吗啡对血清饥饿致培养乳大鼠心肌细胞凋亡的影响及机制.pdf

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1、中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n 2 0 0 8A u g ；2 4 ( 8 ) ：1 0 3 5 4 0 1 0 3 5 吗啡对血清饥饿致培养乳大鼠心肌细胞凋亡的影响及机制 唐博1 ，王洪新1 ，王大鹏1 ，喻晓春2 ( 1 辽宁医学院药理学教研室，辽宁，锦州1 2 1 0 0 0 ；2 中国中医科学院实验中心，北京1 0 0 7 0 0 ) 中国图书分类号：R - 3 3 2 ；R3 2 2 1 l ；R3 2 9 2 ；R3 2 9 2 5 ； R 3 9 2 1 1 ；R9 7 1 2 ；R

2、9 7 7 6 文献标识码：A 文章编号：1 0 0 1 1 9 7 8 ( 2 0 0 8 ) 0 8 1 0 3 5 一0 6 摘要：目的利用体外原代培养的乳大鼠心肌细胞，研究吗 啡对血清饥饿诱导心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 体外原代培养乳大鼠心肌细胞，各组分别给药作用4 8h 后， 用M T r 法测心肌细胞的活力；用A n n e x i nV F I T C P I 双标记 法测心肌细胞的凋亡率；用流式细胞仪分析心肌细胞周期； 用W e s t e r nb l o t 法测P K C 和C a 。s p a s e 3 蛋白的表达。结果 体外原代培养的乳大鼠心肌细胞经无血清饥饿

3、作用4 8h 后，心肌细胞可出现明显的凋亡现象；给予1t x m o l I 。“吗啡 作用于心肌细胞后，心肌细胞的这种凋亡现象可明显被抑 制，表现为：心肌细胞凋亡牢降低、C a s p a s e 3 蛋白表达减少； 但吗啡的这种抑制心肌细胞凋亡作用可被1 0I x m o l L 。1 n a l o x o n e 完全阻断；并且给予1 0I x m o l L “G F l 0 9 2 0 3 X 或1 t t m o l L “S t a u r o s p o r i n e 与吗啡共同作用时，吗啡抑制心肌 细胞凋亡的作用亦在一定程度上降低，表现为：心肌细胞凋 亡率增加、C a s

4、 p a s e - 3 蛋白表达增加、P K C 蛋白表达减少。结 论吗啡可激活心肌细胞膜上的阿片受体，通过P K C 途径 对血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡具有抑制作用。 关键词：吗啡；阿片受体；心肌细胞；凋亡；C a s p a s e - 3 ；P K C 近年来研究发现，外源性阿片类受体激动剂吗 收稿日期：2 0 0 8 一O l 一2 5 。修回日期：2 0 0 8 0 4 2 7 基金项目：辽宁省自然科学基金资助项目( N o2 0 0 4 2 1 7 0 ) 作者简介：唐博( 1 9 7 9 一) ，男，硕士，研究方向：心血管药理学，E m a i l ：l y t a n g b

5、 o 1 6 3 c o m ； 王洪新( 1 9 6 4 一) ，男，教授，博士，研究方向：心血管药理 学，通讯作者，E - m a i l ：j y h x w a n g 1 6 3 c o m 啡具有心肌保护的作用2 。吗啡( m o r p h i n e ) 是阿 片中的主要生物碱，其主要作用于心肌细胞膜上的 阿片类受体，已研究发现除中枢外，心肌细胞膜上亦 存在大量的K 、8 和斗阿片受体，吗啡对心肌的保护 作用与其受体的激动有关【3 。】。目前关于吗啡对心 肌细胞的直接保护作用研究主要还是集中在吗啡预 处理对在体心脏缺血再灌注损伤模型或离体心脏 缺血再灌注损伤模型的保护作用研究领

6、域，而关于 吗啡对培养心肌细胞凋亡的保护作用研究还比较 少，许多问题还未得到彻底阐明。本实验采用体外 培养的大鼠乳鼠心肌细胞，研究吗啡对心肌细胞凋 亡的影响，并分析其作用机制。 1 材料与方法 1 1 实验动物出生2 3d 的S D 大鼠乳鼠，早古 不拘，由辽宁医学院实验动物中心提供，动物许可证 号：S C X K ( 辽) 2 0 0 3 - 0 0 0 7 。 1 2 药品与试剂吗啡购自沈阳第一制药厂；N a l - o x o n e 购自北京四环制药有限公司；G F l 0 9 2 0 3 X ， S t a u r o s p o r i n e ，S D S ，D M S O ，P

