大鼠局灶性脑缺血再灌流后SAMDC的表达及意义.pdf

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1、第1 5 卷第1 0 期 2 0 0 5 年5 月 中国现代医学杂志 C h i n a J o u rna l o f Mo d e rn Me d i c i n e V o l. 1 5 N o . 1 0 M a y 2 0 0 5 文章编号:1 0 0 5 - 8 9 8 2 ( 2 0 0 5 ) 1 0 - 1 4 8 5 - 0 5 论著 大鼠局灶性脑缺血再灌流后 S A MD C的表达及意义 姜冰， 毕长龙， 万 新， 刘宏伟， 吴光勇 ( 中南大学湘雅医院 神经外科， 湖南 长沙4 1 0 0 0 8 ) 摘要:目 的 检测大鼠 局灶性脑缺血再灌流不同时 相脑皮质及皮质下S

2、 A M D C - m R N A的 表达，探讨其在 局灶性脑缺血再灌流后的变化及意义。 方法 在C O N N O L L Y线检法的基础上进行改良， 复制大鼠2 h 局灶性 脑缺血再灌流2 , 4 , 8 , 2 4 h 动物模型， 用逆转录多聚酶链反应( R T - P C R ) 测定脑缺血区 城皮质和皮质下不同 时 相S A M D C - n i P, N A的表达， 分析其时 相变 化及实际 意义。结果 对照 组大鼠皮 质和皮 质下 均未 检测出 有 S A M D C - m R N A的 表达; 实 验组MC A检塞侧大鼠皮质和皮质下均检测出 有S A M D C - m

3、R N A的 表达， 其表 达呈双相性。 再灌流4 h , S A M D C - m R N A的表达明 显高于 缺血期及再灌流2 h , 8 h ( P 。多胺也是一类重要 的代谢调节物， 常与第二信使、 钙离子等一起参与众 多大分子生物( 如: 膜受体、 离子通道、 酶分子、 核酸 和蛋白质) 的代谢调控， 从而发挥这些大分子生物 的生物学功能， 表现为细胞的生长、 分化和各种生命 功能的表达。体内多胺水平受鸟氨酸脱竣酶( 。 卜 n it h i n e d e c a r b o x y l a s e , O D C ) 和S 一甲硫腺甘氨酸脱 狡酶( s - a d e n o

4、s y l m e t h i o n i n e d e c a r b o x y l a s e , S A M D C ) 的调控， 许多应激或刺激因素都会引起其改变， 包括 癫痛发作、脑创伤和脑缺血。 研究已表明 在可逆性 脑缺血造成缺血再灌流后O D C 基因表达的水平及 其活性的增长， 但作为鸟氨酸循环限速酶之一的 S A M D C 在此环节中的 变化了 解的 还不多。 本实验旨 在用改良的M C A闭塞法复制大鼠局灶性脑缺血再 灌流模型， 并在此基础上用R T - P C R的方法检测缺 血再灌流后大鼠 皮质、 皮质下S A M D C - m R N A的表 达， 并探讨其

5、意义。 1 材料和方法 1 . 1 实验动物与主要器械 S D 雄性大鼠， 体重2 0 0 - 2 5 0 g ， 由中 南大学湘 雅医学院动物学部提供; 手术显微镜， 常规显微手术 器械。 1 . 2 动物分组 抽签法随机分成两组， 即实验组和对照组。 实验 组: 采用改良的C O N N O L L Y线栓法， 造成大鼠右大 脑中动脉( M C A) 缺血2 h ， 再灌流2 , 4 , 8 , 2 4 h 后， 检测M C A供血皮质及皮质下S A M D C - m R N A的表 达。实验组每时间点的动物数为8 只; 对照组每时 间点的动物数为3 只， 除不栓塞血管外， 余操作同实

