吡哆醇对脑淋巴引流阻滞所致SAH后神经细胞凋亡加重的影响.pdf

《吡哆醇对脑淋巴引流阻滞所致SAH后神经细胞凋亡加重的影响.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《吡哆醇对脑淋巴引流阻滞所致SAH后神经细胞凋亡加重的影响.pdf（5页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、吡哆醇对脑淋巴引流阻滞所致 杂粤匀 后 神经细胞凋亡加重的影响 王摇 轩员， 圆， 陈摇 锋员， 高摇 兵员， 高向东员， 贾丽丽员， 圆， 杨明峰圆， 孙保亮圆 （员援 章丘市人民医院神经内科， 山东 章丘摇 圆缘园圆园园； 圆援 山东省高校脑微循环重点实验室、 泰山医学院附属医院神经内科， 山东 泰安摇 圆苑员园园园） 收稿日期： 圆园员园 原园圆 原员员， 修回日期： 圆园员园 原园源 原员圆 基金项目： 国家自然科学基金资助项目 （晕燥 猿园缘苑园远缘员， 猿园远苑园苑圆源） ； 山 东省教育厅科技计划资助项目 （晕燥 允园缘蕴员园） ； 山东省中医 药发展计划资助项目 （晕燥 圆园园

2、缘鄄圆猿员） ； 山东省卫生系统高 层次人才基金资助项目 作者简介： 王摇 轩 （员怨苑怨 原 ） ， 男， 硕士， 主治医师， 研究方向： 脑血管 病的临床与基础， 栽藻造： 园缘猿员鄄愿猿圆缘园怨员园， 耘鄄皂葬蚤造： 憎葬灶早曾圆员愿园岳 泽蚤灶葬援 糟燥皂； 孙保亮 （员怨远缘 原 ） ， 男， 博士， 教授， 研究方向： 脑血管病发 病机 制 与 防 治， 通 讯 作 者， 栽藻造： 园缘猿愿鄄远圆猿缘愿远园， 耘鄄皂葬蚤造： 遭造泽怎灶愿愿岳员远猿援 糟燥皂 中国图书分类号： 砸鄄猿猿圆； 砸 猿圆圆援 员愿； 砸 猿圆怨援 圆缘； 砸 苑源圆援 园圆圆； 砸 苑源猿援 猿缘园援

3、圆圆 文献标识码： 粤 文章编号： 员园园员 原员怨苑愿 （圆园员园） 园苑 原园怨圆远 原园缘 摘要： 目的摇 探讨脑淋巴引流阻滞 （悦蕴月） 对蛛网膜下腔出血 （杂粤匀） 后神经细胞凋亡的影响和吡哆醇的缓解作用及相关 机制。方法摇 健康成年 宰蚤泽贼葬则 大鼠， 随机分为正常对照组、 杂粤匀 组、 杂粤匀 垣 悦蕴月 组、 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 吡哆醇组、 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 生理盐水组。采用枕大池 圆 次注血法建立 杂粤匀 模型。于 第 圆 次注血 猿 凿 后检测相关指标。杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 吡哆醇组于 悦蕴月 术前 猿园 皂蚤灶 按 缘园 皂早噪早 原员腹腔注射吡哆醇生理盐水

4、 溶液， 每天以上述半量重复注射 圆 次。采用 栽哉晕耘蕴 荧光标 记法检测原位凋亡情况； 免疫组织化学激光共聚焦检测大鼠 皮层神经细胞 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 和 月糟造鄄圆 的蛋白表达。结果摇 与 正常对照组比较， 其余各组大鼠 栽哉晕耘蕴 阳性细胞表达均明 显升高， 而 杂粤匀 垣 悦蕴月 组和 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 生理盐水组又明显 高于 杂粤匀 组 （孕 约 园郾 园员） ， 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 吡哆醇组与 杂粤匀 垣 悦蕴月 组比较表达有所减弱 （孕 约园郾 园员） 。 与正常对照组比 较， 其余各组大鼠皮层神经细胞 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 蛋白表达均明显 升高， 而 杂粤匀 垣 悦

5、蕴月 组和 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 生理盐水组最高， 与 杂粤匀 组比较差异具有显著性 （孕 约 园郾 园员） ， 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 吡哆 醇组与 杂粤匀 垣 悦蕴月 组比较表达有所减弱 （孕 约 园郾 园员） 。 与 正常对照组比较， 其余各组大鼠皮层神经细胞 月糟造鄄圆 蛋白表 达均明显升高， 而 杂粤匀 垣 悦蕴月 组和 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 生理盐水组 明显低于 杂粤匀 组 （孕 约园郾 园员） ， 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 吡哆醇组较 杂粤匀 垣 悦蕴月 组表达增强。结论摇脑淋巴引流阻滞可以通过 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 高表达和 月糟造鄄圆 低表达加重 杂粤匀 后大鼠皮层神经 细胞

6、的凋亡， 而吡哆醇具有一定的缓解作用。 关键词： 脑淋巴引流； 蛛网膜下腔出血； 大鼠； 凋亡； 吡哆醇； 悦葬泽责葬泽藻鄄猿； 月糟造鄄圆 摇摇蛛网膜下腔出血 （ 泽怎遭葬则葬糟澡灶燥蚤凿 澡藻皂燥则则澡葬早藻， 杂粤匀） 后， 大量积存于蛛网膜下腔中的氧合血红蛋白 等大分子物质是导致脑血管痉挛、 微循环异常的主 要因素， 进而造成继发性脑缺血损伤， 严重影响着患 者的预后 员 原猿。脑内的大分子物质主要通过脑淋巴 引流途径来清除 源 原缘， 本实验前期研究证实脑淋巴 引流阻滞 （糟藻则藻遭则葬造 造赠皂责澡葬贼蚤糟 遭造燥糟噪葬早藻， 悦蕴月） 能加重 杂粤匀 后脑脊液所致海马神经元的凋亡

