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1、 5 3 5 复方刺五加注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 赵星宇 ，李 洋 于小 风 曲绍 春 徐华丽 推大员 ( 吉 林大学药学院药 理学 教研室， 吉 林 长春 13 002 1) 摘 要) 目 的 观察复方刺五加注射液( C A S I) 对大鼠 心肌缺血再灌注( F R)损伤的保护作用及其机制。 方法 通过结扎大鼠 冠状动脉左前 降支30m i n ， 再灌注1 20面n ， 建立心肌F R 损伤模型， 计算心肌梗死范围( Mls)， 测定血清天门冬氨酸氨基转换酶( A sT) 、 磷酸肌酸激酶( c K)、 乳酸 脱氢酶( 切H) 、 超氧化物歧化酶( soD)、 谷胧甘肤过
2、氧化物酶( G S H 一 Px) 活性及丙二醛( M D A)含量， 血浆前列环素( P G 1 2 ) 及血栓素A Z ( ” 认2 ) 水平。 结 果 C A sI40、 som 酬 吨对 心 肌F R 损伤 大鼠， 可 明 显 缩 小MIS ， 降 低 血 清A S T 、 C K 、 LDH 活 性 及M D A 含 量， 提 高soD 及G S H 一 Px活 性， 使 血 浆以A Z 水平明显 下降， PGI : 水平及PG几 / T x A : 比 值明显 增高。 结论 C A sl对大鼠 心肌F R 损伤具有明 显保护作用， 可能与其减少自由 基对心肌的 氧化损 伤， 增强抗
3、氧化酶活性， 纠正P G 1 2 / T x A : 失衡等机制有关。 关键词 刺五加; 心肌缺血再灌注损伤; 心肌梗死面积; 心肌酶学; 自由 基 中图 分类号) R 一2( 文献标识码) A( 文章编号 1 005 刁 2 0 2 2 008 】 肠刁 5 3 5 仍 乃 m 吸 伙 吐 vee 价戏ofc o 幻 “ 卯皿daca n t b o P a n a x se ntic o ” i tsm沙卜 ， n 娜 ecti on on nl y oca r d i al七 屺 b e n 成 a . re ped 沁 s i on in r a 妇 a n d Z H A OX in
4、 g . Y u ， U Y a n g ， Y U儿ao. F e n g ， etaL D e P a rt m e ntofP b a 们 田 旧 c 0 l o gy， sc饭 沁 l ofP b a rl . a 仔， 润inU ai vers i ty， C h ang chu n1 3 002 1 ， J 臼 in， C h i na I A 加 t r a c t 】 0 讨 伙 t i ve 肠i n v e s 石 g a 沈p ro t ec 石 v e e 任 吮 t 。 om即 u n d 朗 a n t h o p a n axs e ntico s u 。 i n
5、j ec ti on( c A s l ) 。 n 刃 口l a一 r e伴而s i o n ( F R ) i nj 呵 i n rats a n d itsmec h 耐5 二MethodsThe 哪oc ardi alF am odelwas i n d u c ed场l eftante d or n 呵 oc c ul u s i oni n 3 0 面n an d 比 pe 而s i o n 运1 20 而n i n fe rase( A S T ) ， c 比 at lne户。 s p h o k i nase ( C K ) 朋 d 玩tate rate . T h e c h
6、anges ofmyoc axdial i nj ra 印 t 。 i ze( M IS) ， 功 y OCar d i di s c h e - desc e n d i ngc 咔 u 比 a t ea ml n o l r 压 n s - s e r u m asp a rt a t e d e h y d 门 g e nas e ( LDH ) ac tivity， m a l o n d i al dsh y d e ( M D A ) co nteni， 阴 哪m 刀 dedi s - m u 枉 比 e( S O D ) a n d ten l l i n e 庄 . Resul
