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1、 2 8 8 C h i n e s e J o u r n a l o f C o a l In d u s t r y Me d ic in e Ma r c h 2 0 0 6 , V o l. 9 , N o . 3 文章 编号1 0 0 7 一 9 5 6 4 ( 2 0 0 6 ) 0 3 一 0 2 8 9 一 0 2 吸人肝素治疗支气管哮喘大鼠的研究 1 2 1 0 0 0 辽宁省锦州市， 锦州医学院附属第一医院呼吸科杨丹李永春 关健 词肝素支气管哮咯大风 中 图分类号R 一 3 3 2文献 标识码B 肝素( H e p a r i n ) 应用于临床已有半个多世纪， 近年来应
2、用肝 素治疗肺部疾病已有不少报道， 一般认为其主要治疗作用是改善 血液流变学， 使高粘血症得到缓解。除此之外， 肝素还有多种非 抗凝特性， 包括抗炎、 抗过敏、 抑制气道高反应性等作用， 并可能 有扩张支气管作用田， 本试验目的在于研究吸人肝素对于支气管 哮喘大鼠的治疗作用， 以探讨肝素对于哮喘的临床应用价值。 1 材料与方法 1 . 1 材料动物: 3 0只健康S D大鼠， 鼠龄3 - 4周， 体重1 2 0 巧。 9 ， 由锦州医学院动物实验中心提供， 随机分为三组， 每组 各1 0只。A组为对照组, B组为模型组， C组为肝素组。主 要试剂 卵清蛋白 美国S i g m a公司生产) ，
3、 氢氧化铝干粉( 北京 化学试剂公司) 。主要仪器 9 8 0 一A型超声雾化器( 上海天缘 医用有限公司生产) 。 1 . 2 大鼠的支气管哮喘模型制作大鼠卵清蛋白致敏 B组 大鼠用卵清蛋白 1 . l ( 含卵清蛋白S O O mg . 氢氧化铝 I O O mg ， 用 生理盐水l ml 混匀， 浓度为1 0 %卵清蛋白) 第一天腹腔注射， 第 七夭再次腹腔注射 I %卵清蛋白l ml ( 含卵清蛋白1 0 mg , 氢氧化 铝1 0 0 mg ， 用生理盐水 l ml 混匀) 腹腔注射卵清蛋白第十四天 时， B组大鼠用 1 %卵清蛋白( 卵清蛋白 l 0 0 mg+生理盐水 1 0 m
4、1) 雾化吸人激发， 超声雾化器产生的雾气由塑料管连接到自 制的喷雾箱内。 容器上 5个气孔。将大鼠置于箱 内， 恒压、 4 0 0 m. Hg 激发。C组大鼠致敏及激发方法与 B组相同. 但雾 化吸人卵清蛋白激发哮喘前雾化吸人肝素( 1 k U / k g ) , 2次/ d , 2 0 mi n / 次， 连续7 d J , A组大鼠处理: 以生理盐水代替卵清蛋 白， 同法、 等量、 同期进行腹腔注射和雾化激发。激发成功标准: 使致敏大鼠出现呼吸加深加快、 点头运动及腹肌收缩 用力呼吸 的标志) 等喘息症状为止，记录大鼠喷人卵白蛋白至腹肌收缩 之间的时间， 即诱喘潜伏期， 并记录其呼吸频率
5、激发后 2 4 1,以2 %戊巴比妥钠0 . 0 3 L / k g腹腔麻醉后， 取仰卧位固定在 手术台上， 无菌消毒皮肤， 于颈部切开， 钝性分离出气管， 结扎右 主支气管， 用作光镜观察， 于左主支气管切一个T型小口， 插人 外径为2 . 5 -.的塑料管并固定， 以0 . 9 %生理盐水 5 ml 温浴至 3 7 1C， 分 3 次行支气管肺泡灌洗， 确保 回收率达 5 0 % - 7 0 %. 三组大鼠均做肺泡灌洗， 回收灌洗液。一律剪取右上肺组织置 于1 0 %甲醛中固定作石蜡切片， 常规 HE染色， 光镜观察.回 收的灌洗液( B AL F ) 以1 O O O t / mi n
6、速度离心1 0 m i n . 取沉淀物以 生理盐水漂洗二次， 以0 . 5 ml 生理盐水重悬， 细胞涂片行瑞氏一 吉姆萨染色， 在细胞计数板上行嗜酸性粒细胞( E o s ) 、 上皮细胞 计数。取上清液做蛋白含量测定 1 . 3 统计学方法以S P S S 1 0 . 0统计软件进行统计分析， 计量 资料以牙1: 表示， 二组间均数比较用 t 检验， 三组间比较采用 单因素方差分析方法进行统计分析。检验水准a 二0 . 0 5 2结 果 2 . 1 病理变化 2 . 1 . 1 大体观察对照组双肺呈粉红色， 模型组标本于第七天 双肺有散在的点状出血， 第十四夭最为明显， 模型组肺体积明显
7、 肿胀， 质地变硬， 表面可见多处点灶状出血及大片褐色实变区， 肝素组较模型组肺体积较小， 少量点片状出血点， 无明显褐色实 变区褐色改变也轻于模型组. 2 . 1 . 2 光镜观察对照组各期观察均未见明显改变， 模型组于 第十四夭炎症明显， 支气管壁增厚， 粘膜肿胀充血形成皱壁， 气 道上皮下炎性细胞浸润， 组织水肿， 纤毛上皮剥离， 杯状细胞增 殖， 支气管分泌物增加。肝素组各期均轻于模型组， 给予肝素干 预后气道及血管周围E o s浸润得到明显抑制， 气道粘液分泌得 到了控制， 抗原诱导的气道炎症部分得到了抑制， 和正常大鼠肺 组织切片接近， 说明肝素可以减轻支气管的炎症改变。 2 .