7、 I ，R N a s e ，T r i t o n X - 1 0 0 ， F u r a - 2 、D M E M 、E G T A 均购自美国S i g m a 公司；小牛 血清购自杭州四季青公司；M T T 购自北京华美公 司；A n n e x i n V F I T C 凋亡试剂盒购自北京宝赛生物 技术有限公司；C a s p a s e - 3 抗体购自C e l lS i g n a l i n g 公 司；P K C 抗体购自S a n t aC r u z 公司；其余试剂均为国 产分析纯。 1 3 方法 1 3 1 心肌细胞培养在无菌的条件下，取出生2 3d 的S D 大鼠

8、乳鼠，开胸取出心脏，用D - H a n k s i s c h e m i ag r o u p ( 4 3 8 0 5 3 1 ) m m 3 ，( 4 5 5 7 5 6 3 ) m m 3v s ( 6 3 8 7 9 3 3 ) m m 3 ，尸 0 0 1 ) I n r e s v e r a t r o lg r o u pa n df e n o f i b r a t eg r o u p ，t h ee x t e n ta n d q u a l i t yo fE v a n sb l u ee x t r a v a s a t i o nw e r er e d

9、u c e dc o m - p a r e dw i t hi s c h e m i ag r o u p ( 5 8 6 6 4 6 5 ) m m 3 ， ( 7 8 7 2 5 7 8 ) m m 3 摊( 1 0 2 0 64 - 6 0 7 ) m m 3 ，P 0 0 1 a n d ( 6 4 0 0 9 2 ) I c g g ，( 1 2 4 7 1 2 4 ) 斗g g 嬲( 1 5 2 5 1 ：5 1 ) g g ，P 0 0 1 ) ， P P A R c tm R N A sw e r ep r o m i n e n t l ye x p r e s s e

10、dc o m p a r e d w i t hi s c h e m i ag r o u p ( 0 8 9 3 0 0 2 8 ，1 1 1 7 0 0 4 2 1 3 50 4 6 7 0 0 1 3 ，P 0 0 1 ) C o n c l u s i o nT h es t u d y s u g g e s t st h a tr e s v e r a t r o lh a sp r o t e c t i v ee f f e c t sa g a i n s ta - c u t ei s c h e m i cs t r o k e ，w h i c hc o u l d

11、b ea t t r i b u t e dt oi t s p r o p e r t yi n c r e a s i n gP P A R o t T h u s ，r e s v e r a t r o lm a yb ea p o t e n t i a la g e n tf o rt h et r e a t m e n to fn e u r o n a li n j u r ya s s o c i a t e dw i t hs t r o k e K e yw o r d s ：i s c h e m i a r e p e r f u s i o ni n j u r

12、y ；r e s v e r a t r o l ； p e r o x i s o m ep r o l i f e r a t o ra c t i v a t e dr e c e p t o r ；b l o o db r a i n b a r r i e r 万方数据 1 0 3 6 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n 2 0 0 8A u g ；2 4 ( 8 ) 液冲洗3 次后剪成约1m m 3 大小的碎块，加入0 8g L 一胰蛋白酶消化细胞，取消化完毕后的细胞，加 入体积分数为0

13、1 5 的小牛血清，0 8 4 的D M E M 培 养基及0 0 1 的双抗液( 含1 0 0k U L 。1 青霉素，1 0 0 斗g L 一链霉素) ，吹打均匀后以lX1 0 9 个L 。1 的 密度接种于底面积为2 5c m 2 的培养瓶中，每瓶5 m l ；或者密度为0 5X1 0 9 个L 一接种于2 4 孔培养 板中，每孔1m l ，送人通以体积分数为0 0 5 二氧化 碳及0 9 5 氧气的孵箱中培养。 1 3 2 试验分组试验分为6 组，正常对照组 ( n o r m a l ) ；血清饥饿组( f a m e s ) ：培养基中不加小牛 血清培养4 8h ；血清饥饿+ 吗啡

