痛觉的效果 3 。c - f o s 基因是一种即刻早期基因，诱导其表达的相关机制 主要与N M D A 、N O 、C a 2 + 和G A B A 等因素有关。 c - l o s 基因的表达产物F o s 蛋白与靶基因的特异序 列结合，调节其转录水平发挥信使作用。F o s 蛋白 是一种能反映神经活力的解剖标志蛋白质。谷氨酸 被认为是一种末梢传人纤维中重要的兴奋性神经递 质，产生于神经核内，通过轴索的运动将它输向末梢 和中枢，它可以从兴奋性的感觉神经末梢释

10、放 4 。 不同种类的谷氨酸受体被证明位于猫、鼠和人类的 传入神经轴索上。电生理试验证实吗啡的局部应用 可抑制谷氨酸所引起的白鼠表皮神经细纤维的兴奋 性L 5 j 。电生理的研究也表明在脊髓感觉通路上的谷 氨酸受体对有害的温度、化学和机械刺激起作用。 这就说明与谷氨酸及其受体有关的突触的兴奋与 c - F o s 蛋白的表达有关、然而，吗啡影响谷氨酸和天 然辣椒碱所引起的脊髓背角c - F o s 蛋白表达的机理 并不十分清楚。本文旨在研究局部注射吗啡是否会 抑制谷氨酸和天然辣椒碱所引起的脊髓背角c - F o s 蛋白表达，以了解末梢神经兴奋传递中谷氨酸和阿 片受体的相互作用和阿片的抗痛觉机

11、理。 l 材料与方法 1 1 实验试剂 谷氨酸，天然辣椒碱，吗啡，盐酸纳洛酮，戊巴比 妥钠。均购于日本和光化学研究所，溶解于生理盐 水中，但天然辣椒碱溶解于由乙醇( 1 0 ) + T w e e n ( 1 0 ) + 生理盐水( 8 0 ) 所组成的混合液中。溶液 的p H 值调至7 4 。 I 2 实验动物及分组 7 2 只雄性成年S D 大鼠，体质量2 0 0 “ - - 3 0 0g ，购 自日本大阪K e a r iC o L t d 。动物保持于1 2h 的白 天黑夜轮回，自由地接受食物和水。随机分成1 2 组，每组6 只。 1 3 实验方法 实验程序均按大阪大学医学伦理协会的章

12、程， 遵照国际疼痛组织的规则实施。所有实验在半年内 完成。 所有药物的注射剂量为5 0p L ，注射于大鼠左 侧后肢足底( 在无麻醉的情况下，注射器的针头朝动 物足底的近中刺入) ，使用的注射器为1 0 0p L ( H a m i l t o ns y r i n g e ，R e n o ，N V ，U S A ) 。注射药物 2h 后对在注射侧和注射对侧( 对照侧) L 4 5 脊髓 背角出现的c - F o s 阳性神经细胞的数量进行观 察引。 1 ) 正常对照组：足底不注射任何药物，直接观 万方数据 察L 4 5 脊髓背角出现的c F o s 阳性神经细胞的数 量。 2 ) G l

13、u 组：足底注射谷氨酸5 比m o l ；C a p 组： 足底注射天然辣椒碱1 5 0n m o l 。 3 ) M O R 组：足底注射吗啡2m g k g ；N L X 组：足底注射盐酸纳洛酮1m g k g ；S a l i n e 组：足底 注射生理盐水5 0 灶L 。 4 ) G l u + M o R 组：足底联合注射谷氨酸 5 肛m o l 和吗啡2m g k g ；G I u + N L X 组：足底联合注 射谷氨酸5t 比m o l 和盐酸纳洛酮1m g k g ；G l u + N L X + M O R 组：足底联合注射谷氨酸5 比m o l 、盐酸 纳洛酮1m g k

14、 g 和吗啡2m g k g 。 5 )C a p + M o R 组：足底联合注射天然辣椒碱 1 5 0n m o l 和吗啡2m g k g ；C a p + N L X 组：足底联 合注射天然辣椒碱1 5 0n m o l 和盐酸纳洛酮 1m g k g ；C a p + N L X + M O R 组：足底联合注射天 然辣椒碱1 5 0n m o l 、盐酸纳洛酮1m g k g 和吗啡 2m g k g 1 4e - F o s 免疫生化学染色 注射药物2h 后，用戊巴比妥钠将大鼠麻醉，然 后对其进行体内灌流。灌流时用生理盐水1 0 0m L ， 溶解于0 1m o l L 磷酸盐缓

