广西眼镜蛇毒中血管紧张素转换酶抑制剂的分离纯化及鉴定.pdf

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1、41 8 中国药理学通报Chi nes。 月 1在 。 吨交 “ I B “ lletin2 0 0 8 M ar ; 24( 3): 418 一 20 广西眼镜蛇毒中血管紧张素转换酶抑制剂的分离纯化及鉴定 韦世秀 ， 刘成军2 ， 万瑞融， ， 李牡艳， ， 吴 华， ( 1 . 广西医科大学医学科学实验中心;2 . 广西壮族自 治区江滨医院， 南宁 53(X)2 1 ) T h ep u ri n Cati 0 na n di d e n t i n Cati 0 nOf a n gl OtenSi n con ve川ng e ” 团 y mei n h i b i torfr o m G

2、 uan g 劝 c o b ra Ve nol 口 W E I S h i 一 x i u l ，u uC h e n g 一 u n Z ， W A NR u i 一 ro n g ， ， 11 M u 一 y anl ， w UH u a l ( L E 叼 犯 ri mentCe欢r ofMed 比 a l sc ic nce， 邵曳 笋 Medic心。 h 卜 ， rs 妙;2 . 加昭6 inHo叩 i tal ofC ua刀 召 荡 i ZhUan g A 咖nompus几- 9 切 几 ， Nanni ng530021， Chi na) 中国图书分类号: R 一 3 2 ; R

3、3 4 1 . 6 ; R5 44. 1 ; R9 7 2 . 4 ; R996 . 3 文献标识码: A 文章编号: 1 001 一 1 9 7 8(2 0 0 8 ) 03一 以18一 03 关键词: 广西眼镜蛇毒; 分离纯化; 血管紧张素转换酶抑制 剂; 生物学活性; 降血压 K ey， o r ds: Guan群 i c o b rav e nom ; 即ri fi c atio n ; angi otens i n c o n - ve rt i n g e 似 y m e i nhi hi t or ; b i o l o gi c al， ti v i ty; h y l 刃 t

4、 e nsi vee ffec t 血管紧张素 转换酶 抑制剂( an gi o te ns inc on v erti nge n z y m e i nhibito r ， A c EI) 是存在于多种蛇毒中的活性多肤， 对心血管 系统和血液系统的作用早已为人们所注意。本研究采用蛋 白液相色谱法， 经凝胶过滤及离子交换柱层析从广西眼镜蛇 毒中分离纯化得到电泳纯的A C EI， 并对其部分生物活性及 对自 发性高血压大鼠( S H R)血压的影响进行研究。 1 材料 1 . 1 动物自 发性高血压大鼠( S H R ) ， 占? 各半， 体重( 2 50 收稿日 期二 2 (X)7 一 12

5、一 1 1 ， 修回日 期二 2 0 0 8 一 02一 。 基金项目: 广西科技厅科学基金资助项目( N O 沙 抖 7 059) 作者简介: 韦世秀( 1956一 ) ， 女， 副研究员， 研究方向: 蛇毒活性蛋白 质及药理学， Tel : 价71一 3 5 8 2 16， E . n 坦 1 1 : 面u56 y 曲 00. com 土 10) 9 ， 由 北京维通利华实验动物技术有限公司提供。昆 明小鼠， 体重( 20土 2) 9 ， 占? 各半， 由广西医科大学实验动 物中心提供。 1 . 2 药品与试剂 广西眼镜蛇毒冻干品由 广西医科大学蛇 毒研究所提供; 舒缓激肤( B K )

6、、 血管紧张素转化酶( A C E) ， 马尿酞一 甘氨酞一 甘氨酸( H G G ) 等购自 美国51 目 旧 a 公司; 电 泳标准分子量蛋白 质， 层析填料灰p h ac ry l s 一 1 00及C MSep h - aroseF . F . 均为A m e rs h a m公司产品。 2 方法 2 . I A C E I 的分离纯化称取广西眼镜蛇毒冻干品0 . 5 9， 溶于0 . olm ol L 一 ， H Ac一 N a A c 缓冲溶液中， 离心。 取上清 液经阮p h ac ly l S 一 1 00柱分离， 用0 . o l m o l L 一 H A c 一 N aA

