培养的大鼠三叉神经节细胞钙激活钾通道的氧化性调节.pdf

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1、3 90 摘要 培养的大鼠三叉神经节细胞钙激活钾通道的氧化性调节 朱仲玲， 王 芳， 吴周环， 龙利红， 金悠， 陈建国 ( 华中科技大学同济医学院药理学系， 湖北 武汉4 3 0 0 3 0) 目的: 研究氧化还原药物对三叉神经节细胞离子通道的调节作用。方法: 记录氧化还原药 物对三叉神经节细胞大电 导钙激活 钾通道( B 玖、 ) 的影响。结果: 采用全细胞膜片钳电生理方法， 蛋氛酸特异性氧化剂c h l o r a ll l i n e- T(Ch一 T) l lnmol 几 可轻微增加通道电流幅值， 但该作用不能被半脱氨酸还原剂 1 ， 4 一 dithi ，D L ， t h r e

2、 i tol( D T I ， ) 所逆 转。相反， 半脱氛酸特异性氧化剂5 ， 5 气 ditl li 卜 b is( 2 一 ni trib enzo icac i d)( D T NB) 5 00拜 m O 1几降低B K 。 的电流幅值， 此 作用可被1 了 r l ， 2 rruno I 几所逆转。结论: R ( ) 5 通过氧化调节B K 么 通道而参与三叉神经节细 胞的功能调节， B 民 ) 通 道在氧化应激相关性生理、 病理状态下起重要的调节作用。 关键词: 钙激活钾通道; 三叉神经节细胞; 氧化性调节; 蛋氨酸; 半胧氨酸 中图分类号: R96 5 . 2文献标识码: A文章

3、编号: 1 0 0 0 一 6 8 3 4 ( 2 0 0 6 ) 0 4 一 0 3 9 0 一 0 4 大电导钙激活钾通道( B 长、 ) 在很多组织中都 有表达， 在许多生理和病理过程中起到重要作用。 用免疫组织化学， Wes te m印迹和放射性配体结合 等 实 验 技 术， 已 证 实B K ca 在 脑 内 广 泛 表 达 。 B K 。 可促进动作电位后复极， 其主要功能是参与神经递 质的释放和病理生理状态下保护神经元避免出现钙 超载。B K ca因其大电导( Z o op s ， 对称性 1 0 0 nirnol 几 K CI) ， 钙敏感性， 电 压依赖性以及独特的药 理特性

4、而区别于其他的离子通道。细胞内钙和膜去 极 化 均可 激活B 呱通 道川。 许多 细 胞内、 外因 素可 调控B K 二 通道的 功能， 但研究多集中于蛋白 质磷酸 化的调节机制3， 对影响通道功能的重要因素 氧 化性调节的 机制 研究较 少川。 R o s 艰N s ， 包括超 氧阴 离子( 饵 ) ， 一氧化氮( N O ) 和过氧化氢( 玩q) 等通过氧化修饰各种蛋白质， 尤其是蛋白质中含琉 基( 一 S H ) 的氨基酸， 如半胧氨酸和蛋氨酸极易被各 种氧化剂所氧化， 从而与许多疾病如阿尔茨海默病 和帕金森病的进展有关。 B K 。 通道蛋白中含有大 量的半胧氨酸和蛋氨酸残基， 对各种

5、氧化剂敏感。 以往研究表明， 氧化还原剂调节表达在爪蟾卵母细 胞上51 。 通道门 控特性5 一 7 。本课题组前期研究亦 证明附属性俘 亚单位能增强对51 0 通道的氧化调节 作 用 “ ， 但对原代培养细 胞上B 阮研 究较少， 因 此 本实验采用全细胞膜片钳技术， 研究氧化还原剂对 培养的大鼠 三叉神经节细胞B K 。 通道的调节作用。 ( Ch一 T ) ， 5 ， 5 一 二硫代双( 2 一 硝基) 苯甲酸( 1 ) 1 、N B ) ， 氯化四乙胺( T E A ， Cl) ， 4 一 氨基毗陡( 4 一 A P ) 和氯化铬 ( CdClz) 均为51 脚a 公司产品。二硫苏糖醇