6、验组。 1 .3 动物模型制作 采用改进C O N N O L L Y方法建立右侧大脑中动 脉( M C A) 区局灶性脑缺血再灌流模型冈 。 大鼠术前 禁食 1 8 h ， 不禁水， 用1 0 % 水合氯醛腹腔注射麻醉， 剂量3 , 4 m IJ 1 0 0 g ， 追加剂 量0 .0 8 一 0 . 1 0 M I 1 1 0 0 g . 麻醉成功后， 取仰卧位， 下垫纱布， 用皮筋固定四肢 及头部， 直肠温度计监测体温， 用加热垫保持体温在 3 7 , 3 8 9 0 。做颈正中切口， 长约2 一 2 .5 c m ， 依次切 开皮肤、 皮下， 暴露颈总动脉鞘， 移人1 6 倍显微镜，

7、镜下小心剪开颈动脉鞘， 双极电凝烧灼颈外动脉的 分支， 在颈外动脉分叉处电 凝颈外动脉， 用动脉瘤夹 夹闭颈外动脉的近端， 并预制1 号丝线。于颈外动 脉电 凝部的 近 端造口， 将钝头3 - 。 尼龙线插人颈 外 动脉近端， 将预置于近端的丝线打结， 剪断颈外动脉 近端， 并反折使颈外动脉与颈内动脉呈一直线， 将插 人的尼龙线缓慢向 颅底方向 插人， 置人长度约1 8 - 2 0 n mm 。当有阻滞感或线有些弯曲时表明尼龙线已 成功进人了M C A及A C A近端，阻断了来自 脑底 W I L L I S 环对M C A 血供来源。 用稀释的庆大霉素盐 水冲洗伤口， 清除异物， 1 号丝线

8、全层缝合皮肤。将 栓塞线留于颈外动脉残端口 外， 根据实验预定的间 隔时间重新麻醉大鼠， 打开切口， 抽出栓塞线， 造成 脑缺血再灌流注。最后电凝颈外动脉残端， 重新缝 合各层组织。 对照组除不栓塞血管外， 余操作同实 验组。 1 . 4 标本处理 根据L O N G A和C O N N O L L Y法中激光多普勒 血流测定值和特征性临床征象的关系， 凡在本实验 中出现左前肢瘫痪的动物临床表现为牵尾时实验动 物作同向圆周运动， 认为栓塞成功。各组动物依次 于缺血2 h 、 再灌流2 , 4 , 8 和2 4 h 后， 在1 0 % 水合氯 醛腹腔注射麻醉下， 断头处死。剪开头皮， 用剪刀从

9、枕骨大孔处剪开枕骨及硬脑膜， 暴露全脑， 用剥离子 获取缺血区脑皮质及皮质下组织， 放人1 .5 m L 的离 心管中 并置于一 8 0 冰箱中 冷冻备用。 1 . 5 实验试剂与仪器 超低温冰箱( S a n y o ， 日 本) 、 低温高速离心机 ( B e c k m a n ， 美国) , P C R仪( B e c k m a n ， 美国) 、 全自 动紫外分光光度计( B e c k m a n ， 美国) 、 电泳仪、 电泳 槽 ( 北京鼎国生物有限公司) 、图像分析处理系统 ( B io - R a d J e 1 D o c - 2 0 0 0 ， 美国) ; T ri

10、z o l R N A提取试 剂( 美国G i b c o B R I , 公司) , D E P C ( 美国S i g m a 公 司) , M - M L V 逆转录 酶( 美国P r o m e g a 公司) , R N A 酶抑制剂 ( 北京鼎国 生物有限 公司) , P C R m a r k e r ( 北京鼎国 生物有限 公司) 、 O li g o ( d T ) ( 上海生工 生物工程技术服务有限 公司) , T a q 酶 ( 上海生工生 物工程技术服务有限公司) , d N T P s ( 上海生工生物 工程技术服务有限公司) , G A P D H , S A M

11、D C引物 ( 上海生工生物工程技术服务有限公司) 。 1 . 6 实验方法 1 .6 . 1组 织总 .A的 提 取 戴 手 套， 去 除 滑 石 粉， 1 4 8 6 第 1 0 期姜 冰， 等: 大鼠 局灶性脑缺血再灌流后S A M D C 的 表达及意义 称 取 适量 ( 2 0 0 m g 左右)的 组 织 放人 玻 璃 匀浆 器 中， 每份标本同时 加人T r iz o l 液1 m L ， 在冰台 上充分 研磨， 直至将标本研碎并溶解于T r i z o l 液中。 将溶解 有 组 织 标 本的T r iz o l 液 转 移至E p p e n d o r f 管中， 加 人