7、 远。然而目 前就改善脑淋巴引流途径的药物研究甚少。国外学 者对淋巴滞留性脑病患者采用大剂量吡哆醇 （责赠则蚤凿鄄 燥曾燥造） 治疗发现能明显的缓解相关症状， 说明吡哆醇 能够改善大分子物质的引流， 然而机制不清 苑 原愿。 本实验通过复制大鼠 杂粤匀 及 悦蕴月 模型， 研究吡哆 醇在 悦蕴月 后对 杂粤匀 皮层神经细胞凋亡的影响， 并 通过 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 和 月糟造鄄圆 的蛋白表达深入研究相关 机制， 以探讨吡哆醇和脑淋巴引流途径在 杂粤匀 后所 起到的保护作用。 员摇 材料 员援 员摇 实验动物摇 选用成年健康 宰蚤泽贼葬则 大鼠 员园园 只， 不拘， 体质量 猿猿园 耀猿愿园 早

8、， 由山东鲁抗制药厂实 验动 物 中 心 提 供（ 动 物 许 可 证 号 杂悦载运 鲁 圆园园缘园园员苑） 。实验前在安静的环境下适应性饲养 员 憎噪， 自由进食、 饮水、 自然昼夜节律光照。 员援 圆摇 主要仪器与试剂 员援 圆援 员摇 试剂摇 栽哉晕耘蕴 原位细胞凋亡检测试剂盒购 于 砸燥糟澡藻 公司， 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 兔抗多克隆抗体、 月糟造鄄圆 兔 抗多克隆抗体购于 杂葬灶贼葬 悦则怎扎 公司， 杂粤月悦鄄云陨栽悦 免 疫组化试剂盒、 杂粤月悦鄄悦赠猿 免疫组化试剂盒购于武汉 博士德生物工程有限公司， 吡哆醇购于 杂蚤早皂葬 公司， 其他试剂均为国产分析纯。 员援 圆援 圆摇仪器

9、摇激光共聚焦显微镜 （砸葬凿蚤葬灶糟藻 圆员园园 型， 美国 月蚤燥鄄砸藻凿 公司） ， 脑立体定位仪 （缘员远园园 型， 美国 杂贼燥藻造贼蚤灶早 公司） ， 恒冷箱冰冻切片机 （悦酝员怨园园 型， 德国 蕴耘陨悦粤 公司） 。 圆摇 方法 圆援员摇 实验分组摇将 宰蚤泽贼葬则 大鼠随机分为正常对照 组、 杂粤匀 组、 杂粤匀 垣 悦蕴月 组、 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 吡哆醇组、 远圆怨中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎造； 圆远 （苑） ： 怨圆远 耀猿园 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 生理盐水组。吡哆醇组于 悦蕴月 术前 猿园

10、皂蚤灶 按 缘园 皂早噪早 原员腹腔注射吡哆醇生理盐水溶 液， 每天以上述半量重复注射 圆 次。 圆援 圆摇 动物模型制备摇 将 杂粤匀 垣 悦蕴月 组、 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 吡哆醇组、 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 生理盐水组的大鼠经 员园豫的水合氯醛麻醉固定后， 行颈部正中纵形切口， 分离颈深和颈浅淋巴结， 结扎输入和输出淋巴管后 将其摘除 源。圆源 澡 后将 杂粤匀 组、 杂粤匀 垣 悦蕴月 组、 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 吡哆醇组、 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 生理盐水组的 大鼠采用枕大池二次注血法建立 杂粤匀 模型。二次 注血 猿 凿 后检测指标。 圆援 猿摇 原位细胞凋亡检测摇染色步骤严格

11、按照美国 砸燥糟澡藻 公司提供的原位细胞凋亡检测试剂盒说明书 进行。应用激光扫描共聚焦显微镜操作系统的单通 道激光系统， 扫描阳性反应物。扫描参数为： 激发光 波长为 源愿愿 灶皂， 观测光为 缘员愿 灶皂， 物镜为 源园 倍， 扫 描方式为点扫描， 在燥燥皂 为 （员郾 园） 。经 蕴葬泽藻则泽澡葬则责 圆园园园 软件摄像、 分析。 圆援 源摇 免疫组织化学激光共聚焦检测凋亡蛋白摇用 新配制的 源豫 多聚甲醛溶液固定切片， 孕月杂 冲洗， 滴 加正常山羊血清封闭液， 去封闭液， 加一抗工作液 （孕月杂 员 颐 圆园园 稀释的 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 或 月糟造鄄圆） ， 源益过夜， 孕月杂 冲洗

12、， 滴加 员 颐 员园园 稀释的相应二抗， 猿苑益 孵育 猿园 皂蚤灶， 孕月杂 冲洗， 加 员 颐 员园园 稀释的相应的荧光标 记物 （云陨栽悦 或 悦赠猿） ， 猿苑益孵育猿园 皂蚤灶， 孕月杂 冲洗源 遍 后封片。应用激光扫描共聚焦显微镜操作系统的单 通道激光系统， 扫描标记的相应阳性反应物。云陨栽悦 扫描参数为： 激发光波长为 源愿愿 灶皂， 观测光为 缘员愿 灶皂； 悦赠猿 扫描参数为： 激发光波长为 缘缘源 灶皂， 观测光 为 缘苑缘 灶皂， 物镜为 源园 倍， 扫描方式为点扫描， 在燥燥皂 为 （员郾 园） 。经 蕴葬泽藻则泽澡葬则责 圆园园园 软件摄像、 分析。 圆援 缘摇 统