6、( D T I 、 ) 为Fl u ka公司产品。1 M E M一 F12 干粉培养基和胎 牛血清购于Gib co公司， 其余药品均为市售分析纯。 玻璃毛坯购于南京泉水教学实验器材厂。细胞外液 成分为( rn mol 几) : N aCl l 4 o 、 K C 1 5 、 C a C I: 2 、 M g C 12 1 . 2 、 H E P E S l o 、 D 一 G l u co sel o ， p H7 . 4 。电 极内 液成 分( mmol /L) : K 一 G l u t arni n e l l o 、 K C 1 2 0 、 N 处 A l 、P3 、 E G T AO

7、 . 1 、 Mg C 1 2 3 、 H E I E S1 0 、 D-G l u cosel o ， p H 7 . 2 。 1 . 2 主要实验仪器 膜 片钳放大器( A xo n 一 Z o o B ， A x O nl n s t r u m e n t ， U SA) ， 微电极拉制仪( P P 一 8 3 ， N a r i s h i g e ， J a p a n ) ， 倒 置相差显微镜( ix70， 01卿PuS ) ， 三维显微操纵器 ( p CS 5 0 0 0 ， B u r l e i g h ， U SA ) ， 数模转换器( I T C es 1 6 ， I

8、n s t ru t e c h 6r 卯r a t io n ， U SA) ， Mac in t o s h 计算机。 1 . 3 大鼠三叉神经节细胞分离及培养 按参考文 献稍加修 改 ” 。 成年sD 大鼠( 雄性， 巧 。 一 2 5 0 9 ， 由 华中 科技大学同济医学院实验动物 中心提供) ， 迅速断头， 取双侧三叉神经节移入4 改良Han k 、 平衡盐溶液( H B SS) 中清除周围结缔组 织和血管， 用眼 科剪将组织剪碎， 然后移人含15 9 / L 胶原酶X l 一 5 型的H B SS 中37消化30 m in， 再加 1 材料与方法 1 . 1 药品与试剂 胶原酶(

9、 Xl一 5 ) ， 1 N ase l( W) ， N aZ A T p ， 氯胺T 基金项目: 国家自 然科学基金资助项目( 3 0 2 7 0 3 5 1 ) ; 回国人员 启动资金资助项目和教育部优秀青年教师资助项目。 收稿日 期: 2 0 0 5 一 0 2 一 1 7 ; 修回日期: 2 0 0 6 一 0 4 一 1 7 作者简介: 朱仲玲( 1 9 79一 ) ， 女， 硕士在读， 从事神经药理学研 究。 乙 通讯 作者， E 一 mail : 。 h enJ mails . tj m u . e du. C n 中国应用生理学杂志， 2 0 0 6 ; 2 2 ( 4) 人2

10、0陷/m1 1 N as e l 继续消化10而n ， 用含10% 热 灭活胎牛血清的D M E M一 F 12培养基终止消化， 8 00 r /1 n i n 离心s min ， 弃去上清， 用D M E M-F 12培养基 清洗 2次， 然后加入含 10%热灭活胎牛血清的 D ME M-F 12培养基悬浮细胞， 用尖端热抛光的P as - te u r 吸管缓慢柔和吹打， 种植于 35 rnm培养皿， 放 人5 % C q 的培养箱中， 取培养12一24 h 的细胞用 于实验。 1 . 4 膜片钳记录 在倒置显微镜下选择膜表面光滑， 胞浆均匀， 形 态典型的三叉神经节细胞， 除了给予药物，

11、 始终用细 胞外液灌流细胞。玻璃电极用两步法拉制， 充灌电 极内液后电阻为 2 一SMn 。调节三维显微操纵器 使玻璃电极尖端与细胞表面接触， 负压吸引形成高 阻抗封接， 再稍加吸引使电极尖端膜片破裂， 形成全 细胞膜片钳记录方式， 记录电流前进行电容补偿和 串 联电阻补偿( 至少80%) 。 用P ul se / P ul se Fi t 电 信 号处理软件( H E K A， Germa ny) 对数据进行采集和分 析。所有实验均在20一24室温下进行。 幅 值， 给药前后电流幅值分别为( 4 . 63土 1 . 61) nA 和( 5 . 2 8 士 1 . 9 6) n A ， 增加率