15、冲液( P B ) ( p H7 4 ) 的 4 多聚甲醛5 0 0h L 。灌流后取出脊髓，将其固定 于4 多聚甲醛液内3 0m i n ，然后放进溶解于 0 1m o l LP B 的2 0 蔗糖溶液内保存，置于4 环境，直至组织下沉。采用冰冻切片机将组织切成 6 0p m 厚度，切下组织收集于0 0 2m o l L 磷酸缓冲 液( P B S ) 内。切片用0 0 2m o l LP B S 冲洗，用l 正常羊血清阻断3 0r a i n ，在室温下培养于兔抗体 ( r a b b i ta n t i b o d ya g a i n s t ) c - F o s ( 1l7 0

16、0 0 溶液； S a n t aC r u zB i o t e c h ，S a n t aC r u z ，C A ，U S A ) 6 0m i n ， 放置于4 的环境中1 2h 。用0 。0 2m o l LP B S 冲 洗3 0m i m 后，切片培养于b i o t i n y l a t e dg o a ta n t i r a b b i ta n t i s e r u m ，再用0 0 2m o l LP B S 冲洗 3 0r a i n 后，用a v i d i n - b i o t i n p e r o x i d a s e c o m p l e x

17、( V e c t a s t a i n ，V e c t o rL a b o r a t o r i e s ，B u r l i n g a m e ，C A ， U S A ) ( A B C ) 染色6 0m i n ，为了使视野更清楚，切片 放置于0 0 5 d i a m i n o b e n z i d i n et e t r a h y d r o c h l o r i d e ( D A B ) 、0 1 硫酸镍铵( a m m o n i u mn i c k e ls u l f a t e ) a n d0 0 1 h y d r o g e np e r o

18、 x i d ei n0 0 5m o l LT r i s H C Lb u f f e r ，再用0 0 2m o l LP B S 冲洗3 0m i n 后， 切片干燥，计数c - F o s 阳性神经细胞。 1 5 c - F o s 阳性神经细胞计数 在每一只实验大鼠中，从L 4 5 的脊髓背角， 选择1 0 枚染色最好的切片计数。计数时。只考虑细 胞的数量和部位，不考虑阳性细胞的染色强度。仅 仅计算脊髓背角中I 一和一层的c - l o s 阳性神经 细胞的数量，单位为个。 1 6 统计学处理 用S P S S l 3 0 统计软件包进行统计分析，采用 单向方差分析，P o 0 5

19、 为差异有统计学意义。 2 结果 位于脊髓背角的e - F o s 蛋白核被染色成不同的 程度，c F o s 阳性神经细胞主要产生于脊髓背角双 侧的I 和层，尤其是注射侧的表层多见，在 深层和对照侧c - F o s 阳性神经细胞很少出现( 图1 2 ) 。正常对照组L 4 一。的脊髓背角双侧的c F o s 阳性 神经细胞几乎为零。各组大鼠注射药物2h 后注射 侧和对照侧的c - F o s 阳性神经细胞数比较见表1 、图 1 2 ，显示吗啡可以减少由谷氨酸和天然辣椒碱引 起的脊髓背角c - F o s 蛋白表达；盐酸纳洛酮可以部 分阻断吗啡对谷氨酸和天然辣椒碱所激发的脊髓背 角e - F

20、 o s 蛋白表达的影响。 所有的图片具有相同的扩大比例，基准尺寸 为1 0 0 “血与G I u + M O R 组比较- P O 0 5 图1 吗啡和盐酸纳洛酮对谷氨酸所引起的e - F o , 阳性神经细胞的影响 万方数据 江西医学院学报2 0 0 8 年第镐卷第5 期 A c t aA c a d e m i a eM e d i c i n a eJ i a n g x i2 0 0 8 。V o l4 8 。N o52 7 t p I i t I c r 一 口( k 城n I - H - L 6 所有图片具有相同的扩大比例，基准尺寸为 1 0 0 岬与C a p + M O R

21、组的比较* P O 0 5 图2 吗啡和盐酸纳洛酮对天然辣椒碱所 引起的c - F o s 阳性神经细胞的影响 表l 各组大鼠注射药物2h 后L 4 5 脊背角c - F o s 阳性 神经细胞数比较( i 士s ，个，露= 6 ) 组别 注射侧 亓矿面而 对照侧 I 与S a l i n e 组比较。# P 0 0 1 与G l u + M O R 组和C a p + M O R 组比较。* P 0 0 5 3 讨论 3 1天然辣椒碱和谷氨酸对脊髓背角c - F o s 蛋白 表达的影响 本研究结果显示，天然辣椒碱和谷氨酸可以激 发大量的脊髓背角浅层c - F o s 蛋白的表达。 天然辣椒

