《光动力疗法结合三羟异黄酮对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《光动力疗法结合三羟异黄酮对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究.pdf（3页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、四川医学2 0 0 9 年7 月第3 0 卷( 第7 期) S i c h u a n M e d i c a lJ o u r n a l ，2 0 0 9 ，V o 3 0 ，N o 7 1 0 0 9 基础与实验研究论著 光动力疗法结合三羟异黄酮对H 2 2 荷瘤小鼠的抑瘤作用研究 蒋凯1 ，权毅1 ，潘显明1 ，张涛1 A ，张汝1 。廖冬发1 。昊士明2 ( 1 成都军区总医院骨科，肿瘤治疗中心，四川成都6 1 0 0 8 3 ；2 第三军医大学新桥医院康复理疗科，重庆4 0 0 0 3 7 ) 【摘要】目的深入了解光动力疗法与三羟异黄酮协同应用对荷瘤小鼠肿瘤生长抑制的作用特点。方法
2、通过 建立荷瘤小鼠动物模型，以光动力疗法和三羟异黄酮单独及协同应用后检测其抑瘤率及廷命率，比较各组差异有无统计 学意义。结果光动力疗法与三羟异黄酮的联合应用较光动力疗法或三羟异黄酮的单独作用更为显著的延缓荷瘤小鼠 肿瘤体积的增长并延长荷瘤小鼠的生存时间。结论在体内实验申，三羟异黄酮能显著增强光动力疗法抗肿瘤作用疗 效。 【关键词】光动力疗法；三羟异黄酮 【中图分类号1 R - 3 3 【文献标识码】 A 【文章编号】1 0 0 4 - 0 5 0 1 ( 2 0 0 9 ) 0 7 1 0 0 9 - 0 3 E f f e c to fP D Tc o m b i n e dW I t hC
3、 E NO Hm i c eb e a r i n gH 2 2x e n o g r a f t s J I A N GK a i ，Q U a yM ，n W X i a n - r u i n g ，以a 1 C h e n g d uM i l i t a r yG e n e r a lH o s p i t a l ，C h e n g d u ，S i c h u a n6 1 0 0 8 3 ，C h i n a 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e T oi n v e s t i g a t et h et h e r a p yr e s
4、 p o n s i v e n e s sb yp h o t o d y n a m i et h e r a p yc o m b i n e dw i t hG E Ni nv i v o M e t h o d sT h em i c eb e a r i n gH 2 2x e n o g r a f t sw e r et r e a t e dw i t hP D Ta n dG E N t h et u m o ri n h i b i t i o ne f f e c tW 8 8a 8 8 e s 8 e db ym e a 8 u r i n g 肿8t u m o r
5、v o l u m e sa n ds u r v i v a lt i m eo v e rap e r i o do f3w e e k s ，t ok n o ww h e t h e rt h e r ei ss i g n i f i c a n td i f f e r o n c ei ne a c h g r o u p R e s u l t s T h ec o m b i n a t i o n so fP l y rw i t hG E Nc o u l ds l o wd o w nt h ei n c r e a s eo ft u m o rv o l u m e
6、 sa n dp r o l o n gt h es u r v i v a lp e r i - o do fm i c eb e a r i n gx e n o g r a f t am o r es i g n i f i c a n d yt h a nP D To rG E Na l o n e C o n c l u s i o nT h et r e a t m e n to fp r o t e i nt y r o s i n ek i n a s e i n h i b i t o r ，g e n i s t e i n ( G E N ) ，c a ne n h a