13、计学分析摇 本实验所有数据结果采用珋曾 依 泽 表示， 应用 杂孕杂杂 枣燥则 宰蚤灶凿燥憎泽 员圆郾 园 统计包中方差分 析进行统计分析。 猿摇 结果 猿援员摇 原位细胞凋亡检测摇 栽哉晕耘蕴 染色阳性对照切 片， 阳性染色细胞布满整个视野 （呈绿色荧光） 。正 常对照组大脑皮层偶见阳性细胞； 杂粤匀 组见较多的 栽哉晕耘蕴 阳性细胞， 与正常对照组比较差异有显著性 （孕 约园郾 园员） 。杂粤匀 垣 悦蕴月 组和 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 生理盐 水组可见大量 栽哉晕耘蕴 阳性细胞， 与 杂粤匀 组比较差 异有显著性 （孕 约园郾 园员） ， 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 吡哆醇组亦见 有较多的凋

14、亡细胞， 但与 杂粤匀 垣 悦蕴月 组比较有一定 程度的减少 （孕 约园郾 园员） ， 见 栽葬遭 员， 云蚤早 员。 猿援 圆摇 皮层神经细胞 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 蛋白表达摇正常对 照组大鼠皮层神经细胞罕见 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 蛋白表达。 杂粤匀 组可见较多的免疫阳性细胞 （呈绿色荧光） ， 与 正常对照组比较差异有显著性 （孕 约园郾 园员） 。杂粤匀 垣 悦蕴月 组和 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 生理盐水组有大量免疫阳 性 细胞分布， 与杂粤匀组比较差异有显著性 （ 孕 约 云蚤早 员摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 葬责燥责贼燥泽蚤泽 蚤灶 则葬贼 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶 遭赠 栽哉

15、晕耘蕴 泽贼葬蚤灶蚤灶早 摇 摇 粤： 孕燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造； 月： 晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造； 悦： 晕燥则皂葬造 糟燥灶贼则燥造； 阅： 杂粤匀； 耘： 杂粤匀 垣 悦蕴月； 云： 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 责赠则蚤凿燥曾燥造； 郧： 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造 泽葬造蚤灶藻援 杂糟葬造藻 遭葬则， 缘园 皂 苑圆怨中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎造； 圆远 （苑） 云蚤早 圆摇 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 蚤灶 则葬贼 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶 遭赠 云

16、陨栽悦 泽贼葬蚤灶蚤灶早 摇 摇 粤： 晕燥则皂葬造 糟燥灶贼则燥造； 月： 杂粤匀； 悦： 杂粤匀 垣 悦蕴月； 阅： 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 责赠则蚤凿燥曾燥造； 耘： 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造 泽葬造蚤灶藻援 杂糟葬造藻 遭葬则， 缘园 皂 云蚤早 猿摇 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 月糟造鄄圆 蚤灶 则葬贼 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶 遭赠 悦赠猿 泽贼葬蚤灶蚤灶早 摇 摇 粤： 晕燥则皂葬造 糟燥灶贼则燥造； 月： 杂粤匀； 悦： 杂粤匀 垣 悦蕴月； 阅： 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 责赠则蚤凿燥曾燥造； 耘： 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟

17、葬造 泽葬造蚤灶藻援 杂糟葬造藻 遭葬则， 缘园 皂 园郾 园员） 。与 杂粤匀 垣 悦蕴月 组比较， 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 吡哆醇 组 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 蛋白表达较弱 （孕 约园郾 园员） ， 见 栽葬遭 圆， 云蚤早 圆。 栽葬遭 员摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 葬责燥责贼燥贼蚤糟 则葬贼 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 早则燥怎责泽 遭赠 栽哉晕耘蕴 泽贼葬蚤灶蚤灶早 （珋曾 依 泽， 灶 越圆园） 郧则燥怎责云造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 蚤灶贼藻灶泽蚤贼赠 晕燥则皂葬造 糟燥灶贼则燥造园援 员苑 依园援 园猿 杂粤匀圆援 猿猿 依园援 源缘 杂粤匀 垣 悦

18、蕴月猿援 苑圆 依园援 远远 孕赠则蚤凿燥曾燥造圆援 愿员 依园援 源苑裕裕 孕澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造 泽葬造蚤灶藻猿援 远缘 依园援 苑园 摇 摇 孕 约园郾 园员 增泽 灶燥则皂葬造 糟燥灶贼则燥造；孕 约园郾 园员 增泽 杂粤匀；裕裕孕 约 园郾 园员 增泽 杂粤匀 垣 悦蕴月 栽葬遭 圆摇 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 葬灶凿 月糟造鄄圆 蚤灶 则葬贼 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 早则燥怎责泽 （珋曾 依 泽， 灶 越圆园） 郧则燥怎责悦葬泽责葬泽藻鄄猿月糟造鄄圆 晕燥则皂葬造 糟燥灶贼则燥造园援员猿 依园援园源园援 猿员 依园援 园远

19、 杂粤匀圆援 圆源 依园援 源员缘援 猿怨 依园援 缘源 杂粤匀 垣 悦蕴月猿援 员怨 依园援 缘员源援 圆远 依园援 苑缘 孕赠则蚤凿燥曾燥造圆援缘猿 依园援猿怨裕裕缘援 苑远 依园援 缘怨裕裕 孕澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造 泽葬造蚤灶藻猿援 圆圆 依园援 远员源援 员怨 依园援 远怨 摇 摇 孕 约园郾 园员 增泽 灶燥则皂葬造 糟燥灶贼则燥造；孕 约园郾 园员 增泽 杂粤匀；裕裕孕 约 园郾 园员 增泽 杂粤匀 垣 悦蕴月 猿援 猿摇 皮层神经细胞 月糟造鄄圆 蛋白表达摇正常对照组 未检测到 月糟造鄄圆 蛋白表达。杂粤匀 组可见较多的免疫 阳性细胞 （呈红色荧光） ， 与正常对照组比较差异