22、碱可以选择性地作用于感觉神经系统 中无髓的c 纤维和有髓的A 6 纤维。电生理和生化 学研究显示天然辣椒碱通过增加细胞膜对钙离子的 通透性激活痛觉受容器。天然辣椒碱的神经毒性作 用主要局限于小直径的感觉纤维。它能刺激周围和 中枢感觉神经末梢的谷氨酸、n e u r o p e p t i d e 、C G R P 、 n e u r o k i n i nA 和s u b s t a n c eP 等物质的释放 7 。 L iD P 等8 3 报道：通过激活T R P V l 受体引起谷氨酸 增加导致了神经末梢钙离子浓度的增加，而这种效 果可通过移除细胞外的钙离子消除。因此，可以说， 天然辣椒

23、碱的注射激活了V R l 受体从而引起末梢 谷氨酸的释放，内源性谷氨酸激活N M D A 、A M P A 和第一类代谢型谷氨酸受体，这些受体对分布予脊 髓背角浅层和深层的c - F o s 阳性神经细胞的表达产 生重要作用。选择性的刺激大鼠足底的V R l 受体 可以激活注射侧和对照侧脊髓背角的神经可塑性， 尤其是注射侧的I 层，这些神经可塑性的特征为 c - F o s 阳性神经细胞的增加。天然辣椒碱能影响钙 离子通道，使钙离子从细胞膜外向细胞膜内流动，内 源性的谷氨酸从末梢神经释放，激活末梢c _ 和A 艿- 纤维，而末梢C 一和A 8 一纤维终止于脊髓背角表层 6 ， 在本实验中，外源

24、性的谷氨酸也有和天然辣椒碱一 样的效果。 综上所述，对天然辣椒碱和谷氨酸敏感的C - 和 A S - 纤维主要终止于脊髓背角I 层，因此c - F o s 阳性神经细胞主要表达在脊髓背角I 层，而非 层。 3 2 吗啡对天然辣椒碱和谷氨酸诱发的c - F o s 蛋 白表达的影响 在本实验中，吗啡和盐酸纳洛酮单独应用只产 生极少量的e - F o s 阳性神经细胞，与生理盐水组的 差异无统计学意义。吗啡减少了谷氨酸和天然辣椒 碱所引起的注射侧c - - F o s 蛋白表达，而盐酸纳洛酮 则拮抗了吗啡的作用，这个结果与其他学者的研究 相似 6 9 。这一现象可解释为吗啡在突触前膜抑制 了痛觉纤

25、维引。G u oM 等 1 0 报道吗啡的急慢性治 疗可以减少在海马回的谷氨酸浓度，而盐酸纳洛酮 可以拮抗吗啡的这种作用。由于钙离子依存性的机 理，谷氨酸可以从突触前释放和被一系列突触前膜 受体所控制包括阿片受体 1 ，这有可能是吗啡直接 激活广泛位于海马回阿片受体 1 1 3 ，从而调节谷氨 酸的水平。 通过免疫生化学的方法已证明阿片受体存在于 大鼠脊髓背角根部 、足底的细小的有髓和无髓纤 维中 1 5 。阿片作用药对周围神经末梢的阿片受体 的占有，产生抗痛觉的效果。这种抗痛觉的效果产 生的机理为：减低痛觉末梢兴奋性、阻断动作电位以 黟毋 ( ， ，1者孑 m 枷枷啪 啪 瑚 啪。 万方数据

26、 2 8 婆要垦堂堕兰堡兰壁塑璺蔓塑查蔓苎塑垒! 堡垒! 竺生! 竺! 竺丝丝型竺丝丝竺墨兰兰壁塑：! 竺! 塑：型竺! 及抑制兴奋性递质释放。 总之，一方面。天然辣椒碱通过作用于周围神经 末梢的V R l 受体，促使突触前膜谷氨酸的释放，增 加脊髓背角c - F o s 蛋白的表达；另一方面，外源性谷 氨酸的投入，激活突触后膜上的各类谷氨酸受体，也 增加脊髓背角c - F o s 蛋白的表达。吗啡通过激活末 梢神经突触前阿片受体，抑制突触前膜谷氨酸的释 放或突触后膜上各类谷氨酸受体的活性，减少c - F o s 蛋白的表达。本实验提示：盐酸纳洛酮能拮抗吗啡 的抑制作用，谷氨酸浓度减少，c -

