大鼠肝癌细胞与I型胶原的黏附特性及其与细胞周期的关系.pdf

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1、大鼠肝癌细胞与 I 型胶原的黏附 特性及其与细胞周期的关系* 宋关斌1 , 2 秦建1严润彬1申晓东1 罗庆1蔡绍皙1孙才新2 1 (重庆大学 生物工程学院 生物力学及组织工程教育部重点实验室,重庆4 0 0 0 4 4 ) 2 (重庆大学 电气工程学院 高电压及电工新技术教育部重点实验室,重庆4 0 0 0 4 4 ) 摘要肿瘤细胞和胞外基质之间的黏附特性与肿瘤的侵袭转移有密切关系。作者从细胞周期的角度,采用微 管吸吮技术和细胞同步技术研究了不同细胞周期肝癌细胞与I型胶原裱衬表面的黏附力学特性。结果表明:胸腺 嘧啶脱氧核苷、秋水仙碱顺序阻断和胸腺嘧啶脱氧核苷双阻断后释放培养的方法可分别获得G

2、1期和S期肝癌细 胞,平均同步率分别为7 4 . 0 9 %和9 0 . 3 9 %;在研究剂量和时间范围内,肝癌细胞与I型胶原的黏附力具有浓度和时 间依赖性; S期肝癌细胞和I型胶原的黏附力值与G1期和未同步组(对照组)相应值比较明显降低。结果提示:肝癌 细胞经血道转移的侵蚀细胞间质阶段, G1期细胞可能起更重要的作用。这一研究对全面认识肝癌的转移机理有重 要意义。 关键词肝肿瘤细胞周期 型胶原 黏附微管吸吮技术 Me c h a n i c a l P r o p e r t i e s o f R a t HC CA d h e s i o nt oC o l l a g e nI a

3、n dI t s R e l a t i o n s h i pw i t hC e l l C y c l e S o n gG u a n b i n 1 , 2 Q i nJ i a n 1 Y a nR u n b i n 1 S h e nX i a o d o n g 1 L u oQ i n g 1 C a i S h a o x i 1 S u nC a i x i n 2 1 ( Ke yL a b o r a t o r yo fB i o me c h a n i c s a n dT i s s u e E n g i n e e r i n go ft h e S t

4、 a t e Mi n i s t r yo fE d u c a t i o n , C o l l e g e o fB i o e n g i n e e r i n g ,C h o n g q i n gUn i v e r s i t y ,C h o n g q i n g 4 0 0 0 4 4 , C h i n a ) 2 ( Ke yL a b o r a t o r yo fHi g hV o l t a g e a n dE l e c t r i c a l Ne wT e c h n i q u e s o ft h e S t a t e Mi n i s t

5、r yo fE d u c a t i o n , C o l l e g e o fE l e c t r i c E n g i n e e r i n g ,C h o n g q i n gUn i v e r s i t y ,C h o n g q i n g 4 0 0 0 4 4 , C h i n a ) A b s t r a c t T h eme c h a n i c a l p r o p e r t i e s o f t u mo r c e l l s a d h e r i n gt oe x t r a c e l l u l a r ma t r i x

6、 ( E C M)a r ec l o s e l yr e l a t e d wi t ht h e i ri n v a s i o na n dme t a s t e s i s .I nt h i ss t u d ywei n v e s t i g a t e dt h ea d h e s i v eme c h a n i c a lp r o p e r t i e sb e t we e n h e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o mac e l l s ( HC C )a n dt h ec o l l a g e nI c

7、o a t e ds u r f a c e s f r o mt h ev i e wp o i n t o f c e l l c y c l eb yc o u p l i n g c e l l u l a rb i o l o g ya n dc e l l u l a rme c h a n i c s ,u s i n gmi c r o p i p e t t ea s p i r a t i o na n dc e l ls y n c h r o n i z a t i o nt e c h n i q u e .T h e r e s u l t ss h o we dt