20、有 显著性 （孕 约园郾 园员） 。杂粤匀 垣 悦蕴月 组和 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 生理盐水组可见少量 月糟造鄄圆 免疫阳性细胞分布， 与 杂粤匀 组比较差异有显著性 （孕 约 园郾 园员） 。与 杂粤匀 垣 悦蕴月 组比较， 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 吡哆醇组 月糟造鄄圆 蛋白表达 增强 （孕 约园郾 园员） ， 见 栽葬遭 圆， 云蚤早 猿。 源摇 讨论 摇 摇 杂粤匀 发生后， 脑和蛛网膜下腔中存在的氧合血 红蛋白等大分子物质是导致脑血管痉挛、 微循环异 常的重要始动和维持因素 员 原源， 怨， 从而造成患者的神 经功能缺损， 严重影响患者的生命及日后的生活质 量。由于其分子特性， 经淋

21、巴通路引流出颅可能是 这些物质清除的主要方式 缘， 愿。近数 员园 年来， 应用 大分子物质示踪等技术已经证实， 脑内和蛛网膜下 腔中的大分子物质可以通过神经周围淋巴管和淋巴 管前淋巴引流系统两条途径被引流入颅外淋巴管和 淋巴结， 主要汇集于颈部淋巴系统 缘， 员园。脑淋巴引 流系统在调节颅内压， 回收、 清除大分子物质， 参与 中枢神经系统免疫等方面起着维持中枢神经系统内 环境稳态的作用 缘， 员员 原员圆。月糟造鄄圆 的表达是抑制细胞 凋亡的关键步骤， 己经证实是中枢神经系统主要的 神经保护性蛋白 员猿。悦葬泽责葬泽藻鄄猿 在 悦葬泽责葬泽藻泽 级联反 应的下行凋亡程序中起最后的枢纽作用

22、员源。本研 究发现， 通过阻断颈部淋巴而造成脑淋巴引流通路 部分阻滞， 可致使皮层神经细胞 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 蛋白表达 增强， 月糟造鄄圆 蛋白表达减弱， 明显加重 杂粤匀 后神经元 损伤， 表明脑淋巴引流通路在 杂粤匀 所继发的脑缺血 损伤中起到重要的作用。 愿圆怨中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎造； 圆远 （苑） 摇 摇 有关改善脑内淋巴引流的药物国内外研究甚 少。有学者使用大剂量吡哆醇能明显改善患者症 状， 说明吡哆醇能够改善大分子物质的引流， 然而机 制不清 苑 原愿。我们研究发现， 吡哆醇可以通过降低 悦葬泽责葬泽

23、藻鄄猿 蛋白的表达， 增强 月糟造鄄圆 蛋白的表达， 来缓 解因脑淋巴引流阻滞所致 杂粤匀 后神经元损伤加重 这一现象， 从而证明吡哆醇在改善 杂粤匀 后的脑淋巴 引流起到重要作用， 但详细机制的阐明还有待进一 步深入研究。 参考文献： 员 摇 阅蚤则蚤灶早藻则 酝 晕援 酝葬灶葬早藻皂藻灶贼 燥枣 葬灶藻怎则赠泽皂葬造 泽怎遭葬则葬糟澡灶燥蚤凿 澡藻皂燥则则澡葬早藻 允 援 悦则蚤贼 悦葬则藻 酝藻凿， 圆园园怨， 猿苑 （圆） ： 源猿圆 原源园援 圆 摇 韵贼贼藻灶 酝 蕴， 酝燥糟糟燥 允， 悦燥灶灶燥造造赠 耘 杂 允则， 藻贼 葬造援 粤 则藻增蚤藻憎 燥枣 皂藻凿蚤糟葬造 贼则藻

24、葬贼皂藻灶贼泽 燥枣 糟藻则藻遭则葬造 增葬泽燥泽责葬泽皂 允 援 晕藻怎则燥造 砸藻泽， 圆园园愿， 猿园 （缘） ： 源源源 原怨援 猿 摇 孙保亮， 张苏明， 王新成， 等援 蕴鄄精氨酸对大鼠蛛网膜下腔出血 脑组织血供的改善作用 允 援 中国药理学通报， 圆园园猿， 员怨 （员圆） ： 员猿苑缘 原苑援 猿 摇 杂怎灶 月 蕴， 在澡葬灶早 杂 酝， 宰葬灶早 载 悦， 藻贼 葬造援 陨皂责则燥增藻皂藻灶贼 燥枣 糟藻则藻遭则葬造 遭造燥燥凿 责藻则枣怎泽蚤燥灶 遭赠 蕴鄄葬则早蚤灶蚤灶藻 枣燥造造燥憎蚤灶早 泽怎遭葬则葬糟澡灶燥蚤凿 澡藻皂燥则则澡葬早藻 蚤灶 则葬贼泽 允 援 悦澡蚤

25、灶 孕澡葬则皂葬糟燥造 月怎造造， 圆园园猿， 员怨 （员圆） ： 员猿苑缘 原苑援 源 摇 杂怎灶 月 蕴， 载蚤葬 在 蕴， 宰葬灶早 允 砸， 藻贼 葬造援 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 遭造燥糟噪葬凿藻 燥枣 糟藻则藻遭则葬造 造赠皂责澡葬贼蚤糟 凿则葬蚤灶葬早藻 燥灶 则藻早蚤燥灶葬造 糟藻则藻遭则葬造 遭造燥燥凿 枣造燥憎 葬灶凿 遭则葬蚤灶 藻凿藻皂葬 葬枣贼藻则 泽怎遭葬则葬糟澡灶燥蚤凿 澡藻皂燥则则澡葬早藻 允 援 悦造蚤灶 匀藻皂燥则澡藻燥造 酝蚤糟则燥糟蚤则糟蚤则糟， 圆园园远， 猿源 （员 原圆） ： 圆圆苑 原猿圆援 缘 摇 运葬责燥燥则 运 郧， 运葬贼扎 杂 耘， 郧则扎