14、组( M P ) ：在培养基 中加入1I 上m o l L 。1 吗啡共同培养4 8h ；血清饥饿 + 吗啡+ n a l o x o n e 组( M P + N L X ) ：在培养基中加入 1 m 0 1 L - 1 吗啡和1 0 m 0 1 L n a l o x o n e 共同培 养4 8h ；血清饥饿+ 吗啡+ G F l 0 9 2 0 3 X 组( M P + G r X ) ：在培养基中加入1t z m o l L 一吗啡和1 0 I L m o l L 。1G F l 0 9 2 0 3 X 共同培养4 8h ；血清饥饿+ 吗啡+ S t a u r o s p o r

15、i n e 组( M P + S t a ) ：在培养基中加入 1 I x m o l L 。吗啡和1I 上m o l L 。S t a u r o s p o r i n e 共同 培养4 8h 。 1 3 3M 7 r r 法测定心肌细胞活力6 1 M I T 法是一 种定量检测活细胞的方法，用该方法统计处理数据， 将测得的吸光值转化为细胞数，求细胞存活率： 细胞存活率= 实验组吸光值对照组吸光值X1 0 0 。 具体方法为：原代心肌细胞培养，将细胞密度调 至1 0 9 个L ，接种于9 6 孑L 培养板，每8 孔细胞1 组，各组分别对应加入各干预药作用。于测试前4 h ，每孔加入5g L

16、 。1 的M 7 r r 液( 2 0 1 山1 c e l l 叫) ；于 C O ，孵育箱中继续培养4h 后弃去培养液，每孔加 入D M S O0 1 5m l ，振荡1 0m i n 后，酶标仪检测各孑L O D 值( 检测波长为5 7 0n m ) 。 1 3 4A n n e x i nV F I T C P I 双标记法检测心肌细胞 凋亡率在细胞凋亡的早期，由于细胞膜失去对称 性，使磷脂丝氨酸( P S ) 从胞膜的内侧暴露于胞膜 外。A n n e x i nV F I T C 是一种标记有荧光素的钙依赖 性磷脂结合蛋白，与P S 有很强的亲和力，可特异地 与P s 结合，但细胞

17、仍保持膜的完整性，可更加灵敏 地检测出早期凋亡细胞，并计算出凋亡阳性细胞百 分率。用0 2 5 的胰蛋白酶消化收集细胞，调节细 胞密度为1X1 0 6 个L 。加入l o 肛l 的A n n e x i n V - F I T C 和5 山的P I ，4 避光染色3 0m i n ，染色后立 即上机检测。 1 3 5 流式细胞仪分析细胞周期胰蛋白酶法收 集心肌细胞，具体如下：弃去孔内原培养液，每孔分 别加入0 2 5 胰蛋白酶1m l ，用吸管充分吹打消化 3m i n ，加入含1 5 小牛血清的D M E M 培养基终止 消化并转移至离心管，离心( 10 0 0r m i n ，1 0 r

18、a i n ) 沉淀细胞，P B S 洗两遍，9 5 的冷乙醇固定，4 过夜，离心( 10 0 0r m i n 一，1 0m i n ) ，弃乙醇，用 P B S 再洗一遍，调细胞密度为1 0 9 个L 一以上，调 终体积为1 0 0I * l ，加入D N A S t a i n 综合染液( R N a s e 终浓度5 0m g - L ，P I 终浓度1 0 0m g L ，T r i t o n X 一1 0 0 终浓度1m l L “) 5 0 0 斗l ，室温避光3 0r a i n ， 上机检测。 1 3 6 W e s t e r nb l o t 分析C a s p a s

19、 e - 3 、P K C 蛋白表达 心肌细胞给予各组药物处理4 8h 后，用细胞刮刀 刮下细胞，用P B S 洗两遍，离心，弃上清，将心肌细 胞放置于一7 0 。C 冰箱中备用，测定指标时，取出样 品，每份样品取样5 0 斗g ，变性的S D S 一聚丙烯酰胺凝 胶恒压电泳，电压积压胶8 0V ，分离胶1 2 0V ，半干 法将蛋白转移至硝酸纤维素膜，恒压电泳9 5V ，室 温1h ，4 。C 封闭过夜，按0 1m l e m 。膜面积加入1 ：20 0 0 稀释的一抗( 兔抗C a s p a s e 一3 ，购自C e l lS i g - n a l i n g 公司；兔抗P K C

