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1、 文章编号： 1000-3711 （2005） 04-0010-01 大蒜精油软胶囊的毒性及致突变性实验研究 * 迪丽努尔沙来，亢建志，穆 冰 （新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心，乌鲁木齐 830002） 摘要： 目的 了解大蒜精油软胶囊的毒性和致突变作用。方法 按照 保健食品检验与评价技术规范（2003 年版） ， 对 大蒜精油软胶囊进行急性毒性试验和致突变试验。结果 大、 小鼠的急性经口毒性 LD50均大于 10g/ “ BW； 小鼠骨髓微 核试验、 精子畸形试验和 Ames 试验结果均为阴性。结论 大蒜精油软胶囊属于实际无毒物， 致突变试验结果阴性， 无致 突变作用。 关键词： 大蒜精油
2、； 毒性； 致突变作用 中图分类号： R -332文献标识码： A 大蒜为民间长期习用的调味品，其药用历史悠 久， 有 “地里长出的青霉素” 之称。大蒜中主要有效成 分为大蒜素， 同时含有多种挥发油、 维生素、 微量元素 及稀有元素硒等， 并含人体必须的多种氨基酸， 具有降 血糖、 降血脂、 降血压、 抗菌、 防癌等多种功效， 能提高 机体的免疫功能、 调节口味、 增强食欲， 长期食用能强 身健体， 延年益寿。大蒜精油是大蒜中的特殊物质， 呈 现明亮透明的琥珀色液体， 此精油含很重要的硫化物， 它对一般健康及心脏血管的健康很有帮助。大蒜油的 毒性及致突变性研究未见报道。本研究通过大、 小鼠 急
3、性经口毒性试验、 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、 小鼠精子畸形试验和 Ames 试验对大蒜精油软胶囊的 安全性进行评价。 1 材料与方法 1.1 受试物： 倍健牌大蒜精油软胶囊， 由广州市佰健 生物工程有限公司乌鲁木齐市分公司提供。 1.2 动物： SPF 级 NIH 小鼠 100 只， 由第一军医大实 验动物中心提供 （ 合格证号： 2003A076） 。清洁级 Wistar 大鼠 20 只和全价颗粒饲料由新疆医科大学实 验动物中心提供， 实验动物生产许可证号： SCXK （新） 2003 -0001。 1.3 环磷酰胺： 上海华联制药有限公司出品。 1.4 实验方法： 按 保健食品检验与评
4、价技术规范 （2003 年版） 进行。 1.4.1 大、 小鼠急性经口毒性试验： 采用最大耐受剂量 法进行试验。SPF 级 NIH 小鼠 20 只， 体重 18 22 g， 清洁级 Wistar 大鼠 20 只， 体重 183 200g， 雌雄各半。 取大蒜精油软胶囊内容物， 按 10g/ kg BW 一次灌胃， 灌胃后动物连续观察 14d， 记录中毒表现及死亡情况。 1.4.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验： 采用间隔 24h 2 次经口灌胃法进行实验。选用体重为 25 30g 的 SPF 级 NIH 小鼠 50 只， 按体重随机分为 5 组， 每组 10 只， 雌雄各半。设低、 中、 高
5、3 个剂量组和溶剂对照 及阳性对照共 5 个组， 3 个剂量组分别给予 0. 62， 1. 25 和 2. 5g/ kg BW 的受试物 （相当于人体推荐剂量的25， 50 和 100 倍） ， 溶剂对照给予色拉油 （5mL/ kg BW） ， 以 40mg/ kgBW 剂量的环磷酰胺作为阳性物， 腹腔注射。 1.4.3 小鼠精子畸形试验： 选用体重 29 34g 的雄性 SPF 级 NIH 小鼠 25 只， 随机分为 5 组， 每组 5 只。3 个剂量组和溶剂对照的剂量均同微核试验， 以 45mg/ kg BW 剂量的环磷酰胺作为阳性物， 腹腔注射。 1.4.4 Ames 试验： 本实验采用
6、平板掺入法， 用经鉴定 符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型 TA97， TA98， TA100， TA102 菌株， 采用多氯联苯 （PCB） 诱导 的大鼠肝微粒体酶 （S9） 作为体外代谢活化系统； 分加 与不加 S9 混合液 2 种方法进行试验。设 5 个剂量每 个器皿分别为 0. 016mg， 0. 08mg， 0. 4mg， 2. 0mg， 10mg， 同时设自发回变、 溶剂对照 （二甲基亚砜） 和阳性 （突 变剂） 对照； 阳性剂为： 不加 S9 情况下， TA97 及 TA98 均为2. 4， 7 - 三硝基芴酮 （0. 4g/ 皿） 、 TA100 为叠氮 钠 （1. 5g/
7、皿） 、 TA102 为丝裂霉素 C （1g/ 皿） ； 加 S9 情况下， TA97， TA98， TA100 为 2 - 氨基芴 （20g/ 皿） ， TA102 为 1. 8 - 二羟基蒽醌 （50g/ 皿） 。每个剂量组 做 3 个平皿， 整套试验在相同试验条件下重复做 2 次。 （下转第 12 页） 01地方病通报 2005 年第 20 卷第 4 期 Endemic Diseases Bulletin 2005 Vol. 20，No. 4 * 收稿日期： 2005-05-10； 修回日期： 2005-06-22 作者简介： 迪丽努尔沙来 （1972 - ） ， 女 （维吾尔族） ，