26、赠遭燥憎泽噪蚤 阅 酝， 蕴怎遭燥憎 酝援 悦藻则藻遭则燥泽责蚤灶葬造 枣造怎蚤凿 燥怎贼枣造燥憎： 葬灶 藻增燥造增蚤灶早 责藻则泽责藻糟贼蚤增藻 允 援 月则葬蚤灶 砸藻泽 月怎造造， 圆园园愿， 苑苑 （远） ： 猿圆苑 原猿源援 远 摇 孙保亮， 贾丽丽， 王摇 轩， 等援 脑淋巴引流阻滞加重蛛网膜下腔 出血后脑脊液所致海马神经元凋亡 允 援 生理学报， 圆园园怨， 远员 （源） ： 猿员苑 原圆猿援 远 摇 杂怎灶 月 蕴， 允蚤葬 蕴 蕴， 宰葬灶早 载， 藻贼 葬造援 悦藻则藻遭则葬造 造赠皂责澡葬贼蚤糟 遭造燥糟噪葬早藻 葬早鄄 早则葬增葬贼藻泽 葬责燥责贼燥泽蚤泽 燥枣 澡蚤

27、责责燥糟葬皂责葬造 灶藻怎则燥灶泽 蚤灶凿怎糟藻凿 遭赠 糟藻则藻遭则燥泽责蚤鄄 灶葬造 枣造怎蚤凿 枣则燥皂 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 泽怎遭葬则葬糟澡灶燥蚤凿 澡藻皂燥则则澡葬早藻 允 援 粤糟贼葬 孕澡赠泽蚤燥造 杂蚤灶， 圆园园怨， 远员 （源） ： 猿员苑 原圆猿援 苑 摇云燥造凿蚤藻泽 酝援 栽澡藻 遭则葬蚤灶 葬灶凿 贼澡藻 造赠皂责澡葬贼蚤糟 泽赠泽贼藻皂 允 援 蕴赠皂责澡燥造燥早赠， 员怨怨远， 圆怨： 员 原怨援 愿 摇 月藻贼造藻躁藻憎泽噪蚤 杂， 酝葬糟噪蚤藻憎蚤糟扎鄄晕葬则贼燥憎蚤糟扎 匀， 月怎则凿怎噪 阅， 砸怎凿赠 允援 栽澡藻 蚤灶鄄 枣造怎藻灶糟藻 燥枣

28、灶藻糟噪鄄凿蚤泽泽藻糟贼蚤燥灶 燥责藻则葬贼蚤燥灶泽 蚤灶 糟藻则增蚤糟葬造 葬灶凿 糟藻则藻遭则葬造 遭造燥燥凿 糟蚤则糟怎造葬贼蚤燥灶 允 援 韵贼燥造葬则赠灶早燥造责燥造， 圆园园园， 缘源 （杂怎责责造 猿员） ： 苑怨 原愿员援 怨 摇 尹摇 泓， 薛欣盛， 马永丰， 等援 枕大池注入促红细胞生成素在兔 蛛网膜下腔出血的脑保护作用 允 援 中国药理学通报， 圆园园愿， 圆源 （源） ： 缘源苑 原缘员援 怨 摇 再蚤灶 匀， 载怎藻 载 杂， 酝葬 再 云， 藻贼 葬造援 栽澡藻 灶藻怎则燥责则燥贼藻糟贼蚤增藻 藻枣枣藻糟贼 遭赠 泽蚤灶早造藻 蚤灶贼则葬糟蚤泽贼藻则灶葬造 蚤灶躁藻

29、糟贼蚤燥灶 燥枣 藻则赠贼澡则燥责燥蚤藻贼蚤灶 燥灶 葬 则葬遭遭蚤贼 皂燥凿藻造 燥枣 泽怎遭鄄 葬则葬糟澡灶燥蚤凿 澡藻皂燥则则澡葬早藻 允 援 悦澡蚤灶 孕澡葬则皂葬糟燥造 月怎造造， 圆园园愿， 圆源 （源） ： 缘源苑 原缘员援 员园杂怎扎怎噪蚤 匀， 酝怎则葬皂葬贼泽怎 酝， 栽葬灶葬噪葬 运， 藻贼 葬造援 悦藻则藻遭则燥泽责蚤灶葬造 枣造怎蚤凿 枣藻则鄄 则蚤贼蚤灶 蚤灶 糟澡则燥灶蚤糟 澡赠凿则燥糟藻责澡葬造怎泽 葬枣贼藻则 葬灶藻怎则赠泽皂葬造 泽怎遭葬则葬糟澡灶燥蚤凿 澡藻皂鄄 燥则则澡葬早藻 允 援 晕藻怎则燥造， 圆园园远， 圆缘猿 （怨） ： 员员苑园 原远援 员员

30、宰藻造造藻则 砸 韵， 阅躁怎葬灶凿葬 耘， 再燥憎 匀 再， 悦葬则葬则藻 砸 韵援 蕴赠皂责澡葬贼蚤糟 凿则葬蚤灶葬早藻 燥枣 贼澡藻 遭则葬蚤灶 葬灶凿 贼澡藻 责葬贼澡燥责澡赠泽蚤燥造燥早赠 燥枣 灶藻怎则燥造燥早蚤糟葬造 凿蚤泽藻葬泽藻 允 援 粤糟贼葬 晕藻怎则燥责葬贼澡燥造， 圆园园怨， 员员苑 （员） ： 员 原员源援 员圆月燥糟澡藻 阅， 在燥贼燥增葬 耘， 宰藻造造藻则 砸 韵， 藻贼 葬造援 悦燥灶泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 粤遭藻贼葬 蚤皂鄄 皂怎灶蚤扎葬贼蚤燥灶 燥灶 贼澡藻 增葬泽糟怎造葬贼怎则藻 燥枣 澡怎皂葬灶 粤造扎澡藻蚤皂藻则忆泽 凿蚤泽藻葬泽藻 遭则葬蚤灶 允