8、 h a t t h es y n c h r o n o u sG1a n dSp h a s eHC Cc e l l s we r ea c h i e v e db yu s eo f t h y mi n e - 2 - d e s o r y r i b o s i d e , c o l c h i c i n e ss e q u e n t i a lb l o c k a g eme t h o d a n d d o u b l et h y mi n e - 2 - d e s o r y r i b o s i d eb l o c k a g eme t h o d

9、 ,a n d t h a tt h e s y n c h r o n o u sr a t e so f G1a n dSp h a s eHC Ca mo u n t e dt o7 4 . 0 9 % a n d9 0 . 3 9 % r e s p e c t i v e l y .Wi t h i nt h er a n g e so f d o s i n ga n dt i mi n gi nt h i ss t u d y ,t h ea d h e s i o no fHC C c e l l st oc o l l a g e nId i s p l a y e dd o

10、 s ed e p e n d e n ta n dt i me d e p e n d e n tp a t t e r n s .Sp h a s ec e l l sh a ds ma l lf o r c eo fa d h e s i o nt oc o l l a g e nIa sc o mp a r e dwi t hG1p h a s ea n d c o n t r o l l e dc e l l s ( P0 . 0 0 1 ) ,wh i c hs u g g e s t e dt h a t G1p h a s e HC Cma yp l a ya ni mp o

11、r t a n t r o l e i nt h e s t e po f i n v a d i n g i n t e r s t i t i a l c o n n e c t i v et i s s u ei nt h eme t a s t a s i sp a t h wa yo f HC Ct h r o u g hb l o o dc i r c u l a t i o n .T h e s ea r eo f s i g n i f i c a n c e t ou n v e i l i n gt h eme c h a n i s m o f HC Cme t a s

12、t a s i s . Ke yw o r d s L i v e r n e o p l a s msC e l l c y c l eC o l l a g e nIAd h e s i o nMi c r o p i p e t t ea s p i r a t i o nt e c h n i q u e *国家自然科学基金资助项目( 1 9 9 7 2 0 7 7a n d1 0 3 7 2 1 2 1 ) ,中国博士后科学基金资助项目( 2 0 0 4 0 3 5 0 1 5 5 ) 通讯作者。E - ma i l : s o n g 9 9 7 3 t o m. c o m 生物

13、医学工程学杂志 JB i o me dE n g = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 2 0 0 6 ; 2 3 ( 2 ) :3 1 3 3 1 7 1 前言 肿瘤作为一种周期失控的恶性疾病,严重地危 害人类健康,其恶性表现之一就是它的侵袭转移性, 这是引起肿瘤晚期恶化,导致死亡的直接原因 1 。无 论对临床医学或是基础理论来说,研究并阐明肿瘤 细胞侵袭和转移的机制都

14、是头等重大的课题。恶性 肿瘤常见的转移途径主要有淋巴道转移、血道转移 和种植性转移,肿瘤经血道转移通常需经历浸润性 生长侵蚀基底膜穿透内皮细胞血道运输靶 器官微血管附着穿出内皮及在靶组织形成转移灶 等,这是一个十分复杂的多阶段连续过程,其间存在 着复杂的细胞生物学和细胞流变学机制 2 。 原发 性 肝 癌( He p a t o c e l l u l a rc a r c i n o mac e l l s , HC C ) 是世界上十大常见癌症之一,自2 0世纪9 0年 代以来其发病率已上升为恶性肿瘤的第二位。近年 来尽管肝癌的诊断、治疗取得了较大进展,但关于肝 癌细胞的侵袭转移机制至今尚

15、未完全阐明。肝癌细 胞与胞外基质的黏附特性和肝癌的侵袭转移密切相 关,胶原蛋白I ( c o l l a g e nI )是肝脏D i s s e间隙主要成 分之一,也是肝癌细胞侵袭转移过程中必须穿过的 重要屏障 3 。本文将细胞力学和细胞生物学有机结 合,应 用 先 进 的 微 管 吸 吮 技 术( Mi c r o p i p e t t e a s p i r a t i o nt e c h n i q u e )从细胞周期的角度研究肝癌 细胞与I型胶原裱衬表面的黏附力学特征及其与细 胞周期的关系,为全面认识肝癌的转移机理提供定 量的细胞力学依据。 2 材料和方法 2 . 1 细胞培养

