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1、热带医学杂志2 0 0 8 年9 月第8 卷第9 期 【文章编号】1 6 7 2 - 3 6 1 9 ( 2 0 0 8 ) 0 9 - 0 8 9 7 - 0 3 8 9 7 基础研究论著 成年大鼠不同发育时期乳腺上皮小亮细胞C D 2 4 的免疫组化研究 曾小芳安靓 ( 南方医科大学组织胚胎学教研室，广州5 1 0 5 1 5 ) 【摘要】 目的观察成年大鼠乳腺不同发育时期C D 2 4 阳性表达的乳腺上皮小亮细胞部位、数量的变化。 方法制备成年大鼠乳腺不同发育时期( 选取静止期、孕期、哺乳期、退化期) 组织标本，采用免疫组织化学和光 镜技术检测C D 2 4 的表达。结果C D 2 4
2、在导管小亮细胞中的染色程度普遍高于腺泡；相比于静止期和退化期， C D 2 4 更多地表达于孕期和哺乳期的小亮细胞；静止期和退化期表达无显著性差异( P O 0 5 ) ；孕期和哺乳期表 达也无显著性差异( P O 0 5 ) 。结论C D 2 4 蛋白参与了正常成年大鼠乳腺组织的发育过程，且可能是鉴定乳腺 干细胞( M a S C s ) 及观察M a S C s 发育与分化过程的重要分子。 【关键词l 大鼠；C D 2 4 ；乳腺小亮细胞；乳腺干细胞；乳腺发育；免疫组织化学 中图分类号：R 3 9 2 1 2文献标识码：A I m m u n o h i s t o c h e m i c
3、 a iS t u d yo fC D 2 Ai nM a m m a r yE p i t h e l i a lS m a l lL i g h tC e l l s d u r i n gD i f f e r e n tD e v e l o p m e n tS t a g ei nR a t Z E N GX i a o - f a n g ，A NJ i n g ( D e p a r t m e n to fH i s t o l o g ya n dE m b r y o l o g y ，S o u t h e r nM e d i c a lU n i v e r s i
4、 t y ， G u a n g z h o u5 1 0 5 1 5 ，C h i n a ) 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e T os t u d yt h ee x p r e s s i o np m f d ea n dl o c a t i o no fC D 2 4i nm a m m a r ye p i t h e l i a ls m a l ll i g h t c e l l sa td i f f e r e n td e v e l o p m e n t a ls t a g e si nr a t M e t h o d
5、s S a m p l e sa r ec o l l e c t e df r o mt h em a m m a r yg l a n d sa td i f f e r e n t d e v e l o p m e n t a ls t a g e so fr a t ( q u i e s c e n c e ，g e s t a t i o n ，l a c t a t i o n ，a n dd e g e n e r a t i o n ) a n dC D 2 4e x p r e s s i o ni se x a m i n e db y i m m u n o h i
6、s t o c h e m i c a lm e t h o d R e s u l t sC D 2 4e x p r e s s i o no fm a m m a r ye p i t h e l i a ls m a l ll i g h tc e l l si ss t r o n g e ri nd u c tt h a n i na c i n u s C o n t r a r yt oq u i e s c e n c ea n dd e g e n e r a t i o ns t a g e s ，C D 2 4e x p r e s s i o nl e v e li