7、C 缓 冲液洗脱， 收集具有抑制A C E的活性峰， 再经C MSePh， C h ang HT . 玩 忱 脚t i veac ti onofth a amu : inth e p 双 兄 ess ofac u - Punctu refor 二 al gesia 仁 J. 反 花 川 她5 认 众 冷 ， 1 973 ， 1 : 25一 阅. M and e l b rr Kll ， Feld m a n S . E ffec tsofse n so ryan ( l hi p l洲 x 三aln叫 stim - 记 以 i ononuni t 二 t iv i tyi n the m ed

8、i ane 而n e n c e oft herUth y 即t ll a l a . mus J . 尸 人 ” 以及扣 洲 ， 1 972 ， 9 ( 4 ) : 5 65一 7 2 . Jul i usD ， B 汕au mAI . M o l ec u l armec h an i s ms of，i c e p t lo n J l . 押 d 止 ure ， 2 001 ， 413:203 一10. 杨建平， 蒋豪， 吴压 大鼠蛛网膜下腔埋管并长期留置操作 的改 进【 J. 中 华 麻醉学 杂志， 1 993 ， 13: 1 1 0 一 3 . Y an g J P ， l l a

9、n g H ， W u J . T 七 e i 呷ro niofthe c 肠 ro n ic c athe- 倪 d 阳 t i onofthe srin alsu b o hai ods p 朋 e in皿 J. Ch如J A ， 伪 ， 以 ， 1 993 ， 1 3 : 1 1 0一 3 . U 山 H ， 介n 曲as h i T ， Wa l arev be Y ， etal . S p i nal condu c t i on b lock 勿intra t h ec alk e 七 u n i n ein d o ，【 J. A 阴认A 朋匆， 1 9 9 7 ， 85: 1

10、伪- 1 0 . M arti n d al e S J ， D 帅 S t 记d art PA . D o u 目 e 一 b l i n drand o m i 双 月con - 加U ed州alofc a u d 司vers usin t ra v e nou8s( +) 一 ket alnl nefor su卜 Pl e m en以io n ofc a u d alan al g e s i ai nc h i l d 二 n J . Br JA t h ， 2 (X 抖， 92 : 3 44 一 7. 彭海燕， 杜俊蓉. N M D A受体亚单位N RZB拮抗剂和神经退行 性疾病【

11、J. 中国药理学通报， 2 0 0 7 ， 23: 433 一 6. PengHY ， DuJ R . N RZB an 协 即 n i stsan d d i 【 J. chinp 盯 止 召 “ “ ， 双 犯 7 ， 23: 433 一 6. 叭 叮 。 o M， 肠 叨e s ， o h taK ， etal . R 司u c 眨 叨 ofN G F ， B D N Fand G D N F i n 。朋 t roCyt e c ul t o 1 5 5 1 印 n 砂 y enh 即c 司妙a 沈 此 b ral v 班 . 山 l a t o r j 几 n p ro di l J

12、. 从 滋 肠 “ ， 2 (X 乃， 盯， : 1 85一 9. ，J，.J 23 r.L工L 月.J飞J，J，J，J 4工f、67 fr.LlLfLr J，.J飞.J 889 r.Lrr.L 痛觉信号整合在丘脑中进行。脊髓前侧索内大量无髓 鞘纤维终止在丘脑内侧核团内， 包括束旁核和中央外侧 核Lz。 本实验10次累 加结果: 后续放电 在 刺激后1 。 内比 较 集中， 我们用刺激后 1 。 比前 1 5 放电频率净增加值作为指 标。 硬膜外使用氯胺酮产生镇痛效果是由于其阻断了神经 传导1.。 神经纤维 局部使用氯胺酮比 静脉应用能更好作用 于神经纤维v。 实验结果表明: 在脊髓部位氯胺酮