12、2 0 0 W L 氯仿， 在振荡器上短暂振荡， 充分混匀后室 温冰浴上放置5 m i n 。在低温离心机上， 4 C ， 1 2 0 0 0 r / m in ， 离心1 5 m i n 。 用2 0 0 W L 的T i p 吸 取上清液层， 转 移至 新的1 .5 m L E p p e n d o r f 管中。 每管 加人等体 积的 异丙醇， 振荡器上振荡混匀， 室温冰浴巧m i n , 使 之 沉 淀 。 在 低 温 离 心 机 上， 4 C ， 1 2 0 0 0 r / m in ， 离 心 1 5 m i n 。 移弃上清层， 管底沉淀部分加人7 5 % 酒精1 M L ，

13、振荡洗涤。 低温离心机上， 4 0 C ， 1 2 0 0 0 r / m i n ， 离心 5 m i n 。 移弃上清液， 置冰浴上自 然干燥。 用T i p 吸 净 管 壁 上的 余水， 加人1 0% o D E P C 水3 0 p L ， 用2 0 it L T i p 吹打， 使沉淀充分溶解， 置一 8 0 冰 箱中 保存， 备用 1 .6 .2 R N A的定量取R N A 2 p , L + 9 8 W L 1 % o D E P C 水， 装 人另 一E p p e n d o r f 管。 先用1 % o D E P C 水润洗一下测量杯， 调零， 再加人样品1 0 0 W

14、 L ， 置于 仪器中 测量。 计算方法: 各标本号R N A浓度( 所测 值 u g / m L ) x 5 0=x x x w g / m L _ 1 0 0 0=x x x w g / w L 。 逆转录时， R N A 样品 总量取4 w g 左右， 估 算出 应取多少 林 L 上述样品。 1 . 6 .3 逆转录合成 c D N A 提取的R N A样品约4 u g +O l i g o( d T ) 1 W L+D E P C水补足至 1 2 W L , 置于7 0 9 C 5 m i n 后冰上骤冷， 短暂离心; 加人5 x b u ff e r 4 W L + R N a s

15、e 1 W L + d N T P s 2 W L + M - M L V 1 w L ， 置于4 2 9 C 6 0 m i n ; 再9 4 9 0 5 m i n ， 冰上骤冷， - 2 0 保存或P C R扩增。 1 .6 .4 P C P , 扩增 引物名称 S A MD C F R G A P D H F R 引物序列扩增片段度 5 - e c t t c g t a c c a t c c c a a g a t - 3 5 - a c a a t a t e e t g c t c c g t t t g - 3 5 - a c c a c a g t c c a t g e

16、e a tc a c - 3 5 - t c e a c e a c c c t g t t g c tg to - 3 3 5 2 饰 4 5 3 如 )9 5 9 C I m i n - + 5 3 C 1 m i n - + 7 2 9 C 2 m i n ; 3 4 循环 7 2 9 C 1 0 m i n -4 9 C 1 .6 .5 产物检测配制 1 . 5 %琼脂糖凝胶 ( 含 0 .5 w g / m L 澳乙 锭) ， 取5 W L 扩 增产 物 加6 x 载 样 缓 冲液1 W L 混合后加样， 使用0 .5 x T B E电泳缓冲液 进行电泳， 电泳电压为7 0 V ，

17、时间 1 h ， 在紫外灯下 观察扩增结果。 1 . 6 .6 电泳结果测定及测量 在扩增系统中，内 参 照G A P D H m R N A扩增成功即表示实验过程中总 R N A提取、 逆转录及P C R成功。定量结果时， 将电 泳后图片在J e l D o c - 2 0 0 0 计算机图像处理系统上用 Q u a n t i t y O n e 软件分析计算产物光带的吸光度， 计 算出 其O D 值， 取P e a k O D 值进行分析比 较。 1 . 7 统计学处理 本实验中测得数据用均数土 标准差 ( z 士 : ) 表 示。 应用统计软件S P S S 1 0 .0 进行统计分析