7、sh i g h e ri n g e s t a t i o na n dl a c t a t i o n s t a g e s T h e r ew a sn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c ei nt h eC D 2 4e x p r e s s i o nl e v e l sb e t w e e nq u i e s c e n c ea n dd e g e n e r a t i o ns t a g e s ( P O 0 5 ) ；孕期 和哺乳期表达也无显著性差异( J p O 0 5 ，图5 、6 ，表1 ) 。 3
8、讨论 成熟乳腺可能存在具有干细胞功能的细胞。在孕期。 这些具十细胞功能的细胞在激素的刺激下增殖、分化，腺 管腺泡发育；当激素撤除时这些结构通过凋亡而消失，脂 万方数据 垫堂匿堂苤查至鲤墨生皇旦箜墨鲞箜窆塑 图5 乳腺导管( x 4 0 0 ) r i g 5M a m m a r yd u c t Ix 4 0 0 ) C D 2 4p o s i t i v eS L Cr e s t sw i t h i nm a n u n a i yd u c t ( a r r o w h e a d ) 图6 乳腺腺泡( x 4 0 0 ) F i g 6M a m m a r ya c i n
9、u s ( X 4 0 0 ) C D 2 4p o s i t i v eS L Cr e s t sw i t h i nm a m m a r ya c i n u s ( a r r o w h e a d ) 表1C D 2 4 在成体大鼠乳腺不同发育时期乳腺上皮小亮细胞中 表达的比较 T a b 1 C o m p a r i s o no fC D 2 4e x p r e s s i o ni nm a m m a r ye p i t h e l i a l s m a l lU g h tc e l l sd u r i n gd i f f e r e n td e v
10、e l o p m e n ts t a g e露 H e = 2 1 3 6 ，P 0 0 0 5 肪垫中的导管结构变得稀疏。此外，在乳腺日常的细胞更 新过程中。成熟的乳腺上皮干细胞也可能发挥一定作用。 因为在哺乳过程中，乳汁中存在脱落的上皮细胞。脱落进 入导管系统的细胞必须以某些方式进行补充，否则上皮细 胞的数目不能维持整体性；具有这种功能的细胞可能是具 有持续活性的干细胞。所以对成熟的乳腺上皮，干细胞至 少具有明显不同的两种功能。即暂时性和持续性。虽然乳 腺组织中存在干细胞，但目前尚缺乏特异性的乳腺干细 胞标记物其中S e a 1 分子是最常应用的M a S C s 筛选标 记。但是近几
11、年来已有资料证实了S c a 1 一一M a S C s 的存在。 且表明S c a 1 - 一M a S C s 可能比S c a 1 + 一M a S C s 更为原始 7 8 I 。 因此，很有必要寻找新的特异性更强的干细胞表面标记。 一个新的抗原C D 2 4 引起了人们的关注虽然有关的研究 尚不甚深入，但其应用前景诱人。 本研究结果显示，相比于静止期和退化期。C D 2 4 更多 8 9 9 地表达于孕期和哺乳期的小亮细胞可能是因为妊娠会导 致乳腺上皮最终分化，而在哺乳后期，细胞发生大量的凋 亡，最终部分完全分化细胞会生存下来。作为相对分化细 胞的标记物，C D 2 4 在此两期高表
12、达于进入“短暂增殖细胞 群”过渡态的乳腺祖细胞增多有关。B r i s k e n 等【9 通过流式 细胞术发现C D 2 4 高表达于雌二醇受体阳性的乳腺上皮细 胞中，而此种上皮细胞在移植实验中几乎不具备再生能 力也证实C D 2 4 在相对分化状态的乳腺上皮细胞中有更 多的表达。C D 2 4 在导管上皮小亮细胞中的染色程度普遍 高于腺泡，可能与导管提供了更适合乳腺干细胞生长的微 生态有关。V i l l a d s e n 等【1 0 针对移植后形成的克隆产物，对 乳腺导管和小叶进行了解剖结构分析发现表型为K 1 4 + K 1 9 + 的克隆形成细胞，不仅处于静止状态。而且绝大多数 处
13、于导管中，此结果也从另一个侧面提示相比于腺泡导 管中会有更原始的干组细胞，C D 2 4 在此细胞中高表达。 C D 2 4 是一种低分子量高度糖基化的黏附分子，是P 选择 蛋白的配体，它通过与激活的血小板和内皮细胞上的P 选 择蛋白相互作用而介导细胞间，细胞与基质间的黏附f 】。 它可能主要在乳腺发育的某些特定阶段发挥作用，R o b e r t 等 1 2 】报道，在M a S C s 微环境中，C D 2 4 可与C D 4 9 和C D 4 4 等相互作用，影响M a S C s 的分裂和分化。在孕期和哺乳 期，作为黏附受体介导细胞一细胞、细胞一细胞外基质的黏 附，提供细胞结合位点和传