13、能阻断疼 痛信息由外周和中枢部位传导。N M D A受体拮抗剂作用广 泛， 而N M D A 受体亚单位拮抗剂可能因为其高选择性而避免 诸多副反 应8。 与其他亚单位相比， N RZB 亚单位分布相对 集中， Ife叩r cxli l 是用于血管扩张药物， 它又是 N M D A受体 N RZB 特异拮抗剂， 在脑缺血动物模型中， 表现为神经保护作 用。 价nP n xl i l 可减少脑水肿， 降 低血脑屏障损坏作用L，。 我 们研究结果: Ifen p rodil 在脊髓部位同 样可以阻断疼痛信息向 高位中 枢传导。 这为Ife即rodil 对疼痛有抑制作用提供了实 验依据。同时也说明在脊

14、髓部位， 具有N M D A受体阻断作用 药物在脊髓部位可能具有治疗疼痛作用。 参考文献: lNi 场 e l mR ， A nne K ， A me T ， et目 . 肠. 五 盯份 山 e t e n Za t i onoft he sP i 耐 su b aZ a c h no ids Pa c e inthe rat【 J. J 八 触 urM d h ， 1 996 ， “: 1 6 7一7 2 . 万方数据 中国药理学 通报 chi nese F 汽 a o legic 以召 以 龙 t in Z oo8 M ar ; 24( 3)41 9 F . F . 离子交换柱纯化， 用。

15、 一 0 . 6m o l L 一 N a C I 的0 . o l mol L 一 H A c 一 N aAc 缓冲 液 线 性 梯度洗 脱， 收 集活 性峰， 冷冻 干 燥低温保存备用。 2 . Z s D s 一 聚 丙烯酞胺凝胶电泳测定分子皿 参照文献川 进行改进， 样品经还原和非还原处理， 用标准分子量蛋白质 作标准对照。 2 . 3 氮基酸组成分析将纯化的A C EI送广西分析测试研 究中心进行测定。 2 . 4 A C E抑制活力测定 按参考文献【 2 方法。反应温度 为37， 以马尿酞一 甘氨酞一 甘氨酸( H G G ) 作底物， A c EI ( 取6 个浓度， 分别为0

16、. 1 、 0 . 2 、 0 . 4 、 0 . 8 、 1 . 6 和3 . Zm g L 一 ) 。 在2 28n m ， 处测定其吸收值， 计算抑制率1 形%= ( 对 照值一 样品值) /(对照值一 空白 值) xloo%。 2 . s A c E I 对s H R 血压 的 影响1 ， 1将s H R 3 o 只随 机 分为 5 组( 每组6 只) 。 A 组: B KI 哪 k g 一 ， 加生理盐水;B组: B KI 此 k g 一 加c a p to p 行 1 8 0 卜 9 k g 一 ; c 组: B K I 林 9 k g 一 加A c E I 如林 9 k g 一

17、; n 组: B KI 林 9 k g 一 加A c E I s o 此 k g 一 ; E 组: B K I 叱 k g 一 加A c E l l 印叱 k g 一 。 各 组 大鼠 均以乌拉坦1 . 29 k g 一 腹腔麻醉， 气管插管， 行颈动脉插 管， 连接B L 4 20生物信号分析系统测定大鼠动脉收缩压 ( S B P ) ， 经股静脉给药。记录给药前、 给药后( 1 ， 2 ， 5 ， 1 0 m in ) 血压的变化。 2 . 6 数据处理 实验数据用S PSS 13 . 0 统计软件处理， 以二 土 5 表示。 3 结果 3 . I A C EI 的分离纯化 广西眼镜蛇粗蛇