7、n c et h ep h o t o d y n a m i et h e r a p yr e s p o n s i v e n e s si na m O l l f l Ch e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a ( H 2 2 ) i n v i v o 【K e yw o r d s 】p h o t o d y n a m i et h e r a p y ；g e n i s t e i n 由于光动力疗法( p h o t o d y n a m i ct h e r a p y ，P D T ) 对 肿瘤细胞抑制作用的特异性
8、，光动力疗法作为一种恶 性肿瘤的候选治疗方法已经有十余年的历史了，但与 其它药物的协同作用及作用机制了辩不多。本实验应 用荷瘤小鼠动物模型通过体内试验，以光动力疗法和 三羟异黄酮( g e n i s t e i nG E N ) 单独及协同应用后检测其 抑瘤率及延命率，比较各组差异有无统计学意义。探 讨光动力疗法对肿瘤的深入作用机制，为其临床应用 提供信息。 l 材料与方法 1 1 实验仪器：C 0 2 培养箱( S h e l d o nM a n u f a c t u r i n g ， h a c ，U S A ) ，低温高速离心机( H i t a e h iH i m a cC
9、F l 5 ，J a - p a n ) ，H e N e 激光器( 西南师范大学激光所) 。 1 2 实验材料：小鼠肝癌细胞H 2 2 细胞株购于重庆 医科大学超声研究所。血卟啉衍生物( H p D ) 购于成 都市龙鼎实业集团生物制品公司。细胞培养液R P M I 1 6 4 0 购于G I B C O ( U S A ) 公司。三羟异黄酮购于美国 S i g m a 公司。 1 3 实验方法 通讯作者E - m a i l ：z h a n g t a 0 2 6 9 1 2 6 咖 1 3 1 动物模型的建立：健康成年B A L B e 小鼠，雌雄 各半，体重( 2 0 2 ) g ，
10、由第三军医大学动物实验中心提 供。模型制备参照N a g l e rA 等1 的方法进行。种植 部位均选小鼠背部，用8 N a 2 S 溶液将小鼠背部脱 毛，局部7 5 酒精消毒后，4 号针经皮穿刺，于皮下缓 慢注入H 2 2 细胞悬液0 2 m l ( 含对数生长期H 2 2 细胞 约1 0 。7 个，单细胞悬浮于O 0 l MP B S 缓冲液中) ，至种 植部位稍隆起后拨出针头，棉球轻压针孔，防止细胞溢 出。术后继续饲养，每3 天观察1 次，游标卡尺测量瘤 体，在约2 周左右，瘤体达1 5 0 2 0 0 r a m 3 后随机分组 开始实验。 1 3 2 实验分组：空白对照组( 不注射
11、H p D ，不进 行光照射) ；光照射对照组( 光照射2 0 0 J c m 2 ，无 H p D ) ；H p D 对照组( 尾静脉注射H p D1 0 m g k g ，不 进行光照射) ； P D T 治疗组( 尾静脉注射H p D1 0 r a g k g ，光照射2 0 0 J c m 2 ) ；G E N 治疗组 腹腔注射G E N l m g ( k g d ) ，连续7 d ； P D T G E N 组 尾静脉注射 H p D1 0 m g k g ，光照射2 0 0 J c m 2 ，同时腹腔注射G E N l m g ( k g d ) ，连续7 d 。荷瘤小鼠共分为6
12、 组，其中 无G E N 处理组均腹腔注射含0 4 D M S O 的生理盐水 万方数据 1 0 1 0 四川医学2 0 0 9 年7 月第3 0 卷( 第7 期) S i c h u a n M e d i c a lJ o u r n a l ，2 0 0 9 ，V o L3 0 N o 7 2 5 0 1 x l ，连续7 d ，作为溶媒对照( v e h i c l ec o n t r 0 1 ) ，以保 证实验条件的均一性。 1 3 3 实验处理：参照M a k o w s k iM 等旧。的方法，随机 分为6 组，每组1 2 只。待小鼠背部荷瘤长至预定体积 时进行实验处理。H p
13、 D 对照组、P D T 治疗组、P D T G E N 组小鼠经尾静脉注入H p D 液( 1 0 m g k g ) 后于暗 室中饲养；2 4 h 后将光照射对照组、P D T 治疗组及 P D T G E N 组小鼠背部向上固定于操作台( 以保证在光 照过程中光斑不会偏离肿瘤) 进行光照射。光照射采 用H e N e 激光器( 西南师范大学激光所，波长6 3 0 n m ， 照射距离2 c m ，输出功率密度2 5 m W c m 2 ，能量密度 2 0 0 J c m 2 ) 垂直照射。G E N 治疗组、P D T - G E N 组小 鼠在光照射前l h 腹腔注射G E N1 m