14、递细胞游走、分化的信号，促进 M a S C s 的增殖和分化：B a u m a n n 等 1 3 在覆盖纤维连接素的 培养基中观察M T L Y 细胞株的运动发现C D 2 4 阳性细胞 迅速与基质附着，而C D 2 4 阴性的细胞附着较慢，更重要 的是，与C D 2 4 阴性细胞相比，C D 2 4 阳性细胞扩散速度明 显较快。C D 2 4 也可能促进M a S C s 定位于乳腺特定区域， 增强由跨膜生长因子介导的干细胞与基质细胞的相互作 用，传递增殖和分化信号；在性成熟期和退化期，它还可能 在特定的生长因子浓度下维持M a S C s 的静息状态从而在 小亮细胞中处于低表达状态，
15、但是否具有两种或多种不 同的M a S C s 类型，或一种干细胞具有几种表型。尚有待 证实。 参考文献】 1 C a p u c oA V 。 E l l i sS B o v i n em a m m a r yp r o g e n i t o rc e l l s ： c u r r e n tc o n c e p t sa n df u t u r ed i r e c t i o n sC J JM a n u n a r yG l a n d B i o lN e o p l a s i a ，2 0 0 5 1 0 ( 1 ) ：5 - 1 5 2 E l l i sS 。C
16、 a p u c oA V C e l lp r o l i f e r a t i o ni nb o v i n em a m m a r y e p i t h e l i u m ： i d e n t i f i c a t i o n o ft h ep r i m a r yp r o l f f e r 瞰i v ec e l l p o p u a t i o n J T i s s u eC e l l 。2 0 0 2 ，3 4 ( 3 ) ：1 5 5 1 6 3 3 S t i n 0J ，R a o u fA ，E m e r m a nJ T ，e ta 1 E
17、p i t h e l i a lp r o g e n i t o r s i nt h en o r m a lh u m a nm a m m a r yg l 锄d J JM a m m a r yG l a n d B i dN e o p l a s i a ，2 0 0 5 ，l o ( 1 ) ：4 9 - 5 9 4 S m i t hG H ，ch e l 如G M a m m a r ye p i t h d i Ms t e r nc e l l s J M i c r o s cR e sT e c h 。2 0 0 1 ，5 2 ( 2 ) ：1 9 0 - 2 0
18、 3 5 S h a c k l e t o nM ，V a i l l a n tF ，S i m p s o nK J ，e ta 1 G e n e r a t i o no f af u n c t i o n a lm a m m a r yg l a n df r o mas i n g l es t e mc e l l J N a t u r e ，2 0 0 6 ，4 3 9 ( 7 0 7 2 ) ：8 4 8 8 ( 下转第9 1 4 页) 万方数据 9 1 4 起感染性心内膜炎。由此可见。对于怀疑有I E 的患者，一 次血培养结果是凝固酶阴性的葡萄球菌不能说明什么问 题
19、。因此，只抽取一次血标本是不够的，应做多次培养。一 般血培养时间需5 7d ，无菌株形成者为血培养结果阴 性。为了减少阴性发生率，一些医生在患者发热高峰时抽 取血标本或以动脉血代替静脉血这种作法价值不大。 长期以来，国内外公认草绿色链球菌是I E 的最主要 致病菌。在抗菌药物问世前该菌感染引起的I E 占总数的 9 0 。9 5 到了2 0 世纪8 0 年代初该比例已下降至4 8 。6 9 ，而葡萄球菌感染所占的比例则有所提高，致病菌种 类亦较以往明显增多，而近期报道草绿色链球菌引起的I E 明显减少。金黄色葡萄球菌导致的I E 增加1 7 。本组病原菌 分布链球菌在培养出的致病菌中的比例亦由
20、5 2 1 7 下降 到3 3 3 3 。而金黄色葡萄球菌在培养出的致病菌中的比 例则由1 5 9 4 上升到2 3 3 3 。尽管草绿色链球菌感染所 占的比例有所下降，表皮葡萄球菌、嗜麦芽假单胞菌所引 起的感染所占比例明显增多但仍以草绿色链球菌感染性 心内膜炎最多见且病原菌分布呈现多样化趋势，真菌感 染有增多趋势。 本试验中草绿色链球菌对青霉素G 耐药率低，提示青 霉素G 仍然是治疗感染性心内膜炎的最常用、最有效的药 物但近年来耐药率也有所上升。金黄色葡萄球菌对青霉 素G 、头孢噻肟已基本耐药，对环丙沙星有所下降。这可能 与近来青霉素类、头孢类抗生素的大量滥用有关。而环丙 沙星有所下降也是近