27、 F o s 阳性神经细胞 数量减少表明阿片受体参与了谷氨酸能系统的痛 觉传导的调节。 e i n i n d u c e dE f f e c f so nc - f o sE x p r e s s i o na n dN A D P H d i a p h o r a s eA c t i v i t yi nt h eF e l i n eS p i n a lC o r d J P h a r m a c o l ，2 0 0 5 5 2 l ( 1 3 ) ：7 0 7 8 E 7 J i nYH N i s h i o k aH W a k a b a y a s h iK e

28、ta 1 E f f e c t o fM o p h i n e o nt h eR e l e a s eo fE x c i t a t o r yA m i n oA c i di nt h eR a tH i n dI n s t e p ：P a i ni sM o d u l a t e db yt h eI n t e r a c t i o nb e t w e e nt h eP e r i p h _ e r a lO p o i da n dG l u t a m a t eS y s t e m sE J N e u r o s c i ，2 0 0 6 ，1 3 8

29、 ( 4 ) ：1 3 2 9 1 3 3 9 E 8 3 L iDP ，C h e nSR P a nHL V R lR e c e p t o rA c t i v a t i o nI n d u c e s G l u t a m a t eR e l e a s ea n dP o s t s y n a p t i cF i r i n gi nt h eP a r a v e n t r i c u l a rN u c l e u s r J JN e u r o p h y s i o l ，2 0 0 4 ，9 2 ( 3 ) l1 8 0 7 1 8 1 6 9 3 H

30、i r o s h iN S i m o n sCT C u e l l a rJM 。e ta 1 O p i o i dM o d u l a t i o n o fS c r a t c h i n ga n dS p i n a lc - f o sE x p r e s s i o nE v o k e db yI n t r a d e r - m a lS e r o t o n i n E J JN e u r o s c i ，2 0 0 3 ，2 3 ( 3 4 ) ：1 0 7 8 4 1 0 7 9 0 1 0 1G u oM 。X uNJ 。L iYT ，e ta 1

31、 M o r p h i n eM o d u l a t e sG l u t a m a t e 参考文献： R e l e a s ei nt h eH i p p o c a m p a lC A lA r e ai nM i c e J N e u r o s c i L e t t ，2 0 0 5 。3 8 1 ( 1 2 ) 1 1 2 - 1 5 E 1 3 C h u nYH F r a n kD , L e eJS e ta 1 P e r i p h e r a lA M P AR e c e p 1 1 1M e I d r u mBs ( 1 9 9 8 ) T h

32、 eG I u t a m a t eS y n a p s ea saT h e r a p e u t i c t o r sC o n t r i b u t et oM u s c l eN o c i c e p t i o na n dc - l o s A c t i v a t i o n J T a r g e t ：P e r s p e c t i r e sf o rt h eF u t u r e J B r a i nR e s ，1 1 6 ：4 4 1 一 N e u r o s dR es200862(2),97。104458 2 H o n o r 6P ，

33、B u r i t o v aJ B e s s o nJM I n t r a p l a n t a rM o r p h i n eD e 。 1 2 1M a d a m b aSG ，S c h w e i t z e rP ，S i g g i n sGR D y n o r p h i nS c l e c p r e s s e sS p i n a le - F o sE x p r e s s i o nI n d u c e db yC a r r a g e e n i nI ntivelyA u g m e n t st h eM c u r r e n ti nH

34、i p p o c a m p a lC A lN e u r o n s f l a m m a t i o nb u tn o tb yN o x i o u sH e a t J B rJP h a r m a c o l b ya nO p i a t eR e c e p t o rM e c h a n i s m J JN e u r o p h y s i 0 1 1 9 9 9 ， 1996，118(3)：67168082(4)：17681775 3 C o g g e s h a l lRE ，Z h o uS C a r l t o nSM O p i o i dR e

35、c e p t o r so nP e E 1 3 s v o b o d aKR 。A d a m scE ，L u p i c aCR O p i o i dR e c e p t o rS u b r i p h e r a lS e n s o r yA x o n s J B r a i nR e s 1 9 9 7 7 6 4 ( 1 2 ) l1 26一typeE x p r e s s i o nD e f t n e sM o r p h o I o g i c a l l yD i s t i n c tC I a s s e so f 1 3 2 HippoeampalI

36、 n t e r n e u r o n s J JN e u r o s c i 1 9 9 9 ，1 9 ( I ) I8 5 一 4 d eG r o o tJ Z h o uS ，C a r l t o nSM P e r i p h e r a lG l u t a m a t eR e l e a s e 9 5 i nt h eH i n d p a wF o l l o w i n gL o wa n dH i g hI n t e n s i t yS c i a t i c E 1 4 M a n s o u rA ，F o xCA ，A k i lH ，e ta 1 O