20、，购自S a n t aC r u z 公司) 杂交2 h ，封闭液漂洗后按0 1m l c m 以膜面积加入l ： 20 0 0 稀释的二抗( 鼠抗兔I g G 抗体，购自北京中山 金桥生物有限公司) ，室温下摇床杂交1h ，漂洗后 加显色剂( N B T ，购自沈阳基因公司) 5m i n ，放射显 影。 1 4 数据处理所有数据均以戈s 表示，各实验 组间比较采用单因素方差分析及L S D - t 检验。全部 数据采用S P S S13 0 统计软件进行统计学处理。 2结果 2 1 吗啡对血清饥饿作用的心肌细胞活力的影响 分组加入m o r p h i n e 、n a l o x o

21、n e 、G F l 0 9 2 0 3 X 及S t a u r o s p o r i n e 经无血清培养4 8h 后，用M T I 法测定心肌 细胞活力。与n o r m a l 组相比，f a m e s 组心肌细胞A ， 值明显降低( P 0 0 1 ) ；与f a m e s 组相比，M P 组心 肌细胞A 跚值明显增高( P 0 0 1 ) ；与M P 组相比， M P + N L X 组、M P + G F X 组和M P + S t a 组心肌细胞 A 5 7 0 值明显降低( P 0 0 1 ) 。见F i g1 。 2 2 吗啡对血清饥饿作用的心肌细胞凋亡的影响 经A

22、n n e x i nV F I T C P I 双染色检测结果发现，血清 饥饿作用乳鼠心肌细胞4 8h 后，与n o r m a l 组相比， 其早期凋亡率增加2 4 1 2 ( P 0 0 1 ) ；表明血清饥 饿可诱导乳鼠心肌细胞凋亡。与f a m e s 组相比，M P 组心肌细胞早期凋亡率减少1 6 3 5 ( P 0 0 1 ) ；表 明M P 可抑制血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡。与 M P 组相比M P + N L X 组、M P + G F X 组和M P + S t a 万方数据 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a 2

23、B u l l e t i n2 0 0 8A u g ；2 4 ( 8 )1 0 3 7 组心肌细胞早期凋亡率分别增加1 4 7 9 、1 0 0 6 和9 8 7 ( P 0 0 1 ) ；表明分别给予n a l o x o n e 、 G F l 0 9 2 0 3 X 和s t a u r o s p o r i n e 可阻断m o r p h i n e 对心肌 细胞凋亡的抑制作用。见T a bl ，F i g2 。 0 9 0 8 O 7 0 6 10 5 瓮 O 4 0 3 0 2 O 1 0 N o r m a lF a m e sM P M P + N L XM P + G

24、 F XM P + S t a F i g1 E f f e c to fm o r p h i n eo na r c h a e u so fc a r d i a c m y o c y t e sd e p r i v e df r o ms e r u m ( x s ，f t = 8 ) 尸 0 O l 懈n o r m a l ；P O 0 1 船f a m e s ：样P O 0 1 傩M P 2E f f e c to fm o r p h i n eO Ra p o p t o s i so fc a r d i a c m y o c y t e sd e p r i v

25、 e df r o ms e r u m ( ；c s 。r , = 5 ) 2 3 吗啡对血清饥饿作用的心肌细胞周期的影响 分组加入m o r p h i n e 、n a l o x o n e 、G F l 0 9 2 0 3 X 及S t a u r o s p o r i n e 经无血清培养4 8h 后，用流式细胞仪分析 心肌细胞周期。与n o r m a l 组相比，f a m e s 组心肌细 胞的S + G 2 + M 期百分比降低5 6 2 ( P 0 0 1 ) ； 与f a m e s 组相比，M P 组心肌细胞的S + G ：+ M 期百 分比增加4 4 6 ( P

26、0 0 1 ) ，表明m o r p h i n e 可拮抗 血清饥饿降低心肌细胞s + G ：+ M 期百分比的作 用；与M P 组相比，M P + N L X 组、M P + G F X 组和M P + S t a 组分别减少3 9 0 、3 8 1 和3 7 4 ( P 0 0 1 ) ，表明n a | o x o n e 、G F l 0 9 2 0 3 X 和S t a u r o s p o r i n e 有拮抗M P 增加心肌细胞s + G ：+ M 期百分比的作 用。见T a b1 ，F i g3 。 T a b1E f f e c to fm o r p h i n eO

27、i la p o p t o s i so fc a r d i a c m y o c y t e sd e p r i v e df r o ms e r u m ( i s n = 5 ) P O O l 船n o r m a l ；P 0 0 1 铘f a m e s ：槲P O 0 1 珊M P 3E f f e c to fm o r p h i n eo nc y d eo f 伪妇 m y o c y t e sd e p r i v e df r o ms e r u m ( ；5 ，= 5 ) 万方数据 1 0 3 8 中国药理学通报C h i n e s eP h a r