12、为1 5 . 3 4 %士 0 . 0 6 %( P 0 . 0 5 ， n =7 ) ， 用细胞外液冲洗和1 Tl ， ZTnmol 几 均不能逆转Ch一 T对通道的作用( 图3 ) 。 尹摹氰 呻钾钾 守马若a与V 0一一 一月 习- 30一ZD一 I D01 O2 O: 洲J月 .506 0 2 结果 2 . 1 大鼠三叉神经节细胞B 吸知 通道电生理特性 保持电位一 80 m V， 为了使其他电压依赖性钾通 道失活， 首先给予0 1l l V5、 的预刺激， 然后给予从- 40 I n V到+ 60 m V的脉冲刺激， 阶跃电压为10 n 1 V ( 图I A ) ， 引出一串幅值较大

13、， 快速激活， 几乎不失活 的外向电流( 图I B)， 其电流幅度以零电流水平至除 极化末之间的电流大小表示。图I C 显示的是BK。 通道1 一 V关系曲线， 随着测试电压由一 40 Il l V向十 60 m V变化， B KC a 电流幅值不断增大， 并表现出外向 整流的特性。给予相对选择性的B K 。 通道阻断剂 一 一 长 二 d CI : 和T E A CI， 观察它们对B K 。 通道的作 用。细胞外液中加人 TEA 一 Cl lrnmo l 几 后， + 6 0 m V 测试电压处的电流幅值由( 6 . 09士 3 . 3 9)1卫 气 减小到( 2 . 39 士1 . 1 8

14、)1 卫 气 ， 抑制率为 57. 88%士 9 . 9 8 %( P0 . 0 1 ， n =7 ， 图Z A ) 。加人 CdC 121 0 0 拌 mol 几， 同 样可 使B K 。 电流显著减小， 给药前后电 流 幅值分别为( 6 . 4 4 士 2 . 6 6 ) nA 和( 3 . 5 3 士1 . 3 6 ) nA， 抑制率为4 2 . 8 2 %士 1 1 . 5 1 %( P 0 . 0 1 ， n = 6 ， 图Z B ) 。 2 . 20 1 . T 对大鼠三叉神经细胞节B K d 通道的作用 Ch一 T是蛋氨酸特异性氧化剂。细胞外液中加 人Ch一 TI Tnmol 几

15、 可以轻微增加B K o 1通道的电流 V 。 随g e o u V ) F ig . IElec t r o p h y s io l呢1 司 p ro l erties ofB K oc l l a n n els in t l l g e n l i n alg a n g l lon neu rons A : B K Qc h ann e I c urrent s weree l ic i t edb y a dou b l e p 己 sep o t ， col . Thell l 朗1 1 rane印t e n t ialw a shel da t一 8 0Il l Vandt h

16、 en s t e p p edt o p r ec ond i t iorun g volt 眼e s s p r ePu lseo f o n 1 V， f o 1 1o w e d b y a p p l ic a t iono f d e 阳l a r iz in g t e stpotent i a l s 5 0 0 rns in+1 01 1 】 V i n c r ement s f rom一 4 01l l Vu p t o+ 6 0 m V . B : T y p ic ally ， a f 如 l y ofla r g ， re l a t iv e noi s y ，

17、ra p id l y a c t ivat i飞， a n d a b ll s t non 一 in a c t i - vat i吧 o u twa r d c u rren t s was e l i c i t e d 勿t h e p 己 s e p 双 )tl 义 。 1 . C : 1 一 V r elat ionship s ofB K oc u rr ent s weres 】1 o w n A . . 一 一一 IC ont rol _ l soonA 匕 T EA一 C l lmmo l / L I O Oms Co n t r o C d C I ， l 0() 协m

18、 o l / L soonA L 1 洲 ) m只 Fig . Z E fl ec tsol 1 、七 二 A es C I ， 明C 贬and 4 一 A I J on l “ 从 、 C u rr e nt s A : B 长 勿 w asn l a r k e d l y s u p p ress e d 勿a p p l ica t ionl mxno l /LT E A Clby5 7 . 5 5 %士 9 . 9 5 %汕ent h e m e ll l b r ane 州e n t iald e 阳 lar - i z edt o+6 0m V( n =7 ) . B : C (

