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1、DNADNA克隆片段的产生和分离克隆片段的产生和分离 重组体重组体DNADNA分子的构建及导入受分子的构建及导入受 体细胞体细胞 基因克隆的实验方案基因克隆的实验方案 克隆基因的分离克隆基因的分离 重组子的选择与鉴定重组子的选择与鉴定 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 DNADNA克隆片段的产生和分离克隆片段的产生和分离 1. 1. 利用限制性内切酶片段化基因组利用限制性内切酶片段化基因组DNADNA 鸟枪法（鸟枪法（shotgun shotgun approchapproch）：）：用限用限 制性内切酶消化给体基因组制性内切酶消化给体基因组DNADN
2、A，这种这种 消化产物，不经过凝胶电泳分部分离，消化产物，不经过凝胶电泳分部分离， 就直接用来同载体分子作连接反应的克就直接用来同载体分子作连接反应的克 隆方法。隆方法。 2. 2. 凝胶电泳法和蔗糖梯度离心法分离凝胶电泳法和蔗糖梯度离心法分离 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 构构 建建 重重 组组 DNADNA 分分 子子 的的 途途 径径 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 重组子分子导入受体细胞的途径重组子分子导入受体细胞的途径 原核生物的转化与转染 真核生物的转染 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物
3、秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 原核生物的转化与转染 1.E.coli的钙转化 2. E.coli的电穿孔转化 3. 转染 4. 转导 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 E.coli的钙转化 细菌细胞在一定的生理状态（感受 态），或经CaCl2处理，或制备成原生质体 的情况下，都可吸收外源，利用这一 特性可将重组导入受体细胞中，用质 粒作载体的遗传工程一般使用这种方法。 由于E.coli不会自发地产生感受态，因此 E.coli的转化一般采用钙转化法。该方法是 将E.coli用冷CaCl2(0) 致敏，而后在高温 （42 ）下热休克，这样可使外原D
4、NA进 入受体细胞。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 E.coli的电穿孔转化 在高压电场下使细胞产生瞬间的 穿孔，这个穿孔足够大并可维持足够 的时间，使外原DNA进入受体细胞。 电穿孔法的转化效率比钙转化法高 23个数量级。这种方法也可用于真 核生物的转染。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 转染是指转化感染（Transfection来自 于transfomation与infection） 凡是以噬菌体（如M13）或病毒为 载体，以转化的方法将DNA导入细胞 的方法均称为转染。因此转染就方法 来说与转化是一
5、样的。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 体外包装颗粒的转导体外包装颗粒的转导 将重组的将重组的 噬菌体噬菌体DNADNA或或重组的重组的 柯斯载体柯斯载体DNADNA经体外包装成具有感染经体外包装成具有感染 能体力的能体力的噬菌体颗粒，然后经由在噬菌体颗粒，然后经由在 受体细胞表面上的受体细胞表面上的DNADNA接受位点，接受位点， 使这些带有目的基因序列的重组体使这些带有目的基因序列的重组体 DNADNA注入大肠杆菌。注入大肠杆菌。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 真核生物的转染 1. 磷酸钙转染技术 2
6、.电穿孔法 3.基因抢转染法 4.激光微束穿孔法 5.显微注射法 6.脂质体介导法 7.多聚物介导法 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 磷酸钙转染技术 主要用于动物细胞的转染。将DNA 溶液加入到CaCl2中，然后在强烈震荡 下加入由Na2HPO4和NaH2PO4组成的 磷酸缓冲液，使溶液产生磷酸钙沉淀并 将DNA包裹在沉淀中。将这些沉淀加入 到细胞中，利用细胞的胞饮作用将DNA 导入到细胞中。磷酸钙一方面可以增加 细胞的通透性，一方面可以避免DNA被 细胞内的核酸酶水解。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 电
7、穿孔法：原理与原核生物的电穿孔 法一样，主要用于植物细胞的转染。 基因抢转染法：主要用于植物细胞的 转染。利用被电场或机械加速的金属 微粒能够进入细胞内的基本原理，先 将DNA溶液与钨、金等金属微粒一起 保温，使DNA吸附在金属微粒表面， 随高速的金属微粒直接进入细胞内。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 激光微束穿孔法：主要用于叶绿体或线 粒体的基因工程操作。利用直径很小、 能量很高的激光束在细胞表面引起可逆 性的穿孔，使DNA进入细胞。 显微注射法：主要用于动物细胞或植物 的原生质体，利用毛细管直接将DNA 注入细胞内。 生物秀实验频道生命科学实验
8、中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 脂质体（liposome）介导法：主要用于 动物细胞或植物的原生质体。将DNA包 裹在人工制备的磷脂双分子层的膜状结 构内，通过脂质体与细胞膜的融合而将 DNA导入细胞内。 多聚物介导法：用于动物细胞或植物的 原生质体。利用多聚物如PEG、二乙胺 乙基葡聚糖（DEAE葡聚糖）、多聚赖 氨酸、多聚鸟氨酸等与二价阳离子、 DNA混合形成沉淀颗粒，通过细胞的胞 饮作用而进入细胞内。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 基因克隆的实验方案基因克隆的实验方案 1. 1. cDNAcDNA基因克隆基因克隆 2. 2.