21、年来其在我院的使用有所下降，其敏 感性上升。与国内其他的报道有所差别f 8 引。全组革兰阳性 球菌对万古霉素、替考拉宁无耐药。另外，随着抗生素的广 泛应用耐药菌株不断增多。经验性用药不一定能达到预 期目的，对于感染性心内膜炎最好还是及时作血培养和药 物敏感试验根据药敏试验结果选择恰当的抗菌药物才能 J o u r n a lo fT r o p i c a lM e d i c i n eV 0 1 8N o 9S e p 2 0 0 8 取得最好的临床效果。 参考文献 1 C a r m o n aI T ，D i o sP D ， S c u l l yC A nu p d a t eo
22、nt h e c o n t r o v e r s i e si nb a c t e r i a le n d o c a r d i t i so fo r a lo r i g i n J O r a l S u r gO r a lM e dO r a lP a t h o l ，2 0 0 2 9 3 ：6 6 0 一6 6 6 2 W e m e rA S ，C o b b sC G ，K a y eD e ta 1 S t u d i e so nt h e b a c t e r e m i ao f b a c t e r i a le n d o c a r d i t
23、i s J J A M A ，1 9 6 7 ，2 0 2 ( 3 ) ：1 9 9 2 0 3 3 H a b i bG ，D e r u m e a u xG ，A v i e f i n o s J F ，e ta 1 V a l u ea n d l i m i t a t i o n so ft h eD u k ec r i t e r i af o rt h ed i a g n o s i so fi n f e c t i v e e n d o c a r d i t i s J JA mC o i lC a r d i o l ，1 9 9 9 ，3 3 ( 7 ) ：2
24、 0 2 3 2 0 2 9 4 曾春来，傅丽霞，陈素芬，等感染性心内膜炎的血培养 阳性与阴性临床意义 J 心脑血管病防治，2 0 0 3 ，3 ( 3 ) ： 2 l 一2 3 5 M o r e i l l o nP ，Q u eY A ，B a y e rA S P a t h o g e n e s i s o f s t r e p t o c o c c a la n ds t a p h y l o c o c c a le n d o c a r d i t i s J I n f e c tD i s C i i nN o r t hA m 。2 0 0 2 ，1 6 ：2
25、9 7 3 1 8 6 Q l l eY A ，F r a n c o i sP ，H a e f l i g e rJ A ，e ta 1 B e a s s e s s i n gt h e r o l eo fS t r e p t o c o c c u sa l i , F e u sc l u m p i n gf a c t o ra n df i b r o n e c t i n b i n d i n gp r o t e i nb ye x p r e s s i o ni nL a c t o c o c c u sl a c t i s J I n f e c t I
26、 m m u n ，2 0 0 1 ，6 9 ：6 2 9 6 - 6 3 0 2 7 陈困伟感染性心内膜炎的变迁 J 新医学，2 0 0 6 ，3 7 ( 4 ) ：2 6 4 - 2 6 5 8 谢伟，孟婕感染性心内膜炎的临床变迁 J 中国现代医 学杂志，2 0 0 5 ，1 5 ( 6 ) ：9 2 7 9 2 9 9 崔敏，张真路感染性心内膜炎病原菌变迁及其耐药性分 析 J 医药导报，2 0 0 7 ，2 6 ( 2 ) ：1 9 7 1 9 8 ( 收稿日期：2 0 0 8 0 4 一O l ；修回日期：2 0 0 8 0 5 2 2 ) 笞譬雾塔峪g 色祭葛譬零凌潞零祭零笞譬雾若黜
27、零塔皂笞啦莽省黜零罐乳疹迎萍牙V 莽笞譬零茜逡牙鹭莽若譬雾葛是牙电莽蠛零廖笞警莽葛警琴边迎薄 ( 上接第8 9 9 页) 6 S l e e m a nK E ，K e n d r i c kH ，A s h w o r t hA ，e ta 1 C D 2 4s t a i n i n g o fm o u s em a m m a r yg l a n dc e l l sd e f i n e sl u m i n a le p i t h e l i a l m y o e p i t h e l i a l b a s a la n dn o n e p i t h e l i a