19、 IC 12 1 0 0拌 m O 1 /L not i c e 日 l y de- c r e a s 义 B K . 妞 c l l 赶 1l l n e l c u rr ent b y 4 2 . 8 2 %士1 1 . 5 1 %( n= 6 ) vi a in hi b it i吧 volt 眼已 de沐nde n tc a lc ium c 11 a 11 11 e 1swhe nt h emem - b rane因t ent i a l washeld a t + 6 01l l V 3 9 2 Co n tro l( 、一 T l mm理 、 1 厂 LW台 s h C h

20、i nJAI P l l v si ol 七fl l nJ八P P l rn y 别0 1 U U O;乙 乙、 斗) 2 2 ( 4 ) 立二 夏 -_一 叠垂豪_纂墓墓一 F i g . 3 E f f ec t ofC ll es Ton B K ocurrent w h en t h e l l e ll l l ra n e 户 又 ent i a l was h el da t+6 0m Vs l i g h t l yenhan c ement of t h e c u rren t s i n d u c edb y C h 一 Tl rnmol /L was not r ev

21、e rs ed e i t h e r b y ext ens i v e p erfu s ion orb y 日 p l l i c a t i on Zrnmol /I- I r厂1 、 2 . 3 D I ，N B 及D T I ， 对大鼠三叉神经节细胞B 玫场 通 道的作用 1 ) 1 、 N B 是一种半胧氨酸特异性氧化剂。如图 4 A 所示， 细胞外液中 加人5 00拜 mol 几D ，N B 后， 从- 40m v到十 6 0 m v测试电压下， B K 。 电流明显减 小， 使B K ca 的 1 一 V曲线下移。在+ 60 1l l V刺激电压 处J 刀 ，N B 使B K

22、 。 电流幅值降低， 给药前后电流幅 值分别为( 6 . 6 7 士 1 . 4 2 ) nA 和( 4 . 2 9 士 1 . 0 9 ) nA( P 00 5 ， n =1 1 ) ， 抑制率为3 4 . 7 2 %士1 0 . 2 5 %。用细 胞外液冲洗不能逆转 1 p f N B对通道的抑制作用。 但半胧氨酸特异性还原剂1 Tl ， Z rnmol 几 能完全逆 转1 ) 1 ，N B的作用( 图4 B ) 。 - . 一CO 】 1 廿0 1 闷 卜D T N 日s n 。， mo 巩 护 全 ，汤 材 工森幸 回回回00圈翻翻 A含)lu.自。 一 叨一 ， 0 ， 臼一1 二1

23、 . Vo 加 边已 . 劲 护 tm V 户 Dl l Zn m O F L 云 赫 忐认 R g . 4 E f f e c t ofl ) 、N 1 3 on B K oc ll a l l ll e l c tirrent s A: Ave r a g e dc urrent 一 vol t 昭e r e l a t io n s h iP s fo r B K 。 气 c ll a l飞 n e l c u r - re n t s in ab se nce and p r e s ent o f l 了 】 ，N B 5 0 0 拜 m o l /-w e red i s p l

24、a y ed ( n=6 一7 ， P0 . 0 5 ， 畏 P0 . 0 1vs con t rol)B : C u rren t s wer e d e c ease db y l l 】 ，N B5 0 0户 Il x 习 /l-. P e rf u s io nw i t he x t e rn al solu t i on d idnotr e ver s et h ise ff e c t .But a P P l i c a t ion o f l T TZ r l l n 1 O I 月 c O u l da c 拓e ve t h er e v e r s e 各种氧化物敏感