31、 援 月则葬蚤灶， 圆园园愿， 员猿员 （孕贼员圆） ： 猿圆怨怨 原猿员园援 员猿 匀葬贼葬 砸， 郧蚤造造葬则凿燥灶 云， 酝蚤糟澡葬藻造蚤凿蚤泽 栽 酝， 匀燥泽泽皂葬灶灶 运 粤援 栽葬则早藻贼藻凿 凿蚤泽则怎责贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 遭糟造鄄圆 早藻灶藻 蚤灶 皂蚤糟藻 藻曾葬糟藻则遭葬贼藻泽 枣燥糟葬造 蚤泽糟澡藻皂蚤糟 遭则葬蚤灶 蚤灶躁怎则赠 允 援 酝藻贼葬遭 月则葬蚤灶 阅蚤泽， 员怨怨怨， 员源 （圆） ： 员员苑 原圆源援 员源云怎遭藻造 杂， 耘凿藻造泽蕴藻蚤灶 悦 蕴援 悦葬泽责葬泽藻泽 葬泽 凿则怎早 贼葬则早藻贼泽 蚤灶 蚤泽糟澡藻皂蚤糟 燥则鄄 早葬灶 蚤灶躁

32、怎则赠 允 援 悦怎则则 阅则怎早 栽葬则早藻贼泽 陨皂皂怎灶藻 耘灶凿燥糟则 酝藻贼葬遭燥造 阅蚤泽燥则凿， 圆园园缘， 缘 （猿） ： 圆远怨 原愿苑援 悦藻则藻遭则葬造 造赠皂责澡葬贼蚤糟 遭造燥糟噪葬早藻 葬早早则葬增葬贼藻泽 葬责燥责贼燥泽蚤泽 燥枣 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽 葬枣贼藻则 杂粤匀 蚤灶 则葬贼 葬灶凿 责赠则蚤凿燥曾蚤灶藻 澡葬泽 葬 糟藻则贼葬蚤灶 则燥造藻 蚤灶 贼澡藻 皂蚤贼蚤早葬贼蚤燥灶 宰粤晕郧 载怎葬灶员， 圆， 悦匀耘晕 云藻灶早圆， 郧粤韵 月蚤灶早圆， 郧粤韵 载蚤葬灶早鄄凿燥灶早圆， 允陨粤 蕴蚤鄄造蚤员， 圆， 再粤晕郧 酝蚤灶早鄄枣藻灶

33、早员， 杂哉晕 月葬燥鄄造蚤葬灶早员 （员援 阅藻责贼 燥枣 晕藻怎则燥造燥早赠， 在澡葬灶早择蚤怎 孕藻燥责造藻泽 匀燥泽责蚤贼葬造， 在澡葬灶早择蚤怎 杂澡葬灶凿燥灶早摇 圆缘园圆园园， 悦澡蚤灶葬； 圆援 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 悦藻则藻遭则葬造 酝蚤糟则燥糟蚤则糟怎造葬贼蚤燥灶 蚤灶 哉灶蚤增藻则泽蚤贼蚤藻泽 燥枣 杂澡葬灶凿燥灶早， 阅藻责贼 燥枣 晕藻怎则燥造燥早赠， 贼澡藻 粤枣枣蚤造蚤葬贼藻凿 匀燥泽责蚤贼葬造 燥枣 栽葬蚤泽澡葬灶 酝藻凿蚤糟葬造 悦燥造造藻早藻， 栽葬蚤葬灶 杂澡葬灶凿燥灶早摇 圆苑员园园园， 悦澡蚤灶葬） 粤遭泽贼则葬糟贼： 粤蚤皂摇栽燥 蚤灶

34、增藻泽贼蚤早葬贼藻 贼澡藻 蚤灶枣造怎藻灶糟藻 燥枣 糟藻则藻鄄 遭则葬造 造赠皂责澡葬贼蚤糟 遭造燥糟噪葬凿藻 （悦蕴月） 燥灶 葬责燥责贼燥泽蚤泽 燥枣 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽 葬枣贼藻则 泽怎遭葬则葬糟澡灶燥蚤凿 澡藻皂燥则则澡葬早藻 （杂粤匀） 蚤灶 则葬贼泽 蚤灶 增蚤增燥， 葬灶凿 贼澡藻 皂蚤贼蚤早葬贼蚤燥灶 则燥造藻 燥枣 责赠则蚤凿燥曾蚤灶藻 蚤灶 则葬贼泽援 酝藻贼澡燥凿泽摇 匀藻葬造贼澡赠 葬凿怎造贼 宰蚤泽贼葬则 则葬贼泽 憎藻则藻 则葬灶凿燥皂造赠 凿蚤鄄 增蚤凿藻凿 蚤灶贼燥 灶燥则皂葬造 糟燥灶贼则燥造 早则燥怎责， 杂粤匀 早则燥怎责， 杂粤匀 垣 悦

35、蕴月 早则燥怎责， 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 责赠则蚤凿燥曾蚤灶藻 早则燥怎责 葬灶凿 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造 泽葬造蚤灶藻 早则燥怎责援 杂粤匀 皂燥凿藻造 憎葬泽 皂葬凿藻 遭赠 凿燥怎遭造藻 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 燥枣 葬怎贼燥造燥早燥怎泽 遭造燥燥凿 蚤灶贼燥 贼澡藻 糟蚤泽贼藻则灶葬 皂葬早灶葬援 韵灶 贼澡藻 贼澡蚤则凿 凿葬赠 葬枣贼藻则 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶， 贼藻则鄄 皂蚤灶葬造 凿藻燥曾赠灶怎糟造藻燥贼蚤凿赠 贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 皂藻凿蚤葬贼藻凿 灶蚤糟噪 藻灶凿 造葬遭藻造蚤灶早 （栽哉晕耘蕴） 皂藻贼澡燥凿 枣造怎燥则藻泽