7、ts 妙 u ta t h ione pero x l d as e ( GSH 一 Px) ac ti vi ty ， a n d 讨 as lua p r 璐 tacyc line ( P GI: ) ， th ro n 止 旧 x a n e 4()， 8 0m 吨 C A S I s i ，i fi c a n t l y reduced M I S ， 比 d u c ed s e rum A S T ， C K ， L D H ti vi ty A Z ( 饮A Z ) levels wereds- a n dM D Ac o n t e nt， andin - c rea 习 e
8、 ds ) D tec ti v ee ffe c l m y OCa rd ial FRinjl lZy 朋dG S H 一 入 丝 。 t i v i ty dsclined 禅 as lna TXA Zle ve l ， e nhance d 扭 as ma p G I : le v elan d P 队/ 饮A Z . C o n c l us i o nS C A slhas p 八 卜 inrats 场二 duci ng丽d atived a m a 邵offree radic 山 onm y 佣 ardi um ， e nhan ci ngac tivityofa ll t i
9、俪d ase 即d cometi ngdi s e q u i libri uln ofp G 1 2 / T X A : etc， 【 K e y ， o r ds】C om脚 u n d ac an t h 叩 anax 。 enticosus inj ec ti on; M y oc azdi 公ische 而 a 一 二 pe rfusi onI n jll 钾; M y OCar d l ali 刘 ra r c t s 返 e( M I S ) ; M y OCar d i ale nZy m o l o gy; F ree r a d i c 幽; M y oca r d i 沮
10、Ine倒 bO l i s m; V as oac ti vefact 帅 我们前期研究发现复方刺五加注射液( C A sl) 能明显增加 小鼠 心 肌营 养 性血流 量川， 使培 养的 大鼠 乳鼠 心室肌细 胞动 作 电位的波幅、 波宽、 闭电位、 最大舒张电位、 最大除极速度及复 极水平的动作电位波宽减小， 作用与钙通道阻滞剂尼莫地平相 似 2 。 此 外， c A sl对 多 种 药物 诱发的 实 验 性心律 失常 均有明 显保护 作用， 尤其抗c 扩 性心律失常的 作用明 显 优于N a 干 性心 律 失常， 提 示 其 可 能 为 钙 通 道阻 滞 剂 川。 本 文 通过大鼠 心 肌
11、 缺 血再灌注( F R ) 损伤模型， 进一步观察C A SI对F R 心肌的保护 作用。 1 材料与方法 1 . 1 动物 w i star 大鼠， 雌雄各半， 体重2 20一 250 9 ， 合格证 号: SCX K 一 ( 吉) 2 (X)3 洲x j l ， 由 吉林大学实验动物中 心提供。 1 。 2 药品 及试剂C A SI ( Z n ll/ 支， 含西洋参叶二醇皂昔50 mg 基金项目: 吉林省科技厅基金项目 ( 吉科合字第1 9 望 沁 31 0 刁 1 号) 1 吉林大学白 求恩医 学院2 以 抖级临床医 学一系 通讯作者: 唯大员( 1 9 5 7 一 ) ， 男， 教
12、授， 博士生导师， 主要从事心血管药理 学研究。 作者简介: 赵星宇( 1 9 8 5 一 ) ， 男， 主要从事临床医 学与基础医学研究。 和刺五加叶皂昔50 mg) 由吉林大学化学学院天然药物化学研 究室提供， 批号2 自 叉 刃 8 巧， 实验时以生理盐水配制成所需浓度 使用; 氯化硝基四 氮哇蓝( N BT) 由上海前进试剂厂生产; 丙二 醛( M D A ) 、 超氧化物歧化酶( S O D ) 及谷胧甘肤过氧化物酶 ( G S H 一 Px) 测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供;6 一 酮- 前列腺素F l 。 ( 6 一 K 一 PGF I 。 ) 放免药盒及血栓素B Z (
