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1、张家口医学院学报2 0 0 3 年第2 0 卷 第3 期 大鼠脑缺血再灌注损伤的光、 电镜观察 陈晓春 张家口 医 学院第一附属医院 神经内 科 0 7 5 0 0 0 摘 要I 目 的: 观察大鼠 缺血再灌注脑组织的损害。方佳: 本实验利用Wi s t a r 大(M , 2 4 只， 随机分为正常对照组、 模型组， 每组1 2 只大鼠。模型组用动脉栓线法自右侧颈总动脉插入阻 塞拴线， 伸人大脑前动脉起始部制成局灶性脑缺血再灌注模型。梗塞1 . 5 h 后拔线再灌注， 再 灌往1 . 5 h 后断头取脑。分别制作光、 电镜切片。播果: 光镜观察: 模型组神经元细胞周围狭窄 状亮区较正常对照组
2、明显增宽( P0 . 0 1 ) 。电镜观察: 模型组与正常对照组相比核膜双层结 构极度模糊， 多处膜中断， 核内异染色质增多。线粒体呈气球样肿胀， 粗面内 质网几乎见不到。 星形胶质细胞水肿， 细胞器减少， 局部细胞膜结构不清。祛格: 本实验表明: 脑缺血再灌注大鼠 脑组织在光、 电 镜下有明 显的形态学改变。 【 关键词1 大鼠; 脑缺血; 观察 I 中图 分类号 R - 3 3 2 文献标识码】 B 文章编号 1 0 0 5 - 8 7 9 6 ( 2 0 0 3 ) 0 3 一 3 7 一 0 2 为了解大鼠缺血再灌注脑组织的损害， 本文对健自 制。 康W is l a : 大鼠进行正
3、常脑组织和脑缺血再灌后脑区1 . 3 实验方法 光、 电镜观察， 现报告如下:动物分组和预处理将Wi s t a r 实验用大鼠随机 1 材料和方法分为2 组， 每组1 2 只。 1 . 1 实验动物健康Wi s t a r 大鼠2 4只， 全部为雌正常对照组: 腹腔注射6 %水合氛醛( 4 -5 m l / k g ) 性， 体重2 7 0 1 1 7 g , 购自 中国医 科院实验动物繁殖场。麻醉后， 将大鼠 仰卧固定在大鼠固定板上， 颈前区剪 笼中混养， 供标准日 粮清洁的自 来水自由饮食， 大鼠 饮毛， 用2 %碘酒消毒手术野皮肤， 颈前正中切口3 c m , 料由本院动物中心提供，
4、日 照时间1 2 h , 室温2 5 士 3 1C ，钝性分离右侧颈总动脉及左侧颈外静脉， 由左颈外静 观察4 d , 随机分组后禁食1 2 h 用于实验。脉插管， 静注1 %肝素( 2 m l / k g ) , 3 h 后取脑检测或固 1 . 2 主要试剂、 仪器6 %水合抓醛 自配; 1 %肝素定。 自 配; 光 学显 微镜日 本; 电 镜J E N 1 0 0 - C X II日 本;模型 组: 参照K a iz u m is l “ 栓线法建立脑缺血再灌 动脉栓线( 直径 0 . 2 mm， 头端在解剖镜下灼成球体)注动物模型， 具体操作步骤如下: 时， 可用自 攻自 断螺纹钉固位，
5、 注意螺纹钉应在牙本质 内 距釉牙本质界至少。 . 5 m m ， 同时避免侧穿、 穿 髓。 3 . 4 死髓牙缺损大时， 可加用根管桩固位， 根管桩达 根长的2 / 3 ， 用水门汀粘固， 根管弯曲细小时， 可用直 径。7 m m的钢丝弯制支架， 支架的两个槽角置于髓底 倒凹处， 无明显 倒凹时可用倒锥钻在髓腔内制备一倒 凹， 用水门汀粘固( 应注意水门汀不可过稠) 然后用银 汞合金充填， 钢丝支架顶端至少距咬合面2 m m ， 保证 银汞合金的空间 3 5 S o r e s o n l z l 的研究表明， 冠内压力不能明显 提高 抗折力， 而后牙作冠极盖( 高嵌体、 全冠) 则能明显提
6、高 抗折度， 牙冠缺块过大( 如超过牙面的1 / 2 一 2 / 3 ) 时， 要考虑用不锈钢冠套修复。 参考文献 1 B r a y B V P o t e n t ia l f o r t o o t h f r a ct u r e in r e s t o r a t iv e P r o s t h e t D e n t , 1 9 8 1 ; 4 5 ; 4 4 1 2 S o r e n s o n J A , I n t r a c o ron a l r e i n f o r ceme n t a n d o o ron a l P t o s h e t D e n t
7、 . 1 9 8 4 ; 5 1 : 7 8 0 d e n t i s t r y J c o v e r a g e . J 万方数据 2 0 0 3 年第2 0卷第3 期张家口医学院学报 ( 1 ) 动物麻醉方法同上。将大鼠仰卧固定在大鼠固定 板L ， 颈前区剪毛， 用2 % 碘酒消毒手术野皮肤， 颈前 正中纵行切口约2 一3 c m, 钝性分离血管周围组织， 如 有出血点行电凝或结扎止血。( 2 ) 分离左侧颈外静脉. 在静脉分叉处向上约0 . 5 一) C M结凡 远心端， 向心端插 人静脉， 并用丝线结扎， 静注1 %肝素( 2 m l / k g ) , ( 3 ) 右侧颈总动脉
8、位于气管旁胸锁乳突肌的下后方， 找到 该动脉后分离与其伴行的静脉及迷走神经， 直至暴露 颈外动脉及颈内 动脉， 电凝颈外动脉分支， 在其远端3 - 5 m m双线结扎， 从中间剪断， 用动脉夹暂时夹闭颈 总动脉及颈内动脉， 然后在颈外动脉近心端剪口插人 动脉栓线1 8 1 0 . 5 m m ( 该线预先用1 % 肝素浸泡) 。松 开颈内动脉夹， 栓线经颈外动脉游离进人颈内动脉、 大 脑中动脉起始端至大脑前动脉近端， 阻断了大脑中动 脉所有的血 流来源， 扎紧栓线根部外留1 . 5 c m长线头， 松开颈总动脉， 缝合皮肤， 记录阻断血流时间。本实验 动物模型缺血 1 . 5 h , 然后拔出
9、栓线再灌注 1 . 5 h , 取脑 固定。 1 . 4 光、 电 镜样品制备 1 . 4 . 1 将大鼠断头取脑， 迅速剥离脑组织0 . 0 1 MP B S冲 洗干 净， 为充分观察尾壳核和新皮质等部位的缺 血再灌注反应， 取过视交叉和脚间窝两个冠状切面间 分别取脑皮质和尾壳核制成光、 电镜标本。 1 . 4 . 2 光镜标本: 1 0 %中性甲醛固定2 4 h , 酒精梯度 脱水， 二甲苯透明， 石蜡包埋， 制成5 u m石蜡切片。常 规H E染色和T o l u i d i n e b l u e 染色法染色。 1 . 4 . 3 电镜标本: 2 . 5 %戊二醛固定4 h , 0 .