28、lc e l l s J B r e a s tC a n c e r R e s ，2 0 0 6 ，8 ( 1 ) ：R 7 7 K o r d o nE C ，S m i t hG H A ne n t i r ef u n c t i o n a lm a m m a r yg l a n d m a yc o m p r i s e t h e p r o g e n y f r o mas i n g l e c e l l J D e v e l o p m e n t ，1 9 9 8 ，1 2 5 ( 1 0 ) ：1 9 2 1 1 9 3 0 8 L a B a r g
29、eM A ，P e t e r s e nO W ，B i s s e l lM J O fm i e n ) e n v i r o n m e n t s a n dm a m m a r ys t e mc e l l s J S t e mC e l lR e v ，2 0 0 7 ，3 ( 2 ) ： 1 3 7 1 4 6 9 B r i s k e nC D u s sS S t e mc e l l sa n dt h es t e mc e l ln i c h ei nt h e b r e a s t ：a ni n t e g r a t e dh o r m o n
30、a la n dd e v e l o p m e n t a lp e r s p e c t i v e J S t e mC e l lR e v ，2 0 0 7 ，3 ( 2 ) ：1 4 7 1 5 6 1 0 G u d j o n s s o nT ，V i l l a d s e nR ，N i e l s e nH L ，e ta 1 I s o l a t i o n ， i m m o r t a l i z a t i o n ， a n dc h a r a c t e r i z a t i o no fah u m a nb r e a s t e p i t
31、h e l i a lc e l ll i n e w i t h s t e mc e l lp r o p e r t i e s J G e n e sD e v ， 2 0 0 2 ，1 6 ( 6 ) ：6 9 3 - 7 0 6 11 K a yR ，R o s t e nP M ，H u m p h r i e sR K C D 2 4 ，as i g u a lt r a n s d u c e r m o d u l a t i n gBc e l la c t i v a t i o nr e s p o n s e s ， i sav e r ys h o r tp e
32、P t i d ew i t hag l y c o s y lp h o s p h a t i d y l i n o s i t o lm e m b r a n ea n c h o r J JI m m u n o l ，1 9 9 1 ，1 4 7 ( 4 ) ：1 4 1 2 - 1 4 1 6 1 2 G l a z e rR I ，W a n gX 。Y u a nH ，e ta 1 M a m m a r ys t e ma n d p r o g e n i t o r c e l lr e g u l a t i o n J C a n c e r B i o m a
33、r k ，2 0 0 7 ，3 ：1 7 1 - 1 8 1 1 3 B a u m a n nP ，C r e m e r sN ，K r o e s eF ，e ta 1 C D 2 4e x p r e s s i o n e a n s e st h ea c q u i s i t i o no fm u l t i p l ec e l l u l a rp r o p e r t i e sa s s o c i a t e e l w i t ht u m o rg r o w t ha n dm e t a s t a s i s J C a n c e rR e s ，2 0 0 5 ，6 5 ( 2 3 ) ：1 0 7 8 3 - 1 0 7 9 3 ( 收稿日期：2 0 0 8 0 3 2 8 ；修回日期：2 0 0 8 0 5 2 0 ) 万方数据