13、 TXB Z ) 放免药 盒由 解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。 1 . 3 实验分组将W is tar 大鼠50 只随机分为5 组， 每组 10 只。 假手术组: 舌下静脉 注射生理盐水2 11 】F 吨; 再灌注模 型组: 舌下静脉注射生理盐水2 Il lF 掩; C ASI 小剂量组: 舌下 静脉注射C A SI20m 岁 掩; C ASI 中 剂量组: 舌下静脉 注射C A - sI40m 岁 掩; C A sl大 剂量 组: 舌下 静脉 注射C A sI80m 岁 k go 1 . 4 模型制备 大鼠冠脉结扎按文献【 4 方法稍加改进， 在 乙醚麻醉下仰位固定于手术台， 自 左侧
14、3 一 4 肋间开胸， 暴露心 脏， 于肺动脉圆锥及左心房间找出冠脉左前降支， 除假手术组 仅穿线不结扎外， 其余各组均以0 号线立即结扎冠脉， 结扎时 用一细小乳胶管垫于血管与结扎线之间， 将心脏送回胸腔， 并 挤出 胸腔内 血液和 气体， 迅速关闭胸腔， 开胸时间不超过30。 。 各组动物在结扎30而n 时分别舌下静脉给药或生理盐水， 然后 再次暴露心脏， 以手术刀片切断结扎线进行再灌注。再灌注 万方数据 5 3 6 12 0 而 n 后， 以 戊巴比 妥 钠30m 岁 k g 腹腔注射麻醉， 腹主动脉插 管取血。 1 . 5 检测指标用C O B A S 一 F A RA 自 动生化分析
15、仪检测血清 天门冬氨酸氨基转换酶( AST ) 、 磷酸肌酸激酶( C P K ) 及乳酸脱 氢酶( LDH ) 活性; 按试剂盒方法检测血清M D A含量， S O D 、 G S H 一 Px活性。 另取血抗凝分离血浆， 用放免法检测前列环素 ( P G I Z ) 和血栓A Z ( T x A Z ) 的 代谢产物6 一 K 一 P G FI 。 和TxB : 水平。 取血后剖取大鼠心脏， 用生理盐水洗净心腔内积血， 去掉 心房组织及脂肪， 称重， 将左心室心肌横切4 一 5 片， 然后浸人 N BT磷酸缓冲液中， 置37恒温水浴， 待染色完全后取出， 正常 组织染色， 缺血组织不染色。
16、切下缺血心肌称重， 计算梗死范 围( M I S ) 。 1 . 6 统计学处理 各组数据以牙 土 : 表示， 组间均数比较采用 单因素方差分析检验。 2 结果 2 . I C ASI 对心肌F R 损伤大鼠M ls及血清A ST、 C K 、 L D H活 性的 影响 与假手 术组相比， 再灌注模型组的M ls， 血清A ST、 C K 及动H活性均明显增加( P 0 . 05) 。见表1 。 表I C A S I 对缺血FR大鼠MI S 及血清AST C K L D H活性的影响( 万 土 5 ， n = 1 0 ) 组别剂量( m k g )M I S ( %)A S T ( U/L )
17、 C K ( U/L )LDH ( U/L ) 假手术组 再灌注模型组 C A S I 组 1 . 6 8土 0 ， 9 2 27. 8 土 8 . 5 3 ) 2 0 . 4士 6.1 4 ) 1 68 士 7 . 2 ， ) 巧. 9士 5 . 5 ， ) 7 1 5 . 2士1 9 5 . 3 9 8 7 . 7 士 241 . 4 1 ) 7 7 6 . 2士 2 0 2 . 3 7 42. 8 土 1 7 1 . 5 4 ) 7 3 0 . 2 士 1 8 0 . 2 4 ) 翻 3 . 2士1 7 6 . 5 1 0 2 4 . 1 土 3 02. 7 2 ) 8 2 5 . 0士
18、2 3 4 . 5 7 5 2 . 2 士 1 6 3 . 7 4 ) 7 1 4 . 6 士 1 5 3 . 5 ， ) 1 4 1 7 。 2土 4 3 8 . 2 2 2 7 85 士 酬 ) 43 2 ) 202 8 . 0土 5 1 72 1 6 6 2 . 5 土 4 9 2 . 7 4 ) 1 5 7 9 . 8 土 5 3 02 4 ) 204080 与假手术组比较: 1 ) P 0 . 0 5 ) ， 见表2 。 表3 C A sl对缺血再灌注损伤大鼠P G L及 T x A Z 水平的影响( 万 土 5 ， n 二 1 0) 组别 剂量P G 犯T X 戈 PGL / T
