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1、1 7 2 4I S S N 1 0 0 9 - 3 0 7 9 C N 1 4 - 1 2 6 0 / R世界华人消 化杂志 2 0 0 4 年7 月1 5 日 第1 2 卷 第7 期 .x J F 究 快 报. 大鼠急性坏死性胰腺炎心肌组织中琉基物质的抗氧化作用 梁王 被， 吕 栋， 李瑞军 梁王彼， 吕 栋. 李瑞军， 首 都医 科大学附 属北京天坛医 院消化内 科 fi t; 京市 1 0 0 0 5 0 项目 负资人: 梁巫吸， 1 0 0 0 5 0 ， 北京市天坛西里6 号院 都医科大学附属北 京 天 坛医 院 消 化内 科 lia n g p ix ia . M e d m a
2、 i l.c o m .c n 电话: 0 1 0 - 6 7 0 1 6 6 1 1 - 2 3 5 9 收稿日期: 2 0 0 4 - 0 3 - 2 6接受日期: 2 0 0 4 - 0 4 - 1 5 摘要 目 的: 探讨琉 基物质 在 急性坏死性胰腺撇A N P ) 时在心肌组 织中抗氧化作用. 方法: 大鼠随机分为A M生 理盐水组; B 组琉基物质处理组; C 组假手术组. 各组大鼠 检测心肌组织内 过氧化物歧化酶 ( S O D ) 、 丙二 醛( M D A ) 含量; 观察光镜下胰腺 组织、电 镜 下b )讥组织形态学改变. 结果: B 组心 肌组织S O D 含量明 显低
3、于C 组份别于4 , 6 , 1 2 h 的5 0 .3士9 .6 , 5 7 .2士9 . 1 , 6 2 .4土7 .3 比8 3 . 1土8 .6 , 8 2 .4 士 9 .4 , 8 2 .6 士9 .2 , P 0 .0 1 ) ， 高于A 组( 3 7 .3 土5 .6 , 4 1 .3 土7 . 1 、 4 4 . 5 土8 . 0 , 尸 0 .0 5 ) ; B 组心肌组织丙二醛 含量均明显高于C 组( 分别于4 , 6 , 1 2 h 的1 . 0 2 5 6土 0 .0 3 2 5 , 0 .7 9 5 6土0 .0 3 5 1 , 0 . 6 0 1 2土0 .0 4
4、 1 5 比0 .31 7 1土 0 . 0 6 3 2 , 0 . 2 9 5 1土0 . 0 2 6 5 , 0 . 3 0 2 5士0 . 0 7 1 2 , P 0 . 0 1 ) , 低于A绷 1 .5 1 2 6土0 . 1 0 3 2 , 1 .3 0 2 5土0 .0 8 5 6 , 0 .9 2 1 3土 0 .0 5 7 8 ， P 0 .0 5 ) ; B 组 胰 腺 组 织 及心 肌 组织 病 理改 变 较 A组减轻， 腹水量亦少于A组. 结论: A N P 时心 肌组织S O D 减少， M D A 含量增加明显; 在 A N P 时外源性疏基物质可作为氧自由 基清除
5、齐 少 生 减轻心肌 组织氧化应激反应中 发挥作用. 梁fi蔽 吕栋， 李瑞军. 大鼠急性坏死性胰腺询A 肌组织中疏基物质的抗氧化 作用. 世界华人消化杂志 2 0 0 4 ; 1 2 ( 7 ) : 1 7 2 4 - 1 7 2 5 h t t p :/ / w w w .w j g n o t . c o m / 1 0 0 9 - 3 0 7 9 / 1 2 / 1 7 2 4 . a s p 1材料和方法 1 . 1 材料 a W i s t a r 大鼠， 质量2 5 0 - 3 0 0 g ， 由 首都医 科大学动物中 心 提供. 牛磺胆酸钠购自 美国S i g m a 公司 .