28、 m o 虻o l o g i c a lB u l l e t i n2 0 0 8A u g ；2 4 ( 8 ) 2 4 吗啡对血清饥饿作用的心肌细胞C a s p a s e 3 蛋白表达的影响经W e s t e r nb l o t 分析显示，n o r m a l 组培养乳鼠心肌细胞未见C a s p a s e - 31 7k u 亚单位的 表达；f a m e s 组经血清饥饿作用于乳鼠心肌细胞4 8h 后则出现了1 7k u 的带谱，且表达量明显高于1 1 0 1 “ - m a l 组( P 0 0 1 ) ；M P 组的C a s p a s e 一31 7k u 亚单

29、位 表达量明显低于f a m e s 组( P 0 0 1 ) ；M P + N L X 组、 M P + G F X 组和M P + S t a 组的C a s p a s e - 31 7k u 亚单 位表达量明显高于M P 组( P 0 0 1 ) ，但与f a m e s 组 比较差异无显著性。见F i g4 。 F i g4E f f e c to fm o r p h i n eo nC a s p a s e - 3e x p r e s s i o no f c a r d i a cm y o c y t e sd e p r i v e df r o m 辩咖( x 士5

30、，n = 5 ) 2 5吗啡对血清饥饿作用的心肌细胞P K C 蛋白 表达的影响经W e s t e r nb l o t 分析显示，f a m e s 组经 血清饥饿作用乳鼠心肌细胞4 8h 后，与n o r m a l 组相 比，P K C 蛋白表达量明显降低( P 0 0 1 ) ；与f a m e s 组相比，M P 组的P K C 蛋白表达量明显增高( P 0 0 1 ) ；与M P 组相比，M P + N L X 组、M P + G F X 组和 M P + S t a 组的P K C 蛋白表达量明显降低( P 0 0 1 ) ，但与f a m e s 组比较无差异。见F i g5

31、 。 F i g5E f f e c to fm o r p h i n eO nP K Ce x p r e s s i o no f c a r d i a cm y o c y t e sd e p r i v e df r o ms e r u m ( ；士s ，n - - 5 ) 3 讨论 细胞凋亡，是由K e r r 等1 在1 9 7 2 年首次提出， 亦称细胞程序性死亡( p r o g r a m m e dc e l ld e a t h ，P C D ) 是在生理或病理条件下由基因控制的通过内源性核 酸内切酶激活所造成的细胞死亡过程。细胞凋亡在 正常组织和器官的发育及多种

32、疾病的发生过程中起 着重要作用1 8 1 。随着分子心血管疾病的研究发展， 现已证实了心肌细胞凋亡现象存在于心血管系统生 理和病理变化过程中，是心肌缺血、缺氧及再灌注损 伤细胞死亡的一种主要形式旧1 。在体外培养中诱 导细胞凋亡的方法很多，“血清饥饿法”是去除培养 心肌细胞培养基中的小牛血清，使心肌细胞在一定 时间内处于无血清的状态，这是一种制造缺乏生长 因子的刺激环境而诱导的细胞凋亡模型oJ 。目前， 心肌细胞凋亡是众多心血管疾病发生的重要因素之 一，亦是导致心功能下降的主要原因之一- l 。因 此，探明其发生发展机制、减少非生理性心肌细胞凋 亡，对保护心脏结构和功能具有重要的临床意义。 阿

33、片受体在体内分布广泛，已发现除中枢外，心 肌细胞膜和血管壁上亦存在大量阿片受体。近年 来，吗啡预处理的心肌保护作用引起了人们的注意。 有动物实验表明，在缺血再灌注前经静脉给予吗 啡，能减少心肌梗死面积2 | ；在心肌细胞水平上，吗 啡亦可模仿I P 的心脏保护作用3 | 。吗啡是一种非 选择性阿片受体激动剂，主要激动汕一阿片受体，同 时也激动8 一和K 一阿片受体4 | 。在出生7d 以前的 新生大鼠心肌细胞上，主要存在K 、仙和8 阿片受 体5 | 。因此，在乳鼠心肌细胞，吗啡可通过同时激 动“、K 、8 阿片受体而发挥其作用。在离体心脏模 型上观察到，吗啡缩小心梗范围的保护作用可被 P K