8、主管医师， 硕士研究生. 图 1 PCR 扩增电泳图 M： Marker； 1. EV， EV76， M2；2. 空白对照；3. 假结核菌；4. 大 肠杆菌； 5. 自然界分离菌； 6 8. 鼠疫菌 2 结果与讨论 据韩延平等研究， 91001 菌株上共有 28 条标识基 因， 这些基因位于鼠疫菌染色体上， 具有稳定、 不易丢 失的特征， 通过对我国 18 个生态型菌株的 PCR 扩增， 所有实验菌株扩增为阳性， 而假结核菌则为阴性 4。 在本研究中， 我们选择了其中的 YPO2088 基因作为研 究目的基因， 对鼠疫菌 127 株、 3 株假结核菌、 2 株大肠 杆菌、 18 株自然界分离菌
9、 （非鼠疫菌株） 的 DNA 进行 扩增， 鼠疫菌均能特异性扩增出预期大小 300 bp 的片 断， 而其他菌株均为阴性 （图 1） 。这一结果与韩延平 等结果相吻合。我们的研究结果更一步证明： 该基因 仅仅存在于鼠疫菌中， YPO2088 标识基因用于鼠疫菌 的快速检测和鉴定是一种比较理想的技术。 参考文献： 1 Parkhill J，Wren BW，Thomson NR，et al. Genone Se- quence of Yersinia pestis，the Causative Agent of Plague J . Natuer， 2001， 413： 523. 2 Deng W，
10、Burland V，Plunkett G，et al. Genone Sequence of Yersinia pestis KIM J . J Bacteriol， 2002， 184： 4601. 3 宋亚军， 童宗中， 王 津， 等. 鼠疫耶尔森菌菌株 91001 全 基因组序列测定及初步分析 J . 解放军医学杂志， 2004， 29 （3） ： 192. 4 韩延平， 周冬生， 宋亚军， 等. 鼠疫耶尔森菌 DNA 标识序 列的鉴定及其应用研究 J . 解放军医学杂志， 2004， 29 （4） ： 307.（本文编辑： 常青） （上接第 10 页） 2 结果 2.1 急性经口毒性试
11、验： 大、 小鼠经口染毒后连续观 察 14d， 无一死亡； 大、 小鼠的急性经口毒性 LD50均大 于 10g/ “ BW。 2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验： 3 个剂量组的 剂量分别为 0. 62， 1. 25 和 2. 5g/ kg BW， 雌性小鼠的骨 髓嗜多染红细胞微核率分别为 1. 2， 1. 2和 1. 2， 雄性为 1. 2， 1. 0和 0. 8， 对照组雌鼠为 1. 8， 雄鼠为 1. 0； 各剂量组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核 率与阴性对照组相比较， 经泊松分布检验 P 0. 05， 差 异无统计学意义， 而阳性组 （雌鼠微核率为 43. 6， 雄 鼠为34） 与阴性对照
12、组相比较差异有统计学意义 （P 0. 05， 差异无统计学意义， 而环磷酰 胺阳性组与阴性对照组相比较， 差异有统计学意义 （P 0. 01） ， 说明动物敏感， 实验结果可靠， 受试物在受 试剂量范围内对小鼠精子畸形率无影响， 精子畸形试 验结果为阴性。 2.4 Ames 试验： 0. 016mg， 0. 08mg， 0. 4mg， 2. 0mg， 10mg 的剂量， 在相同实验条件下重复做 2 次实验， 无 论加 S9 活化系统与否， 各试验组回变菌落数均未见明 显增加， 即各试验组回变菌落数均未超过对照组回变 菌落数的 2 倍， 亦无剂量 - 反应关系， 而阳性组均呈明 显的强阳性， A
13、mes 试验结果为阴性。 3 结论 以上实验结果表明， 大蒜精油软胶囊对大、 小鼠的 急性经口毒性 LD50均大于10g/ kg BW， 属实际无毒物； 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验 以 0. 62， 1. 25 和 2. 5g/ kg BW 的剂量 （相当于人体推 荐剂量的 25， 50 和 100 倍） ， 结果均为阴性， 说明其无 诱发突变的作用。精子畸形试验各剂量组动物精子畸 变率虽然低于对照组， 但没有剂量反应关系， 至于该大 蒜精油软胶囊对小鼠的精子畸变发生率是否有好转作 用需进一步研究； Ames 试验结果为阴性， 提示大蒜精 油软胶囊对鼠伤寒沙门氏菌 TA97， TA98， TA100， TA102 试验菌株无致突变作用。综上所述， 3 项致突 变实验结果均为阴性， 提示倍健牌大蒜精油软胶囊对 鼠伤寒沙门氏菌和哺乳动物的体细胞和性细胞无致突 变作用， 食用基本安全。（本文编辑： 常青） 21地方病通报 2005 年第 20 卷第 4 期 Endemic Diseases Bulletin 2005 Vol. 20，No. 4