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1、大鼠直、 结肠炎C L S的镇痛作用及C O X 2与G F A P 在C N S表达的形态学观察 徐 虓1*,陈胜国1,甘子明1,阿地力江伊明1,陈 晓2, 陈 蓉3,古丽巴哈尔尼牙孜1,貟江利2 ( 新疆医科大学基础医学院1人体解剖教研室,2病理解剖学教研室,3切片中心,新疆 乌鲁木齐 8 3 0 0 5 4) 摘要:目的:研究化学性腰交感神经切除术(C L S) 对直结肠慢性刺激性炎症和扩张性伤害性刺激(C R D) 的中 枢保护作用, 为临床医学提供基础研究资料。方法:W i s t a r大鼠5 4只, 随机分为6组, 每组9只, 按二因素析因实 验设置实验组, 另外设立实验对照组和
2、空白对照组。利用直、 结肠慢性刺激性炎性致痛模型, 切除模型大鼠的腰交 感神经后, 运用机械扩张刺激观察大鼠行为变化。用M i a m p a m b a评分方法改良后疼痛四级评分标准评分, 重复3 次取均值记录结果。取间脑、 脑桥、 延髓、 颈段(C 58) 、 胸段(T36) 、 腰段(L13) 、 骶段(S24) 脊髓连续切片后, 延髓 和脊髓用C O X 2, 间脑、 脑桥用胶质纤维酸性蛋白(G F A P) 免疫组化染色, 显微镜下观察相应核团, 计数阳性细胞 数。结果:L S无论作为预防性手术还是治疗性手术均能使中枢内G F A P和C O X 2表达阳性的细胞数下降(P0. 0
3、5) 。一、 二、 三、 四级反射各组比较直结肠扩张刺激阈值与手术顺序无关而与手术有关(P0. 0 5) , 而手术后痛觉阈值明显上调(P0. 0 5). B y+ t o-r e f l e c t i o nc o m p a r i n g,t h ev i s - c e r o m o t o r t h r e s h o l d(VMT)d i d n t c o m b i n e dw i t ht h es e q u e n c eb u t t h eo p e r a t i o n i t s e l f(P0. 0 5).H o w e v e ro p e r
4、a t i o nc a np r o m o t e t h ev i s c e r o m o t o r t h r e s h o l d(VMT)(P0. 0 5) 。腰交感神经切除术对直结肠 慢性炎症刺激和C R D扩张伤害性刺激有一定的中 枢保护作用(P0. 0 5; 与.组相比,1P0. 0 5; 与,组比较,3P0. 0 5) , 即在 V P、N S T、L13手术于否与手术顺序无交互作用(P 0. 0 5) 。仅在MP BA因素和B因素间有交互作 用(PMP B的表达减少, 见表2。 表2 I$%组中枢神经系统C O X 2和G F A P表达阳性 细胞2因素方差分析结
5、果 因素均方差(M S) FP V P A12 9 64 6. 3 10. 0 0 01 B4 4 11 5. 7 60. 0 0 04 AB2 50. 8 90. 3 5 17 MP BA16 1 35 0. 7 60. 0 0 01 B7 2 02 2. 6 50. 0 0 01 AB4 2 01 3. 2 20. 0 0 10 N S TA1 5 61 3. 5 20. 0 0 09 B 10. 1 20. 7 3 37 AB 30. 2 90. 5 9 34 L1 - 3A7 51 6. 3 90. 0 0 03 B1 84. 1 00. 0 5 14 AB0. 10. 1 00. 7
6、 5 75 2. 3 直肠扩张阈值实验组间比较结果 一、 二、 三、 四级反射各组比较直结肠扩张刺激阈值与手术顺序 无关而与手术与否有关(P 0. 0 5) , 即假手术不影响痛觉阈值(P0. 0 5) , 而手 术后痛觉阈值明显上调(P0. 0 5, 其余各 组 间 比 较,P0. 0 5, 其余各组间比较,P 0. 0 5) 。 G F A P主要用于标记损伤后的胶质反应, 在正 常情况下G F A P受星形胶质细胞的动力调节 8。 损伤后增生的G F A P阳性星形胶质细胞能促进星 形胶质细胞有丝分裂, 使原始祖细胞分化到成熟的 星形胶质细胞。各种中枢神经系统损伤都可引起星 形胶质细胞反