14、g k g ，以后每2 4 h 注射1 次，共注射7 次。 1 3 4P D T 及G E N 作用对荷瘤小鼠肿瘤的抑制作 用：在P D T 及G E N 实验处理后预定时相点以游标卡 尺计量肿瘤，根据公式V = a b 2 2 ( a 为肿瘤的长径，b 为与a 垂直的短径) 计算肿瘤的体积旧J 。各实验组与 空白对照组对比计算抑瘤率。根据各组小鼠存活天 数，计算延命率。 抑瘤率c ，= ( 蔫器器粼烈鬻壤篙鬻) 0 0 延觯( ) = 遄型蕊蠢瓣轰蚴1 0 0 1 4 统计学方法：采用统计学软件S P S S l 0 0 进行。 每个标本测定3 次，取所得数据均数。两均数比较先 经方差齐性检
15、验，齐者用t 检验，不齐者用t 检验。 P O 0 5 ) ，但在治疗后第2 周开始，虽然肿瘤体积仍 持续增长，但肿瘤增长速度较各对照组减缓，增长幅度 减弱，与各对照组差异有统计学意义( P O 0 5 ) ；在治疗 后第2 周，肿瘤生长速度较P D T 治疗组亦明显缓慢， 差异有统计学意义( P O 0 5 ) 。见表l 、2 。 表lP D T 及G E N 对荷瘤小鼠肿瘤体积变化的影响 ( 卫蟠) ，删一 注：与空白对照组比较尸 o 0 5 ，p o 0 1 ；与光照射对照组比较，P 0 0 5 ，P o 们；与H p D 对照组比较，P 0 0 5 ，P 0 O l ；与P D T 治
16、疗组比较P 0 0 5 ，P O 0 l ；与G E N 治疗组比较P o 0 5 ，P o 0 1 ；与P l y r G E N 组比较，P O 0 5 ， P O 0 1 表2H y I 及G E N 对荷瘤小鼠的抑瘤及延命作用( 量坷n = 5 ) 注：与空白对照组比较，0 ) P 0 0 5 。J p O 0 1 3 讨论 P D T 是指基于光敏剂致敏大分子物质后，被特定 光激发产生活性氧成分，进而杀死肿瘤细胞的疗法。 P D T 由于其特异性强，并且创伤小、并发症少，近年来 渐渐受到人们的重视，并对其抗肿瘤作用机制进行了 大量研究。近2 0 年来逐渐应用于l 临床肿瘤治疗。但 是
17、P D T 作为一种特殊的肿瘤治疗方法，在实际应用中 万方数据 四川医学2 0 0 9 年7 月第3 0 卷( 第7 期) S i c h u a n M e d i c a lJ o u r n a t 2 0 0 9 ，V 0 1 3 0 ，7 1 0 l l 也存在一定的局限性。这种局限性主要表现为治疗用 照射光对组织有限的穿透能力限制了P D T 作用的治 疗深度，从而使深部肿瘤细胞能够逃避治疗打击并可 能激活其存活相关信号传导系统，导致肿瘤复发和转 移的可能”J 。为了进一步有效利用P D T 抗肿瘤作用 的特异性并提高其抗肿瘤治疗效率，人们对P D T 的临 床应用进行了广泛的研究
18、。M i t r aS 等3 进行了提高 P D T 作用中照射光穿透率的研究；S o b o l e vA S 等1 进 行了提高P D T 作用中光敏剂利用效能的研究，这些研 究发现均能提高实验条件下P D T 的作用效率，但在实 际临床应用中，对增进治疗效果的作用非常有限，不能 有效的减少肿瘤复发和转移的可能。因此在进一步临 床应用中，目前研究更为重视P D T 与其它治疗方法的 协同运用。由于光动力作用需要氧的参与，P D T 作用 时局部氧的浓度对治疗效果有很大的影响一J 。H u a n g z 等【8 1 将P D T 与高压氧治疗相联合用于抗肿瘤治疗， 取得了显著的增效作用。P
19、 D T 作用可以诱导肿瘤细胞 C O X 一的表达，A n g e l aF 等【9 1 在P D T 作用后联合C O X - 2 抑制剂的协同治疗显著提高了P D T 对肿瘤的增殖抑 制作用。V , 毗r l - D o n g e nG A 等训将光敏剂与抗肿瘤相关 抗体耦合，充分利用耦合体对肿瘤细胞的特异性以提 高P D T 抗肿瘤治疗的效率，也取得了显著的效果。 在本实验中观察到，将P D T 与特异性酪氨酸激酶 抑制剂G E N 联合应用能够较P D T 或G E N 的单独作用 更为显著的延缓荷瘤小鼠肿瘤体积的增长并延长荷瘤 小鼠的生存时间。磷酸化与去磷酸化作为一种重要的 信号
20、蛋白活性调节方式，在肿瘤细胞的生长、增殖、分化 中发挥着重要的作用，蛋白激酶与蛋白磷酸酶则是该过 程中两种重要的调节蛋白，有关P D T 作用后肿瘤细胞 蛋白激酶与磷酸酶活性的表达变化与相关信号传导通 路的研究也逐渐受到人们的重视1 1 。酪氨酸磷酸化与 去磷酸化处于细胞内信号传导通路上游，其活性变化对 下游信号蛋白的磷酸化级联反应有重要的调控作用。 酪氨酸激矽酪氨酸磷酸酶活性比值的升高可以激活肿 瘤细胞多种信号传导系统，诱导肿瘤细胞产生逃避反 应，可能与肿瘤的复发和转移有关2 1 。G E N 是一种纯 化于豆制品的物质，能特异抑制酪氨酸激酶的活性【l3 1 ， 并能通过生长因子信号途径抑制