8、2 各指标监测 1 ) 肝素组较哮喘组哮喘潜伏时间明显延长， 差异有统计学 意义( P 0 . 0 5 ) ， 呼吸频率明显减少， 差异有统计学意义( P 0 . 0 5 ) . 表 1 卵白蛋白激发哮喘的作用( x1s ) 组别。哮喘 潜伏时 间( s )呼吸频 率( 次/ m in ) 哮 喘组1 0 5 7 . 5 0 ! 4 . 0 0 1 3 0 . 0 1 1 6 . 0 肝 素组1 0 9 0 . 5 0 土 6 . 0 0 9 0 . 0 士 1 2 . 0 注: ， 与哮喘 组比 较 P 0 . 0 5 2 ) 哮喘组 B A L F中嗜酸性粒细胞( E o s ) ， 上皮
9、细胞( E P i ) 和 白蛋白含量均极显著高于对照组， 差异有统计学意义( 尸 0 . 0 1 ) ， 而肝素组 E o s , E P i 和白蛋白含量高于对照组， 但低于哮 喘组， 差异有统计学意义( P 0 . 0 5 ) 。见表2 , 表 2 大鼠B A L F中E O S , E p i 及白蛋白含且的变化( 牙士 ) 组别，E o s ( x 1 0 7 / L E M x 1 0 7 / L )白蛋白( g / L 对 照 组1 0 3 . 4 3 - 1 . 3 1 3 . 8 6 1 1 . 2 7 0 . 2 3 10 . 0 5 哮 喘 组1 0 2 0 . 0 0
10、士 3 . 6 7 1 4 . 2 6 士 3 . 2 6 0 . 5 6 士0 . 1 3 肝素 组1 0 8 . 5 4 土 2 . 4 3 0 6 . 4 3 3 1 . 6 7 . 0 . 3 6 10 . 0 6 x 注 : 与 哮 喘组 比较 P0 . 0 5 , +与哮 喘组 比 较 P 0 . 0 5 . 样 与哮 喘 组 比较 尸 0 .0 5 3讨 论 哮喘是一种严重危害人类健康的全球性疾病。目前认为， 哮喘是一种由嗜酸性粒细胞、 肥大细胞及 T淋巴细胞等多种炎 性细胞参与的气道慢性炎症， 支气管哮喘的治疗药物有经典的 及非经典的二大类治疗药物。采用早期干预手段有效控制气道
11、 炎症及防止气道重塑， 降低气道高反应性， 是防治哮喘的关 键P j 。目前， 吸人表面激素为首选方法， 但部分患者使用推荐剂 量的表面皮质激素， 即可引起不同程度的全身性不良反应， 且部 分哮喘患者即使吸人超过推荐剂量的表面皮质激素， 亦不能有 效控制症状， 因此开发能有效控制气道炎症及防止气道重塑， 减 少明显的全身不良反应的非类固醇抗哮喘药物， 目前已成为研 究的热点I . A h me d等对离体绵羊支气管平滑肌进行的研究 发现肝素可阻断抗原所致的支气管平滑肌收缩， 但对乙酞甲胆 碱所致支气管平滑肌收缩无效.进一步的研究是对 1 2例运动 性哮喘患者使用肝素雾化吸人后观察支气管收缩反应
12、。实验结 果显示用肝素预先吸人可阻断运动所致的支气管收缩。B o w l e r 中国煤炭 工业医学杂 志 2 0 0 6 年 3 月第 9 卷 第 3 期 2 8 9 等对1 0 例过敏患者进行了研究， 用尘端提取液致敏前 1 0 m i n 雾 化吸人肝素2 0 O O O U， 该组患者 F E V: 下降， 提示肝素可抑制肥 大细胞所致的变态反应。国内张文志等对 1 3例哮喘状态患者 使用肝素加生理盐水3 0 . 1 超声雾化吸入。结果表明雾化吸人 肝素能改善肺小支气管及肺饱微循环， 促进肺循环 降低血液粘 稠度和肺血管阻力， 阻止血小板释放5一经色胺， 因而能降低气 道阻力， 缓解支
13、气管平滑肌痉挛， 并能激活肺泡的脂蛋白而水解 痰液 降低痰液粘稠度， 易被气道清除， 使通气和微循环改善。 吸入肝素治疗哮喘的确切机制尚不清楚， 目前认为吸人肝 素可作用于气道枯膜肥大细胞， 稳定细胞膜， 防止脱颗粒， 抑制 组胺、 缓激肤、 慢反应物质等释放， 肝素具有抑制速发型变态反 应的作用， 尤其可抑制免疫反应的发生发展， 具有抗补体的作 用， 可以对抗由T细胞介导的迟发型变态反应的炎症发生。很 小剂量的肝素即可减轻炎症对组织的损伤， 降低支气管高反应 性， 使支气管扩张、 分泌减少、 改善通气功能， 呼吸状态明显改 善、 乏氧减轻1 s 。有关研究显示哮喘急性发作期 I L一2标志的