18、， 组间的 比 较采用单因素方差分析，当P 0 .0 5 时认为差异 有显著性。 2 结果 2 . 1 模型的复制 所有置人栓塞线的动物均在置线2 h 后出现左 前肢瘫痪的动物临床表现为牵尾时实验动物作同向 圆 周运动， 认为栓塞成功， 大脑中 动脉栓塞成功率为 1 0 0 % . 1 7 只实验动物在置栓塞线前因麻醉和失血 原因而死亡， 死亡率约为3 0 % . 2 . 2 S A M D C - m R N A的表达 2 .2 . 1 对照组大鼠皮质及皮质下均未检测出 S A M D C - m R N A表达。 实验组M C A 栓塞侧大鼠 皮质 及皮质下中均检测出有S A M D C

19、- m R N A的表达， 见 表 1 。且其表达呈双相， 再灌流4 h 表达明 显增高， 再灌流8 h 回 落， 于再灌流2 4 h 又增高且达到峰值， 与再灌流4 h有差异( P 0 .0 1 ) 。 表1 实验组大鼠同侧皮质、 皮质下S A M D C - m R N A 表达的比较 P C R 扩增体系: 双蒸水1 2 .5 W L ( 或1 4 .5 p , L ) + 1 0 x b u ff e r ( P C R缓冲液， M g f r e e ) 2 .5 W L + M g ( M 邪1 ) 2 .5 W L + d N T P 1 W L +目 的引物S A M D C

20、( 或 内 参照引 物G A P D H ) 2 W L x 2( 或1 W L x 2 ) + T a q 酶 0 .5 W L + 逆转录产物( e D N A ) 2 W L ， 共2 5 W L ( 另加 2 0 W L 矿 物 油 覆 盖) 。 P C R反应条件 ( 工 )9 5 9 C ， 5 m i n 实验组同侧 缺血 2 h 再灌流2 h 再灌流4 h 再灌流8 h 再灌流 2 4 h 例数( 只)P e a k O D值 8 6 . 2 7土0 . 8 6 1 0 5 . 3 8士0 . 7 7 1 2 3 . 3 1 t 0 . 9 7 9 4 . 8 1 士0 . 4

21、 6 1 4 4 .4 1 t 1 . 2 6 2 .2 .2 栓塞对侧脑皮质及皮质下在缺血及再灌流2 h 均未检测出有S A M D C - m R N A的表达， 见表2 。再 1 4 8 7 中国现代医学杂志第 1 5 卷 灌流4 h 才有表达， 再灌流8 h 达到峰值， 2 4 h 表达 又回落。 衰 2实难组大鼠 对侧皮质、 皮质下S A M D C - m R N A 表达的比较 实验组对侧例数( 只)P e a k O D 值 缺血 2 h 8 0 再灌流2 h 再灌流4 h 再灌流s h 再灌流 2 4 h 0 9 4 . 5 6土 1 2 9 . 4 5士 0 . 7 1 1

22、 . 1 3 1 0 9 . 3 6:t 0 . 9 4 2 .2 .3 实验组大鼠同侧皮质及皮质下均检测出 S A M D C的表达， 且于缺血时， 再灌流2 , 4 , 8 和2 4 h 的 表达与对照组相比 差异均有显著性 ( P 0 .0 1 ) . 表明S A M D C 在缺血期即有表达， 再灌流后的表达 逐渐增高， 于再灌流4 h 有一个峰值， 再灌流8 h 后 其表达又回落， 再灌流2 4 h 表达又达到峰值， 且明 显高于再灌流4 h 峰值( P 0 .0 1 ) ， 见图t o 160140120咖50印如加。 名 月 缺血2 h再灌2 h再灌4 h再灌8 h再灌2 4 h

23、 图1 实验组大鼠同 侧皮层、 皮层下组织S A M D C - m R N A 表 达的比较 2 .2 .4 实验组大鼠 对侧脑皮质及皮质下中在缺血及 再灌流2 h 均未检测出有表达， 再灌流4 h 才有表 达， 再灌流8 h 达到峰值， 2 4 h 表达又回落， 与再灌 流4 h 有差异( P 0 . 0 1 ) ， 见图2 , 100806040200 缺血2 h 再 灌2 h再 灌4 h 再灌8 h 再灌2 4 h 图2实验组对侧皮层、 皮层下组织S A M D C - m R N A表达 的比较 3 讨论 脑血管病是一种常见病， 多发病， 分布广， 致残 率高， 发病率近来有上升的