25、。实验中观察到 l rnmol 几 Ch一 T 轻微上调B K 。 通道电流， 这种作用不能被D T I 、 逆 转， 说明蛋氨酸氧化参与了C h 一 T的调节过程。正 常蛋氨酸侧链很长， 有弹性并且没有极性， 当被氧化 成Met ( 0 ) 后， 侧链变硬， 极性变大 “ ， 氧化修饰参 与了整个蛋白质功能的改变。本课题组前期实验发 现， 将位于Shake r 钾通道P 段的一个蛋氨酸替换成 亮氨酸， 将大大降低了该通道对膜撕裂、 姚q 和高 氧等刺激的敏感性， 表明蛋氨酸氧化调节电压依赖 性Shak e r 钾通道的P /C型失活过程 。 】 。 实验发现半恍氨酸特异性氧化剂D ，N B降

26、低 B K ca 通道电 流， 这可能是通过氧化通道蛋白中 半肌 氨酸残基。有研究报道了在撕裂膜片上胞浆侧 1 1 ， N B 对克隆51 0 通道电流起下调作用， 而胞外侧 DTN B 则无此作用仁 7 。 然而， 也有研 究报道， 用 膜内 面向外膜片钳方法， 胞浆侧D l ，N B可增大海马神经 元B K c 石 电 流， 并可被D TT 完 全逆转叫。 这些 作用 与本次实验结果不一致， 可能是因为: ( 1)用全细胞 膜片钳方法， 氧化剂除了氧化B K 。 通道蛋白 上特异 性的氨基酸起直接调节作用外， 也可能通过氧化细 胞膜上其他的分子物质如钙通道而发挥间接作用。 与撕裂膜片相比，

27、 全细胞膜片的药物调节机制要复 杂的多， 其研究也更有意义。( 2 ) B K 。 通道俘 亚单位 有四 种， 俘 1 ， 浅 ， 伪和风 ， 对整 个B K 。 通道的 特 性和 功 能起重要的调节作用， 也使药物的调节作用更加复 杂。 本实验首次在培养的大鼠三叉神经节细胞上进 行氧化性调节的研究， 三叉神经节主要传导头、 面部 的 感觉， B K 。 的基本作用是促进细胞除极化后复 极， 因 此认为1 ) T N B 介导的B K 。 通道抑制作用会易 化三叉神经冲动的传导， 而 C h 一 T可抑制三叉神经 冲动的传导， 推测半胧氨酸还原剂或蛋氨酸氧化剂 有可能对三叉神经痛有一定的作用。

28、 4 参考文献 仁 1 3 讨论 本实验用氧化还原药物模拟体内氧化乃 王 原环 境的改变， 通过观察氧化乃 王 原药物对B 长 1 通道的 作用， 发现B K o 1通道的功能可由它们所处的氧化/ 还原环境的改变所调节。 B 长二 通道含有大量半胧氨酸和蛋氨酸残基， 对 2 仁 3 K a 哪 r 。 、 v s k i GJ ，K naus H G，L 印n a r dR J ，et a l . Hsh- c o 11 d u ct anceca lcium- acti vat edpot assl uIn c hanne ls ， s t ruct ure， p ll a ll l l a

29、 c O 10 g y ， a n d f u n c t ion J . J 召 汉 黔 “ ， 召 B lom emb r ， 1 9 9 6 ， 2 8 ( 3 ) : 2 5 5 一 2 6 7 . V e r g a r a C ， l-al O IT e R ， Ma r r ion N， eta l . 6I c i um- a c t i - va t edpot assi uln c hannels J .CurrOPin风倪 动101， 1 9 9 8 ， 8( 3 ) : 3 2 1 一 3 2 9 . L e v i t an I B Medu l a t i on o

30、f i on c h a n n el sb yp rotei 们 p ll c 巧 p h o r y lat ion and d ePll 浇 p hory la ti on J. A 二“ 尺 汉 中国应用生理学杂志， 200 6 ; 2 2 ( 4)3 9 3 4 8 5 9 6 1 0 7 外笋诚 ， 1 9 9 4 ， 5 6 : 1 9 3 一 2 1 2 山n g L ， ( 访 。 TM， H u a n g H， et以. R 司o x n x x l u la t lon ofl a r g econ c 】 u c t ancecald um 一 ac ti vat e