37、p i o i d r e c e p t o rm R N A S t i m u l a t i o n J N e u r oR e p o r t 2 0 0 0 ，1 1 ( 3 ) 5 4 9 7 。5 0 2 E x p r e s s i o ni nt h eR a tC N S ：A n a t o m i c a l8 n dF u n c t i o h a lI m p l i I s T i a nYL ，G u oY C a oDY ，e ta 1 L o c a lA p p l i c a t i o no fM o r - c 8 t i o n s E J

38、 T r e n d si nN e u r o s c i 。1 9 9 5 1 8 ( 1 ) ：2 2 2 9 p h i n eS u p p r e s s e sG l u t a m a t e - e v o k e dA c t i v i t i e so fCa n dA BA f - 1 5 S t e i nC P e r i p h e r a lM e c h a n i s m so fO p i o i dA n a l g e s i a J f e r e n tF i b e r si nR a tH a i r yS k i n J B r a i n

39、R e s e a r c h ，2 0 0 5 ，1 0 5 9 A n e 5 t hA n a l g 1 9 9 3 ，7 6 1 1 8 2 1 9 1 1 ) , 2 8 - 3 4 ( 责任编辑：钟荣梅) 6 P i l y a v s k i iAI ，M a z n y c h e n k oAV 。M a i s k yVA ，e ta 1 C a p s a i 一 ( 上接第2 3 页) 本实验表明N A C 和D e x 主要是通过抑制 N F K B 的活性，抑制炎症介质的释放，抑制肺组织的 炎症反应，从而起到防治急性肺损伤的作用。 本文为南昌大学医学院课题( A

40、2 2 ) 参考文献： 1 A s h b a u q hDG ，B i q e l o wDB ，P e t t yTL e ts 1 A c u t eR e s p i r a t o r yD i s t r e s s i nA d u h s J L a n c e t 1 9 6 7 。2 ( 7 5 1 1 ) 1 3 1 9 3 2 3 2 W a r eLB 。M a t t h a yM 九T h eA c u t eR e s p i r a t o r yD i s t r e s sS y n - d r o m e J NE n g lJM e d ，2 0 0

41、0 3 4 2 ( 1 8 ) ：1 3 4 4 1 3 4 9 3 1W a r eL & P r o g n o s t i cD e t e r m i n a n t so fA c u t eR e s p i r a t o r yD i s t r e s sS y n d r o m e i nA d u l t s ：I m p a c to nC l i n i c a lT r i a lD e s i g n J C r i tC a r eM e d 2 0 0 5 。3 3 ( s 3 ) 2 1 7 - 2 2 2 4 1W a i l e yKR 。M cD o

42、 n a l dTlE 。H i g a s h i m o t oY e ta 1 M o d u l a - t i o no fP r o i n f l a m m a t o r yC y t o k i n e sb yN i t r i cO x i d ei nM u r i n e A c u t eL u n gI n j u r y J A mJR e s p i rC r i tM e d 1 9 9 9 ，1 6 0 ：6 9 8 7 0 4 5 萨姆布鲁克丁拉塞尔Dw 分子克隆实验指南 M 3 版北 京：科学出版社，2 0 0 2 ：7 5 3 8 8 3 6 E

43、v e r h a r tMB ，H a nW S h e r r i l lTP ，e ta 1 D u r a t i o na n dI n t e n s i - t yo fN F - k a p p aBA c t i i t yD e t e r m i n et h eS e v e r i t yo fE n d o t o x i n - i n d u c e dA c u t eL u n gI n u r y E J JI m m u n 0 1 2 0 0 6 ，1 7 6 ( 8 ) ：4 9 9 5 5 0 0 5 7 张艰李圣青。李焕章，等N F K B 在大

44、鼠急性肺损伤模型肺组 织中的表达及N 一乙酰半胱氨酸的影响 J 细胞与分子免疫学 杂志2 0 0 4 2 0 ( 6 ) ：7 1 2 - 7 1 5 8 李洪霞。张进川。赵亚力，等急性肺损伤大鼠T N F - a 、I L - O 、I 卜 I r am R N A 的表达及药物干预 J 解放军医学杂志，2 0 0 5 ，3 0 ( 4 ) ：3 0 6 - 3 0 9 9 J o h n s t o nCJ ，O b e r d o r s t e rG ，G e l e i nR e ta 1 E n d t o x i nP o t e n t i a t eS e z o n e - i n d u c e dP u l m o n a r yC h e m o k i n ea n dI n f l a m m a t o r y R e s p o n s e s J E x pL u n gR e s 2 0 0 2 ，2 8 ( 6 ) 4 1 9 - 4 3 3 ( 责任编辑：钟荣梅) 万方数据