14、 T细胞激活是哮喘急性发作期气道炎症的重要特征， 在气道炎 症的调节中起着关键作用， 哮喘急性发作期 I L一2高于缓解期 且与病情严重程度正相关。研究表明， 肝素具有抗炎、 抗过敏作 用， 能够抑制补休系统和白细胞的趋化性， 中和多种炎症因子， 肝素对 T细胞激活的抑制是其抗哮喘作用的关键环节， 通过抑 制 I L- 2的合成与分泌进而抑制T细胞激活， 降低内皮细胞的 通透性， 结合多种毒素. 从而可减轻气道的炎症反应. 发挥平喘 作用(C a l .小剂量肝素通过激活 A TM系统， 改善血液流变性， 调 整肺微循环系统， 同时还可解除肾微循环障碍 有助于利尿作 用， 降低心脏前负荷， 使
15、心衰尽快纠正.支气管哮喘气道粘膜腺 体过度分泌， 气道分泌物粘稠所导致的气道阻塞极为常见， 肝素 雾化吸人可以使药物直接作用于呼吸道. 提高局部药物浓度 发 挥其稀释痰液. 促进引流的作用， 更好地发挥平喘效果7 本实验表明， 肝素能显著延长哮喘大鼠的诱喘潜伏期， 降低 呼吸频率， 肝素可以明显减轻哮喘大鼠气道内嗜酸细胞的浸润 嗜酸细胞是哮喘气道炎症的关键效应细胞， 它的数量和活性与 哮喘的严重程度密切相关。肝素有明确的平喘抗炎作用， 本实 验为临床应用提供了可靠的实验依据肝素来源经济， 方便， 在 常规的治疗支气管哮喘的基础上， 加用肝素超声雾化吸人是一 种颇有研究价值的治疗措施 4参 考
16、文 献 1 D a v i d , L u c k M, O s b o m K . C o u g n t v a r i n a n t a s t h m a , a re v ie w o f t h e c li n i c a l 一 l it e r 一 A t u r e a J . J A T HM A, 1 9 9 1 , 2 8 : 8 5 2 P a l e r m o A, B e r ta l e r o P , P iu a N, e t a l. D e c r e a s e d fi b r in o l y r i c r e - s p o n s e
17、t o a d re n e r g i c S t imu l a t io n in h y p e r t e n s i v e p a t ie n t s I . J H y p e rt e n s . 1 9 8 9 , 6 ( s u p p l) , S 1 6 2 3 K r n ib o f E k o , T r a m一T h a n g C . B a c h m a n m F , s t a l. S tv d is e o n t h e r e l e a s e o f a p la s m i n o g e n a c t iv e a t o r
18、i n h ib i to r b y h u m a n p l a t e - le t s J lT h r -b H -. . s , , 1 9 8 6 , 5 5 ; 2 0 1 4 B r o d e r I , B a r lo w P P , H o r t o n R J M. T h e e p id e m io l o g y o f a s t h m a a n d h a y f e v e r i n a t o t a l com m u n it y t e c u m c h m ic h ig a n J . J A ll e r - g y , 1