16、 大鼠肝癌细胞株( C B R H- 7 9 1 9 )购于中国科学 院上海细胞生物学研究所,在本院细胞培养室以 R P MI - 1 6 4 0 +1 0 %小牛血清( Hy c l o n e公司)按常规 方法传代培养。 2 . 2 肝癌细胞的同步化及检测 4 , 5 G1期细胞采取胸腺嘧啶脱氧核苷(重庆化学试 剂公司)和秋水仙碱( S e r v a公司)顺序阻断后释放 培养的方法获得, S期肝癌细胞采用胸腺嘧啶脱氧 核苷双阻断后释放培养获得。将同步后收集固定的 细胞分别以p H7 . 4P B S液清洗,碘化丙啶( P r o p i d - l u m I o d i d e ,P

17、I )染色3 0mi n ,根据周期时相细胞 D NA含量不同, 利用流式细胞仪(美国B D公司)检 测,进行细胞周期分析。 2 . 3 C h a mb e r玻璃底面的裱衬 自制以玻璃为底面的C h a mb e r (圆形小室) 。按 文献 6 的方法对 C h a mb e r底面进行裱衬: 先用2 g / ml 多聚赖氨酸( P D L , S i g ma公司)裱衬,用于桥 接胶原蛋白I与底面,在此基础上将不同浓度胶原 蛋白I ( S i g ma公司)裱衬 C h a mb e r底面, 最后用牛 血 清 白 蛋 白( B S A,华 美 公 司)裱 衬,裱 衬 好 的 C h

18、a mb e r置4 冰箱中保存备用( 2 4h内使用) 。 2 . 4 肝癌细胞与C o l l a g e nI黏附力测量 采 用 微 管 吸 吮 实 验 技 术 7 ,在 裱 衬 好 的 C h a mb e r中加入适量的C B R H- 7 9 1 9肝癌细胞,相 互作用3 0mi n后开始实验:在显微镜下确定待测细 胞后,调节压力系统使压力为零(零压状态) ,控制显 微 操作手将微管管口轻轻接触到待测细胞(见图 1 a ) ,通过压力控制系统对微管施加一阶跃负压 ( P ) ,细胞会发生变形而有小部份细胞膜被吸入微 管(见图1 b ) ,通过显微操作手缓慢水平拉动微管 (见图1 c

19、 ) ,调节负压的大小,直至将待测肝癌细胞 从黏附的C h a mb e r底面上刚好拉脱为止(见图1 d ) , 此时的负压值即为将待测细胞拉掉的临界压力值。 图1微管技术测量细胞与细胞/基质黏附力的模式图 ( a ) ( d )表示利用微管测量细胞黏附力的过程 F i g1 As c h e ma t i cd r a w i n go fa d h e s i o no faHC Ct oc e l l o rma t r i x d e t e r mi n e dw i t hami c r o p i p e t t e ( a ) - ( d )e x p r e s st h

20、eme a s u r i n gp r o c e s so f a d h e s i o nf o r c eo f HC Ct o HUVE Cwi t hmi c r o p i p e t t et e c h n i q u e 2 . 5 黏附力的计算及数据处理 定义肝癌细胞与胞外基质间黏附力( F )的计算 公式为 8 : F = R 2 P P c o s 式 中: R P为微管内半径( 本实验中微管内半径在 413 生 物 医 学 工 程 学 杂 志第2 3 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = =

21、 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 卷 2 . 5 3 . 0 m之间) ; P为吸吮负压; 为微管与平 面夹角。在实验过程中,控制微管与水平面的夹角 在1 0 左右,则 c o s c o s 1 0 =0 . 9 8 5 1 ,这样黏附 力F的计算公式可简化为: F = R 2 P P 各组细胞黏附力值以x - s表示, 进行两样本均 值的t检验。 3 结果 3 . 1 大鼠肝癌细胞( C B R H- 7 9 1 9 )的同步化 经流式细胞仪检测,未同步处理的C B R H-