18、毒经SePhac司 5 - 1 00凝胶过滤及C MSep ha ro seF . F . 离子交换层析获得单一 组分的A C EI， 测定总蛋白回收率为5 . 70%。 3 . Z A C E I 相对分子量测定纯化的 A C E I 经 S D S 一 P A G E 电泳， 在还原与非还原的条件下均为单一条带， 其相对分子 量为 8 . 1 8k u 左右。 3 . 3 氨基酸组成分析A C EI 由12种氨基酸组成， A C EI氨 基酸组分中Gl u 、 c ys、 A rg含量较高， 见Tab l 。 3 . 4 A C E I 对A C E抑制活性测定以H G G为底物， 测得

19、A C EI浓度与IR的关系见1 油 2 ， 半数有效抑制浓度为IC ， 二 1 . 能m g L 一 1 。 T a b1 A . 血 d dcom脚 喊吐 o nor A C E I Ami n oa c i dC o n t e n 口% A mi n oaci dCo n t e n 口% l 5 2。 6 l 3 0 . 97 3 . 0 1 1 . 5 7 0 . 7 7 1 . 5 0 . 65 1 . 8 2 . 0 3 . 3 1 0. 0 2 ne腼晰PheLvs崛腼 p了lioy窗及 8.hlll卜.，y比 A下GPGC.陌 T 曲 2 皿 OfA C E勿 A C E

20、I ( x 土 : ) .且，4工X6 0000，1 G ro u P l D o 留 / 此 k g 一 1 1 份 %/ 无土 5 3 0 . 1 7土2 . 3 2 3 6 . 湘 土2 . 1 7 4 1 ) . 8 9土3 . 1 5 4 9 . 1 2士3 . 峨 抖 6 1 . 4 6土2 . 0 3 8 4 . 7 8士3 . 5 1 ，门j4lf6 3 . S A C EI 增强B K对 S H R血压的效应A C EI经股静脉 给药， 各给药组的血压均有不同程度的下降。A C EI的3 个 给药组的 血压与药前相比 差异均有显著性( 尸 0 . 05或尸 0 . 0 1 )

21、 ， 结果见T a b 3 。 4 讨论 蛇 毒 中 含 有 丰 富 的 酶、 蛋白 质 及 小 分 子 多 肤 闭。 本 实 验 采用适于分离小分子多肤的层析基质， 从广西眼镜蛇毒中分 离纯化 A C EI。应用 S D S 一 以G E测定 A C EI分子量约为8 . 18 k u ， 在有无p 一 琉基乙 醇存在的条件下均为单一条带， 是单链 多肤。蛋白回收率为5 . 70%。A C EI是由12种氨基酸组成 的小分子多肤。A C E的抑制活性测定结果表明， 能抑制 A cE 的 活力， Ic 50 为1 . 02mg L 一 。 A c EI对s H R的血压都 有不同 程度的降低作

22、用， A C EI增强B K降低s H R血压效应 与给药剂量呈量效关系， 与给药前比较差异具有显著性( p 0 . 05或尸 0 . 01) 。阳性对照药CaPt 叩 ril与眼镜蛇毒 A C EI同剂量比较， 后者降压作用稍弱， 这可能是与两者的结 构、 功能以及对 A C E活性抑制反应程度差异有关。纯化的 广西眼镜蛇毒A C EI与血管紧张素转换酶抑制剂作用相似， 对S H R有降血压作用。 Tab 3 T 为 e d 吟 nts ofb l 侧 川p u re勿加 c r 别 脚 d勿A c E I B Kins H R ( 无 士 5 ， n 二 6 ) G ro u p B e

23、fore A d m S B P/m m H g A ft e r A d mS B P/m m H g Z mi n5 而 n 1 0 mi n 1 7 9 . 8 8士84 1 1 8 0 . 3 6土7 . 3 8 1 8 0 . 7 9士7 . 2 9 1 8 0 1 5土7 . 45 1 8 0 . 4 5土7 . 1 2 1 7 4 3 9士6 . 99 1 4 8 . 1 0士7 . 1 4二 1 州) . 4 1土7 . 8 4. 1 5 3 . 5 7士9 . 峨 抖 二 1 4 5. 2 8土7 . 7 8*. 1 7 5 . 1 2士7 . 9 2 1 5 2 . 4()