9、 基因组基因组DNADNA克隆克隆 3. 3. 基因定位克隆基因定位克隆 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 cDNAcDNAcDNAcDNA基因克隆基因克隆基因克隆基因克隆 cDNAcDNA librarieslibraries 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 cDNAcDNA基因克隆基因克隆 cDNA文库是指得到足够多的分别 克隆的cDNA片段，汇集这些克隆应包 含某种细胞中各种mRNA的相应顺 序，每种顺序至少有一份拷贝，这种 克隆片段的汇集体称为某种细胞的 cDNA文库。 生物秀实验频道生命科学实验中心
10、 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 cDNA libraries mRNA isolation, purification Check theRNA integrity Fractionate and enrich mRNA Synthesis of cDNA Treatment of cDNA ends Ligation to vector 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 cDNA文库文库 1. 1. 没有原核生物的没有原核生物的cDNAcDNA 文库文库 原核生物的原核生物的 mRNA mRNA 非常不稳非常不稳 定；定； 原核生物的基
11、因组文库比较容易原核生物的基因组文库比较容易 构建，能包含所有基因的序列。构建，能包含所有基因的序列。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 2.cDNA2.cDNA 文库对于真核生物的基因分析文库对于真核生物的基因分析 cDNAcDNA文库是只含有编码蛋白的基因文库是只含有编码蛋白的基因 文库文库 cDNAscDNAs 没有内含子没有内含子 基因可以在基因可以在E. E. colicoli中直接表达中直接表达 用于新基因的鉴别用于新基因的鉴别 组织或特殊类型细胞（基因的特异组织或特殊类型细胞（基因的特异 表达）表达） cDNA 文库文库 生物秀实验频道生
12、命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 cDNAcDNA 文库文库-mRNA -mRNA 分离分离 大部分真核生物的 mRNAs 有 3 poly （ A ）尾巴 oligo (dT) 能与poly(A) 尾巴互补，由此 来获得mRNA. AAAAAAAAAAn 5 5 capcap 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 1. 1. 传统的分离方法是用oligo (dT)-纤维素柱 分离总RNA 2.2.把oligo(dT) -磁珠同总RNA混合，在强磁 场下分
13、离mRNA 3.3.用蔗糖梯度离心mRNA核糖体复合体（溶解细 胞）来分离mRNA 三种三种分离mRNA的方法 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 用纤维素纯化 poly(A)mRNA的流程图 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 确定确定 mRNA mRNA 没被降解没被降解 方法: mRNAmRNA的翻译的翻译 : 用体外蛋白质合成检测 mRNAs 。（麦胚无细胞转译体系或兔网 织细胞裂解物转译体系） 通过凝胶电泳分析通过凝胶电泳分析mRNAs mRNAs : 用琼脂糖或 聚丙烯酰胺凝胶电泳 cDNAcDNA 文
14、库文库- - 检测检测mRNAmRNA的完整性的完整性 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 克隆特殊的克隆特殊的 mRNAsmRNAs 克隆一个特殊的基因比建立完整的cDNA文库更有用 凝胶分离凝胶分离: :通过琼脂糖凝胶电泳回收 mRNAsmRNAs（根据（根据mRNAmRNA的的大小大小） 富集富集: : 通过杂交来实现 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 cDNAcDNA的的合成合成: : 第一链第一链 的的合成合成: :mRNA, mRNA, 反转录酶反转录酶，oligo(dT) oligo(dT) ， 核