22、 7 9 1 9 肝癌细胞组(对照组)各周期时相的百分比为G o/ G1 期4 0 . 0 7 %、 G2/ M期2 2 . 7 6 %、 S期3 7 . 1 8 %,采用 胸腺嘧啶脱氧核苷、秋水仙碱顺序阻断和胸腺嘧啶 脱氧核苷双阻断后释放培养的方法同步肝癌细胞, G1期和S期平均同步率分别为7 4 . 0 9 %和9 8 . 2 9 % ( 见表1 ) ,表明应用胸腺嘧啶脱氧核苷和秋水仙碱 能较好地将肝癌细胞同步于G1期和S期,可满足后 续微管实验的要求。 表1肝癌细胞的同步结果 T a b l e1 T h es y n c h r o n o u s r e s u l t s o f

23、HC C( C B R H- 7 9 1 9 ) T r e a t me n t s C e l l c y c l e( %) Go/ G1p h a s e Sp h a s e G2/ M p h a s e G e n e r a l HC C4 0 . 0 73 7 . 1 82 2 . 7 6 S y n c h r o n i z e di nG1p h a s eHC C 7 4 . 0 91 6 . 2 39 . 6 7 S y n c h r o n i z e di nSp h a s eHC C9 . 3 69 0 . 3 90 . 2 5 3 . 2 肝癌细胞与胶原

24、I的特异黏附 在用胶原I裱衬好的c h a mb e r中加入足量的胶 原 I的单克隆抗体( S i g ma公司) , 3 0分钟后再加入 肝癌细胞做黏附力测量,同时以非特异抗体( S i g ma 公司)做比较,发现在该实验条件下肝癌细胞主要是 与胶原I发生黏附的(结果见表2 ) 。 表2肝癌细胞与胶原I裱衬表面的黏附特性 T a b l e2 S p e c i a l a d h e s i o no f HC C( C B R H- 7 9 1 9 )t oc o l l a g e nI c o a t e ds u r f a c e s T r e a t me n t s A

25、d h e s i v ef o r c e ( F 1 0 1 0 -N) n B l o c k r a t e ( %) HC C +c o l l a g e nI1 5 7 . 4 2 5 1 . 2 62 6 HC C +c o l l a g e nI +c o l l a g e nI mAb5 6 . 8 8 5 1 . 2 6 *# 2 96 2 . 5 7 HC C +c o l l a g e nI + mo u s eI g G1 kmAb1 5 2 . 7 7 7 1 . 8 63 12 . 9 5 *: C o mp a r e dwi t hHC C +c o

26、l l a g e nI ,P 0 . 0 0 1 . #: C o mp a r e dwi t hHC C +c o l l a g e nI +mo u s eI g G1 kmAb ,P 0 . 0 0 1 3 . 3 肝癌细胞与胶原I黏附的时间依赖性 对于肝癌细胞与胶原I黏附的时间依赖性,我 们通过在2h内连续测量完成所有实验,然后将其 分为四个时间段考察,如表3所示。 表3肝癌细胞与胶原I裱衬表面黏附的时间依赖性 T a b l e3 T i me d e p e n d e n c e o na d h e s i o nf o r c e s o f HC C ( C B R

27、H- 7 9 1 9 ) t oc o l l a g e nI c o a t e ds u r f a c e s P e r i o do f t i me( mi n ) Ad h e s i o nf o r c e s( F 1 0 -1 0N) n ( c e l l s ) 0 - 3 04 6 . 2 3 3 2 . 3 51 5 3 0 - 6 01 4 1 . 6 5 4 6 . 6 31 6 6 0 - 9 01 5 4 . 8 1 5 6 . 6 21 8 9 0 - 1 2 01 5 1 . 1 4 4 7 . 6 31 6 3 . 4 肝癌细胞与胶原I黏附的浓度依