24、 士7 . 8 9二 1 6 3 . 7 4土8 . 8 1 1 5 7 . 2 4土7 . 7 4* 1 4 9 . 8 7士7 . 2 1二 1 7 4 . 4 5土7 . 1 3 1 5 8 . 5 2土7 . 5 6. 1 6 8 . 6 2士7 . 0 1 1 6 3 . 2 3土7 . 8 3 1 5 2. 2 7士8 . 4 6* 1 7 3 . 7 9士6 . 7 8 1 6 3 . 5 5土8 . 2 4 1 7 0 . 65 士8 . 9 7 1 6 5 5 3士8 . 1 1 1 5 9 2 1土8. 84 ， ABCDE . P 0 . 05， 二 P 0 . 0 1

25、仍玩肠 此A d m 参考文献: 【 1雷丹青， 周先丽， 李映新 尖吻蝮蛇毒小分子多肤的分离及抗 血小板聚集作用【 J . 中国药理学通报， 2 仪 拓， 22( 9): 1 1 2 一 9. 1 坛 i n Q ， 2 加 u xL ， uyx . 入h fi c a t io n 证a s m a l l pe pt i d e toi n - h i b i t p l at e l e t 叫 犯 r e g a t i o n 坛 Il l A 沙i s t 耐onac u tu s v e no m J . Chi n 尸 汤 召 rnzaco l B 诚， 2 阴6 ， 2 2

26、 ( 9 ) : 1 1 2一 9 . 2 N akamuraY ， Y axnamoto N ， S a k a i K ， e t al . Puri fi c at i onand c h 二 - te ri za t i o nof angi o t e n s i 司 一 c onv e rt i n ge 几 砂 m ei n h i b i t o 、 from sour m i l k J J Dai 叮叙， 1 9 9 5 ， 7 5 ( 4 ) : 7 7 7 一 8 3 . 【 3 王秀琴， 李晓辉， 张海港， 等. GCIP27 对自发性高血压大鼠左 心室结构影响的实验

27、研究 J . 中国药理学通报， 2 007 ， 23( 8 ) : 1 06 9一7 3 . 万方数据 。4 2 0 中国药理学通报Chi nese Pha 二之 咭艺 c a l B u l le t i n Z (X)S M ar; 24( 3 ) : 4 2 0 短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白体内外对凝血因子的影响 黎渊弘 ， 钟小斌， ， 林发全2 ， 李明 芬2 ( 广西医 科大学1 . 第一附属医院药剂科， 2 . 第一附 属医院实 验中 心， 广西南宁 ， 王乃平3 5 3 (X)2 1 ; 3 . 广西中医学院， 广西 南宁 5 3 以 】 ) 1 ) E ffec t Ofthe

28、 c l Ot ti ng fa c t o rsi nhi b i ti o nOfP h o s P h 0 - li P i d 一 b i ndin g a u ti c o a gUl a ti o nP r o te i nfr o mA g k i s t r- odo nhaly sb rev l c a u d us b o th 认 v i 介 oo nh Um a n P l asmaa nd inv i vo o nrab b i ts uy u an 一 h 6 n g ， z H o N cx i a o 一 b i n ， u Nr a 一 q u a n ， ，

29、 11 M in g 一 re n Z ， w A N GN a i 一 p i n g ( 叨刀 召 % i MedicalUn。 仰 1 . 刀 印 忿 of于 肠 召 门 ” 山 叮ofFi o t 滩 步 1 添 ted Ho甲 it al; 2 . 五 “ e a rch Ce确r ofPi rs t 通 疥 1 她 t edHo胡 称 d 之 ， 肠 心 n - gxi ， Nanni ng 5 3 (X)2 1 ， Chi na;3 . Q 姗哪i col le g e ofT C M， Nan- n i ng5 3 X 幻 1 ) 中国图书分类号: R 一 3 3 2 ; R3