15、核酸末端转移酶酸末端转移酶，dNTPsdNTPs 1. oligo(dT) 1. oligo(dT) 引导引导的的cDNAcDNA合成法合成法 2. 2. 随机引随机引物物引导引导的的cDNAcDNA合成法合成法 第二链第二链的的合成合成: :根据在第一链3 3- -末端加尾末端加尾 （C C），用），用补充引补充引物物合成第二链合成第二链 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 5 mRNA AAAAA- 3 HO- TTTTTP- 5 5 Reverse transcriptase Four dNTPs AAAAA- 3 TTTTTP- 5 mRNA m
16、RNA cDNA cDNA cDNA Duplex cDNA AAAAACCC- 3 TTTTTP- 5 TTTTTP- 5 3 3- CCCCCCC Terminal transferase dCTP Alkali (hydrolyaes RNA) Purify DNA oligo(dG) Klenow polymerase or reverse Transcriotase Four dNTPs 5- pGGGG- OH 5 3- CCCCCCC 5- pGGGG 3- CCCCCCCTTTTTP- 5 - 3 The first strand synthesis 生物秀实验频道生命科学实验
17、中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 5- pGGGG 3- CCCCCCC HO- CCGAATTCGGGGGG 3- GGCTTAAGCCCCCC 5- pAATTCGGGGGG TTTTTGGCTTAAGCC- OH CCGAATTCGG- 3 3- CCCC 3- CCCCCCC 3- CCCC 5- pGGGG 5- pGGGG TTTTTp- 5 - 3 TTTTTp- 5 TTTTTp- 5 - 3 - 3 TTTTTGGCTTAAp- 5 HO- CCG/AATTCGG- 3 3- GGCTTAA/GCC- OH CCG- 3 Duplex cDNA Single
18、strand- specific nuclease Klenow polymerase treat with E.coRI methylase Add E.colRI linkers using T4 DNA ligase E.colRI digestion Ligate to vector and transfom Second strand synthesis 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 对对cDNAcDNA 末端末端的的处理处理 平末端平末端的的片断需要加入片断需要加入特殊的核特殊的核苷酸苷酸序列序列 形成粘形成粘性性末端末端，才才能能进行
19、进行克隆克隆 步骤步骤: 移去突出的移去突出的 3- ends(strand- special nuclease) 填充缺失填充缺失 3 核苷酸核苷酸 (klenow fragment of DNA polyI and 4 dNTPs) 衔接物和平末端的连接衔接物和平末端的连接(T4 DNA ligase) 限制性内切酶的消化限制性内切酶的消化 (E.coRI ) 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 与与载体载体的的连连接接 任何一个任何一个含有含有E.coRIE.coRI 酶切位点酶切位点的的载体都载体都可以用可以用来来克隆克隆 cDNA.cDNA.
20、步骤步骤: 载体末端脱磷酸载体末端脱磷酸（碱碱性性磷酸酶磷酸酶） 用用T4 DNA T4 DNA 连连接接酶连酶连接接 载体载体 和和 cDNAcDNA (plasmid or phage vector) 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 cDNAcDNA克隆的优越性克隆的优越性 1. 1. 以以mRNAmRNA为材料；为材料； （一些（一些RNARNA病毒，不经过病毒，不经过DNADNA中间体，对其研中间体，对其研 究，究，cDNAcDNA是唯一可行的方法）是唯一可行的方法） 2. 2. 基因文库的筛选比较简单易行；基因文库的筛选比较简单易行； 3.