21、多种肿瘤细胞周期相 调节基因和调节蛋白的表达，抑制肿瘤细胞的增殖【I4 1 。 本实验结果表明G E N 与P D T 的协同应用能够增强抗肿 瘤作用的疗效，提示P D T 与G E N 的联合应用可能是临 床抗肿瘤治疗的一种新的有效的策略。 参考文献： 1 N a m e rA ，O h a n aM S h i b o l e tO ，e t 以S u p p r e s s i o no fh e p a t o c e l M i a r c a r c i n o m ag r o w t hi nm i c eb yt h ea l k a l o i dc o c e i d i
22、 o s t a th a l o f u g i n o n e J 】E u rJC a n c e r ，2 0 0 4 ，4 0 ( 9 ) ：1 3 9 7 1 4 0 3 2 M a k o w s k iM ，G r z e l aT ，N i d e r l a J ，日a I n h i b i t i o no fe y e l o o x y g e n a s e - 2i n d i r e c t l yp o t e n t i a t e sa n t i t u m o re f f e c t so fp h o t o d y n a m i et h e
23、 r a p yi n m i c e j C l i nC a n c e rR e s ，2 0 0 3 ，9 ( 1 4 ) ：5 4 1 7 5 4 2 2 3 M aG tM a s u z a w aM - H a m a d aY ，da T r e a t m e n to fm u r i n ea n g i o s a r - c o m aw i t hc t o p o s i d e ，T N P - 4 7 0a n dp r e d n i s o l o n e J JD e r m a t o lS e i ， 2 0 0 0 ，2 4 ( 2 ) ：1 2
24、 6 1 3 3 4 】A k i t aY ，K o z a l dK ，N a k a g a w aA ，d 口EC y e l o c a y g e n a s e - 2i tBp o s s i b l e t a r g e to fm t m e n t8 p p 啦c hi nc o n j u n c t i o nw i t hp h o t o 【I y l 枷ct h e r a p yf o r v a r i c o sd i s o r d e r si ns k i na n do r a l 鲥哆 J B rJD e r m a t 0 1 2 0 0 4
25、 。1 5 1 ( 2 ) ：4 7 2 4 8 0 5 M i c r aS 。F o s t e rT H G d ) 0 鲫b r e a t h i n gs i g n f i c a n t l ya I I I a t h ep e n e - U r l 正o no fr e dl i g h ti nm u l i n et m m m ni nv i v o J P h y sM e dB i d ， 2 0 0 4 4 9 ( 1 0 ) ：1 8 9 1 1 9 0 4 6 S o b o l e vA S ，R o z e n k r a n t sA A ，G i
26、l i a z o v aI X ；A p p r o a c h e st ot h et a r - g e t e di n t r a c e l l u l a rd e l i v e r yo fp h o t o s e n s i t i z e mi no r d e rt oe n h a n c et h e i r e f f i c a c ya n dc e l ls p e c i f i c i t y J B i o f i z i k a ，2 0 0 4 ，4 9 ( 2 ) ：3 5 1 - 3 7 9 7 W a n gH W ，P u t tM E