36、糟藻灶贼 憎葬泽 葬责责造蚤藻凿 贼燥 凿藻贼藻则皂蚤灶藻 蚤灶 泽蚤贼怎 葬责燥责贼燥泽蚤泽 蚤灶 贼澡藻 糟藻则藻遭则葬造 糟燥则贼藻曾援 陨皂鄄 皂怎灶燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠 憎葬泽 糟燥灶凿怎糟贼藻凿 贼燥 凿藻贼藻糟贼 贼澡藻 藻曾责则藻泽鄄 泽蚤燥灶 燥枣 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 葬灶凿 月糟造鄄圆 蚤灶 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽援 砸藻鄄 泽怎造贼泽摇 栽澡藻 灶怎皂遭藻则泽 蚤灶 栽哉晕耘蕴 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟藻造造泽 憎藻则藻 造藻泽泽 蚤灶 灶燥则皂葬造 糟燥灶贼则燥造 早则燥怎责 贼澡葬灶 贼澡燥泽藻 蚤灶 则藻皂葬蚤灶蚤灶早 早则燥怎责， 憎澡蚤造藻 贼澡

37、藻 灶怎皂遭藻则泽 蚤灶 杂粤匀 垣 悦蕴月 早则燥怎责 憎藻则藻 泽蚤早灶蚤枣蚤鄄 怨圆怨中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎造； 圆远 （苑） 糟葬灶贼造赠 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡燥泽藻 蚤灶 杂粤匀 早则燥怎责援 栽澡藻 灶怎皂遭藻则泽 蚤灶 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 责赠则蚤凿燥曾蚤灶藻 早则燥怎责 憎藻则藻 造藻泽泽 贼澡葬灶 贼澡燥泽藻 蚤灶 杂粤匀 垣 悦蕴月 早则燥怎责援 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 灶燥则皂葬造 糟燥灶贼则燥造 早则燥怎责 憎葬泽 憎藻葬噪藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 蚤灶 则

38、藻皂葬蚤灶蚤灶早 早则燥怎责泽， 憎澡蚤造藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 杂粤匀 垣 悦蕴月 早则燥怎责 憎葬泽 泽蚤早鄄 灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 蚤灶 杂粤匀 早则燥怎责援 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 藻曾鄄 责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 责赠则蚤凿燥曾蚤灶藻 早则燥怎责 憎葬泽 造燥憎藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 蚤灶 杂粤匀 垣 悦蕴月 早则燥怎责援 月糟造鄄圆 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 杂粤匀 垣 悦蕴月 早则燥怎责 憎葬泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 造燥憎藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 蚤灶 贼澡藻 杂粤匀 早则燥怎责， 憎澡蚤造藻 贼澡藻 藻曾责

39、则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 杂粤匀 垣 悦蕴月 垣 责赠则蚤凿燥曾蚤灶藻 早则燥怎责 憎葬泽 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 蚤灶 杂粤匀 垣 悦蕴月 早则燥怎责援 悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶摇悦蕴月 藻曾葬糟藻则遭葬贼藻泽 贼澡藻 葬责燥责贼燥泽蚤泽 燥枣 糟燥则贼蚤糟葬造 灶藻怎则燥灶泽 蚤灶 则葬贼泽 葬枣贼藻则 杂粤匀 遭赠 怎责鄄则藻早怎造葬贼蚤灶早 悦葬泽责葬泽藻鄄猿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶凿 凿燥憎灶鄄则藻早怎造葬贼蚤灶早 月糟造鄄圆 藻曾鄄 责则藻泽泽蚤燥灶， 憎澡蚤造藻 贼澡藻 责赠则蚤凿燥曾蚤灶藻 澡葬泽 葬 糟藻则贼葬蚤灶 则燥造藻 蚤灶 贼澡藻 皂蚤贼蚤早葬贼蚤燥灶援 运藻赠

40、 憎燥则凿泽： 糟藻则藻遭则葬造 造赠皂责澡葬贼蚤糟 凿则葬蚤灶葬早藻； 泽怎遭葬则葬糟澡灶燥蚤凿 澡藻皂燥则则澡葬早藻； 则葬贼泽； 葬责燥责贼燥泽蚤泽； 责赠则蚤凿燥曾蚤灶藻； 悦葬泽责葬泽藻鄄猿； 月糟造鄄圆 二氮嗪对氧糖剥夺后 孕悦员圆 细胞凋亡及对 月糟造鄄圆 蛋白的影响 王占强员， 贾春红员， 鲁摇 杨员， 赵丹阳员， 王全才圆， 张摇 鸿员 （中国医科大学附属盛京医院 员援 神经内科、 圆援 神经外科， 辽宁 沈阳摇 员员园园园源） 中国图书分类号： 砸 猿圆怨援 圆缘； 砸 苑源猿援 猿猿园援 圆圆； 砸 苑源猿援 猿猿园援 缘猿； 砸 愿源缘援 圆圆 文献标识码： 粤 文章编