24、趋势， 其中缺血性脑卒中 占 大多数，因此以动物脑缺血模型模拟人类局灶性 脑缺血就更具有临床意义。 3 . 1 实验动物模型 本实验采用标准重量的S D 大鼠， 在C O N N O L - L Y线栓法基础上再行改良， 即不用牵拉的方法阻断 C C A及I C A中的血流， 而是用微动脉瘤夹夹闭E C A 的C C A 起始部， 用3 - 0 的尼龙线插人E C A 后即用 丝线结扎E C A近端并同 时移除该部位的动脉夹， 造 成M C A缺血2 h 后， 抽出栓塞线。因 本模型未造成 C C A和I C A的短暂闭塞而引起缺血预处理对实验 结果的 影响， 因此实验结果更可靠， 更接近人类

25、脑缺 血情况(2 1 0 3 . 2 多胺与S A MD C 多胺的生物合成始于鸟氨酸( o m i t h i n e ) 在鸟氨 酸脱竣酶 ( O D C ) 的催化下， 脱淡生成腐胺(p u - t r e s c in e ) 。在此反应过程中S 一 腺昔甲硫氨酸 (S - A d e n o s y lm e t h i o n in e , S A M ) 在S 一 腺昔甲 硫氨酸 脱 梭酶( S A M D C ) 的作用生成脱竣的S 一甲硫腺甘氨 酸 ( d e c a r b o x y l a t e d S - a d e n o s y l m e t h i o i

26、n e , d c - S A M ) 。 腐 胺在精眯合成酶和精胺合成酶作用下， 进一步生成 精眯( s p e r m i d i n e ) 和 精胺( s p e r m i n e ) , d c S A M在此过程 中 为 精 眯 和 精 胺 的 合 成 提 供 氨 丙 基 (- C H 2 C H 2 C H 2 N H 2 ) 。 鸟 氨 酸 是 多 胺生 物 合 成的 前 体 物质， 腐胺、 精眯与精胺是多胺生物合成途径的 产 物。多胺代谢过程中涉及了4 个限速酶，即O D C , S A M D C , S S A T 和P A O . S A M D C 是多胺脱竣反应的

27、 第二个限速酶， 生物学特征与O D C 相类似， 两者与 脑缺血再灌流性栓塞关系密切o ， 本实验旨在研究 S A M D C 在脑缺血过程中 的作用， 以 期为临床治疗脑 缺血性损伤提供新的 研究途径。 在哺乳动物细胞中 ， 腐胺是S A M D C的特异性激 活剂 , S A M D C催化 S A M进行脱梭反应生成 d c - S A M ， 它是腐胺转化成精眯( 精眯合成酶催化) 及精眯转化成精胺( 精胺合成酶催化) 过程中的氨 丙基基团的供体。S A M D C 在真核生物中先合成3 8 K D a 的无生物学活性的原酶， 原酶自 发催化裂解形 成具有酶活性的7 .7 k D a

28、 (3 小亚单位和3 0 .6 k D a a 大亚单位，同时通过丝氨酸裂解在大亚单位的N - 端形成 丙 酮 酸 辅 基。 哺 乳动物的S A M D C 是由a 2 0 2 亚单位组成， 可能有两个催化中心， 这两种亚单位是 保持酶活性所必需的， 而且酶在哺乳动物种系中 具 有高度的 保守性。 M O R R I S O N等发现S A M D C 在人 脑皮质中 具有最高活性， 其次为小脑、 丘脑、 岛叶和 纹状体， 而在脑白 质和丘脑背内 侧核活性最低。 多胺主要通过两种机制调节S A M D C的活性: 直接激活S A M D C 成熟酶的活性 ( 异构调节或/ 和 1 4 8 8