6、 注射用 硫普罗宁 嘀品 名 凯西莱 ) 由 新 谊药业 股份 有限 公 司 生产. 低温高 速离心机(3 0 0 0 r / m in ) , 7 2 2 0 分光光度 仪、 低温冰箱、 恒温水浴箱、 组织匀浆机由 北京神经外 科研究所提供。 采用传统的A h o p 逆行胰胆管注射诱导模 型 . 实 验 前， 大鼠 禁 食1 2 h ， 自 由 饮 水 . 1 0 0 m g / L 水 合 氯醛ip 麻醉(4 m I J k g ) . 经上腹正中 切口 进人腹腔， 用 微量注射泵以2 .4 m l J h 恒定速度逆行由胰胆管末端向胰 胆 管内 注射5 0 叭 牛 磺胆酸 钠( 1 m
7、 L / k 部 1 . 2 方法 将8 1 只大鼠随机分为3 组， 每组2 7 只. A组 急性坏死性胰腺炎生理盐水组; B 组急性坏死性胰腺炎 琉 基 物 质 ( 硫 普罗 宁 ) 处 理 组; C 组 正 常 对 照 组( R 手 术 组 ). 其中B 组在诱发A N P 前1 h 及3 0 m i n ， 术后3 0 m i n 硫 普罗宁( 3 0 0 m g / k g ) s c ; A 组用等量生理盐水 替代. 各组动 物模型分别在诱发A N P 后4 , 6 , 1 2 h 后处死. 胰头部 分 送光 镜检 查; 将 心肌 组 织1 m m , 放 人2 0 妙戊二 醛固 定
8、液中 送电 镜检查; 其余心肌组织取3 m m x 3 m m 迅速在 低温下 制备 成组 织匀 浆， 用高速离心 机离 心1 0 m in ， 取 上清液 放人 低温冰 箱中 保存(0 冰箱可 保存2 4 h ) 待 测 过氧 化 物 歧 化 酶活 力( 黄 嗦 吟 氧 化 酶 法， 单位k N U / g ) 和 丙二醛( 硫代巴比 妥酸法， 单位u m o L / g ) 含量. 统计学处理 S P S S 统计软件对各组数据进行统计学 处理. 各组数据结果以均数士 标准差表示. 各组间及各时 间点各数据进行配对t 检验. 0 引言 急性坏死性胰腺炎是临床常见危重病，常伴有心、 脑、 肺
9、、肾等多器官损害， 其死亡率高. 胰腺炎的发病 机制是胰蛋白 酶、 氧自由 基、 炎性递质等多因素共同参 与的， 氧自由基对急性胰腺炎时胰腺细胞的损伤作用 相当重要， 琉基物质做为氧自由基清除剂可保护胰腺 细胞免受氧自由 基的损伤， 减轻胰腺病变. 胰腺炎时心 肌细胞同 样可受到损伤， 但心肌损伤与氧自由基、琉 基物质有无内 在联系目 前研究尚 少， 本研究旨 在探讨 琉基物质( 硫普罗宁 ) 在急性坏死性胰腺炎时， 作为氧 自由 基清除剂在减轻心肌组织氧化应激反应中发挥的 作用. 2 结果 A 组胰腺组织4 h 胰腺表面可见大小不一的出血灶， 腹 腔内大量血性腹水， 腺小叶结构凌乱实质中大片
10、出血 坏死灶， 间质中可见炎性细胞浸润; 6 h 后胰腺表面及大 网膜表面出现皂化灶， 胰腺组织病变严重， 间质中 可见 较多炎性细胞浸润; 1 2 h 皂化灶增加， 钙化明显， 炎性细 胞浸润进一步加重. B 组胰腺组织改变4 , 6 , 1 2 h 与A 组比较有所减轻， 腹水量比A组少， 胰腺组织病变、 腺小叶结构改变及出血坏死灶比A 组减轻， 且坏死灶 多为小灶性坏死，间质中炎性细胞浸润减少， C 组为 正常胰腺组织. 电 镜下A 组4 h 心肌组织少量线粒体岭 模糊， 肌纤维溶解不明显; 6 h 线粒体增多、 变性， 峙电 子密度增高， 肌纤维断裂或纤维间 距增宽; 1 2 h 线粒