41、号： 员园园员 原员怨苑愿 （圆园员园） 园苑 原园怨猿园 原园源 摘要： 目的摇 探讨二氮嗪对氧糖剥夺 （韵郧阅） 孕悦员圆 细胞凋亡 的保护作用及其机制。方法摇体外培养 孕悦员圆 细胞株， 以 韵郧阅、 二氮嗪、 缘鄄羟葵酸 （缘鄄匀阅） 处理， 分为 粤 组 （正常对照 组） ， 月 组 （氧糖剥夺组） ， 悦 组 （氧糖剥夺 垣 二氮嗪组） ， 阅 组 （氧糖剥夺 垣 二氮嗪组 垣缘鄄匀阅 组） ， 采用 粤灶灶藻曾蚤灶 灾鄄云陨栽悦辕 孕陨 双染流式细胞分析仪检测凋亡率， 应用免疫荧光染色和 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 检测 月糟造鄄圆 蛋白表达水平， 观察二氮嗪对氧糖剥 夺 孕悦员圆

42、 细胞凋亡的保护作用。结果摇氧糖剥夺后 月， 悦， 阅 组 孕悦员圆 细胞凋亡细胞数增加， 悦 组与 月、 阅 组比较差异均有 显著性 （孕 约 园郾 园员） 。月， 悦， 阅 组 月糟造鄄圆 蛋白表达增加， 悦 组达 到高峰。悦 组与 粤、 月、 阅 组比较差异均有显著性 （孕 约园郾 园员） 。 结论摇 二氮嗪能抑制氧糖剥夺 孕悦员圆 细胞凋亡， 这一作用机 制可能是增加 月糟造鄄圆 表达来实现其保护作用的。 关键词： 孕悦员圆； 粤栽孕 敏感性钾通道； 凋亡； 月糟造鄄圆； 二氮嗪； 缘鄄羟 葵酸 摇 摇 缺血性脑血管病致死率和致残率均较高。我们 的前期研究显示 运粤栽孕开放剂对脑缺血辕

43、 再灌注损伤 发挥保护作用。但关于其抗凋亡的信号转导通路尚 不完全清楚。孕悦员圆 细胞是大鼠嗜铬细胞瘤细胞， 常 收稿日期： 圆园员园 原园猿 原圆圆， 修回日期： 圆园员园 原园源 原员怨 基金项目： 辽宁省科学技术计划资助项目 （晕燥 圆园园愿圆圆缘园圆圆） 作者简介： 王占强 （员怨愿猿 原 ） ， 男， 硕士生， 住院医师， 研究方向： 脑缺 血神经元保护的信号转导机制， 耘鄄皂葬蚤造： 憎葬灶早扎澡葬灶择蚤葬灶早员员圆圆 岳员远猿援 糟燥皂； 张摇 鸿 （员怨苑圆 原 ） ， 女， 博士， 副教授， 硕士生导师， 研究方 向： 脑缺血神经元保护的信号转导机制， 通讯作者， 栽藻造：

44、园圆源鄄愿猿怨缘远猿苑园， 耘鄄皂葬蚤造： 扎澡葬灶早澡援 苑圆员员岳员远猿援 糟燥皂 用做神经细胞替代模型。二氮嗪作为一种线粒体 运粤栽孕通道开放剂， 在脑缺血时对神经细胞的保护作 用已经明确， 本实验通过对 孕悦员圆 细胞氧糖剥夺建 立脑梗死细胞模型研究二氮嗪对 孕悦员圆 细胞的保护 作用。 员摇 材料与方法 员援 员摇主要仪器及试剂摇栽澡藻则皂燥 云燥则皂葬 杂贼藻则蚤鄄糟赠糟造藻 悦韵圆陨灶糟怎遭葬贼燥则， 匀耘孕粤 云陨蕴栽耘砸 杂宰鄄悦栽鄄陨云阅 超净工作 台， 员园员鄄圆粤 型数显电热鼓风干燥箱， 栽郧员远鄄宰杂 台式 高速离心机， 阅再再鄄远悦 型电泳仪， 宰阅鄄怨源园缘月 型

45、水平 摇床， 匀耘砸粤 悦藻造造 员缘园 三气培养箱， 允孕鄄粤 型架盘天 平， 悦藻灶贼则蚤枣怎早藻 缘愿员园 砸 耘责责藻灶凿燥则枣 高速冷冻离心机， 月阅 云粤悦杂 悦葬造蚤遭怎则 流式细胞仪， 美国生产， 激光共聚 焦显微镜 杂孕圆 垣 粤韵月杂 蕴藻蚤糟葬 德国， 韵造赠皂责怎泽 粤载苑园 日 本显微照相系统， 砸孕酝陨 员远源园 培养液 （美国 匀赠造燥灶藻） ， 新生牛血清 （匀赠造燥灶藻） ， 粤灾辕 孕陨 凋亡试剂盒 （南京凯 基生物技术公司） ， 月糟造鄄圆 抗体 （美国 杂葬灶贼葬 悦则怎扎） ， 云陨栽悦 标记二抗 （北京中杉生物技术公司） ， 其它试剂 均为国产分析纯

46、。 员援 圆摇 方法 员援 圆援 员摇细胞培养摇孕悦员圆 细胞接种于含 员园豫 胎牛 血清和 匀耘孕耘杂 液 （终浓度 员园 皂皂燥造蕴 原员） 的改良 砸孕酝陨 员远源园 培养基， 于 猿苑益， 缘豫 悦韵圆的细胞培养箱 中培养。 员援 圆援 圆摇 氧糖剥夺实验及给药方式摇取传代后 猿 凿 孕悦员圆 细胞， 分为 粤、 月、 悦、 阅 组。粤 组细胞正常培养。 月 组更换无血清， 无糖人工脑脊液 （灶粤悦杂云） ， 其组成 为 （皂皂燥造蕴 原员 责匀 苑郾 源） ： 晕葬悦造 员圆缘， 运悦造 缘， 晕葬匀悦韵猿 圆缘郾 苑， 酝早杂韵源圆， 晕葬匀圆孕韵源员郾 圆， 杂怎糟则燥泽藻 员园， 立即移至 园猿怨中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎造； 圆远 （苑） ： 怨猿园 耀猿