31、d pot 出 治 l um c ll a ll - n e ls inC A l p y r a r n l 翻 n euronsf r ol l l ad己 t ra t hi l I x 犯 a l l - p us J . 介 沁 “ rox i l 必 t t ， 2 0 0 0 ， 2 8 6 ( 3 ) : 1 9 1 一 1 9 4 . C io r ba M A，H 亡 i n em a ll l lSH，We i ssb a c hH，et a l . M浏t l 1 a t lon ofpo1 assi tnn c h a 11 11 e 1 f u I1 c t lon

32、 b y m et h loni ne oxida t iona n d 间u c t ion J . 尸 八 兀 Nat l A ca d反i L 巧 冰， 1 9 9 7 ， 9 4( 1 8 ) : 9 9 3 2 一 9 9 3 7 H o s h i T ， Hei n ema n nS ， R e g u l a t i on ofc el l l u n c t lon b y m et h ionine ox i d a t ion a ll dr 司 u c t ion J .J月 lys诚， 2 0 0 1 ， 5 3 1 ( P t l ) : 1 一 1 1 . Tan

33、 gXD， 】 1 谓 罗 t t H， H洲l erM， 以以. 茄山t lver 雌 拟 - l a t lonoflar 罗门l d 优 t 田 I ce司石 tn l 卜 ativat 司印t aSSl urn c 坛 m - nel J . J 浴 之 月 之笋 动 乙 ， 2 叨1 ， 1 1 7 ( 3 ) : 2 5 3 一 2 7 4 . 曳n tarel l i LC ， C h e n J ， Hei n ema nnS H， eta l . The p l s u l u n itenh a l l c es 二 dsti ve r e g t ll a t lon o

34、f l ar g 已 c o ll d u c - t ance cal c i um- a c t iva t 司K + C ll 出 1 ll e ls J . J 以 沉 月 及笋 议， 2 0 0 4 ， 1 2 4( 4 ) : 3 5 7 一 3 7 0 . LiuL ， Si monSA . 食p sa l c i ni n h i b i tsac t i vat i on ofvolt - a g 已 罗t 记 3 x l i um c urrentsi nca l Sa i c i n- sensl t i v e neurons J . J 介 几 u roJ 洲 砚笋

35、101， 1 9 9 6 ， 7 5 ( 4 ) : 1 5 0 3 一 1 5 1 4 C h en J ， A v d o l飞 i nV， C io r b aM A，etal.A c c el e r a t i on ofP /( ) t 即e inac t i v a t ion involtag仓 邵 t 司 K +c ll a ll ll els b y m e t hi onineoxidst ion J . B i O P 诬笋J ， 2 0 0 0 ， 7 8 ( 1 ) : 1 7 4 一 1 8 7 . RED0X MODULAT I 0N OF LARGE COND

36、UCTANCE CALCI UM 。 ACTI VATED P OTAS S I U入 4CHANNELSI N RAT CULTURED T RI GEM I NAL GANGLI ON NEURONS Z H UZ ho吧一 1 1 吧， WA N GFa眼， WUZ h o u 一 h u an， 以 N GL i 一 ho飞， J I NYOu ， C H E NJ i a n 一 g uo ( Del a r t ll l ent o f P l l a n l l a c o lo g y ， T o l匆i M e l iea l 肠11 馆 e ， H L I乏 12 】1 1

37、 n g U n iv e r s i t y o f sci enc e and 飞 ，eC l l ll O 1馆y ， Wu h an4 3 0 0 3 0 ， C hi n a ) Alm: TO o b s e rv e r 司o x l l l 司ul a t lon Ofion c h a l1 n e l i n t ri g emi nal g a 1 1 g 1 i onn e uronsb y oxi d ant s and r edu c i n g 眼e n t s . Me t h . 如: T 】l e e f feCt s o f o x i d ant s a

38、 n d r edu c i 雌 眼ent s on 一 con d u c t a ll c e calc i urn- ac t i vat 记 卯t assl urn c h a n n e l i nc u l t u r e d ra t t ri g e 11 1 l n alg a I1 g 1 ion n e uro nsb y us i n g w l l o l e- c e l l 砂t c h 一 c l a r l l l t ec ll ll i q u e . R es u l ts : Me t hi onln o s p e c l fi c oxl d a