29、第 1 0 期姜 冰， 等: 大鼠 局灶性脑缺血再灌流后S A M D C的 表达及意义 静电效应) ; 加速S A M D C 裂解成有活性的亚单位成 熟酶口 .4 1 0 3 . 3 S A M D C与脑缺血 实验表明脑缺血再灌流可导致O D C活性增 长， 研究已表明O D C 活性的变化和血管源性脑水肿 的 变化时 相一致5 .6 1 。 然而最近的 研究发现腐胺高锋 形成的原因有: 缺血再灌流后O D C 活性及其基因表 达的增加， 有研究表明 脑缺血时O D C 活性的变化呈 双相性， 是在转录水平上调节的结果叭O D C 活性的 增加同时， S A M D C 活性受到抑制，

30、这可被O D C 不 可逆性抑制剂D M F O能明显增加 S A M D C的活性 所证实叭缺血再灌流后P A O和S S A T 活性的增加， 腐胺循环的激活， 可引起大量的 毒性产物3 - a m i n o - p r o p a n a l 及过氧化氢产生。 P A S C H E N 等证实在用巴 比妥治疗大鼠脑缺血再灌流后， 海马C A I 区中腐胺 水平和O D C 活性并不一致， 这可能和多胺代谢第二 个限速性脱玫酶S A M D C 活性受到抑制有关。他们 还发现可逆性脑缺血时缺血区细胞蛋白 质生物合成 受到明显抑制， 包括S A M D C 蛋白的合成， 而O D C 蛋

31、白的合成却增加。S H I R A H A T A和 P E G G对 S A M D C 抑制剂的研究证实了 细胞内 精眯的消耗是 D F M O 通过剥夺S A M D C 的活性位点而不是通过蛋 白底物的破坏来实现的。K A M E J I 和P E G G在研究 多胺和O D C / S A M D C 相互关系时发现外源性应用 精眯或精胺能显著抑制S A M D C的生物合成;而小 剂量外源性应用多胺却能增加O D C 的生物合成， 且 证明其机制是从基因水平上增加O D C - m R N A的转 录。同时还发现腐胺对S A M D C 前体的生物合成没 有影响， 但能加速其转化为

32、有生物活性的亚单位成 熟酶， 精眯、 精胺、 甲 硫腺甘酸、 脱竣的甲硫腺甘酸、 M G B G ( S A M D C 竞争性抑制剂) 都不能替代这种作 用气 本实验结果表明， 栓塞侧皮质及皮质下在缺血 期S A M D C - m R N A 的 表达即 开 始 增高， 但程度不明 显。 再灌流2 h 时的表达也没有明显变化， 当缺血再 灌流4 h 时其表达明显增高， 随后再降低， 但高于再 灌流2 h ， 于再灌流2 4 h 后其表达达到峰值， 而根据 以前的研究此时O D C 活性已 恢复至正常， 这证明了 S A M D C 活性变化的时相也呈双相性， 且与O D C 活 性变化的时

33、相呈反相平行关系 ” 0 1。同样P A S C H E N 等也证实在大鼠5 m i n 全脑缺血再灌流模型中发现 腐胺水平于再灌流2 4 h 后， 达到最高峰， 此时O D C 活性已降至对照组水平切 。本实验发现局灶性脑缺 血再 灌流2 4 h 后， S A M D C - m R N A 水平达到 最高峰， 可能与腐胺的高峰形成及O D C活性恢复至正常相 关。 参考文献: 1 张 璐，综述. 多 胺及其生 物分子的 相互作用 J . 国 外医 学生理、 病 理学 与 临 床 分 册， 1 9 9 7 , 1 7 ( 1 ) :5 6 - 5 8 . 1 Z H A N G L . T

34、 h e i n t e r a c t i o n o f p o l y a m i n e s a n d t h e i r b i o l o g i c a l m o l e c u l e s田. G u o w a i Y i x u e S h e n g li B i n g l i x u e y u L i n c h u a n g F e n c e , 1 9 9 7 , 1 7 ( 1 ) : 5 6 - 5 8 . C h i n e s e 2 S A N D E R C O N N O L L Y J R , R O B E R T A , C H R

