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1、 1 6 5 0 H M G N 2 : 一个新的免疫活性分子( 研究综述) 黄宁， 冯云， 吴 琦， 李成梁， 王伯瑶 ( 四 J 大学基础医学与法医学院感染免疫研究室， 四力 成都 6 1 0 0 4 1 ) 我们应用微量琼脂糖弥散抗菌检测法、 制备性酸性尿素聚丙烯酞胺凝胶电泳和反向高效液相色谱技术分别从人L A K 细 胞和子宫颈茹液中分离鉴定出一个抗菌多肤， 经 N 一 端氨基酸序列测定、 质谱分析、 全长 c D N A克隆和免疫印迹等证明为 HMG N 2 H M G N 2 属于高 迁移 率非组蛋白 ( H i g h m o b ili ty g r o u p c h r o
2、 m o s o m a l p r o t e i n , H M G ) 家族成员， 是脊椎动物和非脊椎动物细胞核 中含量最丰富的非组蛋白家族， 早期研究认为H M G N 2 与D N A 复制和转录活性有关。我们首次发现H M G N 2 的抗菌活性， 为了 证明H M G N 2 在免疫反应中发挥作用， 我们对其亚细胞定位特别是免疫反应时的定位分布进行了研究， 应用免疫荧光化学、 E L I S A 和W e s t e rn B lo tt in g 方法证明 人单个核细胞经I L 一 2 刺激成为L A K 细胞时 部分H M G N 2 由 胞核转移至胞浆， 进而分泌到胞 外。
3、 构 建 带 六组氨酸 臂标签的H M G N 2 重 组真核 细胞表达质 粒p c D N A 3 . 1 一 m y c 一 h i 。 一 H M G N 2 ， 转染人宫颈上皮H e l a 细胞株， 用抗六组氨酸臂的单克隆抗体经免疫细胞化学染色共聚焦显微镜下显示新合成的带六组氨酸臂标签的H M G N 2 除细胞核外， 还分布于细胞浆中， E L L S A和免疫印迹显示亦分泌到细胞外。人子宫颈组织标本免疫组织化学染色显示 H M G N 2 主要分布于 上皮组织表面和宫颈豁液中， 免疫印迹显示感染性子宫颈私液H M N G 2 的表达量比 正常者高。 我们还对 H M G N 2
4、的二维结构与抗菌功能的关系进行了研究。从一级结构看 H M G N 2 氨基酸序列中无半胧氨酸， 不可能 形成R - 片层， 因此应用J A N I N 和K y te 一 D o o l itt le 分析法分析了H M G N 2 的亲疏水性， 应用A g r o s 和V o n H e ij n e 分析法分析了 H M G N 2 的a - 螺旋结构， 结果显示位于第1 7 - 4 2 位氨基酸残基范围有一个a 一 跨膜螺旋结构域， 具双亲性。于是我们合成了 H M G N 2 分子的。 一 跨膜螺旋结构域、 N 一 末端和C 一 末端肤片段进行抗菌活性检测， 仅仅a - 螺旋结构肤
5、片段具抗菌活性。 为了进一步证明H M G N 2 a 一 跨膜螺旋结构域的抗菌作用和抗菌机制， 我们还构建和制备了其。 一 跨膜螺旋结构域与人唾 液抗菌肤h i s t a d in 5 的重组嵌合肤h i s 5 一 a 。这个嵌合的抗菌活性比单一肤的抗菌活性强， 对温度和胰蛋白酶的抵抗性增强。 扫描电镜观察显示该重组嵌合肤不是通常抗菌肤那样的破膜作用而起抗菌作用。荧光素标记显示嵌合肤跨膜进人白色念珠 菌胞内， 分布于胞浆和胞核。D N A 阻滞试验显示I ll s 5 一 a 嵌合肤与微生物D N A 结合， 而且这种结合力大大强于与哺乳动物细 胞D N A的结合力。提示H M G N