28、赖性 应用微管吸吮技术研究了大鼠肝癌细胞与胶原 I的黏附力与胶原浓度的关系, 结果见图2 。在研究 的胶原剂量范围内,随着裱衬胶原浓度的升高,肝癌 细胞与胶原I的黏附力也增大。 3 . 5 肝癌细胞与胶原I黏附的周期依赖性 测定未同步化、 G1期和S期肝癌细胞与胶原I 的黏附力,结果见图3 。S期肝癌细胞与胶原I的黏 附力比G1期相应值明显降低( P0 . 0 0 1 ) ,与未同 步化实验组比较也明显降低( P0 . 0 0 1 ) 。 4 讨论 4 . 1 肝癌细胞( C B R H- 7 9 1 9 )的周期同步 细胞同步化是研究细胞周期各时相形态、结构、 功能等相关性质差异的重要方法。

29、体外培养细胞同 步化方法有多种,可根据细胞来源不同选用不同的 方法 9 。本文通过胸腺嘧啶脱氧核苷和秋水仙碱顺 序阻断法以及胸腺嘧啶脱氧核苷双阻断法对该细胞 进行同步,其G1期和S期的同步率分别为7 4 . 0 9 % 和9 0 . 3 9 %,这一同步结果基本能满足后续微管吸 吮实验的要求。但研究发现G1期的同步率低于S期 513 第2期宋关斌等。大鼠肝癌细胞与I = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = =

30、 = = = = = = = = 型胶原的黏附特性及其与细胞周期的关系 的同步率,其原因可能与同步方法的差异有关。G1 期细胞的同步是采用胸腺嘧啶脱氧核苷和秋水仙碱 顺序阻断于M中期,撤去药物后收集中期细胞培养 使之进入G1期。在收集M中期细胞时,采取摇晃振 荡细胞培养瓶,使M中期细胞脱落,这样的操作影 响因素较多,可能会有其它非中期细胞脱落,因此导 致G1期细胞的百分比偏低。 图2肝癌细胞与胶原I裱衬表面黏附的浓度依赖性 *:与1 g / ml组比较, P 0 . 0 5 ; *:与1 g / ml组比较, P 0 . 0 1 F i g2 C o n c e n t r a t i o n

31、d e p e n d e n c eo na d h e s i o nf o r c e s o f C B R H- 7 9 1 9 t oc o l l a g e nI c o a t e ds u r f a c e s *: C o mp a r e dwi t h1 g / m, P 0 . 0 5 , *: C o mp a r e dwi t h1 g / ml , P 0 . 0 1 图3肝癌细胞与胶原I ( 8 g / ml )裱衬表面黏附的周期依赖性 *:与G1期比较, P0 . 0 0 1 ; #:与未同步组比较, P0 . 0 0 1 ; :与 未同步组比较, P

32、 a0 . 0 5 F i g3C b c l ed e p e n d e n c eo n a d h e s i o n f o r c e so fC B R H- 7 9 1 9t o c o l l a g e nI ( 8 g / ml )c o a t e ds u r f a c e s *:C o mp a r e d wi t h G1 p h a c e , P 0 . 0 0 1 l ,#:C o mp a r e d wi t h g e d e r a l ,P 0 . 0 0 1 ; : C o mp a r e dwi t hg e d e r a l ,P

33、a0 . 0 5 e f 2 肝癌细胞与胞外基质的黏附模型 已有文献报道应用微管吸吮技术对细胞在玻璃 底面g h i j裱衬底面g h i j k胶原裱衬底面g h i j k 胶原kl m n裱衬底面几种情况下的黏附力学特性 进行了方法学上的探讨o 1 0 p,表明细胞的黏附主要来 源于与胶原的相互作用。h i j主要用于桥接胶原与 玻璃底面,使胶原牢固地与底面黏附;裱衬的l m n 只是起填空作用。本文在此裱衬方法的基础上,进一 步用胶原q的单抗做阻断实验,并与非特异单抗比 较,证明肝癌细胞在该条件下的黏附主要来源于胶 原q ,因此本实验所采用的实验方法和建立的黏附 模型是可行的。 e f