35、I S T O P H E R J , e t a l . P r o c e d u r a l a n d S t r a i n - re l a t e d V a r i a b l e s S i g n if i c a n tl y A ff e c t O u t - c o m e i n a M u r i n e M o d e l o f F o c a l C e r e b r a l I s c h e m i a 田 . N e u r o - s u r g e ry , 1 9 9 6 , 3 8 ( 3 ) : 5 2 3 - 5 3 0 . 3 K A

36、 M E J I T , P E G G A E . E ff e c t o f p u tr e s c i n e o n t h e s y n t h e s i s o f S - a d e n o s y l m e t h i o n i n e d e c a r b o x y l a s e 切. B i o c h e m J , 1 9 8 7 , 2 4 3 ( 1 ) : 2 8 5 - 2 8 8 . 4 S T A N L E Y A , S H A N T Z A , P E G G A E . E x p re s s i o n o f m a m m

37、 a li a n S - a d e n o s y l m e t h i o n i n e d e c a r b o x y l a s e i n E s c h e r i c h i a c o li . D e t e r m i - n a t i o n o f s i t e s f o r p u tr e s c i n e a c t i v a t i o n o f a c ti v i t y a n d p ro c e s s 吨 团. J B i o l C h e m 1 9 9 4 , 2 6 9 ( 1 1 ) : 7 9 0 1 - 7 9 0

38、 7 . 5 Z H A N G H , Z H A N G D M , Z H A O D X , e t a l . E ff e c t s o f I G F - 1 o n a p o p t o s i s f o ll o w i n g ce r e b r a l i s c h e m i a a n d re p e r f u s i o n i n r a ts a n d i t s m e c h a n i s m 团. Z h o n g g u o X i a n d a i Y i x u e Z a z h i , 2 0 0 4 , 1 4 ( 1 8

39、 ) : 1 4 - 1 8 . C h i n e s e 网 L I N J I , L I D Q . P r o t e c t iv e e ff e c t o f L - t e t r a h y d r o p a l m a ti n e a - g a i n s t c e r e b r a l i s c h e m i a - re p e r f u s i o n i n j u r i e s i n r a t s a n d m i ce 田. Z h o n g g u o X i a n d a i Y i x u e Z a z h i , 2 0

40、 0 2 , 1 2 ( 1 8 ) : 4 8 - 5 0 . C h i n e s e 切 D I E N E L G A , C R U Z N F , R O S E N F E L D S J . T e m p o r a l p r o f il e s o f p r o te i n s re s p o n s i v e t o tr a n s ie n t i s c h e m i a 田. J N e u r o c h e m , 1 9 8 5 , 4 4 : 6 0 0 - 6 1 0 . 8 姜 冰 .沙土鼠 脑缺血时鸟氨酸 脱赦 酶活 性及多 胺的 变

41、化田 . 中国 现 代医 学 杂 志 ， 1 9 9 9 ,( 6 ) :6 2 - 6 3 . 8 J UN G B . T h e c h a n g e s o f p o l y a m i n e s a n d O D C f o ll o w i n g。 b r a l i s c h e m i a i n g e r b i l s 田. Z h o n g g u o X i a n d a i Y i x u e Z a z h i , 1 9 9 9 , 间: 6 2 -63 . C h i n e s e 9 P A S C H E N W , C S I B A

42、L , R O H N G , e t a l . P o l y a m i n e m e ta b o l i s m i n t r a n s i e n t f o c a l i s c h e m ia o f r a t b r a i n 田. B r a i n R e s , 1 9 9 1 , 5 6 6 ( 1 - 2 ) : 3 5 4 - 3 5 7 . 1 0 S H I R A H A T A A , P E G G A E . I n c r e a s e d c o n t e n t o f m R N A f o r p r e c u r s o r o f S - a d e n o s y l m e t h i o n i n e d e c a r b o x y l a s e i n r a t p r o s ta t e a ft e r t r e a t m e n t w i th 2 - d i fl u o m m e t h y l n i th i n e团.J B i o l C h e m , 1 9 8 6 , 2 6 1 ( 9 ) : 1 3 8 3 3 - 1 3 8 3 7 . ( 赵梓屹 编辑) 1 4 8 9