6、2 可能通过与微生物D N A 结合而抑制细菌D N A的复制和大分子的生物合成， 从而抑制细菌的 生长繁殖。 现已公认H M G 家族另一成员H M G - 1 是一种细胞因子， 在全身炎症反应综合征中发挥重要作用。我们现有研究显示单 个核白 细胞H M G N 2 基因能对细胞因子I L 一 2 起反应， 其表达产物不仅可分布于胞浆， 还分泌到细胞外， 子宫颈上皮细胞 H M G N 2 基因似乎对感染性炎症亦有反应。为了进一步证明 H M G N 2 是一个免疫活性分子， 我们将深人研究上皮细胞 H M G N 2 基因对微生物的反应性及其信号转导; H M G N 2 对天然免疫和获得
7、性免疫的调节作用， 如对白细胞、 巨噬细胞和D C 细胞的趋 化和激活作用等。 四环素对侵袭性牙周炎患者血清抗牙th rlL IIX 叶琳菌I g G 抗体亲和力的影响 张秀琴， 黄世光， 谢敏， 张颖 ( 暨南大学医学院口 腔医学系， 广东 广州5 1 0 6 3 2 ) 目的: 评价结合四 环素的机械性牙周治疗对侵袭性牙周炎( A g P ) 患者牙周附着水平( A L ) 和血清抗牙眼叶琳菌( 几) 抗体亲 和力水平的影响。 方 法: 本 研 究 共 收 集了 门 诊2 5 例A g I 患 者， 依 据A r m it a g e I 7 诊 断 标 准， 这 部 分 患 者 被 确
8、诊 患 有A g P ( 年 龄2 0 岁一 3 5 岁， 平 均年龄为2 8 岁， 其中男性 1 2 例， 女性 1 3 例) 。2 0 例牙周健康者作为对照组( 年龄2 0 岁一 3 8 岁， 平均年龄为2 6 岁， 其中男性9 例， 女性 I 1 例) ， 对照组没有牙周炎临床症状， 牙周探诊深度不超过2 m m 。所有受试者身体其它方面均健康， 并且此前至少 3 个月没有接受过抗生素或其它机械等方面的牙周治疗。 牙周检查采用统一标准， 所有受试者分别由3 位合格的口 腔科医生进 行检查。测量从牙周袋底至釉牙骨质界的牙周附着水平。记录所有患者治疗 3 , 6 和 1 2 个月时牙周附着水
9、平。2 0 例牙周健康 1 6 51 者没有牙周炎的症状， 牙周探诊深度不超过2 m m 。每例患者接受常规牙周治疗， 包括菌斑控制和洁治， 探诊深度超过4 m m的 牙周袋需做根面 平整。 A g P 患者在接受机械性牙周治疗后给服四 环素( 0 . 5 g / d ) , 3 个月疗程结束后对病人进行评估。采集所 有患者确诊时和接 受结合抗生素的机械性牙周治疗3 , 6 和1 2 个月时的血清。 测定血清特异性抗体1 g G 的亲和力。 血清够 抗体亲和力通过硫氰酸钱分离试验检测。 结果: 治 疗前A g P 患者A L 与健康对照组之间 存在明 显差异( P 0 . 0 1 ) ; 治疗
10、结束后， A g P 患者A L 明显低于治疗前( P 0 . 0 1 ) ， 但与 健康对照 组比 较A L 仍存在明显差异( P 0 . 0 1 ) 。 治疗前A g P 患者抗体亲和力水平明显高于健康对照组( P 0 . 0 1 ) ; 治疗结束后， A g P 患者抗体亲和力水平比 治疗前显著下降( P 0 . 0 1 ) 9 结论: 结合四环素的机械性牙周治疗对侵袭性牙周炎可获得满意的疗效。 脂氧素对脂多糖诱导的巨噬细胞游离钙浓度变化及活性氧的影响 金胜威， ， 张力2 ， 叶笃药 “ ， 吴萍 z ， 周晓燕z ， 姚尚龙， ( 华中 科技大学同济医学院协和医院麻醉学教研室， 湖北