21、 3. 由于每一个由于每一个cDNAcDNA克隆都含有一种克隆都含有一种mRNAmRNA序列，序列， 在选择中出现假阳性的几率比较低；在选择中出现假阳性的几率比较低； 4. 4. 克隆在细菌中表达的基因，用作基因序列的测克隆在细菌中表达的基因，用作基因序列的测 定，定， 和发育过程中或组织中基因特异表达和发育过程中或组织中基因特异表达 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 基因组基因组DNADNA克隆克隆 Genomic librariesGenomic libraries 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 基因组
22、文库的构建 基因文库（gene library）：用重组DNA技 术将某种生物细胞的总DNA或染色体DNA的 所有片段随机地连接在载体上，然后转移到适 当的宿主细胞中通过细胞增殖而构成各个片段 的克隆。当制备的克隆数目多到可以把某种生 物的全部基因都包含在内的情况下，这一组克 隆的总体就称为某种生物的基因文库。同一定 义也适用于线粒体或叶绿体的基因文 库。由于制备片段的切点是随机的，所 以每一克隆内所含的片段即可能是一个 或几个基因，也可能是一个基因的一部分或除 完整基因外还包含着两侧的邻近顺序。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 基因文库的构建就是利
23、用所谓的“鸟 抢法”，使基因组的DNA片段随机地插 入适当的载体中，引入细胞进行大量 繁殖而构建的。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 基因组基因组基因组基因组 DNA DNA DNA DNA 文库文库文库文库 纯化基因组纯化基因组DNADNA 基因组基因组DNADNA的的片断化片断化 物理切割和限制性内切酶物理切割和限制性内切酶 eukaryotes prokaryotes 与载体连接 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 构建基因文库的基因组构建基因文库的基因组DNADNA必须进行纯必须进行纯 化后化后，才才能
24、用能用来制备适来制备适用于用于载体插入片断大载体插入片断大 小小的的随机片断随机片断 基因组基因组 DNADNA的的纯化纯化: 原核生物:直接从细胞中体取基因组DNA 去除去除蛋白（蛋白蛋白（蛋白酶消化酶消化）, , 脂脂类类和其它和其它“杂质杂质”。 真核生物真核生物: :从从细胞核中细胞核中 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 Hae ：5-GG /CC 3, Sau3A: 5- /GATC- 3, Alu : 5-AG/CT 3, BamH1: 5- G/GATCC 限制限制性内性内切酶消化切酶消化 1. 将片断的末端 (粘性或平头) 和酶消化的
25、载体连接 2.酶切位点是否被修饰（ 在哺乳动物种CpG 甲基化） 3.内切酶消化的时间和用量取决于要插入片 断的大小范围。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 用于构建基因文库片段的产生大致有两种方法： 一是用限制性内切酶完全消化基因组DNA，这个方 法有两个特点。第一是假如所需的基因含有所用限制 酶的识别位点，那么这一基因将被克隆在两个或数个 片段中，给研究带来一定的困难。第二，一般常用的 限制酶大多识别六个bp序列，切割DNA所产生的片段 的平均大小相对比较小（约4kb即464096bp），因 此整个基因文库要含有非常大量的重组体，这样应用 分子杂交
26、法进行筛选就十分费事费时。虽然可以用限 制酶进行部分消化，产生约20kb的片段，但这种方法 必须掌握好酶解的条件。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 用于制备基因文库的随机片段的另一种方法是 采用机械随机切割。这种方法可以制备大片段的 DNA（用噬菌体作载体约20kb，以cosmid作 载体约45kb ），从而克服上述的两处缺点。但 是这种方法的不是之处是：所制备的片段的末端 顺序是随机的，还必须经过末端修复，人工制造 接头等手续才能与载体进行连接。 用于基因文库构建的载体常用噬菌体或 cosmid载体，因为它们的容量比较大，可克隆大 片段的DNA。虽
27、然cosmid载体比载体的容量 大，但由于文库的保存（cosmid载体在E.coli 中， 载体在噬菌体中） 比cosmid容易，因 此载体用的更多些。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 Hae 、 Alu 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 文库的文库的大小大小( (确定有确定有足够足够的克隆的克隆数数) ) 必须必须包包括一括一定定数量数量的重组子的重组子才才可能克隆基因组可能克隆基因组 中的中的任何碱任何碱基序列。基序列。 计算计算
28、重组子重组子数量数量的的公式：公式： N = ln (1- P) ln (1- f) P: P: 重组重组体群体体群体中中出现目出现目的基因的序列的的基因的序列的几率几率（一般期望一般期望99% 99% ） f : f : 限制片断限制片断的的平均大小平均大小与基因组与基因组DNADNA总量总量之之比比 NN：一个：一个完整基因文库所完整基因文库所应应包含的重组包含的重组DNADNA的的转化转化子的克隆子的克隆数数 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 For example: 期望值为0.99，插入片断为20kb20kb的的E.coli(4.6106bp
29、) 和 human (3109bp) 基因组的克隆数的计算 N E.coli= =1.1 103 ln( 1- 0.99) ln1- (2104/4.6106) Nhuman= = 6.9 105 ln(1- 0.99) ln1- (2 104/3 109) 这个例子说明用质粒载体（插入片断5-10kb ） 就可以建立很好的原核生物基因文库，只需要几 千个克隆；而真核生物则需要更大承载能力的载 体。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 有一些序列不能被克隆 Example: 1. 序列缺乏酶切位点; 2.目的基因包容在一个其大小范围超出载 体承载能力的D
30、NA片断上 Too long for the vector used 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 载体 根据基因组的大小选择合适的载体 构建DNA文库。 载体载体Plasmid phage cosmid BAC YAC 插入片断插入片断 (kb) 5 23 45 350 1000 最常用的载体是phage 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 基因定位克隆基因定位克隆 Map- baseed cloning 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 主要内容：主要内容： 1.