34、 3 肝癌细胞与胶原I裱衬表面的黏附特性 肿瘤细胞与胞外基质成分的黏附是肿瘤细胞侵 袭转移过程的主要生化事件之一。肿瘤细胞可产生 细胞外基质,反过来又受其制约,形成细胞动力学交 互作用。细胞外基质成份通过相应的受体黏附分子, 对细胞黏附g增生g分化g细胞骨架组装g细胞运动和 水解酶释放有广泛的调节作用。实验发现,大鼠肝癌 细胞C l r st u v 1 v与胶原q裱衬表面的黏附力随着 黏附时间的变化而变化,黏附力在w 0 xy 0mi d内迅 速增长, y 0mi d之后维持在较稳定的水平,即1 5 0 ( z 1 0 |1 0 ) 左右。这可能是由于肝癌细胞上黏附分子 表达呈现时间效应,从

35、而使其黏附行为趋于稳定。 本实验结果发现,肝癌细胞与q型胶原的黏附 力在研究剂量范围内随着胶原浓度的增加而增大, 表现出明显的浓度依赖关系,这和肝癌细胞与 q 型胶原黏附作用的报道结果基本一致o 8 p。王芳等o 1 1 p 对恶性肿瘤细胞侵袭不同阶段基底膜的变化作了研 究,发现随着肿瘤的生长,基底膜中q 型胶原和层 粘连蛋白的含量均增加,但随着肿瘤的转移又出现 基底膜缺损的现象,并指出胶原和层粘连蛋白的增 加不仅来自肿瘤细胞自身的分泌,而且肿瘤细胞可 能会促使其他细胞进行分泌。所以胞外基质成分浓 度的增加在肿瘤细胞与胞外基质作用中可能起着重 要作用,使肿瘤细胞产生趋化性,并定向活跃运动, 同

36、时提供较强的黏附力和粘着位点。本实验中, G1 期肝癌细胞与q型胶原的黏附力比m期相应值明显 增大( P0 f 0 0 1 ) 。 j i o t t a等o 1 2 p发现侵袭性的人乳腺 癌细胞膜具有比良性乳腺损伤的细胞膜大5 0倍的 层粘连蛋白结合能力。纤维粘连蛋白在改善肿瘤细 胞的铺展及促进m / G2期i n的合成及增殖方面 y1w 生 物 医 学 工 程 学 杂 志第2 w = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = =

37、= = = = = = = = = = = = = 卷 发挥较大作用,而层粘连蛋白则对肿瘤细胞的黏附 及运动游走所起作用更大。从细胞周期角度讲, M 期细胞表达的纤维粘连蛋白受体最少,因此G1期和 S期肝癌细胞与胶原I的黏附力差异可能就反映了 肝癌细胞表面黏附分子受体分布的周期差异,从而 使G1期肝癌细胞表现出一种黏附的活跃状态,反映 在肝癌细胞的侵袭和转移过程中,推测G1期肝癌细 胞比S期细胞可能更易于与间质组织相互作用。 参考文献 1T h i e r y J P . C e l la d h e s i o n i n c a n c e r . C o mp t e s R e n d

38、 u s P h y s i q u e ,2 0 0 3 ;4 :2 8 9 2J i a n g X N, Z h o u R L . T h er e l a t i v i t y o ft u mo rc e l l si n i t s a d h e s i o n ,mo v i n g a n d me t a s t a s i s . P r o g B i o c h e m B i o p h y s , 1 9 9 8 ; 2 5 :4 0 4 蒋新农,周柔丽.肿瘤细胞黏附、迁移与转移的 相关性.生物化学与生物物理进展, 1 9 9 8 ; 2 5 ( 5 ) :4

39、 0 4 3G a oJ .C a n c e ri n v a s i o n a n d me t a s t a s i s - B a s i cR e s e a r c h a n d C l i n i c .B e i j i n g :T h eUn i o nP r e s so f B e i j i n gMe d i c a l Un i v e r s i t y 2 4 :3 2 7 5G a l a v a z i G,B o o t s maM.S y n c h r o n i z a t i o no fma mma l i a nc e l l s i