19、X A Z 假手术组 再灌注模型组 C A S I 组 。 6士7 1 . 5 . 3 土 8 2 . 7 1 ) 。 4士9 6 . 3 2士7 3 表Z C A sl对F R损 伤大鼠自由 基及抗氧化酶 的影响 了 土 5 ， n 二 1 0 ) 7士 6 5 . 2 4 ) 1 4 28土 5 5 . 7 2 3 2 . 3 土 7 3 . 5 2 ) 1 9 8 . 5士8 94 1 5 8 . 7土 70. 44) 1 5 3 ， 2 士 66 5 4 ) 3 . 47 士 0 . 6 2 1 . 7 5 土 0 . 5 9 3 ) 22 1士 0 . 9 5 3 . 0 8 土 0
20、 . 9 8 5 ) 3 . 1 6士 0 . 8 5 6 ) 495407.439488.483. 加4080 剂量M D A S O DG S H一 Px ( U/而) 与假手术组比 较: 1 ) P 0 . 05) ， 见表3 。 3 讨论 缺血心肌再灌注后一段时间内常出现再灌注损伤， 表现为 再灌注心律失常、 无复流和慢血流现象、 心肌顿抑和细胞坏死 等。 当 心肌F R 损伤时， 由于自 由 基堆积和C 扩 超载， 损伤了 细胞膜和线粒体， 造成心肌细胞各种酶释放人血， 引起一系列 血清酶( 如A sT、 C K 及L D H ) 活 性变化， 可作为观察心肌F R 损 伤程度及药物
21、疗效和预后的指标之一。 本实验表明， C A SI能明 显缩小心肌F R损伤大鼠的M 巧， 降低血清A ST、 C K 及LDH活 性， 证实其对F R 心肌具有明显保护作用。 心肌F R 损伤时， 不仅氧自由基生成增多， 而且对自由基 的 清除能力减低， 从而造成心肌组织中 产生的氧自 由 基大量蓄 积， 引起心肌组织的严重损伤。因此， 氧自由基对组织细胞的 损 害 是 引 起 再 灌 注 损伤的 重 要因 素 之 一 团。 氧自 由 基对 机 体 造成的 损伤程度可以 通过M D A含量及内 源性抗氧化酶( S O D 、 csH 一 入) 活 性 变 化间 接 评定 (1 。 c Asl
22、 能明 显降 低 心 肌F R 损 万方数据 伤大鼠 血清M D A含量， 升高S O D 及GsH 一 氏活性。 提示其可能 通过抑制脂质过氧化过程， 并同时提高内源性抗氧化酶活性而 减轻氧自由基对心肌的损伤。 P 认 与以人在血中极不稳定， 很快代谢为稳定的6 一 K - PGF I 。 与TxB : ， 因 此通常测定后两者水平代表P G I Z 与饮A Z 的 水平。 现已 知， PGI : 与T X A : 的平衡失调是心肌缺血或心肌坏 死 的 主 要 原 因 to。 C A sl可 明 显 降 低 血 浆仪A Z 水 平， 并 能 明 显 增高P GIz 水平及PGI Z / Tx
23、凡 比 值， 提示其可能通过纠正PGL 与T X A Z 之间的平衡失调对大鼠心肌F R 损伤产生保护作用。 4 参考文献 1 萧 寒， 于小风， 曲绍春， 等. 复方刺五加注射液对小鼠心肌营养性 血流量的 影响( J . 人参研究， 2 佣5 ; 1 7 ( 3 ) : 23一 5. 2 王颖实， 于小风， 曲绍春， 等. 复方刺五加注射液对培养大鼠心肌细 胞动作电位的影响影响 J . 人参研究， 2 (X 拓; 1 8 ( 1 ) : 5 衣 3 王 黎， 张潇月， 曲绍春， 等. 复方刺五加注射液对药物诱发实验性 心律失常的影响【 J . 吉林大学学报: 医学版， 2 叨7 ; 3 3
24、( 4): 6 78名 L 4 唯大员， 曲绍春， 于小风， 等. 刺五加叶皂昔对大鼠 心肌缺血再灌注 损伤的 保护作用 J . 中国中 药杂志， 2 仪 ”; 29( 1 ) : 714. 5 武 毅， 于晓风， 曲 绍春， 等. 人参果皂昔对犬实验性心肌梗死的保 护作用 J . 中国药学杂志， 2 (X 刀; 42( 5 ) : 42衣 曲绍春， 唯 诚， 于晓风， 等. 人参 Rb 组皂昔对大鼠实验性心肌缺 血再灌注损伤的保护作用( J 吉林大学学报( 医学版) ， 2 加7 ; 33 ( 5 ) : 849 一 2 . ( 2 (X)7 一 12一 11收稿 2 (X)8 习 1 一