30、 4 1 ; R3 49. 2 1 ; R科6 1 1 ; R9 7 3 . 2 ; R9 9 6 . 3 ; R9 7 7 . 3 ; R9 7 7 . 6 文献标识码: A 文章编号: 1 001 一 1 9 7 8 ( 2 008 ) 03 一 0420 一 01 关键词: 凝血因子; 磷醋; 蛇毒 Key wor ds: c l otti n g faCt or; p h o s p h ol i p i d ; s n a k e ve n om 蛇毒中常有的抗凝蛋白分为蛋白水解酶类和非蛋白水 解酶， 它们作用的有效成份和性质已被广泛研究。然而， 蛇 毒中磷醋结合抗凝蛋白对凝血功能的

31、作用尚未见报道。笔 者已报道从短尾蝮蛇毒中纯化出一种能与磷醋结合的新型 抗凝蛋白 川。 该蛋白 是 二聚体， 相对分子量为2 . 4 x l0 4 ( 非 还原) 和1 . 46x 1 04( 还原) 。等电点为p HS . 2 。N 一 末端为 n c 玲( 份c ) w s s Y E G H C Y ( Q/K ) 。 它具有精氨酸醋酶活性， 而没有磷醋酶A 、 5 一 核昔酸酶、 纤维蛋白( 原) 溶解酶、 磷酸 二醋酶、 L 一 氨基酸氧化酶和类凝血酶的活性。本文报道该抗 凝蛋白体内外对凝血因子的抑制作用。 1 材料与方法 1 . 1 材料、 试剂与仪器电泳纯的短尾蝮蛇毒磷脂结合抗

32、凝蛋白由广西医科大学蛇毒研究所纯化和提供; 凝血因子 11 、 Yll、 珊、 IX、 X、 Xl、 Xll缺乏血浆从晓盯 g e K i n g B i o 一 M e d i c al 公司购买; umb daBi o 2 0 双光束紫外分光光度计， 美国PE 公司产品; Al le 盯 a 64R台式高速离心机， 美国Beck m an公司 产品。 A C L 一 A dv ac e 全自 动血凝仪， 美国IL公司产品。 新西 兰白 兔( 2 . 0 土 0 . 5 ) k g ( 清洁级， 广西医科大学实验动物中 心) 。 1 . 2 方法 1 . 21 凝血因子活性的测定体外法: 0

33、 . 2 9 L 一 的抗凝 收稿日 期: 2 以 打一 11一 05， 修回日 期: 2 008 一 01一 06 基金项目: 广西研究生教育创新计划资助项目 ( No Z J 万 1 砚扮 粥1 1】 J7 D10) 作者简介: 黎渊弘( 1 9 77一 ) ， 男， 博士， 主管药师， 研究方向: 血液药 理， E 一 二 1 : z y l 设 001 h o t 代 旧 11 . c om ; 王乃平( 1 9 54一 ) ， 男， 博士， 教授， 博士生导师， 研究方向: 生化药理， Tel : 0 7 7 1 一1 3 9 3 的 蛋白0 . 1 m l(对照组生理盐水) ， 分

34、别加入用30 份正常的人 血浆制成的混合血浆1 、 2 、 4 、 6 、 s nil， 配置成 1 : 10、 1: 20、 1 : 40、 1 : 60、 1 : 505 个不同稀释浓度， 用因子缺乏血浆作为 标准， 进行凝血因 子F ll: C ; F V: C ; F Vll: C ; F 恤: C ; r lX: c ; F X: c ; F XI: C ; F 姗: C的活性测定， 并计算抑制率。体内法: 新西兰白 兔24 只， 随机分为磷脂结合抗凝蛋白高、 中、 低剂 量 组和 肝素 组， 各 兔于 耳 缘静 脉 按0 . 8 、0 . 4 、 0 . Z m g k g 一 给