34、 C 阻断剂c h e l e r y t h r i n e 阻断，说明P K C 介导了吗 啡预处理的保护效应6 | ，近年亦有报道P K C 活化 后可降低缺血再灌注所致的心肌细胞凋亡【1 7J 。本 研究中吗啡抑制血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡作用 可被P K C 特异性拮抗剂G F l 0 9 2 0 3 X 阻断，说明 P K C 的活化与吗啡抑制心肌细胞凋亡作用有关。 吗啡可能通过与G 蛋白偶联受体结合，激活细胞膜 上的磷脂酶c ，水解磷脂酰肌醇二磷酸并释放I P 3 和D A G ，升高c a “和D A G 使P K C 磷酸化，P K C 通 过磷酸化众多位于膜上和胞质内的底物

35、蛋白而发挥 广泛的生理作用，从而产生心肌保护作用。在凋亡 早期，胞膜的磷脂酰丝氨酸从细胞膜内侧移位到细 胞膜外表面，A n n e x i nV 能高亲和专一性结合暴露在 细胞膜外侧的磷脂丝氨酸，A n n e x i nV 用荧光素 F I T C 标记染色与检测D N A 片段化等细胞核改变方 法相比可在早期确定凋亡的发生。C a s p a s e 一3 目前 被认为是各种细胞凋亡过程中的关键酶，既能接受 凋亡信号，成为凋亡的执行者，又是凋亡效应器，是 凋亡发生过程中所需要的一种重要蛋白酶，同时也 是凋亡发生的标志酶【l 引。C a s p a s e 3 通常以无活性 的蛋白酶原形式存

36、在，在细胞即将发生凋亡时被裂 解成1 7k u 和1 2k u 两个亚单位组成的异源二聚体， 它能连续地激活凋亡相关蛋白酶9 | ，从而引起细胞 凋亡的发生。 本实验结果证明：体外原代培养的乳鼠心肌细 万方数据 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n2 0 0 8A u g ；2 4 ( 8 ) 1 0 3 9 胞经无血清培养4 8h 后，可见明显的心肌细胞凋亡 现象的发生，表现为心肌细胞活力降低、心肌细胞凋 亡率增加、心肌细胞的s + G ：+ M 期百分比降低、 P K C 蛋白表达明显降低，而C a

37、 s p a s e - 3 蛋白表达明显 增强。给予1I 山m o l L 。1 吗啡作用于凋亡的心肌细 胞后，可明显逆转上述血清饥饿诱导的心肌细胞凋 亡现象的发生，降低心肌细胞凋亡率，提示吗啡对血 清饥饿诱导的心肌细胞凋亡具有抑制作用；但给予 阿片受体阻断剂n a l o x o n e 后，吗啡的上述抑制心肌 细胞凋亡作用消失；同时，给予P K C 特异性拮抗剂 G F l 0 9 2 0 3 X 后，也能阻断吗啡抑制心肌细胞凋亡的 作用，因此表明，吗啡抑制血清饥饿诱导心肌细胞凋 亡作用是通过激活心肌细胞膜上的阿片受体实现 的，其作用机制与P K C 途径相关。 综上所述，本研究在血清饥

38、饿培养乳鼠心肌细 胞模型上证实了吗啡的抗凋亡保护作用，其作用机 制是吗啡作用于心肌细胞膜上的阿片受体，通过 P K C 信号转导途径实现的。 参考文献： 1 P e a r tJN ，G r o s sGJ M o r p h i n e t o l e r a n tm i c ee x h i b i t ap r o f o u n d a n dp e r s i s t e n te a r d i o p r o t e c t i v ep h e n o t y p e J C i r c u l a t i o n 2 0 0 4 ， 1 0 9 ( 1 0 ) ：1 2 1

39、 9 2 2 2 】S h iE ，J i a n gX ，B a iH ，e ta 1 C a r d i op r o t e c t i v ee f f e c t # o fm o r p h i n e o nr a th e a r ts u f f e r i n gf r o mi s e h e m i aa n dr e p e f f u s i o n J C h i nM e d J ( E n 9 1 ) ，2 0 0 3 ，1 1 6 ( 7 ) ：1 0 5 9 6 2 3 Y uxC ，W a n gHx ，W a n gTM ，e la 1 R e d u