40、nv i t r ob yi n h i b i t i o no ft h eD NA s y n t h e s i s .E x pC e l lR e s , 1 9 9 6 ;4 1 :4 2 8 6Z h a n g T , Qu Q, X u e YM, e ta l . I n v e s t i g a t i o n o n t h e me c h a n i c s o f a d h e s i o nt ot h e s e l e c t i v e e x t r a c e l l u l a r ma t r i x c o a t e ds u r f a

41、 c e so fl u n gc a n c e rc e l l s .JB i o me dE n g , 2 0 0 1 ;1 8 4 ( 2 ) :1 6 9 张 婷,屈谦,薛亚梅等.肺癌细胞与胞 外基质选择裱衬表面黏附力学的研究.生物医学工程学杂志, 2 0 0 1 ; 1 8 ( 2 ) :1 6 9 7Z h a oH,D o n gX ,Wa n gX ,e ta l .S t u d i e so n S i n g l e - C e l l Ad h e s i o nP r o b a b i l i t yb e t we e nL y mp h o c y t e

42、 sa n dE n d o t h e l i a l C e l l swi t hMi c r o p i p e t t eT e c h n i q u e .Mi c r o v a s c u l a rR e s ,2 0 0 2 ; 6 3 :2 1 8 8WuZ Z ,S h a oKF ,S o n gG B ,e ta l .S t u d i e so ft h ea d h e s i v e p r o p e r t i e s b e t we e n h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o ma c e l l s

43、 a n d t h e s u r f a c e sc o a t e dwi t hc o l l a g e nI V.C h i n e s eMe d i c a lJ o u r n a l , 1 9 9 9 ; 7 9 :3 6 9 吴泽志,邵开峰,宋关斌等.肝癌细胞在I V型 胶原裱衬表面的黏附特性.中华医学杂志,1 9 9 9 ; 7 9 ( 5 ) :3 6 9 9R u s t e m U,I s a b e l l eC ,Mi c h e l P ,e t a l .C e l l c y c l ea n a l y s i s a n d s y n c h

44、r o n i z a t i o no ft h eX e n o p u sc e l l l i n eX L 2 .E x pC e l l R e s , 1 9 9 8 ;4 1 :6 0 1 0Wa n gX H,L o n gM,Wa n gX J ,e t a l .Ad h e s i o np r o p e r t i e so f h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o ma c e l l t o c o l l a g e n t y p e I . Ac t a B i o p h y s i c aS i n i c

45、 a ,1 9 9 6 ;1 2 ( 4 ) :6 8 6 王宪航,龙 勉,王晓军 等.肝癌细胞与胶原蛋白I裱衬表面黏附特性.生物物理学 报, 1 9 9 6 ; 1 2 ( 4 ) :6 8 6 1 1Wa n gF ,G a oJ .R e l a t i o n s h i pb e t we e ne x t r a c e l l u l a r ma t r i xa n d p r o g r e s s i v eg r o wt ho fma l i g n a n tt u mo r .C h i nJOn c o l ,1 9 9 8 ; 2 0 ( 2 ) :1 1 2

46、 王 芳,高进.恶性肿瘤体内外生长和发展过 程与细胞外基质相关性研究.中华肿瘤杂志,1 9 9 8 ; 2 0 ( 2 ) : 1 1 2 1 2L i o t t a L A, R a o C N, B a r s k y S H. T u mo r i n v a s i o n a n d e x t r a c e l l u l a r ma t r i x .L a bI n v e s t ,1 9 8 3 ; 4 9 :6 3 6 (收稿: 2 0 0 3 - 0 7 - 2 1 修回: 2 0 0 4 - 0 3 - 3 1 ) 713 第2期宋关斌等。大鼠肝癌细胞与I = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 型胶原的黏附特性及其与细胞周期的关系