11、体 增多， 伴有肌丝断裂. B 组4 h 线粒体结构大致正常， 肌 纤维大致正常; 6 h 线粒体结构尚清晰， 固 缩变性少， 峙 相对增多， 肌纤维间隙增宽部分溶解; 1 2 h 线粒体增 I S S N 1 0 0 9 - 3 0 7 9 C N 1 4 - 1 2 6 0 / R2 0 0 4 年7 月1 5 日 第1 2 卷 第7 期 1 7 2 5 生， 峙结构尚 正常， 肌纤维未见明显溶解; C 组正常 心肌组织结构. 2 . 1 心肌组织过氧化物 歧化酶活力 A , B 两组于 各时间 点均明 显 低于C 组(P 0 .0 1 ) ; B 组明 显高于A 组(P 0 .0 5 ,
12、 表1 ) . 表1心肌组织过氧化物歧化酶活力变化( m e a n 士 S D , k N U / g , n = 2 7 ) 分组 A ( 胰腺炎) B ( 凯 西莱 ) C ( 对照) 4 3 7 . 3 t 5 0 . 3 t 5 . 6 6 9 .6 6 0 8 3 . 1 t 8 . 6 4 1 . 3土7 . 1 6 5 7 . 2土9 . 1 6 8 2 .4 3 9 .4 4 4 . 5 t 8 . 护 6 2 .4 t 7 . 3 6 0 8 2 . 6士9 . 2 6 P 0 .0 1 ， 比C 组; 0 P 0 .0 5 ， 比A组. 2 .2 心肌组织丙 二醛含童 A
13、 , B 两组于各时间点均明显 高于C 组( P 0 .0 1 ) ; B 组明 显低于A 组( P 0 .0 5 ， 表2 ) . 表2心肌组织丙二醛含f变化( m e a n 士 S D , u m o L / g , n = 2 7 减轻; 光镜下胰腺的病理变化及电镜下心肌组织的病理 变化 均明 显 减轻. 琉基 物 质(硫普 罗宁 ) 是 一种 含 有 游 离琉 基的甘氨酸衍生物， 被广泛应用于各种肝脏疾病、放 化疗术后. 琉基物质是体内一种重要的氧自由基清除 剂， 应用他可通过清除氧自由基来治疗急性胰腺炎1 1 1 本研究中可见，预先使用琉基药物的B组，可减轻 A N P 时胰腺组织
14、和心肌组织的氧化应激反应， 病理检 查可见胰腺和心肌组织损伤明显减轻， 心肌组织中具 有特异性清除超氧阴离子自 由 基的S O D 活性较A 组增 加， 氧自 由 基攻击肺细胞膜产生的 终末产物M D A 含量 较A 组明 显减低， 细胞损伤及炎症有所减轻， 使用琉基 药物一 硫普罗宁作为氧自由 基清除剂可减轻胰腺和心肌 组织的损伤. 总之， A N P 时氧自由基对胰腺细胞损伤的同时也 可导致心肌损伤， 预先使用硫普罗宁， 可使A N P 时腹 水量明 显减少; 保护胰腺细胞的同 时保护心肛 胜 且 织; 为 琉 基物质在A N P 中 应用，以 保护胰腺细胞的同时保护心 肌组织，预防和治疗
15、A N P 时合并的器官损伤建立新的 思路提供依据. 分组别 A ( 胰腺炎) B ( 凯西莱) 1 . 5 1 2 6 t 0 . 1 0 3 2 1 . 0 2 5 6 t 0 .03 2 5 “ 1 . 3 0 2 5 t 0 . 0 8 5 6 6 0 . 7 9 5 6土0 . 0 3 5 1 6 0 0 . 9 2 1 3 t 0 . 0 5 7 8 6 0 . 6 0 1 2 t 0 . 0 4 1 5 “ 0 P 0 .0 5 ， 比A 组; 6 P 0 .0 1 ， 比C 组. 3 讨论 急 性胰腺炎( A P ) 是临床常 见急症之一【2 - 4 1 ， 尤 其是急 性 出
16、 血坏死 性胰腺炎( A N P ) 临床表现危重， 死亡 率高5 - 6 近年来，急性胰腺炎合并其他脏器损伤的研究7 1 以及 抗氧化剂在急性胰腺炎时发挥的作用受到人们的重视f8 1 急性胰腺炎时可出现不同 程度的心血管并发症， 轻 者心率增快、心功能不全，重者可出现室颤、心跳 骤停、 心梗等严重并发症. 急性胰腺炎时产生心肌损伤 的机制尚 不完全清楚， 急性胰腺炎时 胰腺组织中M D A 浓度明显升高， S O D 活性明显减低9 1 ， 血浆中M D A 浓 度明显升高， S O D 活性明显减低， 氧自 由基参与了A N P 的病变， 与多器官损伤的严重程度呈正相刘1 0 1. 心肌组