7、应 9, 在病理性痛刺激下胶质细胞的 特异性标识物表达增加 1 0。常用而且特异性比较 高的物质是G F A P, 主要用于标记星形胶质细胞。 最新观点认为, 胶质细胞不再是中枢神经系统中的 一个静止不动的成分, 而是处于一个与神经元不断 进行信息交流的动态过程 1 1。星形胶质细胞在正 常神经活动中的功能是: ( 1) 谷氨酸(G l u) 和GA B A 代谢的关键部位; ( 2) 维持离子平衡; (3) 合成神经活 性物质; ( 4) 调节神经递质的释放 1 2。故神经胶质 细胞活跃的部位也是神经元活跃的部位这一观点被 广泛的采纳, 本实验也同时得出C R D刺激可诱导脑 内某些部位的G
8、 F A P表达, 同时反证C L S能有效的 保护中枢对伤害性刺激的反应。 本实验以直结肠慢性炎症性刺激的W i s t a r大 鼠为模型动物, 在此基础上加用直肠扩张C R D法检 测内脏痛反应阈值(VMT) , 采用6 - OHD A作为化 学毁损剂 1 3,1 4在腰交感神经旁注射, 以切除腰交感 神经为治疗性干预, 观察C L S对C R D所引起的 VMT的影响, 以及C L S的中枢保护作用。在中枢 神经系统内以C O X 2和G F A P为检测标志, 观察中 枢神经系统内阳性神经元的数量。 本研究的结果表明: 化学性腰交感神经切除术 能有效的阻止直结肠慢性炎症性刺激和C R
9、 D伤害 性刺激向中枢的传导,C L S无论作为预防性手术还 是治疗性手术, 均能保护中枢神经系统不受直结肠 慢性炎症刺激和C R D扩张伤害性刺激的影响。使 中枢内G F A P和C O X 2表达阳性的细胞数目明显 下调而以预先切除腰交感神经组为显著。同时还发 现在N S T、 C58中间带和T36中间带外侧核等部位 各组组间比较无差别, 故本研究认为上述部位不是 直结肠慢性炎症刺激和C R D扩张性伤害刺激上传 通路中的换元部位。G F A P阳性表达的细胞,-组 与/组在MP B和V P及-组与.组在V P比较差 异显著, 而在MP B无差异, 这一结果表明治疗性 C L S有一定的中
10、枢保护作用, 但不能使C N S恢复 到正常水平; 可能是由于慢性刺激引起的G F A P表 达来不及回复到正常水平的结果。在析因分析中仅 在MP B手术因素与手术时间顺序因素有交互作 用, 所以在MP B预防性切除的保护意义更为显著。 在其余的脑部手术的因素与手术顺序的因素无交互 作用, 故无论是预先手术还是造模后手术均能在一 定的程度上保护C N S, 阻断上传的伤害性刺激。 一、 二、 三、 四级反射各组比较, 直结肠扩张刺激阈值 与手术顺序无关而与手术与否有关。四级反射假手 术组之间, 以及与实验对照组之间差异无统计学意 义。由此得知假手术不影响痛觉阈值, 而手术后痛 觉阈值明显上调。
11、 本研究的意义在于: 阐明了化学性腰交感神经 切除术对中枢的贡献, 找到了直、 结肠伤害性扩张刺 激在中枢换元的部位。研究还显示治疗性切除和预 防性切除对中枢具有同样的保护作用, 为临床治疗 提供了参考思路。本研究证实, 在中枢L 13中间带 外侧核、N S T、MP B、V P是直结肠感觉的换元部 位, 交感神经是直结肠炎性刺激的感觉传入神经。 研究还发现C L S能提高直结肠对扩张刺激的阈值。 参考文献: 1 向勇, 杨光, 傅南安.交感神经系统在炎症痛中的作用J.国外 医学 麻醉学与复苏分册,2 0 0 3,2 4(2)7 3 - 7 5. 2 B a r o nR,J a n i gW
12、 . P a i ns y n d r o m e sw i t hc a u s a lp a r t i c i p a t i o n o f t h es y m p a t h e t i cn e r v o u s s y s t e mJ. A n a e s t h e s i s t,1 9 9 8,4 7 (1) :4 - 2 3. 3 疼痛基础研究的最新进展J.国外医学麻醉学与复苏分册, 2 0 0 0,2 1(1) :1 - 7. 4 姜敏,张义侠,傅宝玉,等.大鼠结肠对理化刺激的内脏神经 的敏感性J.世界华人消化杂志 ,2 0 0 2,1 0(1 1) :1 2 7