10、 0 1 M P B S 冲洗5 3 , 1 %饿酸后固定1 . 5 h , P B S 冲洗 5 x 3 ， 丙酮 梯 度脱水， E P O N 8 1 2 浸透及包埋， 常规制作超薄切片 铀一铅染色， 电镜下观察。 15 统计分析方法资料采用完全随机设计的方差 分析方法， 均数间的两两比较采用新复极差法， 简称 D u n c a n 新法 2 结果 2 . 1 大鼠 脑组织梗塞区 观察 取材时先切成冠状脑 片， 肉眼可见大脑中动脉供血区颜色变浅呈灰白色， 该 区 包括右侧顶、 额叶皮质及尾壳核。 2 . 2 光镜观察经石蜡切片HE 和尼氏染色， 可见正 常大鼠 脑组织内神经元轮廓清晰，
11、多呈锥形、 星形、 梭 形。 细胞周围有狭带状亮区 ， 平均宽度为2 . 6 3 士 0 . 4 2 p m ， 细胞核大而圆， 着色较浅， 位于细胞中央。 偶见 嗜酸性核仁。H E染色胞质弱嗜酸性。尼氏染色后胞 质内有多少不等的蓝色颗粒尾壳核神经元多呈星 形， 胞体较小， 核圆、 位于细胞中央， 其它结构与皮质无 异。模型组神经元轮廓模糊， 胞体着色变深， 胞核小、 胞质分界不清。细胞周围亮Ix 变宽平均 5 . 了 9十 。 5 2 0 m与 正常对照组有明显著差异 p ( ) . 0 1 ) ， 尼氏 染 色时， 胞质内蓝色颗粒减少或质膜消失颗粒外溢。 2 . 3 电镜下观察神经元的变化
12、; 大鼠脑组织内正常 神经元有明、 暗两种类型， 明者整个细胞电子密度低， 其细胞核大而圆、 异染色质少， 呈细沙粒状， 分散在核 内， 核仁大呈网状， 电子密度高。双层核膜有清晰的核 周隙其宽度均匀而明显。胞质内有核搪体、 内质网、 高 尔基氏体和线粒体。线粒体呈圆或卵圆形， 峪较多而 明显， 基质中等电子密度无水肿表现。暗细胞电子密 度较高， 核不规则呈高电 子密度， 核膜不清晰， 核仁明 显， 胞质内有较多的线粒体和板层状内质网。另外， 电 镜下可见有许多神经元突起的横切、 纵切、 或斜切面， 其中杂有明显的化学性突触结构。 模型组神经元变形， 明暗神经元不易区分， 胞核变 形 表面呈锯
13、齿状， 核内异染色质增多、 电子密度增高， 核膜及 核周隙模糊不清， 局部核质分界不清， 核仁呈均 一电子密度， 网状结构消失。细胞器减少或变形， 结构 不清。线粒体呈气球样肿胀、 蜻减少或消失， 粗面内质 网几乎见不到。质膜结构不清或消失断裂。细胞周围 有大量水肿液呈低电子密度亮区。 3 讨论 据报道， 脑动脉梗塞一定时间后， 解除梗塞物使缺 血区再灌注是模拟临床梗塞病人扩血管溶栓后病理变 化的较好方法。本实验制作脑组织局部缺血再灌注模 型， 技术难度显然较大， 但损伤区域明显， 定位准确， 通 过对缺血再灌注区脑组织细胞周围狭窄带状亮区宽度 测量和细胞形态结构的光、 电镜观察， 证实了脑梗
14、塞后 再灌注损伤的存在。 参考文献 1 I . o n g a E Z , We i n e s t e in P R , C a r ls o n S , C u m m i n s R . R e v e rs i b l e m i d d l e c e r e b r a l a rt e r y =I u s io n w i t b o u t tt a n i e c t o m y i n r a t s . S t rok e , 1 9 8 9 : 2 0 : 8 4 2 陈康宁， 黄为伟 蛋白 激膝C 抑制剂 对脑缺血大风突 触休游 离 钙的影响. 国外医学: 内 科学分册, 1 9 9 6 ; 2 3 ( 4 ) : 1 6 4 万方数据