39、n t c ll l o r a l l l i ne-T( C I 卜 T ) I n l l l l o l /L S l i g h t l y i n - c r ea s edt hec urrent a n l l 1i t u d e and t hi s en 11 a l1 c ement d id not ant a gc ” 1 12 氏 l b y D T 飞 ， . I n con t rast ， c 邓 t e in e 一 印 ec if ic r ea g e ll t s ， 5 一 d i t h io- b is ( 2 一 n i t ro be l峨

40、 元 C a c id ) ( D l ，N B ) 5 0 0 尸 m o 1/L51 ，if i cant l y d ec r eas司c urrent 出 1 1 1 l i t u deofB K o 注 c ll a ll ll e lsThe effec t was reve r s 翻b y t h e r 伐 lu c i 眼昭en t Z n l n l o 1 /L 1 ， 4 一 di t h io- 1 L es t hr e itol ( 1 ) Tl ， ) . o j n c l us ion : R eact iveox龙ens pec iesw ere d

41、efin it e ly in vo 1v e d in r 娜 酥 1- la t i on ofnat i v e n e u r o 11 a l f u n c t i onv i a r e d o x n l咤妇 u l a t i onofB K I、 c l l a ll ll e ls ， whi c h are S L lg g es t 司top l a y c O n l l ensa t or y ro l esu n d e r o x i da- t i v es t r e 弼 es r el a t 司 c o l l d i t i O 1 1 5 . K

42、E YW( ) R I 6 : cal c i um- a c t i vat ed p t assi tim c 】l a n ll el ; t ri g 。 朋l g a l l gl i on n euron ; r 仪 Ic )xl l l x l u l at i o n ; met h i oni n e ; c y s t ei ne 模拟高原低氧对大鼠脑内神经胶质细胞的影响 杨忠 ， 张金海 ， 黄庆愿“ ， 吴喜贵 ， 蔡文琴1 ( 1 . 第三军医大学基础部神经生物学教研室， 2 . 第三军医大学高原系病理生理教研室， 重庆4 0 0 0 3 8) 摘要目的: 观察模拟高

43、原低氧对成年大鼠脑内 胶质细胞的影响。方法: 大鼠在模拟海拔4 0 00m高原低压舱内 连续暴雾1 、 3 、 7 d ， 胶质原纤维酸性蛋白( G F AI ) 与Gril 五 n i a s ll l l p l ici folia同功凝集素( G S A 一 1 氏) 组织细胞化学分别显示星形胶质细胞与小胶质细 胞。 结果: G F A P 与G S A 1 民阳性细胞在低氧后3 ， 7 d 两个时相显著增多， 主要分布于新皮层、 海马、 纹状体及室管膜下层等区域。 结论: 模拟高原低氧能引起大鼠脑内星形胶质细胞与小胶质细胞的显著活化。 关键词: 高原低氧; 星形胶质细胞; 小胶质细胞;

44、 组织细胞化学 K E YW R 工 心 : fu g h al t i t ude h y l 刀 x la ; as t rocyt e ; 而c r l g l ia ; h i s t och emi s t 即 中图分类号: R 3 3 2 : R 3 3 8 ; R 3 3 9 . 5 4文献标识码: A文章编号: 1 0 0 0 一 6 8 3 4 ( 2 0 0 6 】 0 4 一 0 3 9 3 一 0 3 大脑是对低氧非常敏感的器官， 急性高原低氧可引起 中枢神经系统( C N S)的功能紊乱， 导致高原反应甚至发生昏 迷( 高原脑水肿) ; 既往很多研究关注于神经元结构与功能的 变化， 从细胞能量代谢、 离子通道等探讨低氧所致 C N S 损害 及其发生机制。胶质细胞作为 C N S内数量最多的细胞群 体， 近十余年的研究显示它们通过调控神经元微环境、 甚至 直接与神经元相互作用等方式， 主动影响神经系统功能活 动。 星形胶质细胞与小胶质细胞的反应性活化是 C NS 损 伤、 缺血低氧等多种病理过程的重要环节， 但有关它们在高 原低氧条件下的改变还少见报道 ，“ 。 本实验应用组织细胞