27、 ，E m a n u e l eM J da T r e a t m e n t i n d u c e dc h a n g e s i nt u m o ro x y g e n a t i o np r e d i c tp h o t o d y n a m i ct h e r a p yo u t c e m e J 】 C a n c e rR e s 。2 0 0 4 。6 4 ( 2 0 ) ：7 5 5 3 7 5 6 1 8 H u a n gz 。C h e nQ ，S h a k i lA ，da H y p e m x y g e n a f i o ne n h
28、 a n 俏t h e t u m o rc e l lk i l l i n go fp h a o f r i n - m e d i a t e dp h o t e d y n t a n i et h e r a p y J P h o t o c h e mP h o t o b i o l ，2 0 0 3 ，7 8 ( 5 ) ：4 9 6 一5 0 2 9 A n g e l aF ，K a r ly o nT S a mW ，e ta 1 C y e l o o x y g e n a s e - 2i n h i b i t o rl a c a t - m e n te
29、 n h a n c e sp h o t o d y n a m i ct h e r a p y m e d i a t e dt u m o rr e s p o n s e 【J 】 C a n c e rR e s ，2 0 0 2 ，6 2 ( 1 4 ) ：3 9 5 6 3 9 6 1 1 0 v a n D o n g e nG A ，V i s s e fG M ，V m u o n r a e t sM B P h o t o s e n s i t i z e r - a n t i - b o d yc o n j u g a t e sf o rd e t e c
30、t i o na n dt h e r a p yo fc s n c e l r J 】A d vD r u g D e l i vR e v 2 0 0 4 ，5 6 ( 1 ) ：3 1 5 2 】1 蒋凯，程渝吴士明光动力疗法对- 2 2 细胞蛋白酪氨酸激酶及磷 酸酶活性的影响 J 重庆医学，2 0 0 5 ，3 4 ( 7 ) ：1 0 2 4 1 0 2 6 1 2 C h e n gH Y ，S c h i a v o n eA P ，S m i t h g a l lT E Ap o i n tm u t a t i o ni nt h eN - t e r m i n a l
31、c o i l e d - c o i ld o m a i nm l e s s e sc F e st y r o s i n ek i n a s ea c t i v i t ya n d s u r v i v a ls i g n a l i n gi nm y e l o i dl e u k e m i ac e l l s J M o lC e l lB i d 。 2 0 0 1 2 1 ( 1 8 ) ：6 1 7 0 6 1 8 0 1 3 】K a n gs ，C h u n gJ H ，L e eJ H ，矗a T o p i c a lN - a c e t y
32、le y s t e i n ea n d g e n i s t e i np r e v e n tu l t r a v i o l e t - l i g h e i n d u c e ds i g n a l i n gt h a tl e a d st op h o - t o a g i n gi nh u m a ns k i ni nv i v o J JI n v e s tD e r m a t o l ，2 0 0 3 ，1 2 0 ( 5 ) ： 8 3 5 8 4 l 1 4 】K a z iA ，D a n i e lK G ，S m i t hD M ，矗a
33、I n h i b i t i o no ft h ep r D t e a s o m eI r e t l v i t y 。an o v e lm e c h a n i s ma s s o c i a t e dw i t ht h et u m o rc e l la p o p t o n i t - i n d u c i n ga b i l i t yo fg e n i s t e i n J B i o c h e mP h a r m a c o l ，2 0 0 3 6 6 ( 6 ) ： 9 6 5 9 7 6 ( 收稿日期：2 0 0 8 1 2 - 0 7 ) 万方数据