11、武汉4 3 0 0 3 0 ; z 华中科技大学同济医学院病理生理学系， 湖北 武汉4 3 0 0 3 0 ) 近年来越来越多的研究资料表明炎症反应的及时消退是炎症治疗的重要环节。脂氧素对多种炎症细胞和炎症相关基因 有显 著的 负 性 调节 作用， 是体内 重要的内 源 性脂质 促炎症消 退介质。 细 胞内 游离钙离子 浓度变化为巨 噬细胞居化的 重要第 二信使。 但脂氧素对巨噬细胞内游离钙浓度变化了解较少。为此， 本研究采用细胞内钙离子特异性荧光探针F lu o 3 一 A M和活 性氧特异性荧光探针 D C F H 一 D A同时标记小鼠巨噬细胞， 用激光共聚焦显微镜同时动态观察脂多糖引起
12、巨噬细胞胞内游离 钙浓度和活性氧变化及脂氧素的影响作用。 结 果: ( 1 ) 脂多 糖呈 剂 量依 赖升 高细 胞内 游 离钙 浓度和活 性氧的 产生， 肌浆网C a z + 一 A T P 酶抑制剂T h a p s i g a r g in 1 Eu n o l/ L 可 完全抑制1 0 m g / L 脂多糖引起的胞内钙超载。( 2 ) 脂氧素呈剂量依赖性抑制脂多糖引起的胞内游离钙浓度升高， 0 . 1 n m o l/ L , 1 n m o t/ L , 1 0 n m o V L , 1 0 0 n m o l/ L 脂氧素对脂多糖引起的胞内钙浓度升高抑制率分别为8 %, 2 5
13、 %, 8 5 %, 1 0 0 %。脂多糖 可抑制T h a p s i g a r g i n 排空肌浆网 储存钙而开放钙池调控的 钙内流， 抑制率为3 6 % 0 ( 3 ) 细胞外无钙液 及脂氧素均可抑制 脂多糖 诱导的活性氧的产生。 结论: 脂多糖通过促进内钙释放而开放钙池调控的钙通道， 大量细胞外钙离子进人细胞使钙超载。 脂氧素可能通过抑制 外钙内流， 保持细胞钙稳态， 减少活性氧的生成而发挥抗炎及促进炎症消退的作用。 实验性A R D S 大鼠小肠G q / 1 1 蛋白的动态变化 克拉拉 阿巴 斯 ， 刘春喜3 ， 张丽 ， 刘红英4 ， 陈 蓉 “ ， 王伟峰a ， 李秀娟
14、( 新疆医科大学基础医学院 病理生理学教研室， 2 病理学教研室， 新疆 乌鲁木齐8 3 0 0 5 4 ; 3 新疆生产建设兵团医院麻醉科， 新疆 乌鲁木齐 8 3 0 0 0 ; a 新疆马兰基地) 目 的: 观察 ;q / 1 1 蛋白 在急 性呼吸窘迫综合征( a c u t e r e s p ir a to ry d i s t r e s s s y n d ro m e , A R D S ) 大鼠 肠损伤中的 变化。 方法: 采用尾静脉注射油酸法复制大鼠A R D S 模型， 根据观测时限再将油酸组分为3 0 m i n , 6 0 m in , 9 0 m i n , 1
15、2 0 m i n 4 个组， 免 疫印 迹法检测小肠粘膜中 油酸组血浆A C E 活性降低( P 0 . 0 1 ) ， 血浆 L D H活性及 M D A 含量有所升高( P 0 . 0 1 ) ， 小肠组织中A C E , L D H活性和M D A含量逐渐升高( P 0 . 0 5 或 0 . 0 1 ) a 结 论: ( 1 ) 油酸 致A R D S 过 程 伴有 小肠损伤; ( 2 ) 小肠C q / 1 1 蛋白 的 上调 说明 其可能参与了A R D S 肠损伤 过程中 细 胞外信 号向细胞内的传递， 导致小肠功能和结构的变化。讨论: 目 前认为， A R D S 发病的关键是致病因子激活了细胞和体液因素， 导 致 了 体 内 过 度 或 失 招 匆 生 炎 症 反 应 ， 实 质 上 是 一 种 全 身 炎 症 反 应 综 合 症 ( sy s te m ic in fl a m m a to ry re s p o n s e s y n d ro m e , S IR S ) 在 肺 部 的 表 现， 且S I R S 贯穿A R D S 始终。“ 肠道发病的中心器官” 学说提出肠道既可能是 S I R S 时的开始器官， 又是 S I R S 的靶器官。本实