17、 织中S O D活性及M D A 浓度变化报道甚少. 本研究证 实， A N P 可导致的心肌损伤， 表现为心肌细胞线粒体 变性， 岭电子密度增高， 肌纤维断裂或纤维间距增宽; A N P 时心肌组织中S O D活性明显减低， M D A浓度增 高. 预 先给予外源琉 基物质( 硫普罗宁 ) 可以 使这种改变 参考文献 A h o H J , K o s k e n s a l o S M, N e v a l a i n e n T J . E x p e r i m e n t a l p a n - c r e a t i t i s i n r a t s . S o d i u m
18、T a u r o c h o l a t e - i n d u c e d a c u t e h e mo r - r h a g i c p a n c r e a t i ti s . S c a n d J G a s t r o e n t e r o l 1 9 8 0 ; 1 5 :4 1 1 - 4 1 6 S l a v i n J , G h a n e h P , S u tt o n R , H a r t l e y M, R o w l a n d s P , G a r v e y C , H u g h e s M, N e o p t o l e m o
19、s J . Ma n a g e m e n t o f n e c r o t i z i n g p a n c r e a t i t i s . W o r l d J G a s t r o e n t e r o l 2 0 0 1 ; 7 :4 7 6 - 4 8 1 Ma o E Q , T a n g Y Q , Z h a n g S D . E f f e c t s o f t i m e i n t e r v a l f o r h e m o f i l t r a ti o n o n t h e p r o g n o s i s o f s e v e r
20、e a c u t e p a n c r e a t i t i s . Wo r l d J G a s t r o e n t e r o l 2 0 0 3 ; 9 : 3 7 3 - 3 7 6 金世龙， 候庆福， 顾红光， 王仁云， 廖维健. 手术与非手术治疗重 症急性 胰腺炎1 2 0 例. 世界华人消化杂志 2 0 0 3 ; 1 1 :4 9 4 - 4 9 6 夏时海， 全金梅， 乔爱军， 张 伟龙， 任万英， 郭萍， 赵晓晏.生 长抑 素衍生物善宁 加倍剂 量治 疗重症急性胰腺炎的 疗效研究 世界华 人消化杂志 2 0 0 2 ; 1 0 : 1 1 5 7 - 1 1
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22、. W o r l d J G a s t r o e n t e r o l 2 0 0 3 ; 9 : 2 0 9 6 - 2 0 9 9 谷俊朝， 秦兆寅， 王宇. 实验性大鼠 急性坏死性 胰腺炎合并 肺损害 T X A Z .P G I : 的变化. 世界华人消化杂志 1 9 9 9 ; 7 : 2 7 5 谭至柔， 唐国 都， 姜海行， 邓德海， 袁 海锋. 抗氧化剂 对急性胰腺 炎大鼠 核因 子一 K B 和一氧化氮合酶的影响. 世界华人消化杂志 2 0 0 4 ; 1 2 : 7 1 1 - 7 1 3 1 0 1 1 D a b r o w s k i A , C h w i
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