25、修回 ( 编辑章木) 灵芝抱子粉抗肝纤维化作用的实验研究 李 文 斌 赵 红宇 ，( 大 连市 第三 人民 医 院， 辽宁 大 连 n 60 3 7 ) 【 摘 要 ) 目 的 观 察 破 壁 灵 芝 抱 子 粉 对c c “诱导 的 肝 纤 维 化 大鼠 的 影响 。 方 法 c c 玩诱导 大鼠 肝 纤 维化动 物模 型， 观 察破 壁 灵 芝 抱 子 粉 对大鼠 肝纤维化形成过程中 转化生长因 子p l 、 金属蛋白 酶抑制因 子一 l(TI M P 一 1)表达的 影响 及肝脏组织学变化。结果 破壁灵芝抱子粉明显减少肝 脏胶原沉积， 可以 明 显降 低TGF 一 p ， 、 TI M
26、P 一 1 的 表达( 均尸 。 . 05) 。 结 论 破 壁灵 芝 抱 子粉可 通过下调T G F 一 p ， 、 TI M P 一 1 抑制胶原合成及加强 胶原分 解， 从而抑制肝纤维化形成。 关键词 破壁灵芝抱子粉; 肝纤维化; 细胞因子 中图 分类号) 双 ， 6 5( 文献标识码) A 文章编号) 1 佣5 ， 2 0 2 创 沁 . ) 06刁 5 3 7 犯 现已 知肝纤维化是一种可逆性病变， 而肝硬化则是不可逆 性病变， 阻止肝纤维化的发生与发展是防治肝硬化的关键。破 壁灵芝抱子粉是延年益寿的营养食品， 现代医学研究发现它对 老年常见病如慢支、 神衰、 肝炎、 糖尿病等具有疗
27、效， 并且具有 抗癌、 抗爱滋 病、 抗衰老等 作用 。 本文通过观察破壁灵芝抱 子粉对细胞因子 转化生长因子p ， ( T G F 一 p : ) 和TGF 一 日 ， mRN A的 影响及自 由基的清除作用， 探讨其抗肝纤维化的机理， 为临床 应用提供依据。 1 材料与方法 1 . 1 动物 W i star 雌雄性大鼠各30只， 4 一 5 月龄， 体重1 50- 2 209 ( 购自 佳木斯大学实验动物中 心) 。 按随机数字表法分成 对照组、 模型组、 低剂量组、 高剂量组， 每组巧只。 1 . 2 试 剂 及 仪 器 金属蛋白 酶抑制因子 一 1(n M P 一 1 ) 、 T G
28、F一 氏 单克隆抗体、 D A B 显示剂、 巧卜 一 ly si ne猫片剂、 PBS 缓冲液、 构椽 酸缓冲液购自 武汉博士得生物工程公司。 soc 0 R E X可调式 加样器( 日 本株式会社) ， GC一 1 2 0 0 全自 动， 记数仪( 中国科技 大学) ， M P1202型电子分析天平( 上海精科仪器厂) ， Y L-3A回 转式切片机( 上海仪表厂) ， B H Z型O LYM P U S 显微镜及S O NY 摄像装置( 日 本株式会社) ， Bl一 以 X 医学图像分析系统( 成都泰 盟公司) 。 1 . 3 给药方法 对照组皮下注射花生油2 . 0 11 11/ 吨体
29、重， 饮 用 水s m l/ k g 体重灌胃; 模型组皮下注射相同剂量40%C C 玩花 生油， 饮用水5 口 l/ k g 体重灌胃; 低剂量组皮下注药同模型组， 抱子 粉悬浊液灌胃 剂量5 111 1/ 纯体重， 浓度为。 . 1 群d( 相当 于 0 . 5 留吨体重) ; 高剂量组接受组低剂量相同处理， 但是抱子粉 浓度为0 . 6 岁耐( 相当于3 . 0 岁吨体重) 。各组皮下注药为Z d 一次， 灌胃 为每天一次。 1 . 4 免疫组化观察 竹 M P 一 1 、 T G F 一 p : 染色用P BS代替一抗作 阴性对照。 1 . 5 免疫组化图像半定量分析 2 0()倍镜下
30、， 每只大鼠 选取2 张切片， 每张切片随机选取5 个视野， 然后根据阳性物质范围 内每个像素的吸光度计算出每个标本的平均光密度值。 1 ， 统计学处理 采用5 玲5 10. 0 统计软件模块处理， 所有数 据均采用牙 士 ， ， 以F 检验作统计分析。 1 黑龙江佳木斯大学基础医学院 作者简介: 李文斌( 1 9 6 9 一 ) ， 男， 硕士， 副主任医师， 主要从事临床医 学肝 胆外科工作。 2 结果 2.I TGF 一 p ， 免疫组化染色结果 见图1 。正常对照组TcF- p l 表达见于汇管区、中央静脉周围细胞、 肝细胞、 肝窦内 皮 细胞， 着色较浅， 范围窄。而其他三组TGF 一 p ， 主要表达见于 纤维间隔内、肝细胞、肝窦内皮细胞、H S C细胞，呈棕黄色 颗粒， 范围 广。 本实验肝组织切片TGF 一 p ， 、 n M P 一 1 抗原免疫 万方数据