19、9 6 2 , 3 3 : 5 1 3 5 尚为民 ， 施云 ， 莫 成航 ， 等 血栓 索 A , 前 列环 素对 支气 管哮 喘及 慢性支气管炎的作用 I 广西医学, 2 0 0 2 , 2 4 ( 1 0 , 1 5 9 5 一 1 5 9 7 6 S h i m C . R e s p o n s e t o b ro n c h o d il a t o r J . C h n C h e s t M e e t , 2 0 0 3 . 1 0, 1 5 5 刃王柏生 ， 刘 洪旭 ， 林杰 豪 支 气管 哮喘 中西 医研 究近 况仁 J . 中国 中西 医结合杂 志 ， 1 9 9
20、 8 , 1 8 ( 4 ) : 2 5 3 一 2 5 4 2 0 0 5 -0 7 -2 9 收稿2 0 0 5 -1 0 - 1 7 修 回 文 章编号1 0 0 7 一 9 5 6 4 ( 2 0 0 6 ) 0 3 一 0 2 8 9 一 0 1 嗜铬细胞瘤并发脑出血1 例 2 5 2 5 0 0山东省冠县人 民医院申强柳海英 关 健词嗜格细胞瘤 言 脑 出血 ; 并发症 中图分类 号R 7 4 3 . 3 4文献标 识码D 1病 历 报 告 患者， 男, 2 1岁, 2 0 0 5年5月7日3 : 0 0 ， 因左侧肢体活动失 灵2 h 人院。患者2年前出现头痛、 头晕， 于山东省
21、省立医院诊 断为肾上腺外嗜铬细胞瘤、 继发性高血压。经脑血管造影排除 动脉瘤和脑血管畸形. 在该院行嗜铬细胞瘤摘除术术后 3 个 月内血压正常, 3 个月后血压再次升高， 波动于工 8 0 -2 0 0 / 1 1 0 - 1 3 0 - H g之间。长期服复方降压片、 阿替洛尔、 尼群地平等药 物治疗， 血压控制不理想.6 个月前于山东省省立医院诊断为 肾上腺外嗜铬细胞瘤复发.人院前 2 h , 患者睡醒后起床小便时 感左侧肚体活动失灵， 言语不流利。体检; B P 1 8 0 / 1 1 0 m mHg , 神志清， 精神不振， 言语欠流利， 左侧肢体肌力0级， 肌张力高， 左侧巴彬斯基征
22、( 十) 。急诊头颅 C T示右侧基底节出血， 出血 量约3 0 -1 。予以甘露醇、 酚妥拉明、 硝普钠等药物治疗。6 h后 意识丧失， 再次行头颅C T示右侧基底节出血破人脑室 出血量 约1 5 0 -1 , 随后转人神经外科行血肿抽吸术 6 d 后死亡。 2讨 论 嗜铬细胞瘤发病以2 0 -5 0岁多见，男性较女性略多。嗜铬 细胞瘤位于肾上腺者约占8 0 %-9 0 纬， 可产生去甲肾上腺素和 肾上腺素。肾上腺外嗜铬细胞瘤位于腹膜外， 腹主动脉旁( 约占 1 0 纬 - 1 5 %) ， 肾上腺外肿瘤可为多中心的， 局部复发或转移的 比例较高。肾上腺外嗜铬细胞瘤， 除主动脉旁嗜铬体所致者
23、外， 只产生去甲肾上腺素， 不能合成肾上腺素o f 。去甲肾上腺素、 肾 上腺素可使心肌收缩力加强， 心率加快， 血管收缩， 血压升高 长期高血压可形成脑部小动脉的微动脉瘤， 血压骤然升高可引 起破裂而致脑出血。 嗜铬细胞瘤并不多见， 在诊治方面的经验教训为: 早期诊 断 早期治疗。对于高血压病患者， 尤其是年轻者、 阵发性及持 续性高血压者应警惕本病， 一旦确诊， 力争手术切除肿瘤。恶性 嗜铬细胞瘤的治疗较困难， 一般来说对放疗和化疗不敏感有 条件的医院可行, 2 , I 一MI B G治疗， 可获得一定效果tl。嗜铬 细胞瘤所致继发性高血压较难控制.对手术失败、 不能完全切 除或切除后复发者， 应用药物控制血压。一般采用。受体阻滋 剂， p 受体阻滞剂， 必要时可应用硝普钠m 对出现意识障碍 或脑血管体征患者， 密切监测血压， 及时行头颅 C T检查， 予以 积极治疗， 必要时可请神经外科医生会诊以协助治疗. 3参 考 文 献 3 沈稚舟. 嗜铬细胞瘤 m7 / / 陈湘珠. 实用内科学 第u版. 北京: 人 民卫生 出版社 ， 2 0 0 3 : 1 1 2 2 - .1 1 2 6 2 0 0 5 -0 6 - 1 4收稿2 0 0 6 -0 1 -0 4 修 回