31、 1. 拟南芥简介拟南芥简介 2. RFLP2. RFLP分子标记分子标记 3. RFLP3. RFLP作图的原理与步骤作图的原理与步骤 4. 4. 染色体步移染色体步移 5. 5. 大尺度基因组物理图谱的构建大尺度基因组物理图谱的构建 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 基因定位克隆基因定位克隆 是用于分离其编码产物上不知道是用于分离其编码产物上不知道 的目的基因的一种有效的方法。从的目的基因的一种有效的方法。从 理论上讲，任何一种可鉴定出有一理论上讲，任何一种可鉴定出有一 个突变的基因，都可以通过基因定个突变的基因，都可以通过基因定 位克隆技术予以分
32、离。位克隆技术予以分离。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 步骤：步骤： 1.1.先将目的基因定位到染色体上，并在目先将目的基因定位到染色体上，并在目 的基因的两侧确定一对紧密连接的的基因的两侧确定一对紧密连接的RFLPRFLP或或 RAPDRAPD分子标记；分子标记； 2. 2. 利用最紧密连锁的一对两侧分子标记作探利用最紧密连锁的一对两侧分子标记作探 针，通过染色体步移技术将位于这两个分针，通过染色体步移技术将位于这两个分 子标记之间的含目的基因组片断克隆并分子标记之间的含目的基因组片断克隆并分 离出来；离出来； 3. 3. 最后根据其同突变体发生
33、遗传互补的能最后根据其同突变体发生遗传互补的能 力从此克隆重鉴定出目的基因。力从此克隆重鉴定出目的基因。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 应用基因定位克隆技术应用基因定位克隆技术 分离目的基因的必要条件：分离目的基因的必要条件： 1. 1. 以酵母人工染色体为载体构建含以酵母人工染色体为载体构建含 有大片断有大片断DNADNA的的YACYAC文库。文库。 2.2.有可用的同目的基因紧密连锁的有可用的同目的基因紧密连锁的 DNADNA探针，（距离几百探针，（距离几百bpbp ） 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区
34、 拟南芥简介拟南芥简介： 1. 1. 植株小，便于筛选突变体；植株小，便于筛选突变体； 2. 2. 时代时间短（时代时间短（5 5个星期左右），可以积累个星期左右），可以积累 大量遗传数据）；大量遗传数据）； 3. 3. 种子产率高，每株可产生种子产率高，每株可产生4 4 1010 4 4 粒以上的粒以上的 种子；种子； 4. 4. 基因组小，结构简单，总长度基因组小，结构简单，总长度7 7 1010 7 7 bpbp适适 合于用染色体步移技术克隆目的基因；合于用染色体步移技术克隆目的基因； 5. 5. 天然自花授粉，可得到突变基因的纯合天然自花授粉，可得到突变基因的纯合 子，同时也可通过人工
35、杂交授粉，以便给子，同时也可通过人工杂交授粉，以便给 基因定位。基因定位。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 RFLP RFLP 分子标记分子标记 DNADNA限制片断长度多态性，它是指限制片断长度多态性，它是指 应用特定的核酸内切酶切割有关的应用特定的核酸内切酶切割有关的 DNADNA分子，所产生的分子，所产生的DNADNA片断在长度片断在长度 上的简单变化。上的简单变化。 由于核酸内切酶是以一种序列特异由于核酸内切酶是以一种序列特异 的方式切割的方式切割DNADNA分子，来自一个完整分子，来自一个完整 的的纯合子纯合子个体（所有的基因及个体（所有的
36、基因及DNADNA序序 列）的每一种同源列）的每一种同源DNADNA分子，都会在分子，都会在 同样的位点被准确地切割。同样的位点被准确地切割。 生物秀实验频道生命科学实验中心 生物秀论坛学术交流、资源共享、互助社区 它所代表的是基因组它所代表的是基因组DNADNA在限制在限制 性内切酶消化后产生片段在长度上差性内切酶消化后产生片段在长度上差 异，由于不同个体等位基因之间碱基异，由于不同个体等位基因之间碱基 的互换、重排、缺失等变化导致限制的互换、重排、缺失等变化导致限制 内切酶识别位点发生改变，从而造成内切酶识别位点发生改变，从而造成 基因型间限制性片段长度的差异。基因型间限制性片段长度的差异。 生物秀实验频道生命科学实验中心