35、 药， 肝素组剂量为50u k g 一 ， 药前及药后巧m in分别从耳 动脉取血Z ml， 用3 . 8 %拘椽酸钠9: 1 抗凝， 3 。 洲 r 而n 一 离心10 m in， 分离贫血小板血浆。按凝血因子试剂盒说明， 在美国IL公司A C L 一 A dvac e 全自动血凝仪上进行各种凝血 因子测定。 抑制率 / %二 ( 空白 对照值一 供试品 值) / 空白 对照值xloo% 1 . 2 . 2 统计处理 所有实验数据均采用成组设计的方差分 析， 用s Pss l3 . 0 软件进行统计学处理， 结果均以x 土 : 表示。 2 结果与讨论 不同浓度磷脂结合抗凝蛋白体外对凝血因子的

36、影响不 同， 1 : 60 和 1 : 50稀释度仅仅抑制 F lx: C因子活性、 1 ， 10， 1 : 20， l: 4D稀释度则可抑制F 姗: C 、 F 仪: C 、 F xl: C 、 F 翅: C的活性， 而不影响其它因子的活性， 抗凝蛋白浓度与因子 抑制活性呈正相关。兔体内凝血因子试验也表明: 大中剂量 磷脂结合抗凝蛋白药后 巧 m in均可抑制 F 现: C 、 F lx: C 、 F Xl: C 、 F 扭: C的活 性而不影响其它因子的活性， 抗凝蛋白浓 度与因子抑制活性呈正相关。 肝素则仅抑制F lx: C 、 F xl: C 、 F 双: c 的活性而不影响F 姗:

37、C 活性。由于磷脂结合抗凝蛋 白并非针对某一特定的凝血因子具有特异的抑制作用， 它可 以对多种凝血因 子活性( F 姗: C ， F lx: C ， F xl: C ， F 妞: C ) 及不 同凝血阶段均具有抑制性作用， 说明磷脂结合抗凝蛋白的 抗凝作用主要是干扰内源性凝血系统。 参考文献: 【 1黎渊弘， 黎肇炎， 林发全， 等. 短尾蝮蛇毒中磷脂结合抗凝蛋白 的分离纯化及鉴定【 J . 中国药理学通报， 2 创 为， 22( 7 ) : 8 31 - 5. 1 1 UYH ， Uz Y ， u n F Q ， The p u ri fi cati on朋 d i d ent i fi c

38、 a l i onofPh一 p h o l i p i d 一 b i ndi昭antic o a 即l at i on州te i n lh 111 甲s t r 司 o n hal”b re 石 - cau d us v e ， 仁 J . Chi n月 认 r 加zc o I B 以 1 ， 2 (X 汤， 22( 7 ) : 8 3 1 一 5 . 3 4 1 Wa n g XQ ， L I XH ， ZhangHG ， etal . E ffec t s ofGC I P27 on th e st ru c t u reofl eft v e n 示 c l e i ns 即 n t

39、 a n eo u s l y h y 伴 rten s iverats J . Chi n P 丙 a rmaco i B u l l ， 2 (X)7 ， 23( 8 ) : 1 069 一 7 3 . 韦世秀， 舒雨雁， 黎红烨. 广西眼镜蛇毒磷酸二醋酶分离纯化及 部分性质 J . 中国生物化学与分子生物学报， 2 005 ， 21 ( 2) : 2 7 8一8 1 . 4 戮i sx ， S huYY ， LIHJ . Pu欣c at ionan d c h a raCt e ri Zati o nof p h 韶 p h 记i e s t e ， fromGuan 加 C obraV e n o m J . Chi n J B 切 d 比 价 肚 石 I B 议 ， 2 (X5 ， 2 1 ( 2 ) : 2 7 8 一 8 1 . 万方数据