13、 8 - 1 2 8 1. 5 M i a m p a m b aM,C h e r y - C r o z eS,G o r r yF,e t a l . I n f l a mm a t i o n o f t h ec o l o n i cw a l l i n d u c e db y f o r m a l i na sam o d e l o f a c u t ev i s - c e r a lp a i nJ. P a i n,1 9 9 4,5 7(3). 1 0 2 2 - 1 0 2 9. 6 李震, 陈军.环氧合酶及其在病理性痛中的作用J.神经解剖 学杂志,2 0
14、0 3,1 9(1) :9 4 - 9 7. 7 W i l l i n g a l eHL,G a r d i n e rN J,M c L y m o n tN. P r o s t a n o i d ss y n - t h e s i z e db yc y c l o o x y g e n a s e i s o f o r m s i nr a t s p i n a l c o r da n d t h e i r c o n t r i b u t i o nt ot h ed e v e l o p m e n to fn e u r o n a lh y p e r e
15、 x c i t a b i l i t y J. B rJP h a r m a c o l,1 9 9 7,1 2 2:1 5 9 3 - 1 6 0 4. 8 D a yJR,L a p i n g N J,L a m p e r t - E t c h e l l s M,e ta l .G o n a d a l s t e r o i d s r e g u l a t e t h ee x p r e s s i o no f g l i a l f i b r i l l a r ya c i d i cp r o t e i n i nt h ea s u l tm a l
16、er a th i p p o c a m p u sJ. N e u r o s c i e n c e,1 9 9 3,5 5 (2) :4 3 5 - 4 4 3. 9 M a l h o t r aS,S h n i t k aT,E l a b r i n kJ . R e a c t i v e a s t r o c y t e s:Ar e - v i e wJ. C y t o b i o s,1 9 9 0,6 1(1) :1 3 3 - 1 6 0. 1 0 罗层, 陈军.胶质细胞在病理性痛中的作用J.神经解剖学杂 志,2 0 0 2,1 8(4) :3 6 6 - 3
17、6 9. 1 1 H a y d o nP G.G l i a:l i s t e n i n ga n dt a l k i n gt ot h es y n a p s eJ. N a t u r eN e u r o s c iR e v,2 0 0 1,2:1 8 5 - 1 9 3. 1 2 朱长庚, 丁文龙, 方秀斌, 等.神经解剖学J.北京: 人民卫生 出版社,2 0 0 0,1 2,4 0 0 - 4 0 6. 1 3 李康生, 董菁, 廖传红, 等.化学性交感神经切除对免疫功能的 影响J.免疫学杂志,1 9 9 7,1 3(1) :6 6. 1 4 夏锋, 何振平, 段恒春, 等.去交感神经状态对肝部分切除后肝 再生的影响J.第三军医大学学报,2 0 0 1,2 3(4) :4 1 6 - 4 1 8. 收稿日期:2 0 0 5 - 0 1 - 1 5 233 新疆医科大学学报 J OUR NA LO FX I N J I ANG ME D I C A LUN I V E R S I T Y 2 0 0 5A p r ., 2 8(4)