40、 c e di n h i b i t o r ya c t i o n s o fa d e n o s i n eA 1a n dk a p p a l - o p i o i dr e c e p t o ra g o n i s t so nb e t a a d r e n o c e p t o r si ns p o n t a n e o u s l yh y p e r t e n s i v er a th e a r t J C l i nE x p P h a r m a c o l P h y s i o l ，1 9 9 7 ，2 4 ( 1 2 ) ：9 7 6

41、7 4 Y uXC ，W a n gHX ，P e iJM ，e ta 1 A n t i a r r h y t h m i ce f f e c to f k a p p a o p i o i dr e c e p t o rs t i m u l a t i o ni nt h ep e f f u s e dr a th e a r t ：i n v o l v e m e n to f ac A M P - d e p e n d e n tp a t h w a y J JM o lC e l lC a r d i o l ，1 9 9 9 ，3 1 ( 1 0 ) ：1 8 0

42、 9 1 9 5 B i a nJS ，W a n gHX ，Z h a n gWM ，e ta 1 E f f e c t so f k - o p i o i dr e c e p t o r s t i m u l a t i o ni nt h eh e a r ta n dt h ei n v o l v e m e n to fp r o t e i nk i n a s eC J 所JP h a r m a c o l ，1 9 9 8 ，1 2 4 ：6 0 0 6 6 徐叔云，卞如濂，陈修，主编药理实验方法学 M 第3 版， 北京：人民卫生出版社，2 0 0 2 ：1 4 3

43、 5 6 X uSY ，B i a nRL ，C h e nX ，c h i e fe d M e t h o l o g yo f P h a r m a c o l o g i - c o lE x p e r i m e n t M 3 r de d ，B e i j i n g ：P e o p l e sM e d i c a lP u b l i s h i n g 【7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 63 1 6 1 7 1 8 1 9 H o u s e ，2 0 0 2 ：1 4 3 5 K e r rJF ，W i l l i eAH ，C u

44、 r r i eAR ，e ta 1 A p o p t o s i s ：ab a s i cb i o l o g i c a lp h e n o m e n o nw i t hw i d e r a n g i n gi m p l i c a t i o n si nt i s s u ek i n e t i c s J 肼J C a n c e r ，1 9 7 2 。2 6 ( 4 ) ：2 3 9 5 7 T h o m p s o nCB A p o p t o s i si nt h ep a t h o g e n o s i sa n dt r e a t m e

45、n to fd i s - e a s e J , e n c e ，1 9 9 5 ，2 6 7 ( 5 2 0 3 ) ：1 4 5 6 6 2 M a t o b aS ，T a t s u m iT 。K e i r aN ，e ta 1 C a r d i op r o t e c t i v ee f f e c to fa l l - g i o t e n s i n - c o n v e r t i n ge n z y m ei n h i b i t i o na g a i n s th y p o x i a r e o x y g e n a t i o ni n

46、 j m ：yi nc u l t u r e dr a tc a r d i a cm y o c y t e s J C i r c u l a t i o n ， 1 9 9 9 ，9 9 ( 6 ) ：8 1 7 2 2 G o y e n e e h eAA ，H a r m o nJM ，T e l l e r i aCM ，e ta 1 C e l ld e a t hi n - d u c e db ys e r u md e p r i v a t i o ni nl u t e a lc e l l si n v o l v e st h ei n t r i n s i

47、c p a t h w a yo fa p o p t o s i s J R e p r o d u c t i o n ，2 0 0 6 ，1 3 1 ( 1 ) ：1 0 3 1 1 T a n a k aM ，I t oH ，A d a e h iS ，e ta 1 H y p o x i ai n d u c e sa p o p t o s i sw i t h e n h a n c e de x p r e s s i o no fF a sa n t i g e nm e s s e n g e rR N Ai nc u l t u r e d n e o n a t a l

48、r a tc a r d i o m y o c y t e s J C i r cR e s ，1 9 9 4 ，7 5 ( 3 ) ：4 2 6 3 3 L u d w i gLM ，P a t e lHH ，G r o s sGJ ，e ta 1 M o r p h i n ee n h a n c e sp h a r - m a c o l o g i c a lp r e c o n d i t i o n i n gb yl s o f l u r a n e ：r o l eo fm i t o c h o n d r i a lK ( A T P ) c h a n n e l sa n do p i o i dr e c e p t o r s J A n e s t h e s i o l g y ，2 0 0 3 ，9 8 ： 7 0 5